Общая фармакопейная статья «Количественное определение 2-феноксиэтанола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0029.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II») Общая фармакопейная статья «Количественное определение фенола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0028.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II») Общая фармакопейная статья «Определение общего азота с реактивом Несслера в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0027.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II») Общая фармакопейная статья «Определение белкового азота с реактивом Несслера с предварительным осаждением белкового материала в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0026.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II») Общая фармакопейная статья «Количественное определение тиомерсала в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0025.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II») Общая фармакопейная статья «Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0024.15» («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II»)

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Количественное определение 2-феноксиэтанола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0029.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод предназначенный для определения 2-феноксиэтанола в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛИ). Определение проводится спектрофотометрическим методом. Метод основан на способности 2-феноксиэтанола поглощать свет в ультрафиолетовой области. По результатам измерения оптической плотности растворов при 269 нм (максимум поглощения 2-феноксиэтанола) и 290 нм (максимум поглощения окрашенных примесей) определяется содержание 2-феноксиэтанола по калибровочному графику.

Спектрофотометрический метод

Метод А
(определение содержания 2-феноксиэтанола в мг/мл)

Испытуемый раствор сорбированного образца центрифугируют при 2000 об./мин. в течение 20 мин. К 0,1 мл надосадочной жидкости или к 0,1 мл несорбированного образца добавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартных растворов в кювете с толщиной слоя 10 мм при 269 и 290 нм по сравнению с контрольным раствором (вода очищенная). Находят разность между показателями оптической плотности при 269 и 290 нм (A269 — А290) и по калибровочному графику определяют количество 2-феноксиэтанола в разведенном образце, выраженное в мкг/ мл. Количество 2-феноксиэтанола (X1) в исходном образце в мг/мл вычисляют по формуле:

,

где:
а — количество 2-феноксиэтанола, найденное по калибровочному графику, мкг/мл; 100 — разведение испытуемого образца;
1000 — пересчет в мг.

Содержание 2-феноксиэтанола в ИЛП должно составлять от 4,25 до 5,75 мг/мл. Построение калибровочного графика. К 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мл стандартного раствора N 2 прибавляют воду очищенную до 5 мл и перемешивают (концентрация 2-феноксиэтанола 20, 40, 60, 80, 100 мкг/мл соответственно), далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество 2-феноксиэтанола в мкг, а по оси ординат — среднее значение разности между показателем оптической плотности при 269 и 290 нм (А269 — А290). Примечания.
1. Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого сорбированного образца или 0,1 мл испытуемого несорбированного образца. 2. Основной стандартный раствор 2-феноксиэтанола — 99,7%, плотность — 1,1 г/мл. 3. Стандартный раствор 2-феноксиэтанола 5 мг/мл (раствор N 1). Помещают 0,227 мл основного стандартного раствора 2-феноксиэтанола в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в течение 6 мес. 4. Стандартный раствор 2-феноксиэтанола 100 мкг/мл (раствор N 2). Перед использованием 1 мл стандартного раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят водой очищенной до метки и перемешивают.

Метод Б
(определение содержания 2-феноксиэтанола в мкл/мл)

Проводят определение содержания 2-феноксиэтанола в мкл/мл по методу А. По калибровочному графику определяют количество 2-феноксиэтанола в разведенном образце в мкл/ мл. Количество 2-феноксиэтанола (X2) в испытуемом образце в мкл/мл вычисляют по формуле:

X2 = а · 100,

где: а — количество 2-феноксиэтанола, найденное по калибровочному графику, мкл/мл; 100 — разведение испытуемого образца.

Содержание 2-феноксиэтанола в ИЛП должно быть не более 10 мкл/мл. Построение калибровочного графика. К 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мл стандартного раствора N 4 прибавляют воду очищенную до объема 5 мл и перемешивают (концентрация 2-феноксиэтанола 0,02, 0,04, 0,06, 0,08, 0,1 мкл/мл соответственно), далее анализ проводят, как указано в методе А, Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество 2-феноксиэтанола в мкл/мл, а по оси ординат — среднее значение разности между показателем оптической плотности при 269 и 290 нм (А269 — А290). Примечания.
1. Испытуемый раствор. 1 мл раствора испытуемого сорбированного образца или 0,1 мл раствора испытуемого несорбированного образца. 2. Основной стандартный раствор 2-феноксиэтанола — 99,7%, плотность — 1,1 г/мл. 3. Стандартный раствор 2-феноксиэтанола 5 мкл/мл (раствор N 3). Помещают 0,250 мл основного стандартного раствора 2-феноксиэтанола в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Стандартный раствор хранят при температуре 4-8 °С в течение 6 мес. 4. Стандартный раствор 2-феноксиэтанола 0,1 мкл/мл (раствор N 4). Перед использованием 1 мл стандартного раствора N 3 помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят водой очищенной до метки и перемешивают.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Количественное определение фенола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0028.15
Взамен ГФ X

Настоящая фармакопейная статья предназначена для определения фенола в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП). Метод основан на способности фенола поглощать свет в ультрафиолетовой области. Определение фенола проводится спектрофотометрическим методом. По результатам измерения оптической плотности растворов при 269 нм (максимум поглощения фенола) и 290 нм (максимум поглощения окрашенных примесей) определяется содержание фенола по калибровочному графику.

Спектрофотометрический метод

Готовят 10 мл разведенного испытуемого образца и измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартных растворов в кюветах с толщиной слоя 10 мм при 269 нм и 290 нм по сравнению с контрольным раствором (вода очищенная). Рассчитывают разность между показателем оптической плотности при 269 нм и 290 нм (А269 — А290) и по калибровочному графику определяют количество фенола в разведенном образце в мкг/мл. Количество фенола (X) в исходном образце в мг/мл вычисляют по формуле:

,

где: а — количество фенола, найденное по калибровочному графику, мкг/мл; 100 — разведение испытуемого раствора;
1000 — пересчет в мг.

Содержание фенола в иммунобиологических лекарственных препаратах должно составлять от 1,5 до 4,0 мг/мл. Построение калибровочного графика. К 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 мл стандартного раствора В прибавляют воду очищенную до объема 5 мл и перемешивают (концентрация фенола соответственно: 10, 20, 30, 40, 50 мкг/мл), далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мкг фенола, а по оси ординат — среднее значение разности между показателем оптической плотности при 269 нм и 290 нм (А269 — А290). Примечания.
1. Испытуемый раствор. К 0,1 мл испытуемого образца добавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают. 2. Основной стандартный раствор фенола 10 мг/мл (раствор А). Помещают 1,0000 г (точная навеска) фенола в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла при температуре 4-8 °С в течение 1 г. 3. Стандартный раствор фенола 100 мкг/мл (раствор В). Наливают 0,1 мл стандартного раствора А в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла при температуре 4-8 °С в течение 3 мес.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение общего азота с реактивом Несслера в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0027.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения общего азота в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП). Метод основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония, образующимися после минерализации белковых продуктов. Для количественного определения содержания общего азота с реактивом Несслера используется колориметрический метод.

Колориметрический метод

В центрифужную пробирку вносят 0,5 мл испытуемого образца (А), с содержанием общего азота от 0,05 до 0,4 мг (табл.), прибавляют 0,1 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают. Пробирку закрывают стеклянным колпачком и минерализуют на песочной бане при температуре 190-210 °С. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Минерализацию продолжают не менее 10 ч до обесцвечивания содержимого пробирки. Затем к минерализату прибавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают. В химическую пробирку вносят 0,5 или 1,0 мл разведенного минерализата (В) (табл.), доводят объем раствора водой до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы. Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл стандартного раствора N 2 (содержание азота 5; 10; 15; 20; 25 мкг), доводят объем растворов водой до 9,5 мл, перемешивают и далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мкг общего азота, а по оси ординат — среднее значение оптической плотности. Калибровочный график воспроизводится при каждом анализе.

Таблица

Соотношение содержания общего азота в испытуемом образце и объема минерализата для колориметрирования

Содержание общего азота в испытуемом образце (А), мг/0,5 мл Объем разведенного минерализата для колориметрирования (В), мл 0,050-0,200
1,0
0,200-0,400
0,5

Содержание общего азота (X) в мг/мл вычисляют по формуле:

,

где: а — количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг; А — объем анализируемого образца, мл;
В — объем минерализата, мл;
1000 — перевод мкг в мг;
10 — разведение минерализата.

Содержание общего азота должно составлять от 0,1 до 0,8 мг/мл, если в фармакопейной статье или нормативной документации нет иных указаний. Примечания.
1. Основной стандартный раствор аммония сульфата 0,1 мг/мл (раствор N 1). В воде очищенной в мерной колбе вместимостью 500 мл растворяют 0,2357 г аммония сульфата, доведенного до постоянной массы в эксикаторе над безводным кальция хлоридом, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 1 года. 2. Стандартный раствор аммония сульфата 0,05 мг/мл (раствор N 2). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мл раствора N 1, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 3 мес.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение белкового азота с реактивом Несслера с предварительным осаждением белкового материала в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0026.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения белкового азота в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП). Метод основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония, образующимися после минерализации белковых продуктов. Для количественного определения содержания белкового азота используются колориметрические методы: — метод с предварительным осаждением белковых компонентов с использованием трихлоруксусной кислоты (ТХУ), рекомендуемый для определения белкового азота в вирусных вакцинах, анатоксинах и инфекционных аллергенах (методы А и В). — метод с предварительным осаждением белковых компонентов с использованием фосфорновольфрамовой кислоты, рекомендуемый для определения белкового азота в неинфекционных аллергенах.

Метод с использованием трихлоруксусной кислоты для определения содержания белкового азота от 0,01 до 0,4 мг/мл (метод А)

В центрифужную пробирку вместимостью 10 мл вносят необходимое количество испытуемого образца (А), прибавляют раствор ТХУ до конечной концентрации 10% и перемешивают (табл.).

Таблица

Соотношение содержания белкового азота, объема анализируемого образца, реагента и минерализата для колориметрирования

Содержание белкового азота в анализируемом образце, мг/мл Объем анализируемого образца (А), мл
Трихлоруксусная кислота
Объем минерализата (В), мл
объем, мл
исходная концентрация, %
0,010-0,016
5
0,72
80
2,0
0,016-0,030
3
0,43
80
2,0
0,030-0,050
3
0,43
80
1,0
0,050-0,080
2
2,00
20
1,0
0,080-0,200
1
1,00
20
1,0
0,200-0,400
1
1,00
20
0,5

Пробу оставляют на 18-20 ч при температуре 4-8 °С. Образовавшийся осадок отделяют от надосадочной жидкости центрифугированием при 2000 об./мин. при температуре 4-6 °С в течение 30 мин. Далее осадок промывают 1 мл 10% раствора ТХУ и вновь центрифугируют в аналогичных условиях. К осадку прибавляют ОД мл серной кислоты концентрированной. Пробирку закрывают стеклянным колпачком и минерализуют на песочной бане при температуре 190-210 °С. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Для ускорения минерализации используют водорода пероксид, который периодически добавляют по 1-2 капли в предварительно охлажденную пробирку. Минерализацию продолжают не менее 10 ч до обесцвечивания содержимого пробирки. К полученному минерализату добавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают. В химическую пробирку вносят необходимое количество минерализата (В) (табл.), содержащего 8-20 мкг азота, доводят объем раствора до 9,5 мл водой очищенной, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы. Одновременно с испытуемым образцом для подтверждения правильности методики проводят анализ стандартного образца (CO) «Содержание белкового азота». Анализ проводят при каждом определении. Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл стандартного раствора N 2 (0,05 мг/мл аммония сульфата), доводят объем растворов водой очищенной до 9,5 мл, перемешивают (содержание азота 5; 10; 15; 20; 25 мкг соответственно), прибавляют по 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность, как указано выше. В качестве контрольного раствора используют 9,5 мл воды очищенной и 0,5 мл реактива Несслера. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество белкового азота (мкг), а по оси ординат — среднее значение оптической плотности. Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе. Содержание белкового азота (X, мг/мл) вычисляют по формуле:

,

где: a — количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг; A — объем анализируемого образца, мл;
B — объем минерализата, мл;
1000 — перевод мкг в мг;
10 — разведение минерализата.

Содержание белка по белковому азоту (Y, мг/мл) вычисляют по формуле:

Y = X · 6,25,

где: X — содержание белкового азота, мг/мл; 6,25 — коэффициент пересчета белкового азота на белок. Содержание белкового азота, полученное по методу А, должно составлять от 0,01 до 0,4 мг/мл.

Примечания.
1. Испытуемый раствор 1, 2, 3 или 5 мл раствора испытуемого образца (согласно Таблице 1) (содержание белкового азота в анализируемой пробе должно быть 0,08-0,4 мг). 2. Основной стандартный раствор аммония сульфата 0,1 мг/мл (раствор N 1). В мерной колбе вместимостью 500 мл в воде очищенной растворяют 0,2357 г аммония сульфата, доведенного до постоянной массы в эксикаторе над безводным кальция хлоридом, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Основной раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 1 года. 3. Стандартный раствор аммония сульфата 0,05 мг/мл (раствор N 2). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мл раствора N 1, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 3 мес. 4. Стандартный образец (CO) «Содержание белкового азота». 5. Приготовление 80% раствора ТХУ. Растворяют 150 г ТХУ в 100 мл воды очищенной. После этого 1 мл раствора титруют 1М раствором натрия гидроксида (индикатор — фенолфталеин). Концентрацию ТХУ (X) в % в анализируемом растворе рассчитывают по формуле:

X = a · 0,1634 · 100 = a · 16,34,

где: a — количество 1М раствора натрия гидроксида, израсходованное на титрование испытуемого образца, мл; 0,1634 — количество ТХУ, соответствующее 1 мл 1М раствора натрия гидроксида, г. Концентрация ТХУ должна быть 80-90%.
Раствор ТХУ разводят до концентрации 80% и хранят в емкости из темного стекла в течение 6 мес. (растворы ТХУ меньших концентраций готовят соответствующим разведением 80% раствора). Перед каждым использованием раствора ТХУ проводят проверочное определение ее процентной концентрации.

Метод с использованием кислоты трихлоруксусной для определения содержания белкового азота от 2,5 до 10 мкг/мл (метод В)

В центрифужную пробирку емкостью 10 мл вносят 5 мл испытуемого образца, прибавляют 0,72 мл 80% раствора ТХУ и перемешивают. Далее проводят минерализацию испытуемого образца по методу А. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Объем минерализата доводят до 5 мл водой очищенной и перемешивают. Отбирают в пробирку 1 мл полученного раствора, доводят объем раствора водой очищенной до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при длине волны 400 нм в кюветах с толщиной слоя 20 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы. Содержание белкового азота (X) в мг/мл вычисляют по формуле:

,

где: а — количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг; 5а — разведение минерализата, мл;
5б — объем испытуемого образца, взятый на минерализацию, мл; 1 — объем минерализата, взятый на колориметрирование, мл; 1000 — перевод в миллиграммы.
Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл стандартного раствора N 3 (содержание белкового азота 2; 4; 6; 8; 10; 12 мкг соответственно), доводят объем раствора водой очищенной до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют по 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. В качестве контрольного раствора используют 9,5 мл воды очищенной и 0,5 мл реактива Несслера. Измеряют оптическую плотность растворов, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество белкового азота (мкг), а по оси ординат — среднее значение оптической плотности. Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе. Содержание белкового азота, полученное по методу В, должно составлять от 2,5 до 10 мкг/мл.

Примечания.
1. Основной стандартный раствор аммония сульфата 0,1 мг/мл (раствор N 1). Приготовление указано в методе А. 2. Стандартный раствор аммония сульфата 0,02 мг/мл (раствор N 3). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мл раствора N 1, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 3 мес. 3. Приготовление 80% раствор ТХУ. Приготовление указано в методе А.

Метод определения белкового азота с использованием фосфорновольфрамовой кислоты

Определение проводят по ОФС «Определение белка» (метод В) с использованием фосфорновольфрамовой кислоты. Содержание белкового азота в неинфекционных аллергенах должно быть от 0,01 до 0,4 мг/мл. Построение калибровочного графика аналогично изложенному в методе А. Одновременно с испытуемым образцом для подтверждения правильности методики проводят анализ стандартного образца (CO) «Содержание белкового азота в неинфекционных аллергенах». Анализ проводят при каждом определении. Примечание.
Стандартный образец (CO) «Содержание белкового азота в неинфекционных аллергенах». Определение проводят в соответствии с инструкцией по применению.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Количественное определение тиомерсала в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0025.15
Взамен ГФ X

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для количественного определения тиомерсала в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП) колориметрическим, полярографическим методом и методом электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии. Указанные методы предназначены для определения содержания тиомерсала в сорбированных и несорбированных ИЛП. Колориметрический метод основан на выделении из тиомерсала ртути в виде свободных ионов и последующем колориметрическом определении ртути дитизоната. Полярографический метод основан на полярографической активности тиомерсала. Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии (ЭААС) для определения тиомерсала в ИЛП вводится впервые. Метод основан на измерении оптической плотности атомного пара ртути получаемого при электротермической атомизации исследуемого образца. Сигнал максимального поглощения резонансового излучения атомами ртути прямо пропорционален концентрации тиомерсала в исследуемом образце. Содержание тиомерсала в испытуемом образце определяется по калибровочному графику. Содержание тиомерсала в ИЛП не должно превышать 20-120 мкг/мл.

Колориметрический метод

Испытуемый образец помещают в колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 1,2 мл серной кислоты разведенной концентрированной (при наличии сорбента алюминия гидроксида смесь осторожно нагревают на водяной бане, постоянно помешивания до его полного растворения), добавляют 5 мл 5% раствора калия перманганата, перемешивают и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. После этого удаляют избыток калия перманганата, прибавляя 1,5 мл 20% раствора гидроксиламина сульфата, 30 мл воды очищенной и 5 мл 6 М раствора уксусной кислоты. Полученный раствор перемешивают, прибавляют 10 мл 0,001% раствора дитизона (точно отмеренный объем) и встряхивают в течение 30 с. Содержимое колбы переносят в делительную воронку и после разделения слоев фильтруют в кювету толщиной 10 мм нижний хлороформный слой через предварительно прокипяченную и высушенную вату. Затем измеряют оптическую плотность хлороформного раствора при 597 нм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 0,2 мл воды очищенной и все вышеперечисленные реагенты. Содержание тиомерсала (X1) в растворе в мкг/мл вычисляют по формуле:

где: a — количество ртути, найденное по калибровочному графику, мкг; 100 — разведение испытуемого образца;
0,2 — объем испытуемого образца, мл;
49,55 — коэффициент пересчета ртути на тиомерсал.

Построение калибровочного графика. К 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2 мл стандартного раствора N 2 прибавляют 1,2 мл серной кислоты разведенной, 30 мл воды очищенной, 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида, 5 мл 6 М раствора уксусной кислоты и перемешивают (содержание ртути: 4; 6; 8; 10; 12 мкг соответственно). Далее определение проводят по методике, указанной выше. Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе. Одновременно с испытуемым образцом для подтверждения правильности методики проводят анализ стандартного образца (CO) «Содержание тиомерсала в сорбированных препаратах». Анализ CO проводят при каждом определении. Примечания.
1. Испытуемый раствор — 0,2 мл раствора испытуемого образца, приготовленного, как указано в фармакопейной статье или нормативной документации. 2. Основной стандартный раствор ртути металлической 1 мг/мл (раствор N 1). Помещают 0,5 г ртути металлической (точная навеска) в мерную колбу вместимостью 500 мл, растворяют в 15 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Для определения содержания ртути отмеряют 10 мл стандартного раствора N 1, прибавляют 0,5 мл 10% раствора квасцов железоаммонийных и медленно титруют 0,01 М раствором аммония роданида до оранжевого окрашивания раствора. Содержание ртути (X2) в мг/мл вычисляют по формуле:

где: V — раствор аммония роданида, мл;
0,001003 — количество ртути, соответствующее 1 мл 0,01 М раствора аммония роданида, в г; 10 — объем испытуемого образца, в мл.

Раствор хранят в течение 3 мес. при комнатной температуре в вытяжном шкафу в специально отведенном месте. 3. Стандартный раствор ртути металлической 10 мкг/мл (раствор N 2). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл стандартного раствора N 1, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Возможно использование государственного стандартного образца (ГСО) раствора ионов ртути (II). 4. Стандартные образцы (CO) «Содержание тиомерсала в сорбированных препаратах» с различным диапазоном содержания тиомерсала в пределах от 20 до 120 мкг/мл. 5. Приготовление 5% раствора калия перманганата. Растворяют 50 г калия перманганата в 700 мл горячей воды очищенной, помещенной в коническую колбу, охлаждают и переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в течение 3 мес. 6. Приготовление 0,001% раствора дитизона. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг дитизона (точная навеска), растворяют в хлороформе, доводят объем раствора хлороформом до метки и перемешивают. Раствор хранят в темном месте при температуре 4-8 °С в течение 1 мес. Перед использованием 10 мл раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора хлороформом до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 597 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором (вода очищенная). Диапазон колебаний показаний оптической плотности от среднего значения не должен превышать . 7. Приготовление 20% раствора гидроксиламина сульфата. В мерном цилиндре вместимостью 500 мл в воде очищенной растворяют 100 г гидроксиламина сульфата, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной в течение 6 мес. 8. Приготовление 6 М раствора уксусной кислоты. Вносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл 340 мл уксусной кислоты ледяной, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 мес. 9. Приготовление 50% серной кислоты разведенной по объему. В коническую колбу вместимостью 250 мл вносят 100 мл воды очищенной и осторожно при постоянном перемешивании прибавляют 100 мл серной кислоты концентрированной. Работу следует проводить в вытяжном шкафу, соблюдая технику безопасности. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 мес. 10. Приготовление 0,1 М раствора аммония роданида (раствор А). Раствор готовят из 0,1 Н стандарт-титра (фиксанала) в мерной колбе вместимостью 1000 мл согласно инструкции по приготовлению. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в течение 6 мес. 11. Приготовление 0,01 М раствора аммония роданида (раствор В). В мерную колбу вместимостью 50 мл вносят 5 мл раствора А и доводят объем водой очищенной до метки. Раствор готовят при каждом определении. 12. Приготовление раствора азотной кислоты разведенной. В коническую колбу вместимостью 250 мл вносят 100 мл воды очищенной и осторожно при постоянном перемешивании прибавляют 72 мл азотной кислоты концентрированной. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 мес. 13. Приготовление 10% раствора квасцов железоаммонийных. В 90 мл воды растворяют 10 г квасцов железоаммонийных и прибавляют азотной кислоты разведенной до перехода коричневой окраски в желтовато-зеленую. В случае необходимости раствор фильтруют.

Полярографический метод

Испытуемый раствор помещают в колбу вместимостью 50 мл с притертой пробкой, прибавляют 0,5 мл 2 М раствора калия хлорида и помещают в электролизер, термостатируемый при температуре 19-21 °С. Через испытуемый раствор пропускают газообразный азот в течение 10-15 мин. Ртутный капельный электрод опускают в электролизер и снимают полярограмму на полярографе с регистрирующим устройством в области потенциала от 0,2 до 1,0 В (внутренний анод). Содержание тиомерсала (X3) в мкг/мл рассчитывают по формуле:

;

где: а — количество тиомерсала в испытуемом растворе, найденное по калибровочному графику, мкг/мл; 5,0 — общий объем пробы, мл;
4,5 — объем испытуемого раствора, взятого на анализ, мл.

Построение калибровочного графика. К 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 мл стандартного раствора тиомерсала N 2 (150 мкг/мл тиомерсала) прибавляют 0,5 мл 2 М раствора калия хлорида, доводят общий объем водой очищенной до 5 мл (концентрация тиомерсала: 30; 45; 60; 75; 90; 105; 120; 135 мкг/мл соответственно) и перемешивают. Определение проводят, как указано выше. На полученных полярограммах строят калибровочный график, откладывая среднее значение высоты волны на оси ординат (OY), а на оси абсцисс (OX) — соответствующее значение концентрации тиомерсала в мкг/мл. Калибровочный график пригоден неограниченное время для данного капилляра при постоянных условиях определения (температура, время каплеобразования). Тиомерсал, используемый для приготовления стандартного раствора N 1, должен соответствовать требованиям, указанным в разделе «Методы оценки качества тиомерсала». Приложения.
1. Испытуемый раствор — 4,5 мл раствора испытуемого образца, приготовленного, как указано в фармакопейной статье или нормативной документации. 2. Стандартный раствор тиомерсала 15 мг/мл (раствор N 1). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,50 г тиомерсала (точная навеска), растворяют в воде очищенной и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в течение 3 мес. 3. Стандартный раствор тиомерсала 150 мкг/мл (раствор N 2). Перед определением 1 мл стандартного раствора тиомерсала N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. 4. Приготовление 2 М раствора калия хлорида. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 149,1 г калия хлорида, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 6 мес.

Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии

Анализ проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора — электротермического атомно-абсорбционного спектрометра. Испытуемый образец, приготовленный, как указано в фармакопейной статье или нормативной документации, вносят в отверстие графитовой трубки прибора и измеряют оптическую плотность образцов при длине волны 253,7 нм в следующей последовательности: вода очищенная (контрольный раствор), калибровочные растворы (в порядке увеличения измеряемой концентрации), стандартный образец «Содержание тиомерсала в сорбированных препаратах» и испытуемый образец. Анализ испытуемых образцов проводят не менее трех раз. Содержание тиомерсала в испытуемом образце в мкг/мл рассчитывают по калибровочному графику с помощью программного обеспечения к прибору с учетом разведения испытуемого образца. Построение калибровочного графика. Отбирают 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл стандартного раствора тиомерсала N 2 (2 мкг/мл), доводят объем растворов водой очищенной до 1 мл и перемешивают (концентрация тиомерсала: 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2 мкг/мл соответственно). Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество тиомерсала в мкг/мл, а по оси ординат — среднее значение оптической плотности атомного пара ртути. Калибровочный график воспроизводят при каждом определении. Метод электротермической атомно-абсорбционной спектрометрии применим для ИЛП с содержанием тиомерсала от 20 до 120 мкг/мл, а также для анализа остаточного содержания тиомерсала. Приложения.
1. Испытуемый раствор. Испытуемый раствор разводят водой очищенной, как указано в фармакопейной статье или нормативной документации. 2. Основной стандартный раствор тиомерсала 1 мг/мл (раствор N 1). В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 100 мг тиомерсала (точная навеска), растворяют в воде очищенной, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при температуре 4-8 °С в течение 1 мес. 3. Стандартный раствор тиомерсала 2 мкг/мл (раствор N 2). К 20 мкл стандартного раствора N 1 прибавляют 9,98 мкл воды очищенной и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при температуре 4-8 °С в течение 3 дней. 4. Стандартные образцы (CO) «Содержание тиомерсала в сорбированных препаратах» с диапазоном содержания тиомерсала от 20 до 120 мкг/мл. Перед использованием CO разводят согласно инструкции по применению. Раствор CO готовят и используют в день проведения анализа.

Методы оценки качества тиомерсала

О-этилртутьтиосалицилат натрия М.м. 404,8 C9H9HgNaO2S. Описание. Белый порошок с легким кремовым оттенком со слабым характерным запахом. Растворимость. 1 г реактива без остатка растворяется при температуре 18-22 °С в 1 мл воды, а также в 35 мл спирта. Раствор должен быть бесцветным или светло-желтым. Препарат почти не растворим в бензоле и эфире. Значение pH 6,0-8,0. Используют 1% раствор на свежепрокипяченой воде очищенной. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия». Подлинность. 0,05 г реактива растворяют в 5 мл воды очищенной. К раствору прибавляют 1,0 мл 10% раствора меди сульфата. Образуется осадок зеленого цвета. Растворяют 0,5 г реактива в 10 мл воды очищенной и прибавляют 1 мл 2 М раствора хлористоводородной кислоты, выделившийся осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают водой очищенной до исчезновения хлорид ионов. Осадок, высушенный до постоянной массы при комнатной температуре в присутствии фосфора (V) оксида при давлении не более 0,667 кПа (5,0 мм рт. ст.), имеет температуру плавления 110 °С. Ртутные соли. Растворяют 0,1 г реактива в 5 мл воды очищенной. К раствору прибавляют 1 мл 5% свежеприготовленного раствора натрия сульфида. Выпавший осадок не должен изменять цвета при выдерживании в темном месте в течение 30 мин. Растворимые в эфире вещества. 0,5 г реактива (точная навеска) встряхивают с 20 мл эфира в течение 10 мин, фильтруют через плотный фильтр. После испарения эфира остаток, высушенный в течение 22-24 ч в присутствии фосфора (V) оксида при давлении не более 0,667 кПа (5,0 мм рт. ст.) и комнатной температуре, должен весить не более 4 мг. Потеря в массе при высушивании. Высушивают 0,5 г реактива в течение 24 ч в присутствии фосфора (V) оксида до постоянной массы. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 0,5%. Определение проводят в соответствии ОФС «Потеря в массе при высушивании». Количественное определение. Растворяют 0,3 г реактива (точная навеска) в 10 мл воды очищенной в термостойкой колбе или химическом стакане вместимостью 50 мл, прибавляют 1,5 г растертого калия перманганата и хорошо перемешивают. Через 5 мин в колбу осторожно прибавляют при постоянном перемешивании по каплям 5 мл серной кислоты концентрированной. Через 5-10 мин. образовавшийся осадок растворяют при постепенном прибавлении 4-8 мл 3% раствора водорода пероксида. К обесцвеченному раствору прибавляют по каплям 5% раствор калия перманганата до исчезающего розового окрашивания. Раствор вновь обесцвечивают добавлением по каплям 4% раствора щавелевой кислоты. Полученный раствор после прибавления 5 мл 10% раствора квасцов железоаммонийных медленно титруют ОД М раствором аммония роданида до изменения окраски. 1 мл 0,1 М раствора аммония роданида соответствует 0,02024 г тиомерсала. Высушенный в присутствии фосфора (V) оксида реактив должен содержать не менее 98% и не более 101% тиомерсала. Хранение. ЯД! Хранят в банке с притертой пробкой, в защищенном от света сейфе. Реактив подвергают контролю 1 раз в 3 мес. Если тиомерсал не соответствует одному из перечисленных требований, его бракуют.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0024.15
Взамен ГФ X

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для количественного определения формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП). Метод основан на образовании хиноидного красителя при взаимодействии фуксинсернистого реактива с водорастворимыми альдегидами. Определение формальдегида проводится колориметрическим методом с использованием фуксинсернистой кислоты.

Колориметрический метод

В химические пробирки отбирают 0,5-2,0 мл надосадочной жидкости сорбированного образца или такое же количество несорбированного образца, доводят объем раствора водой очищенной до 5 мл и перемешивают, затем прибавляют 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты и вновь перемешивают (испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 2000 об./мин. в течение 20 мин.). Пробирки закрывают пробками и оставляют на 1 ч. Измеряют оптическую плотность при 590 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 5 мл воды очищенной и 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты. Содержание формальдегида (X1) в мкг/мл вычисляют по формуле:

,

где: a — содержание формальдегида, найденное по калибровочному графику, мкг; A — объем испытуемого образца, мл.
Содержание формальдегида в ИЛП не должно превышать 0,02% (200 мкг/мл). Построение калибровочного графика. К 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 мл стандартного раствора N 2 прибавляют воду очищенную до объема 5 мл, перемешивают (содержание формальдегида: 20; 30; 40; 50; 60; 70; 80 мкг), прибавляют 1 мл раствора фуксинсерниетой кислоты и вновь перемешивают. Далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество формальдегида в мкг, а по оси ординат — среднее значение оптической плотности калибровочных растворов. Примечания.
1 Испытуемый раствор. На анализ отбирают 0,5, 1,0 или 2,0 мл испытуемого образца в зависимости от содержания формальдегида в лекарственном препарате (количество формальдегида в анализируемом образце должно быть в пределах 20-80 мкг). 2. Основной стандартный раствор формальдегида с содержанием формальдегида около 4 мг/мл (раствор N 1). В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл формалина технического, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Определяют процентное содержание формальдегида в формалине техническом. В колбу с притертой пробкой переносят 5 мл раствора N 1, прибавляют 20 мл 0,05 М раствора йода и 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида, перемешивают и оставляют в темном месте на 10 мин. Затем прибавляют 11 мл 0,5 М раствора серной кислоты. Выделившийся йод титруют 0,1 N раствором натрия тиосульфата. После появления соломенно-желтого окрашивания раствора добавляют 0,5% раствор крахмала (индикатор) и продолжают титрование до обесцвечивания раствора. На титрование контрольного раствора отбирают 5 мл воды очищенной и прибавляют реактивы, указанные выше для раствора N 1. Содержание формальдегида (X2) в процентах рассчитывают по формуле:

где: а — объем 0,1 N раствора натрия тиосульфата, пошедшее на титрование контрольного раствора, мл; б — объем 0,1 N раствора натрия тиосульфата, пошедшее на титрование раствора N 1, мл; К — поправка к титру 0,1 N раствора натрия тиосульфата; 5,0 — объем раствора N 1, мл;
100* — разведение формалина технического; мл 100 — коэффициент пересчета в проценты; 0,001501 — количество формальдегида, соответствующее 1 мл 0,05 М раствора йода, г. Содержание формальдегида в формалине техническом должно быть не менее 36%. Содержания формальдегида (X3) в стандартном растворе N 1 в мг/мл рассчитывают по формуле:

,

где: X2 — содержание формальдегида в формалине техническом, %; 100 — пересчет % в г;
100* — пересчет в 1 мл;
1000 — пересчет в мг.
Полученный раствор хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 1 мес. 3. Стандартный раствор формальдегида 20 мкг/мл (раствор N 2). Необходимое количество раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают (если установлено, что концентрация формальдегида в формалине техническом 37%, то для приготовления стандартного раствора формальдегида N 2 отбирают 0,54 мл основного стандартного раствора N 1). Стандартный раствор N 2 используют свежеприготовленным. 4. Приготовление раствора фуксинсернистой кислоты. На кипящей водяной бане растворяют 1 г фуксина основного или парафуксина (для фуксинсернистой кислоты) в 500 мл воды очищенной. Раствор охлаждают до температуры 18-20 °С, фильтруют в мерную колбу, вместимостью 1000 мл и прибавляют 30 мл 20% раствора калия метабисульфита или 25 мл 20% раствора натрия метабисульфита. Через 20 мин. к смеси прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и выдерживают не менее суток. Перед каждым использованием раствор фуксинсернистой кислоты титруют 0,05 М раствором йода (индикатор: 0,5% раствор крахмала). На титрование 3 мл фуксинсернистой кислоты должно расходоваться от 3 до 4 мл раствора йода. Если объем раствора йода, израсходованного на титрование, меньше 3 мл, то к 100 мл приготовленного реактива прибавляют калий (или натрий) метабисульфит из расчета 200 мг на каждый миллилитр разницы между 3 мл и израсходованным объемом раствора йода. Если объем раствора йода, израсходованный на титрование, больше 4 мл, то к 100 мл реактива прибавляют раствор фуксина основного или парафуксина (V1) в мл в количестве, рассчитанным по формуле:

,

где: V — объем 0,05 М раствора йода, пошедший на титрование 3 мл реактива, мл; 100 — объем фуксинсернистой кислоты, мл; 27 — коэффициент пересчета.
Реактив готов к применению через сутки после приготовления. Раствор должен быть бесцветным, допускается слегка желтоватая окраска. Для его осветления раствора возможно применение активированного угля. Реактив хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 1 г. 5. Приготовление 0,1 N раствора натрия тиосульфата. Раствор натрия тиосульфата готовят из стандарт-титра (фиксанала) 0,1 М раствора натрия тиосульфата в мерной колбе вместимостью 1000 мл. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 3 мес. 6. Приготовление 20% раствора натрия (калия) метабисульфита. В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 г натрия (калия) метабисульфита, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Реактив хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 6 мес.