Общая фармакопейная статья «Определение активности ферментных лекарственных препаратов. ОФС.1.2.4.0013.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том I») Общая фармакопейная статья «Определение содержания витаминов в многокомпонентных лекарственных препаратах микробиологическим методом. ОФС.1.2.4.0012.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том I») Приказ Минздрава МО от 16.10.2015 N 1498 «О внесении изменений в Перечень аптечных организаций, осуществляющих в 2015 году отпуск отдельным категориям граждан лекарственных препаратов, медицинских изделий, специализированных продуктов лечебного питания для детей-инвалидов»

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение активности ферментных лекарственных препаратов ОФС.1.2.4.0013.15
Взамен ГФ XI, вып. 2

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на методы определения активности ферментов, которые основаны на определении скорости превращения субстратов для действия энзимов в соответствующие продукты ферментативной реакции, которые они катализируют.

Классификация ферментов

Фермент (E) — белок, обладающий каталитическими свойствами в реакции преобразования субстрата (S) в продукт (P). Согласно международной номенклатуре (табл.), все ферменты подразделяются на 6 классов в зависимости от типа катализируемых ими реакций.

Таблица

Классификация ферментов

N п/п
Название класса ферментов
Типы катализируемых реакций
1
Оксидоредуктазы
Окислительно-восстановительные
2
Трансферазы
Перенос атомных групп и молекулярных остатков 3
Гидролазы
Гидролиз
4
Лиазы
Негидролитическое расщепление С-С, С-О, C-N, C-S, Р-О связей, а также отщепление различных групп с замыканием двойной связи 5
Изомеразы
Изомеризация
6
Лигазы
Соединение 2 молекул с использованием высокоэнергетических соединений

Особенности измерения активности ферментов, описываемые в фармакопейных статьях, определяется их принадлежностью к тому или иному классу. Принцип, положенный в основу всех методов определения активности фермента (E), заключается в регистрации скорости убыли субстрата (S) (то есть вещества, на которое действует фермент) или скорости образования продукта реакции (P). Простейшей схемой для описания кинетики ферментативных реакций является так называемая двухстадийная схема:

, (1)

где: E — фермент;
S — субстрат;
P — продукты реакции;
kкат — каталитическая константа.

Начальная скорость () катализируемой ферментом реакции, при которой расходом субстрата можно пренебречь, описывается уравнением Михаэлиса-Ментен (2):

, (2)

где: Vмакс = k x [E]0 — максимальная скорость реакции; [E]0 — начальная концентрация фермента; KM — константа Михаэлиса.

Для аллостерических ферментов начальная скорость ферментативной реакции не подчиняется уравнению Михаэлиса-Ментен. Для определения скорости ферментативной реакции через определенные промежутки времени отбирают пробы из реакционной смеси и проводят количественное определение методами, основанными чаще всего на спектральных свойствах субстрата или продукта реакции.

Требования к условиям проведения ферментативной реакции

Ферментативная реакция должна проводиться в строго определенных условиях с учетом следующих факторов. 1. Начальная скорость реакции (). Скорость ферментативной реакции количественно можно измерить по убыли субстрата или по образованию продукта реакции. Типичные кинетические кривые ферментативной реакции приведены на рис. 1. Для каждой ферментативной реакции могут быть подобраны условия, при которых начальный участок кривой линеен, т.е. зависимость концентрации образовавшегося продукта или израсходованного субстрата от времени наблюдения имеет прямо пропорциональный характер.

Рисунок 1. Типичные кинетические кривые ферментативной реакции: А — регистрация по скорости исчезновения субстрата реакции; Б — регистрация по скорости образования продукта реакции

Начальная скорость реакции () определяется как тангенс угла наклона линейного участка кривой. Поскольку длительность прямолинейного участка кинетической кривой от опыта к опыту несколько изменяется, время инкубации (при использовании метода отбора проб) должно составлять не более 70% и не менее 20% времени соответствующего прямолинейного участка. 2. Концентрация субстрата ([S]0). В большинстве случаев зависимость начальной скорости ферментативной реакции () от начальной концентрации субстрата ([S]0), согласно уравнению Михаэлиса-Ментен (2) описывается гиперболической функцией (рис. 2).

Рисунок 2. Зависимость начальной скорости реакции  от начальной концентрации субстрата [S]0.

а — ферментативный процесс, подчиняющийся уравнению Михаэлиса-Ментен; б — процесс, для которого характерно ингибирование фермента субстратом; [S]0 — начальная концентрация субстрата; [S]нас — насыщающая концентрация субстрата; [S]опт — оптимальная концентрация субстрата; Vмакс — максимальная скорость реакции;

Начальная скорость реакции () зависит от начальной концентрации субстрата ([S]0) вплоть до его насыщающей концентрации. Под насыщающей концентрацией ([S]нас) понимают такую концентрацию субстрата, при которой начальная скорость реакции практически перестает повышаться при дальнейшем увеличении концентрации субстрата, стремясь к своему предельному значению, называемому максимальной скоростью реакции Vмакс (рис. 2). Отрезок на оси абсцисс, соответствующий скорости, равной половине максимальной, будет представлять собой KM. При проведении ферментативной реакции реакционная смесь должна содержать такое количество субстрата, которое обеспечит насыщение фермента в течение всего хода определения (количество субстрата, взятого для проведения ферментативной реакции, должно быть примерно на 30% выше насыщающей концентрации). Если форма кривой зависимости начальной скорости реакции () от начальной концентрации субстрата ([S]0) отличается от гиперболической, определение параметров по уравнению Михаэлиса-Ментен невозможно. Такие отклонения наблюдаются в случае ингибирования или активации фермента субстратом, а также при работе с аллостерическими ферментами. В этом случае оптимальной является та концентрация субстрата, при которой начальная скорость реакции максимальна ([S]опт) — точка перегиба на экспериментальной кривой зависимости начальной скорости реакции от начальной концентрации субстрата (рис. 2). После выбора насыщающей концентрации субстрата необходимо проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [P] от t. В качестве субстратов используются как природные вещества, такие как альбумин, казеин, крахмал, так и синтетические. Природные субстраты ферментов используют большей частью для подтверждения подлинности. Синтетические субстраты обеспечивают более высокую точность и лучшую воспроизводимость при количественном определении ферментативной активности. 3. Концентрация фермента ([E]0). В соответствии с уравнением Михаэлиса-Ментен начальная скорость ферментативной реакции () в подавляющем большинстве случаев линейно зависит от концентрации фермента ([E]0). Выбор оптимальной для каждого метода концентрации фермента осуществляется экспериментально при помощи построения кривой зависимости начальной скорости реакции от концентрации фермента (рис. 3). После выбора начальной концентрации фермента необходимо проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [P] от t при выбранном значении насыщающей концентрации субстрата.

Рисунок 3. Зависимость начальной скорости реакции  от начальной концентрации фермента [E]0

4. Температура. Особенностью ферментативных реакций является наличие колоколообразной зависимости скорости реакции от температуры в достаточно широком интервале температур, которая характеризуется «температурным оптимумом» реакции. Эта особенность объясняется наложением 2 эффектов: возрастанием скорости реакции при увеличении температуры и ускорением тепловой денатурации белковой молекулы, приводящей к инактивации фермента при достаточно высоких температурах. Обычно ферментативную реакцию рекомендуется проводить в термостате при температуре () °С, если нет иных указаний в фармакопейной статье. Предварительно каждый из реагентов нагревают до температуры 37 °С. 5. Значение pH. Типичная кривая, описывающая для большинства ферментов рН-зависимость начальной скорости ферментативной реакции при наличии 2 ионогенных групп в активном центре фермента, приведена на рис. 4.

Рисунок 4. Зависимость начальной скорости реакции от значения pH

Определение активности следует проводить при оптимальном значении pH, определенном при выбранных значениях концентрации фермента и насыщающей концентрации субстрата; использовании буферного раствора того состава, который не ингибирует фермент и температуре () °С, если нет других указаний в фармакопейной статье. После выбора оптимального значения pH необходимо проверить, сохраняется ли при этом pH линейная зависимость [P] от t при выбранных значениях концентрации фермента и насыщающей концентрации субстрата. 6. Кофакторы. Существуют ферменты, для проявления каталитических свойств которых необходимо присутствие кофакторов — веществ, с помощью которых происходит активация ферментов. Кофакторами могут выступать один или несколько неорганических ионов, таких как Fe2+, Mn2+, Mg2+, Zn2+ или комплексная органическая или металлорганическая молекула, называемая коферментом. Для определения оптимальной концентрации кофактора следует построить кривую зависимости начальной скорости реакции от начальной концентрации кофактора, аналогичную зависимости начальной скорости реакции от начальной концентрации субстрата, и по этой кривой выбрать насыщающую концентрацию кофактора. После выбора насыщающей концентрации кофактора необходимо проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [P] от t. Конкретные параметры ферментативной реакции указываются в фармакопейных статьях.

Способы детекции

Для количественной регистрации скорости ферментативной реакции используют спектрофотометрические, флюресцентные, хеми- и биолюминесцентные методы детекции, основанные на спектральных свойствах субстрата или продукта реакции, а также детекцию с помощью микрокалориметрических датчиков и биодатчиков (биосенсоров) на основе хеми- и биолюминесценции; электрохимические методы, такие как потенциометрия, амперометрия и др. Для одних видов анализа детекция может проводиться непрерывно в ходе реакции, для других — после ее остановки. Способ остановки ферментативной реакции должен быть указан в фармакопейной статье.

Единицы измерения ферментативной активности

Активность фермента измеряется количеством субстрата, преобразованного в продукт в единицу времени, и выражается в Международных единицах (ME) или единицах действия (ЕД). ME — это такое количество фермента, которое при заданных условиях катализирует превращение одного микромоля субстрата за 1 мин. (или одного микроэквивалента затронутых реакцией групп в тех случаях, когда атакуется более одной группы в каждой молекуле субстрата). ЕД — это условная единица активности фермента, величина которой указывается в фармакопейной статье. Нормируются:
— удельная активность препарата, которая выражается в единицах энзимной активности фермента (ME или ЕД) на 1 мг препарата или на 1 мг ферментного белка (в последнем случае удельная активность характеризует чистоту препарата). Определение содержания белка в препарате проводят одним из методов, приведенных в ОФС «Определение белка». — доза, которая выражается в единицах ферментативной активности (ME или ЕД) на единицу лекарственной формы. Перевод единиц активности ЕД в ME и обратно осуществляется опытным путем на основании статистически достаточного материала, обработанного в соответствии с ОФС «Статистическая обработка результатов определения специфической фармакологической активности лекарственных средств биологическими методами».

Определение активности ферментных препаратов в сравнении со стандартным образцом (CO)

С целью снижения погрешности методов определения ферментативной активности необходимо проводить определение ферментативной активности препарата в сравнении со стандартным образцом (CO) данного фермента. Определение ферментативной активности испытуемого препарата и CO проводят в одинаковых условиях опыта. Активность препарата (А) в соответствующих единицах (ME или ЕД) вычисляют по формуле:

,

где: А0 — ферментативная активность CO в единицах (ME или ЕД) на 1 мг белка или препарата; П0 — величина измеряемого параметра для CO; П — величина измеряемого параметра для испытуемого препарата; К — коэффициент, выравнивающий концентрации растворов испытуемого препарата и CO.

Определение активности иммобилизованных ферментов

Иммобилизованными называются ферменты, молекулы которых физически или химически связаны с каким-либо носителем. В качестве носителей могут быть использованы природные и синтетические полимеры, органические низкомолекулярные носители, неорганические материалы. В зависимости от природы носителя иммобилизованные ферменты могут существовать в форме гелей, пленок, гранул, макропористых порошков и в других формах. Активность иммобилизованных ферментов может нормироваться на массу носителя или его площадь. Кинетические характеристики иммобилизованных ферментов, численно определяемые константой Михаэлиса Км и каталитической константой kкат, могут существенно изменяться в зависимости от природы носителя и способа иммобилизации. Поэтому для корректного определения активности иммобилизованных ферментов необходим повторный подбор условий.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение содержания витаминов в многокомпонентных лекарственных препаратах микробиологическим методом ОФС.1.2.4.0012.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод микробиологического определения количественного содержания витаминов в многокомпонентных лекарственных препаратах. Его осуществляют чашечным или пробирочным методами с использованием указанных ниже тест-штаммов микроорганизмов.

Определение количественного содержания витаминов чашечным методом

Тест-штаммы микроорганизмов. Для определения содержания цианокобаламина (C63H88CoN14O14P) используют штамм Escherichia coli 113-3(АТСС 11105).

Выполнение испытания.
Точную навеску порошка растертых драже или таблеток испытуемого препарата, указанную в соответствующих фармакопейных статьях, количественно переносят в мерную колбу определенной вместимости, доводят объем раствора водой очищенной до метки, перемешивают и фильтруют. Из полученного раствора готовят разведение 1% раствором натрия цитрата <а> так, чтобы концентрация раствора для испытания была близкой к контрольной концентрации раствора стандартного образца (СО) цианокобаламина — 0,05 мкг/мл. В чашки Петри (6 чашек для построения стандартной кривой и 3 чашки для раствора испытуемого препарата) одинакового диаметра с ровным и плоским дном, установленные на строго горизонтальной поверхности (регулируют по ватерпасу), разливают по 10-12 мл расплавленной и охлажденной до температуры 48-50 °С основной среды, засеянной суспензией Escherichia coli 113-3 из расчета от 4 до 6 мл суспензии на 200 мл основной среды. После застывания среды в каждой чашке стерильным бором по трафарету делают лунки в агаре: 6 лунок диаметром 8 мм под углом 60° друг к другу. В 3 лунки (через одну) каждой из 6 чашек, используемых для построения стандартной кривой, и 3 чашек — для раствора испытуемого препарата, вносят по 0,1 мл раствора СО контрольной концентрации (0,05 мкг/мл). В 3 лунки (через одну) каждой из 3 чашек препарата вносят по 0,1 мл одной из концентраций остальных растворов СО, а также раствора испытуемого препарата. Чашки инкубируют при температуре 37 °С в течение 16-18 ч. По окончании инкубации измеряют диаметры зон стимуляции роста тест-микроорганизма для каждой концентрации растворов СО. После измерения зон роста для всех концентраций рассчитывают среднюю величину зоны, учитывая в каждом случае 3 чашки, т.е. 9 зон. Затем рассчитывают среднюю величину зоны для контрольной концентрации, учитывая все чашки (27 зон). По разности между средней величиной зоны контрольной концентрации раствора (0,05 мкг/мл), рассчитанной из всех чашек, и средней величиной зоны контрольной концентрации раствора СО, полученной из 3 чашек с каждой отдельной концентрацией, находят поправку к величине зоны данной концентрации. Найденную поправку прибавляют к средней величине зоны данной концентрации, если она положительная, и вычитают, если она отрицательная. Аналогичным образом делают поправку к концентрации раствора испытуемого препарата. Содержание цианокобаламина в 1 драже или 1 таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле:

где: С — содержание цианокобаламина в 1 мл испытуемого раствора, найденное по стандартной кривой, мкг; К — коэффициент разведения;
а — навеска препарата в граммах или количество таблеток; б — средняя масса одной таблетки, г;
106 — коэффициент для пересчета в граммы.

Построение стандартной (калибровочной) кривой. По исправленным значениям величин зон стимуляции роста при добавлении приготовленных концентраций и средней величине зоны контрольной концентрации на всех чашках строят стандартную кривую, откладывая на оси абсцисс концентрации цианокобаламина в мкг/мл, а на оси ординат соответствующие им величины диаметров зон роста. По полученным точкам строят стандартную кривую, находят концентрацию цианокобаламина в мкг/мл и вычисляют его содержание в образце. Примечания.
1. Приготовление основного раствора СО цианокобаламина 100 мкг/мл. В мерной колбе вместимостью 250 мл в 25% спирте растворяют 0,0250 г СО цианокобаламина (в пересчете на сухое вещество), доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Раствор годен к использованию в течение 2 мес. при температуре 2-8 °С во флаконе темного стекла с притертой пробкой. 2. Приготовление рабочего раствора СО цианокобаламина 1 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл основного раствора СО цианокобаламина и доводят объем раствора водой очищенной до метки. Раствор годен в течение 5 сут. при температуре 2-8 °С. Растворы, содержащие цианокобаламин, не должны подвергаться воздействию прямых солнечных лучей. Из рабочего раствора СО цианокобаламина в день исследования готовят растворы, содержащие 0,025; 0,050 и 0,075 мкг цианокобаламина в 1 мл. Для этого соответственно 2,5; 5,0 и 7,5 мл рабочего раствора СО помещают в мерные колбы вместимостью 100 мл, доводят объемы растворов в колбах 1% раствором натрия цитрата до метки и перемешивают. Раствор, содержащий 0,05 мкг цианокобаламина в 1 мл, принимают за раствор СО контрольной концентрации. 3. Хранение и подготовка тест-культуры для анализа. Культуру тест-микроорганизма выращивают на скошенной агаризованной среде при температуре () °С в течение 16-18 ч. Тест-культуру хранят при температуре 2-8 °С, пересевая не реже одного раза в месяц. Состав среды для хранения тест-микроорганизма:

• казеиновый кислотный гидролизат 10% 6 мл <б>
• калия фосфат двузамещенный 0,02 г
• железа сульфат 0,0005 г
• магния сульфат 0,02 г
• L-аспарагин 0,02 г
• глицерин 0,2 г
• агар микробиологический 1,5 г
• цианокобаламин 10 мкг
• вода очищенная до 100 мл pH среды до стерилизации ()

Приготовление среды. Ингредиенты (гидролизат казеина и соли) последовательно растворяют в воде. Аспарагин растворяют отдельно в 10 мл воды с добавлением 2 капель 1 М раствора хлористоводородной кислоты при слабом нагревании и добавляют к раствору солей. Устанавливают pH 7,0 полученной смеси 15% раствором натрия гидроксида, после чего доводят объем среды водой очищенной до 100 мл, прибавляют 0,2 г глицерина и 1,5 г агара микробиологического. Смесь нагревают на водяной бане до полного растворения агара, затем прибавляют 10 мкг цианокобаламина. За 1 сут. до проведения испытания тест-микроорганизм пересевают на пептонно-солевую среду следующего состава:

А) Пептонно-солевая среда агаризованная:

• пептон ферментативный сухой 2,0 г
• натрия хлорид 0,5 г
• агар микробиологический 1,8 г
• вода очищенная до 100 мл

Б) Пептонно-солевая среда жидкая:

• пептон ферментативный сухой 2,0 г
• натрия хлорид 0,5 г
• вода очищенная до 100 мл pH среды до стерилизации ().

Приготовление сред. Жидкую и агаризованную среды разливают в пробирки по 5 мл, стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при температуре 120-121 °С в течение 15 мин. Для получения скошенного агара среду охлаждают в наклонном положении. На обе среды делают посев тест-культуры E.coll из рабочего музея и инкубируют в течение 16-18 ч. при температуре () °С и используют для приготовления посевного материала. 4. Состав и приготовление основной среды. Состав основной среды:

• аммония хлорид 2,0 г
• натрия хлорид 3,0 г
• калия фосфат двузамещенный 0,4 г
• натрия цитрат трехзамещенный 3,0 г
• лактоза 3,0 г
• агар микробиологический 15,0 г
• вода очищенная до 1000 мл pH среды до стерилизации ()

Приготовление среды. Среду разливают по 200 мл в колбы и стерилизуют насыщенным водяным паром при температуре 120-121 °С в течение 15 мин. Хранят при температуре 2-8 °С не более 2 мес. Перед розливом в чашки Петри на каждые 200 мл расплавленной среды добавляют по 5 мл стерильного 40% раствора глюкозы. Раствор глюкозы стерилизуют при температуре 120-121 °С в течение 10 мин. 5. Приготовление посевного материала. Со скошенного пептонно-солевого агара (А) делают смыв суточной тест-культуры 0,9% раствором натрия хлорида или используют бульонную культуру с жидкой питательной среды (Б). Плотность микробной взвеси должна быть (1-2)109 КОЕ/мл. Вся работа должна выполняться в асептических условиях. В работе используют только химически чистую лабораторную посуду.

Определение содержания витаминов пробирочным методом

Пробирочный метод используют для определения количественного содержания D-биотина (C10H16N2S), кальция пантотената (C18H32CaN2O10), фолиевой кислоты (C19H19N7O6), никотиновой кислоты (или никотинамида) в многокомпонентных препаратах.

Тест-штаммы микроорганизмов.
— Lactobacillus plantarum BKM B-578 (ATCC 8014) используют для определения D-биотина, кальция пантотената и кислоты никотиновой (или никотинамида); — Enteroccocus faecalis {E.faecium) BKM B-602 применяют для определения фолиевой кислоты.

Выполнение испытания.
Точную навеску порошка растертых драже или таблеток, указанную в соответствующих фармакопейных статьях или в нормативной документации, количественно переносят водой в мерную колбу определенной вместимости, доводят объем раствора водой очищенной до метки, перемешивают и фильтруют (основной раствор). Готовят растворы рабочих стандартных и испытуемых образцов. Для этого в 2-3 ряда пробирок одинакового размера разливают по 1 мл свежеприготовленной воды очищенной. Образцы в количестве 1 мл с концентрацией D-биотина около 0,002 мкг/мл, кальция пантотената — 0,2 мкг/мл, фолиевой кислоты — 0,004 мкг/мл, никотиновой кислоты (или никотинамида) — 0,32 мкг/мл вносят в первые пробирки соответствующих рядов и делают 6 последовательных разведений в каждом ряду, перемешивая и перенося 1 мл раствора в следующие пробирки ряда; из последней отбирают 1 мл и удаляют в дезинфицирующий раствор. Затем во все пробирки добавляют по 1 мл основной среды. При этом общий объем полученных растворов в каждой пробирке должен быть равен 2 мл. В каждом ряду ставят отрицательный контроль, содержащий 1 мл воды очищенной и 1 мл основной среды. Все пробирки стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при температуре 120-121 °С в течение 10-15 мин. После охлаждения в каждую пробирку вносят по 0,1 мл разведенной взвеси тест-культуры (п. 5). Засеянные пробирки инкубируют при температуре ()°С в течение 16-24 ч. Интенсивность роста тест-культуры в пробирках стандартного и испытуемого образцов измеряют на фотометре-нефелометре при длине волны около 540 нм. Содержание определяемого витамина в одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле:

где: С — среднеарифметическое содержание D-биотина в 1 мл, найденное по стандартной кривой для шести концентраций растворов испытуемого образца с учетом всех разведений (4; 8; 16; 32; 64 и 128), в мкг; V, V1, V2 — разведения, мл;
а — навеска испытуемого образца в граммах или количество таблеток; б — средняя масса одной таблетки, г;
106 — коэффициент для пересчета, г.

Примечания.
Приготовление рабочих растворов CO витаминов. 1. CO D-биотина. В мерную колбу вместимостью 500 мл помещают 200 мл 25% спирта, в котором растворяют 0,0010 г D-биотина на кипящей водяной бане. После охлаждения объем раствора доводят тем же растворителем до метки (основной раствор) и перемешивают. В 1 мл основного раствора содержится 2 мкг D-биотина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мл основного раствора и доводят объем раствора водой очищенной до метки. Переносят 1 мл полученного раствора в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки (рабочий раствор). Рабочий раствор содержит 0,002 мкг D-биотина в 1 мл. Содержание D-биотина в стандартном ряду разведений должно соответствовать 0,0005; 0,00025; 0,000125; 0,0000625; 0,000031; 0,0000156 мкг/мл и 0 мкг/мл — в отрицательном контроле. 2. CO кальция пантотената. В мерной колбе вместимостью 50 мл в 25% спирте растворяют 0,050 г кальция пантотената (в пересчете на сухое вещество по содержанию азота) и доводят объем раствора тем же растворителем до метки (основной раствор). В 1 мл основного раствора содержится 1 мг кальция пантотената. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем раствора водой очищенной до метки. Переносят 1 мл полученного раствора в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора водой очищенной до метки (рабочий раствор). Рабочий раствор содержит 0,2 мкг кальция пантотената в 1 мл. Содержание кальция пантотената в стандартном ряду разведений должно соответствовать 0,05; 0,025; 0,0125; 0,00625; 0,0031; 0,00156 мкг/мл и 0 мкг/мл — в отрицательном контроле. 3. CO фолиевой кислоты. В мерной колбе вместимостью 100 мл в 5 мл 1% раствора натрия двууглекислого <в> растворяют 0,0100 г фолиевой кислоты, доводят объем водой очищенной до метки (основной раствор). В 1 мл основного раствора содержится 100 мкг фолиевой кислоты. В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл основного раствора и доводят объем раствора водой очищенной до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл полученного раствора, доводят объем раствора водой очищенной до метки. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл (рабочий раствор). Рабочий раствор содержит 0,004 мкг фолиевой кислоты в 1 мл. Содержание фолиевой кислоты в стандартном ряду при приготовлении разведений должно соответствовать 0,001; 0,0005; 0,00025, 0,000125; 0,0000625; 0,00003125 мкг/мл и 0 мкг/мл — в отрицательном контроле. 4. CO никотиновой кислоты (или никотинамида). В мерной колбе вместимостью 100 мл в 25% спирте растворяют 0,0100 г никотиновой кислоты (или никотинамида) и доводят объем раствора тем же растворителем до метки (основной раствор). В 1 мл основного раствора содержится 100 мкг никотиновой кислоты или никотинамида. Раствор хранят при температуре 2-8 °С не более 1 мес. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 мл основного раствора и доводят объем раствора водой очищенной до метки. 4 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки. Рабочий раствор содержит 32 мкг/мл никотиновой кислоты или никотинамида. Содержание кислоты никотиновой или никотинамида в стандартном ряду разведений должно соответствовать 0,08; 0,04; 0,02; 0,01; 0,005 мкг/мл и 0 мкг/мл — в отрицательном контроле. Растворы годны к использованию в течение 2-3 мес. при хранении в емкости с притертой пробкой при температуре 2-8 °С.

2. Построение стандартной кривой. На оси абсцисс откладывают содержание определяемого витамина (в мкг/мл) в пробирках стандартного ряда, а на оси ординат — соответствующие им значения процента светопропускания. По полученным точкам вычерчивают стандартную кривую, находят концентрацию соответствующих витаминов в мкг/мл и вычисляют их содержание в образце.

3. Хранение и подготовка тест-культуры для анализа 3.1. L.plantarum ВКМ В-578 (АТСС 8014) поддерживают на питательной среде следующего состава:

• дрожжевой экстракт 2,0 г
• пептон 0,5 г
• глюкоза 0,5 г
• натрия ацетат 0,5 г
• твин-80 0,01 г
• агар микробиологический 1,6 г
• вода очищенная до 100 мл pH ()

3.2. Е.faecalis BKM В-602 поддерживают на питательной среде следующего состава:

• дрожжевой экстракт 1,0 г
• глюкоза 0,5 г
• натрия ацетат 0,5 г
• агар микробиологический 1,8 г
• вода очищенная до 100 мл pH ().

Ингредиенты последовательно растворяют в воде, устанавливают требуемое значение pH 6,8 и доводят объем водой очищенной до 100 мл. Смесь нагревают при перемешивании на кипящей водяной бане до полного растворения агара, разливают по 5 мл в пробирки, стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при температуре 120-121 °С в течение 10-15 мин., охлаждают в наклонном положении для получения скошенной поверхности агара. Посевы инкубируют при температуре () °С в течение 16-24 ч. Тест-культуру хранят при температуре 2-8 °С, пересевая не реже одного раза в мес. Примечания.
Состав и приготовление основной среды.
1. Состав среды для определения содержания D-биотина:

—
глюкоза
40 г
—
натрия ацетат
20 г
—
раствор гидролизата казеина 10%
100 мл <б>
—
раствор L-цистина и D, L-триптофана
100 мл <г>
—
раствор твина-80
1 мл <д>
—
раствор аденина, гуанина и урацила
10 мл <е>
—
раствор кальция пантотената и тиамина
20 мл <ж>
—
раствор рибофлавина
40 мл <з>
—
раствор ПАБК, пиридоксина, никотиновой кислоты 20 мл <и>
—
растворы солей А <к> и солей Б <л>
по 10 мл
—
вода очищенная
до 1000 мл

pH ()

2. Состав среды для определения содержания кальция пантотената:

—
глюкоза
40 г
—
натрия ацетат
20 г
—
раствор гидролизата казеина <б>
100 мл
—
раствор L-цистина и D, L-триптофана <г> 100 мл
—
раствор твина-80 <д>
1 мл
—
раствор аденина, гуанина, урацила <е>
20 мл
—
раствор рибофлавина, тиамина, D-биотина <м> 20 мл
—
раствор ПАБК, пиридоксина, никотиновой кислоты <и> 20 мл
—
растворы солей А <к> и солей Б <л>
по 20 мл
—
вода очищенная
до 1000 мл

pH ()

3. Состав среды для определения содержания фолиевой кислоты:

—
глюкоза
40 г
—
натрия цитрат <а>
20 г
—
раствор гидролизата казеина <б>
120 мл
—
раствор L-цистина, D, L-триптофана, L-аспарагина <н> 100 мл
—
раствор аденина, гуанина, урацила и ксантина <о> 10 мл
—
раствор тиамина, рибофлавина, никотиновой кислоты <п> 10 мл
—
раствор кальция пантотената <р>
8 мл
—
раствор пиридоксина <с>
24мл
—
раствор ПАБК <т>
10 мл
—
раствор биотина <у>
0,5 мл
—
раствор солей Б <л>
10 мл
—
вода очищенная
до 1000 мл

pH ()

4. Состав среды для определения содержания никотиновой кислоты (никотинамида):

—
глюкоза
40 г
—
натрия ацетат
20 г
—
раствор гидролизата казеина <б>
100 мл
—
раствор аденина, гуанина, урацила <е>
10 мл
—
раствор L-цистина и D, L-триптофана <г> 100 мл
—
раствор тиамина и кальция пантотената <ж> 2 мл
—
раствор рибофлавина <з>
8 мл
—
раствор пиридоксина и ПАБК <ф>
2 мл
—
раствор биотина <у>
4 мл
—
растворы солей А <к> и солей Б <л>
по 10 мл
—
вода очищенная
до 1000 мл

pH ()

5. Приготовление питательных сред для определения содержания витаминов. Глюкозу предварительно обрабатывают углем активированным осветляющим. Для этого к 200 мл 20% раствора глюкозы добавляют 10 г угля, встряхивают в течение 40 мин. и фильтруют через плотный бумажный фильтр. К раствору глюкозы добавляют остальные растворы, устанавливают pH 6,8 и доводят объем среды водой очищенной до 1000 мл. Среду нагревают на кипящей водяной бане 5 мин., охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. Готовую среду разливают по 70 мл в колбы вместимостью 100 мл, закрывают и хранят в морозильной камере при температуре минус 18-25 °С в течение 3 мес. Перед использованием среду размораживают при комнатной температуре.

Приготовление посевного материала

Для приготовления посевного материала используют один из нижеприведенных способов: 1) За 1 сут. до испытания тест-микроорганизм пересевают на питательную среду соответствующего состава (п. 3) и инкубируют при температуре () °С в течение 16-24 ч. Клетки отделяют центрифугированием в асептических условиях, надосадочную жидкость сливают, а осадок суспендируют в 10 мл стерильного раствора натрия хлорида <х>. Вносят 0,05 мл полученной суспензии в 10 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Мутность используемой суспензии должна быть ()% по шкале светопропускания фотометра-нефелометра при длине волны около 540 нм. 2) При определении D-биотина, кальция пантотената и никотиновой кислоты (или никотинамида) за 1 сут. до испытания небольшое количество исходной тест-культуры L.plantarum ВКМ В-758 (АТСС 8014) пересевают бактериологической петлей на агаризованную среду для лактобактерий (п. 3.1). Инкубируют при температуре () °С в течение 16-24 ч. После этого культуру смывают стерильным раствором натрия хлорида и доводят содержание микробных клеток до 109 КОЕ/мл по оптическому стандарту мутности. Затем переносят 0,2 мл взвеси в пробирку с 9,0 мл раствора натрия хлорида, перемешивают и используют в качестве посевного материала для внесения в основную питательную среду (пп. 4.1, 4.2 и 4.4). Enteroccocus faecalis (faecium) ВКМ В-602 пересевают в жидкую питательную среду следующего состава:

• дрожжевой экстракт 2,0 г
• пептон 0,5 г
• глюкоза 0,5 г
• натрия ацетат 0,5 г
• твин-80 0,01 г
• вода очищенная до 100 мл pH ().

Готовую среду разливают в пробирки по 10 мл и стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при температуре 120-121 °С в течение 10-15 мин. Последующие этапы работы проводят по той же схеме, что и для L.plantarum ВКМ В-758 (АТСС 8014). При испытании допускается использование коммерческих сухих стандартных питательных сред известных производителей. В работе используют только химически чистую лабораторную посуду.

Примечания.
а) Приготовление 1% раствора натрия цитрата. В мерной колбе вместимостью 1000 мл в воде очищенной растворяют 10 г натрия цитрата и доводят объем раствора водой до метки. Раствор годен к использованию в течение 7 сут. в условиях хранения при температуре 2-8 °С. б) Приготовление 10% раствора кислотного гидролизата казеина (свободного от витаминов). При приготовлении среды для хранения культуры можно использовать коммерческий сухой солянокислый гидролизат казеина в соответствующем количестве или 10% казеиновый кислотный гидролизат, для которого используют казеин размолотый. В круглодонной колбе вместимостью 1000 мл смешивают 100 г казеина размолотого с 500 мл 20% раствора хлористоводородной кислоты <ц>. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 24 ч. Первые 5-8 ч. растворения казеина нагревание проводят на кипящей водяной бане, затем на электроплитке с асбестовой сеткой. Из полученного гидролизата при пониженном давлении отгоняют хлористоводородную кислоту. К густому остатку прибавляют 300 мл воды очищенной, перемешивают и снова отгоняют до получения густого сиропа. Указанную операцию повторяют дважды. Далее растворяют оставшуюся массу в 100 мл воды, доводят pH раствора до 3,5 с помощью 30% раствора натрия гидроксида и доводят объем раствора водой очищенной до 1000 мл. К готовому раствору прибавляют 20 г угля активированного, встряхивают в течение 1 ч., фильтруют на воронке Бюхнера с отсасыванием. Обработку углем повторяют, получают бесцветный или светло-желтый раствор, который разливают во флаконы по 100 мл, и стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при температуре 120-121 °С в течение 15 мин. Хранят при температуре 2-8 °С. в) Приготовление 1% раствора натрия двууглекислого. Растворяют в 100 мл воды очищенной 1 г натрия двууглекислого и хранят при температуре 2-8 °С не более 1 нед. г) Приготовление раствора L-цистина и D, L-трилтофана. В мерной колбе вместимостью 500 мл в 20 мл 20% раствора хлористоводородной кислоты <ц> растворяют 1 г L-цистина и 1 г D, L-триптофана (или 0,5 г L-триптофана), нагревают до 70-80 °С, периодически помешивая, до полного растворения аминокислот. После охлаждения объем доводят водой очищенной до метки и хранят при температуре 2-8 °С. д) Приготовление раствора твина-80. Растворяют 2,5 г твина-80 в 25 мл спирта. Хранят при температуре 2-8 °С. е) Приготовление раствора аденина, гуанина и урацила. По 0,2 г аденина сульфата, гуанина и урацила растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл с добавлением 10 мл 20% раствора хлористоводородной кислоты <ц> при длительном нагревании на кипящей водяной бане. После охлаждения доводят объем водой очищенной до метки и хранят при температуре 2-8 °С в течение 1 мес. ж) Приготовление раствора кальция пантотената и тиамина. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют 10 мг кальция пантотената и 5 мг тиамина хлорида в 25 мл 25% спирта, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и хранят при температуре 2-8 °С в течение 2 нед. з) Приготовление раствора рибофлавина. В мерной колбе вместимостью 200 мл растворяют 10 мг рибофлавина в небольшом количестве воды с добавлением 1 мл ледяной уксусной кислоты, доводят объем водой очищенной до метки. Хранят в емкости из темного стекла при температуре 2-8 °С в течение 2 нед. и) Приготовление раствора пара-аминобензойной кислоты (ПАБК), никотиновой кислоты и пиридоксина. Раствор готовят в 25% спирте из расчета, чтобы в 1 мл содержалось 10 мкг ПАБК, 40 мкг никотиновой кислоты и 20 мкг пиридоксина гидрохлорида. Раствор хранят при температуре 2-8 °С в течение 2 нед. к) Приготовление раствора солей А. Растворяют 5 г калия фосфата однозамещенного и 5 г калия фосфата двузамещенного в 50 мл воды очищенной. л) Приготовление раствора солей Б. Растворяют 1 г магния сульфата, 0,05 г натрия хлорида, 0,01 г железа сульфата и 0,05 г марганца сульфата в 50 мл воды очищенной. Растворы солей А и Б хранят при температуре 2-8 °С. м) Приготовление раствора рибофлавина, тиамина и D-биотина. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют 20 мг рибофлавина, 10 мг тиамина хлорида и 4 мг D-биотина в 50 мл раствора 0,02 М уксусной кислоты, объем доводят водой очищенной до метки. Хранят в емкости из темного стекла при температуре 2-8 °С. н) Приготовление раствора L-цистина, D, L-триптофана и L-аспарагина. По 1 г L-цистина, D, L-триптофана и L-аспарагина растворяют в 200 мл воде очищенной с добавлением 20 мл 20% раствора хлористоводородной кислоты <ц> в мерной колбе вместимостью 500 мл, нагревают до 70-80 °С, периодически помешивая, до полного растворения аминокислот. После охлаждения объем раствора доводят водой до метки и хранят при температуре 2-8 °С. о) Приготовление раствора аденина, гуанина, урацила и ксантина. По 0,1 г аденина сульфата, гуанина хлорида, урацила и ксантина растворяют в воде очищенной в мерной колбе вместимостью 100 мл с добавлением 10 мл 20% раствора хлористоводородной кислоты <ц> при длительном нагревании на кипящей водяной бане. После охлаждения доводят объем водой очищенной до метки и хранят при температуре 2-8 °С. п) Приготовление раствора тиамина, рибофлавина и никотиновой кислоты (никотинамида). По 10 мг тиамина хлорида, рибофлавина и 30 мг никотиновой кислоты растворяют приблизительно в 150 мл воды очищенной с добавлением 1 мл уксусной кислоты ледяной в мерной колбе вместимостью 250 мл, объем доводят водой очищенной до метки. Хранят в емкости из темного стекла при температуре 2-8 °С в течение 2 нед. р) Приготовление раствора кальция пантотената. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют 10 мг кальция пантотената в 25 мл воды очищенной, добавляют 25 мл спирта, доводят водой до метки. Хранят при температуре 2-8 °С в течение 1 мес. с) Приготовление раствора пиридоксина. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют 10 мг пиридоксина гидрохлорида в 25 мл воды очищенной, добавляют 25 мл этилового спирта, доводят водой до метки. Хранят при температуре 2-8 °С в течение 1 мес. т) Приготовление раствора ПАБК. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют 2 мг ПАБК в 25 мл воды очищенной, добавляют 25 мл этилового спирта, доводят водой до метки и перемешивают. Хранят при температуре 2-8 °С в течение 1 мес. у) Приготовление раствора D-биотина. В мерной колбе вместимостью 500 мл растворяют 1 мг D-биотина при нагревании на кипящей водяной бане в 200 мл воды очищенной с добавлением 2 мл уксусной кислоты ледяной, доводят водой до метки. Хранят при температуре 2-8 °С. ф) Приготовление раствора пиридоксина и ПАБК. По 10 мг пиридоксина и ПАБК растворяют в 25 мл воды очищенной в мерной колбе вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл этилового спирта, доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Хранят при температуре 2-8 °С не более 1 мес. х) Приготовление раствора натрия хлорида (0.9%) изотонического. Растворяют 2,25 г натрия хлорида в 250 мл воды очищенной, разливают по 10-15 мл в пробирки, стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при температуре 120-121 °С в течение 15 мин. ц) Приготовление 20% раствора хлористоводородной кислоты. Разбавляют 425 мл хлористоводородной кислоты концентрированной (d = 1,19) водой очищенной до 1000 мл и перемешивают.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

ПРИКАЗ
от 16 октября 2015 г. N 1498

О ВНЕСЕНИИ ИЗМЕНЕНИЙ В ПЕРЕЧЕНЬ АПТЕЧНЫХ ОРГАНИЗАЦИЙ, ОСУЩЕСТВЛЯЮЩИХ В 2015 ГОДУ ОТПУСК ОТДЕЛЬНЫМ КАТЕГОРИЯМ ГРАЖДАН ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ, СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ ЛЕЧЕБНОГО ПИТАНИЯ ДЛЯ ДЕТЕЙ-ИНВАЛИДОВ

Приказываю:
Внести в приказ Министерства здравоохранения Московской области от 02.02.2015 N 133а «Об утверждении Перечня аптечных организаций, осуществляющих отпуск лекарственных препаратов, медицинских изделий и специализированных продуктов лечебного питания отдельным категориям граждан» (с изменениями, внесенными приказами Министерства здравоохранения Московской области от 13.03.2015 N 360, от 22.09.2015 N 1326) следующие изменения: 1. Дополнить приложение «Перечень аптечных организаций, осуществляющих в 2015 году отпуск отдельным категориям граждан лекарственных препаратов, медицинских изделий и специализированных продуктов лечебного питания» к приказу строками согласно приложению 1. 2. Исключить из приложения к приказу строки согласно приложению 2.

Министр здравоохранения
Московской области
Н.В.СУСЛОНОВА

Приложение 1
к приказу МЗ МО
от 16 октября 2015 г. N 1498

Наименование муниципального образования Наименование юридического лица
N
Пункт отпуска
Адрес пункта отпуска
Балашиха
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
136
Аптечный пункт
Московская область, г. Балашиха, проспект Ленина, д. 30, пом. 324 Балашиха
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
144
Аптечный пункт
Московская область, г. Балашиха, мкр-н Салтыковка, ул. Островского, д. 4 Воскресенский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
171
Аптечный пункт
Московская область, г. Воскресенск, ул. Тополиная, д. 29 Дзержинский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
142
Аптечный пункт
Московская область, г. Дзержинский, ул. Ленина, д. 30 Дубна
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
141
Аптечный пункт
Московская область, г. Дубна, ул. 9 Мая, д. 7в, строение 1 Истринский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
147
Аптечный пункт
Московская область, г. Истра, ул. Урицкого, д. 83 Истринский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
148
Аптечный пункт
Московская область, Истринский р-он, г. Дедовск, ул. Больничная, д. 5, корп. 11 Каширский
ОАО «Мособлфармация»
1068
Аптека
г. Кашира, ул. Советская, д. 6
Коломна и район
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
34
Аптечный пункт
Московская область, г. Коломна, ул. Октябрьской революции, д. 318 Котельники
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
138
Аптечный пункт
Московская область, г. Котельники, мкр-н Силикат, д. 42 Котельники
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
140
Аптечный пункт
Московская область, г. Котельники, мкр-н Ковровый, д. 26 Красногорский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
145
Аптечный пункт
Московская область, Красногорский район, пос. Нахабино, ул. Институтская, д. 9а Красногорский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
146
Аптечный пункт
Московская область, г. Красногорск, ул. Карбышева, д. 4 Лыткарино
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
164
Аптечный пункт
Московская область, г. Лыткарино, ул. Комсомольская, д. 3 Люберецкий
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
154
Аптечный пункт
Московская область, Люберецкий район, пос. Красково, ул. Карла Маркса, д. 90 Люберецкий
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
156
Аптечный пункт
Московская область, г. Люберцы, пос. ВУГИ, д. 26 «А» Подольский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
150
Аптечный пункт
Московская область, г. Подольск, ул. Кирова, д. 27 Пушкинский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
143
Аптечный пункт
Московская область, г. Пушкино, мкр-н Заветы Ильича, у. Вокзальная, д. 11 Раменский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
153
Аптечный пункт
Московская область, г. Раменское, ул. Махова, д. 14 Раменский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
166
Аптечный пункт
Московская область, Раменский район, пос. Ильинский, ул. Первомайская, д. 10 Рузский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
127
Аптечный пункт
Московская область, Рузский район, п. Тучково, ул. Восточный микрорайон, д. 24 «А» Солнечногорский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
161
Аптечный пункт
Московская область, Солнечногорский район, г.п. Андреевка, р.п. Андреевка, ул. Жилинская, д. 1А Чеховский
ОАО «Мособлфармация»
1422
Аптека
Московская область, Чеховский район, с. Троицкое, д. 48 Чеховский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
159
Аптечный пункт
Московская область, Чеховский район, пос. Любучаны, ул. Спортивная, д. 7 Щелковский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
157
Аптечный пункт
Московская область, Щелковский район, сельское поселение Медвежье-Озерское, д. Медвежьи Озера, д. 72 Щелковский
ГБУ МО «Мособлмедсервис»
158
Аптечный пункт
Московская область, Щелковский район, дачный поселок Загорянский, ул. Горького, д. 6

Приложение 2
к приказу МЗ МО
от 16 октября 2015 г. N 1498

Наименование муниципального образования Наименование юридического лица
N
Пункт отпуска
Адрес пункта отпуска
Воскресенский
ООО ПКП «Практика»

Аптечный пункт
г. Воскресенск, ул. Гражданская, 2а, поликлиника N 2 Коломна и район
ОАО «Мособлфармация»
1107
Аптека
Московская область, г. Коломна, ул. Макеева, д. 2, пом. 99 Красногорский
ООО «Инфарм»

Аптечный пункт
Красногорский район, пгт. Нахабино, ул.Институтская, д. 9А Льггкарино
ОАО «Мособлфармация»
1490
Аптечный пункт
г. Лыткарино, ул. Комсомольская, д. 3
Люберецкий
ОАО «Мособлфармация»
1493
Аптечный пункт
г. Люберцы, пос. ВУГИ, д. 26а
Люберецкий
ОАО «Мособлфармация»
1821
Аптечный пункт
Люберецкий район, пос. Красково, ул. К.Маркса, д. 90 Раменский
ОАО «Фармакон»

Аптека готовых лекарственных форм «Чулково» Московская обл., Раменский район, с.о. Чулковский, д. Чулково Раменский
ОАО «Фармакон»

Аптека готовых лекарственных форм «Ильинская» Московская обл., Раменский район, пос. Ильинский, ул. Московская, д. 27 Солнечногорский
ООО «Мартин Фарм»

Аптечный пункт
Московская область, Солнечногорский район, пос. Андреевка, ул. Жилинская, д. 1А