«Методические указания к токсиколого-гигиеническому исследованию материалов, узлов и аппаратов по замене функций внутренних органов» (утв. Минздравом СССР 27.11.1985)
УТВЕРЖДЕНЫ
Начальником Управления
по внедрению новых
лекарственных средств
и медицинской техники
Э.А.БАБАЯНОМ
27 ноября 1985 года
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
К ТОКСИКОЛОГО-ГИГИЕНИЧЕСКОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ МАТЕРИАЛОВ, УЗЛОВ И АППАРАТОВ ПО ЗАМЕНЕ ФУНКЦИЙ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ
- ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Настоящие Методические указания распространяются на функциональные элементы аппаратов: массообменные мембраны и волокна для АИП, сорбенты для гемосорбции и указанные аппараты в целом. Исследования проводятся в два этапа:
I — исследование функциональных элементов; II — исследование конструкций в целом (АИК, АИП, аппарат гемосорбции).
2. ГИГИЕНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К МАТЕРИАЛАМ И АППАРАТАМ
2.1. Материалы и конструкции в целом не должны оказывать на организм общетоксического, аллергенного, гемолитического действия.
3. ЭТАПЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МАССООБМЕННЫХ МЕМБРАН, ВОЛОКОН, СОРБЕНТОВ И ИХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
3.1. Санитарно-химические исследования. 3.2. Изучение гемолитического действия «ин витро». 3.3. Токсикологические исследования.
4. ИССЛЕДОВАНИЕ АИК, АИП И АППАРАТОВ ГЕМОСОРБЦИИ
Проводится в той же последовательности (п.п. 3.1., 3.2. и 3.3.).
5. ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ АППАРАТОВ
5.1. При исследовании функциональных элементов аппаратов обязательным является определение миграции в модельную среду продуктов разрушения полимерных композиций (окисляемость, бромируемость интегральными методами), pH вытяжки, а также остаточных количеств исходных продуктов синтеза, технологических добавок и стерилизующих (дезинфицирующих) агентов. При исследовании углеродных сорбентов (естественных или пирролизных углей) обязательным является определение миграции в модельную среду ароматических углеводородов (типа 3,4-бензпирена) и микроэлементов, присутствующих в углях. 5.1.1. Условия приготовления вытяжек.
Модельная среда — дистиллированная вода. Соотношение поверхности пленки или волокна и объема модельной среды определяется по формуле:
S S max - = ----- x K, (1) V V
где:
S — максимальная поверхность мембраны или волокон в кв. см; V — объем крови в организме в куб. см (взрослого человека — 5000 куб. см, ребенка — в зависимости от возраста); K — коэффициент аггравации, равный 10.
Соотношение массы сорбента и объема модельной среды определяется по формуле:
P P max - = ----- x K, (2) V V
где:
P — максимальное количество сорбента, необходимое для одного сеанса гемосорбции, г; V — объем крови в организме человека, куб. см (взрослого человека — 5000 куб. см, ребенка — в зависимости от возраста); K — коэффициент аггравации, равный 10.
Экспозиция: 3 суток.
Температурный режим экстракции: 40 +/- 1,0 град. C. 5.1.2. Оценка результатов санитарно-химических исследований. В случае обнаружения миграции из материала в модельную среду веществ с известной токсикологической характеристикой в количествах выше порога хронического действия при пероральном введении (или выше допустимых количеств миграции веществ, мигрирующих из пластмасс, контактирующих с пищевыми продуктами, если таковые известны) делается вывод о несоответствии материала гигиеническим требованиям. Дальнейшее его исследование не проводится. При обнаружении уровня миграции ниже порога хронического действия веществ (или ниже ДКМ) либо при отсутствии достаточных данных о характере биологического действия веществ, мигрирующих в модельную среду, проводятся токсикологические исследования. 5.2. Гематологические исследования влияния вытяжек из материалов на кровь «ин витро» (определение гемолитического действия проводится в соответствии с методикой). 5.3. Изучение общетоксического действия. Условия проведения эксперимента.
Вид животных: белые крысы — самцы весом 180-200 г. Группы животных: опытная и контрольная. Количество животных в группе: 10 голов. Животным вводится вытяжка, приготовленная по п. 5.1., доведенная NaCl до физиологического раствора. Контрольной группе вводится раствор физиологический. Путь введения — внутрибрюшинный.
Объем вводимой вытяжки — 5 мл.
Кратность введения: а) при изучении материалов, используемых в оксигенаторах, и гемосорбентов вытяжка вводится 10 раз через сутки; б) при изучении материалов, используемых в АИП, вытяжка вводится 20 раз через сутки. Сроки наблюдений: до начала эксперимента, 1, 2 недели и спустя неделю после прекращения введения (восстановительный период). Выбор методов изучения функционального состояния организма животных определяется в зависимости от состава материалов, технологии изготовления и способа подготовки его к работе в аппарате, а также в соответствии с результатами санитарно-химических исследований. Обязательным является изучение поведенческих реакций, общей реактивности, функций ЦНС, сердечно-сосудистой системы, печени, почек, белкового обмена, системы крови. Через неделю от начала затравок необходимо провести спиртовую нагрузку, по окончании — нагрузку гексеналом (нембуталом). Конкретные методики определения указанных параметров состояния организма животных приведены в ряде руководств и справочных материалах, указанных в приложении к сборнику. По окончании эксперимента проводятся макро- и микроскопические исследования тканей брюшины на месте введения вытяжки и следующих органов: печени, сердца, селезенки, почек. Оцениваются гистоархитектоника внутренних органов (окраска гематоксилин-эозином), наличие жировой дистрофии (окраска Суданом-3), состояние волокнистых структур (окраска по Ван-Гизону). Полученные результаты количественных определений подлежат статистической обработке (определяются средняя арифметическая, стандартное отклонение и стандартная ошибка вариационных рядов, а также производится сравнение показателей опытной и контрольной групп по критерию «t» Стьюдента). Руководства по статистической обработке данных медицинских исследований приведены в приложении к настоящему методическому сборнику. 5.3.1. Изучение аллергенного действия вытяжек. Для установления аллергенных свойств используют многократные эпикутанные воздействия вытяжек из изделий, конъюнктивальные пробы, а также аллергодиагностику «ин витро». Методики выявления сенсибилизирующих свойств описаны в источниках, приведенных в приложении к настоящему сборнику. 5.4. Оценка результатов исследования функциональных элементов. Функциональный элемент (мембраны, полые волокна, сорбенты) считается нетоксичным, если он не вызывает гемолитического действия, не вызывает статистически достоверных изменений изучаемых функций на протяжении эксперимента; применение нагрузочных проб не вызывает срыва компенсаторных механизмов; не обнаружено патологических изменений внутренних органов при гистологических исследованиях. Функциональный элемент считается токсичным, если из него в модельную среду мигрируют химические соединения в количествах, превышающих порог хронического действия веществ при пероральном введении или выше ДКМ, если таковые известны. Аналогичный вывод делается при обнаружении гемолитического или аллергенного действия вытяжки из материала «ин витро». В случае обнаружения статистически достоверных изменений (Р < 0,05 при t = 2,1) результатов количественных определений, наличия изменений поведенческих реакций животных вывод о возможности использования материала в качестве газо- или массообменного элемента в АИК и АИП и гемосорбента делается на основании комплексной оценки указанных исследований.
6. ИССЛЕДОВАНИЕ АППАРАТУРЫ ПО ЗАМЕНЕ ФУНКЦИИ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ
Допускается исследование аппаратов, функциональные узлы которых прошли исследование по п. 5 и соответствуют гигиеническим требованиям. Исследование аппаратуры (АИП, АИК, аппарат гемосорбции) проводится на стенде в условиях, имитирующих работу аппаратов в клинике <>.
<> Вытяжки готовятся в замкнутом контуре в режиме рециркуляции по схеме, указанной на рис. 1 и 3 (не приводятся).
6.1. Условия приготовления вытяжек
Модельная среда: дистиллированная вода. Температура экстракции: 40 +/- 1 град. C. Продолжительность экстракции: 3 часа.
Объем циркулирующей жидкости: 1 литр.
Примечание:
При исследовании диализаторов с повышенной ультрафильтрацией допускается увеличение объема до 2,0 л.
Скорость циркуляции модельной среды:
а) для диализаторов и аппаратов гемосорбции — 200 мл/мин.; б) для оксигенаторов — в зависимости от конструктивных особенностей. При исследовании оксигенаторов предусматривается подача в систему аппарата кислорода с расходом, обусловленным конструкцией аппарата. Дальнейшие санитарно-химические и токсикологические исследования вытяжек из аппаратов проводятся в соответствии с п.п. 5.1.-5.3. Оценка результатов — по п. 5.4.
