«Контроль сыворотки крови крупного рогатого скота на присутствие посторонних вирусов и микоплазм. Методические указания. МУК 4.2.2123-06» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 17.08.2006) <Письмо> Росздравнадзора от 17.08.2006 N 04И-666/06 «О необходимости изъятия недоброкачественных лекарственных средств»

Документ введен в действие с 17 августа 2006 года. Текст документа

Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы по
надзору в сфере защиты
прав потребителей и
благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
17 августа 2006 г.

Дата введения:
с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

КОНТРОЛЬ СЫВОРОТКИ КРОВИ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ПРИСУТСТВИЕ
ПОСТОРОННИХ ВИРУСОВ И МИКОПЛАЗМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.2123-06

1. Разработаны: ФГУН «Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича» Роспотребнадзора (Н.В.Шалунова, З.Е.Бердникова, Е.М.Петручук).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 11.07.2006 г.).
3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 17 августа 2006 г.
4. Введены взамен: «Контроль сыворотки крови крупного рогатого скота на отсутствие вирусов-контаминантов и микоплазм» РД 42-28-14-88.
5. Область применения

1.1. Методические указания устанавливают методы контроля коммерческой сыворотки крови крупного рогатого скота (далее — сыворотка) на присутствие посторонних вирусов и микоплазм. Сыворотка широко применяется при культивировании органов и тканей животных, используемых для приготовления профилактических и диагностических иммунобиологических препаратов и в научных исследованиях. Сыворотка является одним из компонентов питательных сред, используемых для культивирования первичных и перевиваемых клеточных культур. 1.2. Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, выпускающих и контролирующих медицинские иммунобиологические профилактические препараты. 1.3. Методические указания также могут использоваться организациями, зарегистрированными в Российской Федерации, выпускающими и контролирующими медицинские иммунобиологические профилактические препараты, и специалистами научных лабораторий.

2. Общие положения

Контроль сыворотки на присутствие посторонних вирусов предусматривает использование первично-трипсинизированных и перевиваемых клеточных культур, являющихся высокочувствительными и доступными для выявления наиболее часто встречающихся вирусов-контаминантов. В этих культурах хорошо размножаются с развитием цитопатических изменений вирусы парагриппа, инфекционного ринотрахеита, диареи и аденовирусы. Продолжительность контроля 28 сут. Контроль сыворотки на присутствие микоплазм предусматривает проведение двух методов: 1. Микробиологический метод. Метод основан на выявлении роста микоплазм при внесении испытуемой сыворотки в питательные среды. Продолжительность контроля 21 сут. 2. Метод индикаторной клеточной культуры (цитохимический метод). Метод основан на выявлении ДНК микоплазм, окрашенных флюорохромом Hoechst-33258 на индикаторной клеточной культуре Vero. Продолжительность контроля 3-5 сут.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, оборудование, реактивы и материалы

3.1. При выполнении контроля должны быть применены следующие средства измерений, оборудование и вспомогательные устройства: весы аптечные от 1 до 20 г, погрешность +/- 20 мг ТУ 64-1-2834-80 колбы стеклянные, конические,
вместимостью 50 мл, 100 мл ГОСТ 25336-82Е стакан химический, вместимостью 1000 мл ГОСТ 25336-82Е пипетки градуированные от 1,0 до 10,0 мл ГОСТ 29227-91 пробирки бактериологические
вместимостью от 10,0 до 20,0 мл ГОСТ 25336-82Е стакан химический, вместимостью 1000 мл ГОСТ 25336-82Е флаконы для культивирования из

 нейтрального стекла (матрасы)             ГОСТ 5636-70 флаконы, вместимостью 100, 500 мл         МРТУ 5031-32 мешалка магнитная                         МРТУ 64-1-1503-67 

микроскоп биологический (любой модели)
микроскоп люминесцентный серии ЛЮМАМ

 ножницы медицинские                       ГОСТ 21239-93 пинцеты анатомические                     ТУ 64-1-37-78 пробки резиновые                          ТУ 38.006269-95 стекла предметные                         ТУ 9464-001-33016370-95 чашки Петри (однократного применения)     ТУ 64-2-19-79 воронка стеклянная                        ГОСТ 25336-82Е камера Горяева                            ТУ 9443-001-11856833-94 

термостат на температуру 37 град. С
с погрешностью измерения не более
+/- 1 град. С
холодильник с температурой от 4 до
10 град. С, вместимостью 1000 мл
холодильник с температурой минус
(20 +/- 4) град. С
центрифуга ЦЛС-3 МРТУ 42.1778-65 (495)

3.2. При выполнении контроля должны быть применены следующие реактивы и материалы:

 бензилпенициллина натриевая соль          ФСП 42-0048-1083-01 стрептомицина сульфат                     ФС 42-3726-99 версена раствор                           ФСП 42-0196-3274-02 вода дистиллированная                     ГОСТ 6709-72 

гидролизат сердца крупного рогатого
скота

 дрожжи хлебопекарные прессованные         ГОСТ 171-81 глицерин, чда                             ГОСТ 6259-75 масло иммерсионное кедровое (чистое)      ТУ 81-05-79-75 мясная вода                               ТУ 42.14.271-82 натрия гидроокись                         ГОСТ 4228-77 натрия хлорид                             ГОСТ 4233-77 раствор Хенкса                            ФСП 42-0343-3541-02 спирт этиловый ректификованный 96 град.                                  ГОСТ 18300-87 питательная среда ДМЕМ                    ФСП 42-0343-3544-02 

сыворотка крови крупного рогатого
скота, жидкая для культур клеток
(предварительно отконтролированная
на присутствие посторонних вирусов
и микоплазм) ФСП 42-0196-4672-03 тестикулы эмбрионов быка (получают
на мясокомбинате, срок хранения не
более 1 сут. при температуре от 4
до 10 град. С)

 трипсин (0,25%-й раствор)                 ФСП 42-0343-3805-03 хлороформ                                 ГОСТ 20015-88 бумага фильтровальная                     ГОСТ 12026-761 вата медицинская гигроскопическая         ТУ 8195-01116673801-99 марля медицинская                         ГОСТ 9412-93,                                           ТУ 9390-0119-34576906-95

4. Требования безопасности

Работу с микроорганизмами 3 и 4 групп проводят в соответствии с СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами».

5. Условия проведения контроля

Подготовительные операции и испытания на присутствие посторонних вирусов и микоплазм проводят в чистых помещениях класса А/В (GMP) с ламинарным потоком воздуха при соблюдении правил асептики, при температуре (20 +/- 2) град. С и относительной влажности 60-70%.

6. Контроль сыворотки на присутствие посторонних вирусов

При выполнении контроля используют два вида клеточных культур: первично-трипсинизированные — тестикулы эмбрионов быка (ТБ) 4-6-месячного возраста и перевиваемые — почки быка (МДВК) или любые другие перевиваемые клеточные культуры почки крупного рогатого скота, в которые вносят исследуемые сыворотки. Принцип метода основан на появлении цитопатического действия (ЦПД) или гемадсорбции под действием вирусов-контаминантов.

6.1. Подготовка к выполнению контроля

При подготовке к выполнению контроля сыворотки на присутствие посторонних вирусов должны быть выполнены следующие операции: 6.1.1. Приготовление первично-трипсинизированной клеточной культуры тестикулов эмбрионов быка (ТБ). 6.1.2. Доставляют тестикулы эмбрионов быков 4-6-месячного возраста с перевязанной мошонкой с мясокомбината в любом стерильном сосуде с 250-270 мл раствора Хенкса с 500 ед/мл бензилпенициллина калиевой или натриевой соли. 6.1.3. Обжигают кожу мошонки над пламенем горелки и обрабатывают тампоном со спиртом. 6.1.4. Срезают ножницами кожу с кончика мошонки и, подтягивая тестикулы за семенные канатики, извлекают их. 6.1.5. Помещают тестикулы в стерильную чашку Петри и удаляют ножницами белочную оболочку. 6.1.6. Переносят тестикулы в чашку Петри с 30-35 мл раствора Хенкса с 100 ед/мл антибиотика. 6.1.7. Разрезают тестикулы вдоль и вылущивают ножницами содержимое в раствор Хенкса. 6.1.8. Промывают ткань тестикулов до просветления жидкости 2-3 раза в растворе Хенкса с 500 ед/мл антибиотика. 6.1.9. Помещают ткань тестикулов в колбу вместимостью 500 мл с перемешивающим стержнем, прилагаемым к магнитной мешалке. 6.1.10. Нагревают 0,2%-й раствор трипсина до температуры (20 +/- 2) град. С и наливают 100-150 мл в колбу. Колбу ставят на магнитную мешалку и включают ее. Скорость вращения перемешивающего стержня должна быть такой, чтобы жидкость не пенилась и стержень не ударялся о стенки колбы. Перемешивание проводят 5-6 мин.
6.1.11. Сливают надосадочную жидкость после первого цикла трипсинизации в колбу для отходов. 6.1.12. Проводят 4-5 циклов трипсинизации. 6.1.13. Сливают надосадочную жидкость после каждого цикла во флаконы вместимостью 100 мл. 6.1.14. Помещают флаконы в центрифугу и осаждают клетки при скорости 1000-1500 об/мин. в течение 10-15 мин. 6.1.15. Вынимают флаконы из центрифуги, сливают надосадочную жидкость в сосуд для отходов. 6.1.16. Добавляют в каждый флакон к осадку клеток по 10-15 мл среды 0,5%-го гидролизата лактальбумина на растворе Хенкса. 6.1.17. Объединяют полученные суспензии клеток в один флакон и отбирают пипеткой (0,5 +/- 0,01) мл.

6.1.18. Добавляют к 0,5 мл этой суспензии 0,5 мл 0,1%-го раствора метиленового синего и подсчитывают окрашенные клетки в

х
камере Горяева при увеличении 70. Для точности результатов подсчет проводят в нескольких пробах. Количество клеток в 1 мл подсчитывают по формуле:

                            а х 1000 х 2                        Х = ------------ , где                                0,9

X — концентрация клеток в 1 мл исходной суспензии; а — среднее число клеток в нескольких пробах; 0,9 — объем камеры Горяева в куб. мм;
1000 — число куб. мм в 1 куб. см;
2 — коэффициент разведения суспензии добавленным объемом краски.

6.1.19. Разводят суспензию клеток средой ДМЕМ во флаконе по

5 п. 6.1.17. с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 4-5 х 10 клеток/мл.
6.1.20. Вносят в каждый из 2 флаконов вместимостью 1000 мл по 100-120 мл разведенной суспензии клеток и добавляют 10% сыворотки, предварительно отконтролированной на присутствие посторонних вирусов и микоплазм.

6.2. Культивирование и подготовка перевиваемой клеточной культуры почки быка (МДВК)

6.2.1. Готовят во флаконе вместимостью 100 мл 50 мл смеси, состоящей из равных объемов 0,02%-го раствора версена и 0,25%-го раствора трипсина и нагревают ее до температуры (20 +/- 2) град. С.

6.2.2. Просматривают флаконы с МДВК вместимостью 1000 мл под

х
микроскопом при увеличении 70 и отбирают с полным монослоем клеток.
6.2.3. Сливают питательную среду из флаконов в сосуд для отходов и добавляют смесь версена и трипсина. 6.2.4. Оставляют клетки в смеси версена и трипсина при температуре (20 +/- 2) град. С и наблюдают за ними визуально. 6.2.5. Когда начнется «набухание» и слабое «отслоение» клеток от стекла (обычно через 15-20 мин.), сливают смесь версена и трипсина в сосуд для отходов. 6.2.6. Флаконы с клеточной культурой помещают при температуре (37 +/- 1) град. С на 30-35 мин. 6.2.7. Добавляют во флаконы по 50 мл среды ДМЕМ и встряхивают их так, чтобы все клетки отделились от стекла.

Примечание.
В официальном тексте документа видимо допущена опечатка: имеется ввиду пункт 6.1.18, а не пункт 5.1.18.

6.2.8. Подсчитывают клетки в камере Горяева, как указано в п. 5.1.18.

6.2.9. Разводят клетки средой ДМЕМ с таким расчетом, чтобы в 1

5
мл содержалось 2 х 10 клеток/мл.
6.2.10. Вносят в каждый из 2 флаконов по 100-120 мл разведенной суспензии клеток и добавляют 10% сыворотки, предварительно отконтролированной на присутствие посторонних вирусов и микоплазм. 6.2.11. Через 5-6 сут. просматривают флаконы под световым микроскопом и отбирают с полным монослоем клеток.

6.3. Выполнение контроля сыворотки на
присутствие посторонних вирусов

При выполнении контроля сыворотки на присутствие посторонних вирусов должны быть выполнены следующие операции: 6.3.1. Отбирают по 1 флакону с клеточными культурами ТБ и МДВК для проверки испытуемой сыворотки и по 1 флакону с теми же культурами в качестве контрольных. 6.3.2. Сливают питательную среду из флаконов в сосуд для отходов. 6.3.3. Монослой клеток ТБ и МДВК промывают 3 раза средой ДМЕМ без сыворотки. 6.3.4. Вносят пипеткой в каждый из двух флаконов вместимостью 1000 мл с клеточными культурами ТБ и МДВК по 25 мл испытуемой сыворотки так, чтобы разведение в среде не превышало 1:4 из расчета не менее 3 кв. см площади на 1 мл сыворотки. Одновременно вносят пипеткой в каждый из двух контрольных флаконов вместимостью 1000 мл с клеточными культурами ТБ и МДВК по 25 мл сыворотки, ранее отконтролированной на присутствие посторонних вирусов и микоплазм. 6.3.5. Инкубируют клеточные культуры ТБ и МДВК при температуре (20 +/- 2) град. С (60 +/- 5) мин. 6.3.6. Сливают сыворотку и добавляют в опытные и контрольные флаконы с культурами ТБ и МДВК по 75 мл среды ДМЕМ. Инкубируют при температуре (37 +/- 1) град. С 14 сут. 6.3.7. С целью обнаружения цитопатогенного действия (ЦПД) просматривают опытные и контрольные клеточные культуры под микроскопом на 2, 5, 7, 10 и 14 сут. 6.3.8. Если в опытных и контрольных клеточных культурах не будет наблюдаться ЦПД, через 14 сут. их трижды замораживают при температуре минус (20 +/- 2) град. С и размораживают при температуре (37 +/- 2) град. С. 6.3.9. После размораживания культуры флаконы встряхивают, отбирают из каждого флакона с клеточными культурами ТБ и МДВК по 25 мл суспензии и вносят во флаконы с клетками того же вида. Два флакона с клеточными культурами ТБ и МДВК оставляют для контроля. 6.3.10. Вносят в опытные и контрольные клеточные культуры ТБ и МДВК по 75 мл среды ДМЕМ. 6.3.11. Клеточные культуры инкубируют при температуре (37 +/- 2) град. С в течение 14 сут. Если в течение 14 сут. в опытных и контрольных клеточных культурах не наблюдается ЦПД, их проверяют на наличие гемадсорбирующих вирусов. 6.3.12. Сливают из флаконов питательную среду и промывают культуры 3 раза раствором Хенкса. 6.3.13. Добавляют в опытные и контрольные клеточные культуры по 50 мл 0,25%-й взвеси куриных эритроцитов и эритроцитов морской свинки и инкубируют их при температуре (37 +/- 2) град. С.

6.3.14. Через 30-35 мин. эритроциты из флаконов удаляют, а монослой промывают раствором Хенкса и просматривают под

х
микроскопом при увеличении 70 .

6.4. Учет результатов

6.4.1. Если в клеточных культурах при первичной инокуляции сыворотки и в пассаже не выявлено ЦПД и не отмечено гемадсорбции, сыворотка признается пригодной. 6.4.2. Если при исследовании наблюдается ЦПД или отмечается гемадсорбция в испытуемых клеточных культурах при отсутствии в контроле, сыворотку бракуют. 6.4.3. Если ЦПД или гемадсорбция появились в контрольных и в опытных клеточных культурах, допускается однократный переконтроль сыворотки.

7. Контроль сыворотки на присутствие микоплазм

7.1. Микробиологический метод контроля сыворотки на присутствие микоплазм

Обнаружение микоплазм микробиологическим методом предусматривает внесение исследуемой сыворотки в бульонную питательную среду, инкубирование в течение 7 сут. и последующий высев на питательную среду, содержащую 0,3% агара.

7.2. Чувствительность микробиологического метода

Микробиологический метод контроля сыворотки позволяет обнаруживать одну и более колоний микоплазм в объеме не более 100 мл сыворотки.

7.3. Приготовление бульонной среды

7.3.1. Для приготовления 1 л среды к 200 мл триптического гидролизата бычьего сердца (содержание сухих веществ 8-10%) добавляют 400 мл мясного экстракта 1:2 (содержание сухих веществ 3,0-3,5%), экстракт хлебопекарных дрожжей из расчета 1,5 г сухих веществ на 1 л среды, и 5,0 г хлорида натрия. 7.3.2. С помощью 10%-го раствора NaOH устанавливают значение рН бульонной среды от 8,0 до 8,2. 7.3.3. Среду нагревают до кипения, кипятят 2-3 мин., фильтруют через складчатый бумажный фильтр. 7.3.4. Разливают по 300-305 мл во флаконы, закрытые ватно-марлевыми или резиновыми пробками и завальцованные алюминиевыми колпачками, и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 град. С 30 мин. С помощью 5%-го раствора соляной кислоты устанавливают рН от 7,8 до 8,0. 7.3.5. Для приготовления среды, содержащей 0,3% агара, дополнительно вносят 3,0 г агара. Готовые среды хранят при температуре от 2 до 8 град. С не более 4 мес.

7.4. Стерильность питательной среды

7.4.1. Для испытания на стерильность отбирают не менее 2% от количества емкостей в серии. Определение проводят путем визуального просмотра каждого флакона с питательной средой после выдерживания в течение 44-48 ч при температуре (37 +/- 1) град. С и 14 сут. при температуре 20-25 град. С. 7.4.2. В случае пророста хотя бы в одном флаконе бракуют всю серию. Далее питательная среда не используется.

7.5. Определение ростовых свойств среды, содержащей 0,3% агара

Каждую серию приготовленной среды проверяют на ростовые свойства, используя тест-штамм Mycoplasma arginini G 230 (ОСО 42-28-378-05). Среду считают чувствительной и признают годной, если результаты ее испытания соответствуют Инструкции по применению ОСО 42-28-378-05.

7.6. Подготовка сред для контроля

7.6.1. Перед употреблением полужидкую среду, содержащую 0,3% агара, разогревают в водяной бане до полного расплавления агара и охлаждают до температуры 40-45 град. С. 7.6.2. Добавляют 15-20% нормальной сыворотки крови лошади без консерванта, предварительно проверенной на стерильность и присутствие микоплазм, и 100 ед/мл бензилпенициллина натриевой соли. 7.6.3. Разливают по 10 мл в бактериологические пробирки и закрывают ватно-марлевыми пробками. Хранят среду при температуре от 2 до 8 град. С не более 7 сут.

7.7. Выполнение контроля сыворотки на присутствие микоплазм микробиологическим методом

При выполнении контроля сыворотки микробиологическим методом должны быть выполнены следующие операции: 7.7.1. Вносят (300 +/- 2) мл бульонной среды во флакон вместимостью 500 мл. Флакон закрывают ватно-марлевой пробкой. 7.7.2. Вносят (100 +/- 2) мл исследуемой сыворотки в (300 +/- 2) мл бульонной среды. Смесь инкубируют 7 сут. при температуре (37 +/- 1) град. С и относительной влажности 80-90%. 7.7.3. Отбирают 10 пробирок со средой, содержащей 0,3% агара, и вносят в каждую пробирку по (1,0 +/- 0,1) мл смеси исследуемой сыворотки и бульонной среды. Посев проводят прокалыванием всего столбика питательной среды, содержащейся в пробирке, концом пипетки вместимостью 1,0 мл, выпуская равномерно ее содержимое, начиная от дна до поверхности. 7.7.4. Инкубируют посевы 14 сут. при температуре (37 +/- 1) град. С и относительной влажности 80-90%.

7.8. Учет результатов

7.8.1. Учет результатов проводят путем визуального просмотра засеянных пробирок в проходящем свете на 4, 7, 10, 14 сут. 7.8.2. Сыворотка считается свободной от микоплазм, если через 14 сут. не обнаруживают роста микоплазм ни в одной из засеянных пробирок. 7.8.3. В случае получения сомнительных результатов проводят повторный контроль. 7.8.4. При повторном контроле, при наличии роста микоплазм хотя бы в одной пробирке, сыворотка считается контаминированной микоплазмами.

8. Контроль сыворотки на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры (цитохимический метод)

Метод обнаружения микоплазм с использованием индикаторной клеточной культуры Vero основан на внесении испытуемой сыворотки в клеточную культуру и обработку препарата специфическим флюоресцирующим красителем Hoechst-33258, окрашивающим ДНК клеток и микоплазм. Возможно применение другого флюорохрома, аттестованного в ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Клеточную культуру Vero (или другую чувствительную к микоплазмам) получают из банка клеток, аттестованного в соответствии с требованиями ВОЗ в ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

8.1. Подготовка к выполнению контроля на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры

При подготовке к выполнению контроля сыворотки на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры должны быть выполнены следующие операции: приготовление основного и рабочего раствора красителя Hoechst-33258, подготовка люминесцентного микроскопа, подготовка предметных стекол.

8.1.1. Приготовление основного и рабочего раствора Hoechst-33258

Соблюдая стерильность, 5 мг концентрата Hoechst-33258 растворяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды (основной раствор). Для получения рабочего раствора добавляют концентрат красителя в раствор Хенкса без индикатора в соотношении 1:9 и используют для окраски препаратов немедленно.

8.1.2. Подготовка люминесцентного микроскопа

Используют для анализа препаратов фильтры: ФС1-4, СС15-2,

х х БС8-2. Просматривают препараты при увеличении ок. 10 , об. 90

х х масляная иммерсия, или об. 70 или об. 85 водная иммерсия.

8.1.3. Подготовка предметных стекол

Промывают стекла в проточной водопроводной воде в течение 10-15 мин. Помещают стекла в сосуд с дистиллированной водой и кипятят 5-7 мин. После охлаждения до температуры 20-22 град. С извлекают стекла с помощью пинцета и помещают в чашку Петри. Протирают каждое стекло стерильной салфеткой и помещают на 1 сут. в смесь Никифорова, состоящую из равных объемов 96 град. этилового спирта и эфира для наркоза. Извлекают стекла с помощью пинцета из смеси Никифорова и протирают каждое стекло стерильной салфеткой. Стерилизуют стекла (30 +/- 2) мин. при температуре (120 +/- 2) град. С.

8.2. Выполнение контроля сыворотки на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры

При проведении испытания на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры выполняют следующие операции:

8.2.1. Вносят 1 мл испытуемого материала в чашку Петри диаметром 90 мм, содержащую стерильное предметное стекло и 20-23

5 мл суспензии клеточной культуры Vero в концентрации 10 кл/мл.

8.2.2. Инкубируют чашку Петри с клеточной культурой Vero в течение 3-5 сут. при температуре (37 +/- 1) град. С в анаэробных условиях до формирования 50-70% монослоя. Образование монослоя

х х наблюдают в световом микроскопе при увеличении ок. 10 , об. 20 . 8.2.3. Сливают культуральную жидкость, промывают препарат питательной средой или буфером (рН 7,2-7,4). 8.2.4. Помещают предметное стекло на 30-35 мин. в 96 град. этиловый спирт. Сливают спирт и высушивают препарат на воздухе. 8.2.5. Добавляют рабочий раствор красителя Hoechst-33258 и окрашивают в темноте при температуре (37 +/- 1) град. С в течение 30-35 мин. 8.2.6. Сливают краситель, промывают препарат стерильной дистиллированной водой, подсушивают на воздухе и микроскопируют.

8.3. Учет результатов

Учет результатов испытания на присутствие микоплазм методом окрашивания ДНК флюорохромом Hoechst-33258 на индикаторной культуре клеток Vero проводят путем просмотра препаратов в люминесцентном микроскопе. Микоплазмы выглядят, как однородно окрашенные тела сферической формы, имеющие вид отдельных, парных, цепочечных или нитевидных образований яркого зеленоватого свечения. Диаметр обычно находится в пределах 0,1-0,3 микрона. Микоплазмы в виде ярко светящейся зернистости на фоне темной цитоплазмы выявляют по периферии клеток и в межклеточном пространстве. Условно интенсивность контаминации микоплазмами обозначают знаками креста: 1 крест — единичные микоплазмы в препарате; 2 креста — небольшие скопления микоплазм в поле зрения; 3 креста — отдельные микоплазмы и скопления в 20-50% клеток; 4 креста — максимальное количество микоплазм в виде скоплений в межклеточном пространстве в каждом поле зрения. В качестве положительных контрольных образцов используют заведомо контаминированные микоплазмами клеточные культуры. Отрицательными контрольными образцами служат клеточные культуры, в которых описанные выше светящиеся образования не выявлены. Обнаружение микоплазм в препаратах на индикаторной клеточной культуре Vero свидетельствует о контаминации испытуемого материала микоплазмами. В случае получения сомнительных результатов следует проводить повторный контроль. Окончательный ответ о присутствии микоплазм в сыворотке будет учитывать результаты двух методов: микробиологического и метода индикаторной клеточной культуры. В случае обнаружения микоплазм хотя бы одним методом сыворотка считается контаминированной и бракуется.

Приложение

Таблица 1

Контроль сыворотки крови крупного рогатого скота на присутствие посторонних вирусов

Клеточные культуры Результаты контроля

ЦПД Гемадсорбция

Первично-трипсинизированная Не обнаружено Не обнаружено клеточная культура ТБ

Перевиваемая клеточная культура Не обнаружено Не обнаружено МДВК

Таблица 2

Контроль сыворотки крови крупного рогатого скота на присутствие микоплазм

Методы Результаты контроля

Микробиологический (посев Отсутствие роста на питательные среды)

  Цитохимический            Отсутствие люминесцентного свечения в                              индикаторной клеточной культуре Vero    

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ
ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ

ПИСЬМО

17 августа 2006 г.

N 04И-666/06

О НЕОБХОДИМОСТИ ИЗЪЯТИЯ НЕДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития сообщает о выявлении недоброкачественных лекарственных средств: 1. Забракованные ГОУЗ «Пермский областной Центр сертификации и контроля качества лекарственных средств»: — Солодки корня сироп, 100 г, производства ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга», поставщик ЗАО «СИА Интернейшнл-Пермь», показатель «Описание» (на дне флакона осадок) — серии 70306. — Цефотаксима натриевая соль, порошок для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения 1000 мг, производства ООО «Компания «Деко», поставщик ООО «Медиас», показатель «Цветность раствора» — серии 160805. 2. Забракованные ГУ Омской области «Территориальный центр по сертификации и контролю качества лекарственных средств Омской области»: — Кислота аскорбиновая, раствор для инъекций 5% (ампулы) 1 мл N 10, производства Одесское производственное химико-фармацевтическое предприятие «Биостимулятор», Украина, поставщик ООО «ФармАльянс», показатель «Описание» (окраска раствора в ампулах различной степени интенсивности) — серии 190506. — Клиофит, эликсир 250 мл, производства ЗАО «Фармацевтическое предприятие «Мелиген», поставщик ЗАО «РОСТА» Омский филиал, показатель «Описание» (жидкость с обильным хлопьевидным осадком) — серии 010405. 3. Забракованные ГУЗ «Волгоградский Центр сертификации и контроля качества лекарственных средств»:

Примечание.
По вопросу, касающемуся результатов повторного выборочного контроля лекарственного препарата Цефотаксима натриевая соль, порошок для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения 1000 мг, производства ООО «Компания «Деко», поставщик ООО «Экстрем-Фарм», серии 120605, см. Письмо Росздравнадзора от 02.04.2007 N 01-6719/07.

— Цефотаксима натриевая соль, порошок для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения 1000 мг, производства ООО «Компания «Деко», поставщик ООО «Экстрем-Фарм», показатель «Цветность раствора» — серии 120605. 4. Забракованные ГУЗ «Свердловский Центр сертификации и контроля качества лекарственных средств»: — Гликодин, сироп 100 мл, производства «Алембик Лимитед», Индия, поставщик ЗАО «Шрея Корпорэйшнл», показатель «Описание» (мутная жидкость), «Упаковка» (картонные пачки расклеены по ребру) — серии 109935К. — Флюколдекс, суспензия для детей для внутреннего применения во флаконах 100 мл, производства «Наброс Фарма Пвт.Лтд», Индия, поставщик ЗАО «Аптека-Холдинг», показатель «Описание» (в суспензии кристаллы, которые не растворяются и не распадаются при взбалтывании) — серии 040. 5. Забракованные ГУЗ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» г. Кемерово: — Нафтизина раствор, капли назальные 0,1% 15 мл, производства ООО «Славянская аптека», поставщик ООО «Агроресурсы», показатель «Описание» (жидкость с включениями) — серии 631105. 6. Забракованные ГУЗ «Центр по сертификации и контролю качества лекарственных средств Рязанской области»: — Калия хлорид, раствор для внутривенного введения 4% (ампулы) 10 мл N 10, производства ОАО «Новосибхимфарм», поставщик ООО «Интеркэр», показатель «Упаковка» (часть ампул с микротрещинами) — серии 1501205. — Мексидол, раствор для инъекций 0,1 г (ампулы) 2 мл N 10, производства ООО Медицинский центр «ЭЛЛАРА», поставщик АНО «Здравсервис» г. Тула, показатель «Описание» (окраска раствора в ампулах различной степени интенсивности), «Цветность» — серии 060206. 7. Забракованные ГУЗ «Центр сертификации и контроля качества лекарственных средств Самарской области»: — Валерианы корневища с корнями, сырье растительное — порошок, 1,5 г N 20, производства ООО ПКФ «Фитофарм», поставщик ООО «ВМсервис», показатель «Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм», «Масса содержимого упаковки», «Отклонения от средней массы» — серии 011105. 8. Забракованные ГУЗ «Центр сертификации и контроля качества лекарственных средств Ямало-Ненецкого автономного округа»:

Примечание.
По вопросу, касающемуся результатов повторного выборочного контроля лекарственного препарата Кальция хлорид, раствор для внутривенного введения, 100 мг/мл 10 мл N 10, производства ОАО «Синтез», поставщик ЗАО «СИА Интернейшнл-Тюмень», серии 20206, см. Письмо Росздравнадзора от 16.01.2007 N 01-252/07.

— Кальция хлорид, раствор для внутривенного введения, 100 мг/мл 10 мл N 10, производства ОАО «Синтез», поставщик ЗАО «СИА Интернейшнл-Тюмень», показатель «Описание» (жидкость с посторонними включениями) — серии 20206. 9. Забракованные отделом контроля качества лекарственных средств Комитета по фармацевтической деятельности и производству лекарств Иркутской области: — Пропосол, аэрозоль для местного и наружного применения 50 г, производства ЗАО «Алтайвитамины», поставщик ЗАО «РОСТА», показатель «Упаковка» (защитное полимерное покрытие имеет запах керосина) — серий 1131105,1341205. 10. Забракованные Центром по сертификации и контролю качества лекарственных средств Красноярского края: — Пропосол, аэрозоль для местного и наружного применения 50 г, производства ЗАО «Алтайвитамины», поставщик филиал ЗАО ЦВ «Протек» — «Протек-7», показатель «Упаковка» (защитное полимерное покрытие имеет запах керосина) — серии 1181105. Указанные серии лекарственных средств подлежат изъятию (возврату поставщику) из обращения и уничтожению в установленном порядке. Федеральная служба предлагает субъектам обращения лекарственных средств провести проверку наличия указанных серий лекарственных средств, о результатах которой проинформировать территориальное управление Росздравнадзора. Территориальным управлениям Росздравнадзора провести мероприятия в соответствии с Порядком, предусмотренным письмом Росздравнадзора от 08.02.2006 N 01И-92/06 «Об организации работы территориальных управлений Росздравнадзора с информацией о недоброкачественных и фальсифицированных лекарственных средствах». Одновременно Федеральная служба информирует, что во изменение письма от 31.07.2006 N 01И-607/06, п. 3 следует читать: — Преднизолон, раствор для инъекций 30 мг/мл (ампулы) 1 мл N 3, производства «Ипка Лабораториз Лимитед», Индия, поставщик ЗАО «СИА Интернейшнл-Владивосток», показатель «Механические включения» — серии L45012Y.

Врио руководителя Федеральной службы
Е.А.ТЕЛЬНОВА