Какие экспресс-тесты способны оценить иммунитет к COVID-19
Массовое тестирование на антитела служит вспомогательным методом диагностики текущей коронавирусной инфекции, в частности позволяющее эпидемиологам понять, какая доля населения в настоящее время переболела. Однако подобные тесты способны лишь показать, встречался ли человек с коронавирусной инфекцией или, к примеру, перенес ОРВИ. Кроме того, сегодня вовлеченные в борьбу с пандемией специалистам понимают, что даже подтвержденные случаи COVID-19 и наличие в результатах анализов крови переболевших антител класса IgG не гарантируют полной защиты от повторного заражения — иммунитет к SARS-Cov-2 может оказаться совсем не стойким. Именно поэтому сейчас актуальными становятся тесты, позволяющие врачам выяснить, сформирован ли у конкретного пациента — после вакцинации или перенесенного заболевания — протективный иммунитет, защищающий его от повторного инфицирования.
Значение анти-RBD антител
В клетку человека SARS-Cov-2 попадает благодаря S-белку (от англ. spike – шип), чей рецептор-связывающий домен (RBD) прикрепляется к мишени на клетке-хозяине, тем самым обеспечивая инфицирование. На это организм начинает реагировать выработкой антител, и по мере развития иммунного ответа формируются IgG-антитела к различным белкам вируса — к нуклеокапсидному (N, к оболочке, состоящей из нуклеокапсидных c-белков) и к спайковому (S-белок). Правильно выбранные лабораторные тесты IgG – к определенному белку вируса — позволяют врачам судить о возникновении или отсутствии протективного иммунитета, который мог сформироваться после заболевания или вакцинации.
Наличие IgG к нуклеокапсидному белку говорит о наличии в анамнезе пациента перенесенной инфекции, а вот выявление IgG к рецептор-связывающему домену (RDB) – о наличии протективного иммунитета. В многочисленных исследованиях, как отмечается в действующей десятой версии временных методических рекомендаций Минздрава РФ по профилактике, диагностике и лечению коронавирусной инфекции, показано: более 80% вируснейтрализующих антител направлены к рецептор-связывающему домену (RBD) S-белка SARS-CoV-2.
Человеческий иммунитет, выявляя RBD вируса, вырабатывает антитела, которые обладают нейтрализующими свойствами – не позволяют вирусу связываться с клетками. Поэтому для оценки эффективности вакцинации (поствакцинального тестирования) и иммунного статуса человека после COVID-19 необходимы только тест-системы, выявляющие антитела к RBD S-белка (анти-RBD антитела).
Почти четыре месяца — с 18 января — в стране идет вакцинация против коронавируса: прививочные пункты открыты не только в городских поликлиниках и больницах, но и во многих торговых центрах, фуд-моллах, центрах госуслуг и даже в театрах. «Но многие граждане продолжают сомневаться в ее необходимости. И теперь появились тесты, cозданные специально для оценки иммунного ответа, которые позволяют точно ответить на этот вопрос — подтвердить эффективность вакцинации в качестве средства защиты от COVID-19», — отмечает генеральный директор «Авивир» Федор Куркин.
Качественное определение наличия антител к S-белку
Компания «Авивир» первой вывела на российский рынок два RBD-теста: SGTI-flex-19 IgG от компании Sugentech из Южной Кореи был зарегистрирован 3 февраля текущего года, а следом, 16 марта регудостоверение получила тест-система Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА – российская разработка, созданная совместно с резидентом Фонда «Сколково» «Рапид Био». Сейчас две эти тест-системы уже находятся в продаже.
«Оба эти теста — экспресс, время выполнения не превышает 10 и 20 минут. И оба — на выявление антител IgG к спайковому белку, они аналогичны – отмечает генеральный директор «Авивир» Федор Куркин. – Тесты используются перед вакцинацией — чтобы проверить наличие или отсутствие антител и удостовериться тем самым в необходимости вакцинации. Тесты также показаны людям, прошедшим вакцинацию против коронавируса – для определения наличия антител по ее итогам».
Тесты предназначены для качественного выявления антител класса IgG к рецептор-связывающему домену (RBD) поверхностного гликопротеина S коронавируса SARS-CoV-2 в сыворотке, плазме и цельной крови человека: они выполняются иммунохроматографическим методом и только в условиях лабораторной диагностики in vitro.
Преимущество этого метода — в его быстроте, для сравнения – результаты тестов на анти-RDB антитела, выполняемые с помощью ИФА, становятся доступны через 1–3 дня. Для оценки иммунного статуса тесты Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА и SGTI-flex-19 IgG также можно применять у пациентов, перенесших респираторное заболевание с подозрением на инфекцию COVID-19, и у людей, не имеющих признаков простудных заболеваний и предположительно не являющихся контактными с больными COVID-2019.
Как выполняется тестирование
«Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА показан для проведения людям, прошедшим вакцинацию, его рекомендуется делать через три недели после второй прививки. Реагенты отвалидированы под векторные вакцины, в первую очередь – Гам-КОВИД-Вак» (ТН Спутник V), – отмечает Федор Куркин. – Результат определяется с достоверностью в 96%. Ориентировочно выполнять тесты следует раз в месяц».
Во временных методических рекомендациях Минздрава отмечается, что «длительность периода детектируемого наличия антител не определена, но в настоящее время рассматривается как период не менее трех месяцев».
По результатам проведенных испытаний Экспресс-ВАК SARS-CoV-2-ИХА чувствительность теста составляет 96,0% (95% доверительный интервал (ДИ) 79,65-99,90%), специфичность – 98,04% (95% ДИ 89,55-99,95%).
Выполнение теста с помощью Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА займет не больше 20 минут. В специальное отверстие тест-картриджа наносят 20 мл сыворотки, плазмы или цельной крови, а затем – 2-3 капли буферного раствора из флакона-капельницы. Время между нанесением образца и первой каплей буферного раствора должно составлять 15–20 секунд. Результат можно оценить спустя 10–20 минут (разработчик не рекомендует интерпретировать результаты позднее 20 минут с момента внесения пробы).
Результаты сравнительного исследования южнокорейской тест-системы SGTI-flex-19 IgG продемонстрировали точность тест-системы в 96,18%. Показатели чувствительности и специфичности составили 92,43 % и 99,15 % соответственно.
Тестирование с помощью SGTI-flex-19 IgG проводится в течение 10 минут. Тестовые кассеты чувствительны к действию влаги, их необходимо использовать сразу после вскрытия. Затем 10 мл образца — цельной венозной крови, плазмы или сыворотки — переносят в специальное углубление на поверхности тестовой кассеты, добавляют три капли буферного раствора и уже через 10 минут считывают результат (через 30 минут любой результат считается недействительным).
Массовое тестирование на антитела служит вспомогательным методом диагностики текущей коронавирусной инфекции, в частности позволяющее эпидемиологам понять, какая доля населения в настоящее время переболела. Однако подобные тесты способны лишь показать, встречался ли человек с коронавирусной инфекцией или, к примеру, перенес ОРВИ. Кроме того, сегодня вовлеченные в борьбу с пандемией специалистам понимают, что даже подтвержденные случаи COVID-19 и наличие в результатах анализов крови переболевших антител класса IgG не гарантируют полной защиты от повторного заражения — иммунитет к SARS-Cov-2 может оказаться совсем не стойким. Именно поэтому сейчас актуальными становятся тесты, позволяющие врачам выяснить, сформирован ли у конкретного пациента — после вакцинации или перенесенного заболевания — протективный иммунитет, защищающий его от повторного инфицирования.
Значение анти-RBD антител
В клетку человека SARS-Cov-2 попадает благодаря S-белку (от англ. spike – шип), чей рецептор-связывающий домен (RBD) прикрепляется к мишени на клетке-хозяине, тем самым обеспечивая инфицирование. На это организм начинает реагировать выработкой антител, и по мере развития иммунного ответа формируются IgG-антитела к различным белкам вируса — к нуклеокапсидному (N, к оболочке, состоящей из нуклеокапсидных c-белков) и к спайковому (S-белок). Правильно выбранные лабораторные тесты IgG – к определенному белку вируса — позволяют врачам судить о возникновении или отсутствии протективного иммунитета, который мог сформироваться после заболевания или вакцинации.
Наличие IgG к нуклеокапсидному белку говорит о наличии в анамнезе пациента перенесенной инфекции, а вот выявление IgG к рецептор-связывающему домену (RDB) – о наличии протективного иммунитета. В многочисленных исследованиях, как отмечается в действующей десятой версии временных методических рекомендаций Минздрава РФ по профилактике, диагностике и лечению коронавирусной инфекции, показано: более 80% вируснейтрализующих антител направлены к рецептор-связывающему домену (RBD) S-белка SARS-CoV-2.
Человеческий иммунитет, выявляя RBD вируса, вырабатывает антитела, которые обладают нейтрализующими свойствами – не позволяют вирусу связываться с клетками. Поэтому для оценки эффективности вакцинации (поствакцинального тестирования) и иммунного статуса человека после COVID-19 необходимы только тест-системы, выявляющие антитела к RBD S-белка (анти-RBD антитела).
Почти четыре месяца — с 18 января — в стране идет вакцинация против коронавируса: прививочные пункты открыты не только в городских поликлиниках и больницах, но и во многих торговых центрах, фуд-моллах, центрах госуслуг и даже в театрах. «Но многие граждане продолжают сомневаться в ее необходимости. И теперь появились тесты, cозданные специально для оценки иммунного ответа, которые позволяют точно ответить на этот вопрос — подтвердить эффективность вакцинации в качестве средства защиты от COVID-19», — отмечает генеральный директор «Авивир» Федор Куркин.
Качественное определение наличия антител к S-белку
Компания «Авивир» первой вывела на российский рынок два RBD-теста: SGTI-flex-19 IgG от компании Sugentech из Южной Кореи был зарегистрирован 3 февраля текущего года, а следом, 16 марта регудостоверение получила тест-система Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА – российская разработка, созданная совместно с резидентом Фонда «Сколково» «Рапид Био». Сейчас две эти тест-системы уже находятся в продаже.
«Оба эти теста — экспресс, время выполнения не превышает 10 и 20 минут. И оба — на выявление антител IgG к спайковому белку, они аналогичны – отмечает генеральный директор «Авивир» Федор Куркин. – Тесты используются перед вакцинацией — чтобы проверить наличие или отсутствие антител и удостовериться тем самым в необходимости вакцинации. Тесты также показаны людям, прошедшим вакцинацию против коронавируса – для определения наличия антител по ее итогам».
Тесты предназначены для качественного выявления антител класса IgG к рецептор-связывающему домену (RBD) поверхностного гликопротеина S коронавируса SARS-CoV-2 в сыворотке, плазме и цельной крови человека: они выполняются иммунохроматографическим методом и только в условиях лабораторной диагностики in vitro.
Преимущество этого метода — в его быстроте, для сравнения – результаты тестов на анти-RDB антитела, выполняемые с помощью ИФА, становятся доступны через 1–3 дня. Для оценки иммунного статуса тесты Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА и SGTI-flex-19 IgG также можно применять у пациентов, перенесших респираторное заболевание с подозрением на инфекцию COVID-19, и у людей, не имеющих признаков простудных заболеваний и предположительно не являющихся контактными с больными COVID-2019.
Как выполняется тестирование
«Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА показан для проведения людям, прошедшим вакцинацию, его рекомендуется делать через три недели после второй прививки. Реагенты отвалидированы под векторные вакцины, в первую очередь – Гам-КОВИД-Вак» (ТН Спутник V), – отмечает Федор Куркин. – Результат определяется с достоверностью в 96%. Ориентировочно выполнять тесты следует раз в месяц».
Во временных методических рекомендациях Минздрава отмечается, что «длительность периода детектируемого наличия антител не определена, но в настоящее время рассматривается как период не менее трех месяцев».
По результатам проведенных испытаний Экспресс-ВАК SARS-CoV-2-ИХА чувствительность теста составляет 96,0% (95% доверительный интервал (ДИ) 79,65-99,90%), специфичность – 98,04% (95% ДИ 89,55-99,95%).
Выполнение теста с помощью Экспресс-ВАК SARS-CoV2-ИХА займет не больше 20 минут. В специальное отверстие тест-картриджа наносят 20 мл сыворотки, плазмы или цельной крови, а затем – 2-3 капли буферного раствора из флакона-капельницы. Время между нанесением образца и первой каплей буферного раствора должно составлять 15–20 секунд. Результат можно оценить спустя 10–20 минут (разработчик не рекомендует интерпретировать результаты позднее 20 минут с момента внесения пробы).
Результаты сравнительного исследования южнокорейской тест-системы SGTI-flex-19 IgG продемонстрировали точность тест-системы в 96,18%. Показатели чувствительности и специфичности составили 92,43 % и 99,15 % соответственно.
Тестирование с помощью SGTI-flex-19 IgG проводится в течение 10 минут. Тестовые кассеты чувствительны к действию влаги, их необходимо использовать сразу после вскрытия. Затем 10 мл образца — цельной венозной крови, плазмы или сыворотки — переносят в специальное углубление на поверхности тестовой кассеты, добавляют три капли буферного раствора и уже через 10 минут считывают результат (через 30 минут любой результат считается недействительным).
