Приказ Минздравсоцразвития России от 27.01.2010 N 31н (ред. от 08.12.2010) «О мерах по реализации Постановления Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г. N 1145 «О финансовом обеспечении в 2010 году за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета мероприятий по развитию службы крови» (Зарегистрировано в Минюсте России 19.02.2010 N 16473) «МУ 4.2.2787-10. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Лабораторная диагностика мелиоидоза. Методические указания» (утв. Роспотребнадзором 06.12.2010) Статья. «Региональное законодательство в борьбе с табакокурением» (О.Ю.Кутумова, К.А.Главатских) («ГлавВрач», 2010, N 12)
Изменения, внесенные Приказом Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н, вступили в силу по истечении 10 дней после дня официального опубликования (опубликован в «Российской газете» — 21.01.2011). Текст документа
Зарегистрировано в Минюсте РФ 19 февраля 2010 г. N 16473
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРИКАЗ
от 27 января 2010 г. N 31н
О МЕРАХ ПО РЕАЛИЗАЦИИ ПОСТАНОВЛЕНИЯ
ПРАВИТЕЛЬСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОТ 31 ДЕКАБРЯ 2009 Г. N 1145 «О ФИНАНСОВОМ ОБЕСПЕЧЕНИИ В 2010 ГОДУ ЗА СЧЕТ БЮДЖЕТНЫХ АССИГНОВАНИЙ ФЕДЕРАЛЬНОГО БЮДЖЕТА МЕРОПРИЯТИЙ ПО РАЗВИТИЮ СЛУЖБЫ КРОВИ»
(в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
В соответствии с Постановлением Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г. N 1145 «О финансовом обеспечении в 2010 году за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета мероприятий по развитию службы крови» («Российская газета» от 22 января 2010 г. N 12) приказываю: 1. Утвердить:
перечень оборудования по заготовке, переработке, хранению и обеспечению безопасности донорской крови и ее компонентов, приобретаемого для оказывающих медицинскую помощь федеральных государственных учреждений, находящихся в ведении Федерального медико-биологического агентства, и федерального государственного учреждения «Государственное учреждение Российская детская клиническая больница Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», находящегося в ведении Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, а также для передачи в собственность субъектов Российской Федерации с последующей передачей при необходимости в собственность муниципальных образований согласно приложению N 1; перечень компьютерного и сетевого оборудования с лицензионным программным обеспечением для создания единой информационной базы по реализации мероприятий, связанных с обеспечением безопасности донорской крови и ее компонентов, развитием, организацией и пропагандой донорства крови и ее компонентов, и программно-техническими средствами защиты этой базы, приобретаемого для оказывающих медицинскую помощь федеральных государственных учреждений, находящихся в ведении Федерального медико-биологического агентства, и федерального государственного учреждения «Государственное учреждение Российская детская клиническая больница Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», находящегося в ведении Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, а также для передачи в собственность субъектов Российской Федерации с последующей передачей при необходимости в собственность муниципальных образований согласно приложению N 2; основные направления пропаганды массового донорства крови и ее компонентов согласно приложению N 3; форму заявки на поставку в 2010 году оборудования по заготовке, переработке, хранению и обеспечению безопасности донорской крови и ее компонентов, компьютерного и сетевого оборудования с лицензионным программным обеспечением для создания единой информационной базы по реализации мероприятий, связанных с обеспечением безопасности донорской крови и ее компонентов, развитием, организацией и пропагандой донорства крови и ее компонентов, и программно-технических средств защиты этой базы согласно приложению N 4. 2. Контроль за исполнением настоящего Приказа возложить на заместителя Министра здравоохранения и социального развития Российской Федерации В.И.Скворцову.
Министр
Т.А.ГОЛИКОВА
Приложение N 1
к Приказу Министерства
здравоохранения и
социального развития
Российской Федерации
от 27 января 2010 г. N 31н
ПЕРЕЧЕНЬ
ОБОРУДОВАНИЯ ПО ЗАГОТОВКЕ, ПЕРЕРАБОТКЕ, ХРАНЕНИЮ И ОБЕСПЕЧЕНИЮ БЕЗОПАСНОСТИ ДОНОРСКОЙ КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ, ПРИОБРЕТАЕМОГО ДЛЯ ОКАЗЫВАЮЩИХ МЕДИЦИНСКУЮ ПОМОЩЬ ФЕДЕРАЛЬНЫХ ГОСУДАРСТВЕННЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ, НАХОДЯЩИХСЯ В ВЕДЕНИИ ФЕДЕРАЛЬНОГО МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТСТВА, И ФЕДЕРАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УЧРЕЖДЕНИЯ «ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКАЯ ДЕТСКАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ», НАХОДЯЩЕГОСЯ В ВЕДЕНИИ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ, А ТАКЖЕ ДЛЯ ПЕРЕДАЧИ В СОБСТВЕННОСТЬ СУБЪЕКТОВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ПЕРЕДАЧЕЙ ПРИ НЕОБХОДИМОСТИ В СОБСТВЕННОСТЬ МУНИЦИПАЛЬНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ
(в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
N Наименование оборудования п/п
1 2
Федеральные государственные учреждения и государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования, предусмотренное приложением N 1 к Правилам финансового обеспечения в 2010 году за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета мероприятий по развитию службы крови, утвержденным Постановлением Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г. N 1145 (в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Аппарат для автоматического цитоплазмафереза
- Аппарат для автоматического донорского плазмафереза
- Аппарат для автоматизированного разделения крови на компоненты
- Автоматический гематологический анализатор
- Автоматический иммуноферментный анализатор
- Комплект полуавтоматического ИФА-оборудования
- Установка для замораживания плазмы крови
- Камера длительного хранения плазмы
- Аппарат для размораживания плазмы и подогрева компонентов крови
- Автоматизированный комплекс для иммуногематологических исследований в гелевой и микропланшетной технологии (п. 10 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Автоматический анализатор для иммуногематологических исследований (п. 11 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Автоматический биохимический анализатор
- Перемешиватель донорских тромбоцитов в комплекте с инкубатором донорских тромбоцитов
- Центрифуга рефрижераторная напольная
- Аппарат дозированного сбора и помешивания крови (весы-помешиватели)
- Кресло донорское
- Система инактивации патогенов компонентов донорской крови
- Автоматический анализатор для определения стерильности компонентов донорской крови
- Устройство для стерильного запаивания трубок пластиковых контейнеров для заготовки крови и ее компонентов
- Медицинский холодильник для хранения крови, ее компонентов, лекарственных средств и вакцин
- Медицинский холодильник для хранения крови, компонентов лекарственных средств и вакцин при низких температурах (от -20 град. C до -40 град. C)
- Медицинский холодильник для хранения крови, компонентов лекарственных средств и вакцин при низких температурах (от -50 град. C до -80 град. C)
- Криобанк
- Система приборов для проведения скрининга донорской крови и ее продуктов методом генамплификации нуклеиновых кислот
- Запаиватель пластиковых магистралей
- Оборудование для глицеролизации и деглицеролизации эритроцитов
- Комплекс приборов для выделения нуклеиновых кислот, высокопроизводительного определения их последовательностей, анализа и скрининга генов на мутации и полиморфизмы (п. 27 введен Приказом Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
Организации здравоохранения субъектов Российской Федерации
- Аппарат для автоматического донорского плазмафереза
- Аппарат для автоматического цитоплазмафереза
- Аппарат для автоматизированного разделения крови на компоненты
- Запаиватель пластиковых магистралей
- Установка для замораживания плазмы крови
- Камера длительного хранения плазмы
- Автоматический иммуноферментный анализатор
- Комплект полуавтоматического ИФА-оборудования
- Автоматический гематологический анализатор
- Автоматический биохимический анализатор
- Центрифуга рефрижераторная напольная
- Автоматизированный комплекс для иммуногематологических исследований (п. 12 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Автоматический анализатор для иммуногематологических исследований (п. 13 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Перемешиватель донорских тромбоцитов в комплекте с инкубатором донорских тромбоцитов
- Кресло донорское
- Аппарат дозированного сбора и помешивания крови (весы-помешиватели)
- Система инактивации патогенов компонентов донорской крови
- Криобанк (п. 18 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Устройство для стерильного запаивания трубок пластиковых контейнеров для заготовки крови и ее компонентов
- Аппарат для размораживания плазмы и подогрева компонентов крови
- Медицинский холодильник для хранения крови, ее компонентов, лекарственных средств и вакцин
- Медицинский холодильник для хранения крови, компонентов лекарственных средств и вакцин при низких температурах (от -20 град. C до -40 град. C)
- Медицинский холодильник для хранения крови, компонентов лекарственных средств и вакцин при низких температурах (от -50 град. C до -80 град. C)
- Система приборов для проведения скрининга донорской крови и ее продуктов методом генамплификации нуклеиновых кислот
- Оборудование для глицеролизации и деглицеролизации эритроцитов
- Автоматический анализатор для определения стерильности компонентов донорской крови
- Мобильный комплекс заготовки крови
Приложение N 2
к Приказу Министерства
здравоохранения и
социального развития
Российской Федерации
от 27 января 2010 г. N 31н
ПЕРЕЧЕНЬ
КОМПЬЮТЕРНОГО И СЕТЕВОГО ОБОРУДОВАНИЯ
С ЛИЦЕНЗИОННЫМ ПРОГРАММНЫМ ОБЕСПЕЧЕНИЕМ ДЛЯ СОЗДАНИЯ ЕДИНОЙ ИНФОРМАЦИОННОЙ БАЗЫ ПО РЕАЛИЗАЦИИ МЕРОПРИЯТИЙ, СВЯЗАННЫХ С ОБЕСПЕЧЕНИЕМ БЕЗОПАСНОСТИ ДОНОРСКОЙ КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ, РАЗВИТИЕМ, ОРГАНИЗАЦИЕЙ И ПРОПАГАНДОЙ ДОНОРСТВА КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ, И ПРОГРАММНО-ТЕХНИЧЕСКИМИ СРЕДСТВАМИ ЗАЩИТЫ ЭТОЙ БАЗЫ, ПРИОБРЕТАЕМОГО ДЛЯ ОКАЗЫВАЮЩИХ МЕДИЦИНСКУЮ ПОМОЩЬ ФЕДЕРАЛЬНЫХ ГОСУДАРСТВЕННЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ, НАХОДЯЩИХСЯ В ВЕДЕНИИ ФЕДЕРАЛЬНОГО МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТСТВА, И ФЕДЕРАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УЧРЕЖДЕНИЯ «ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКАЯ ДЕТСКАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ», НАХОДЯЩЕГОСЯ В ВЕДЕНИИ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ, А ТАКЖЕ ДЛЯ ПЕРЕДАЧИ В СОБСТВЕННОСТЬ СУБЪЕКТОВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ПЕРЕДАЧЕЙ ПРИ НЕОБХОДИМОСТИ В СОБСТВЕННОСТЬ МУНИЦИПАЛЬНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ
(в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
N Наименование оборудования п/п
1 2
Федеральные государственные учреждения и государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования, предусмотренное приложением N 1 к Правилам финансового обеспечения в 2010 году за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета мероприятий по развитию службы крови, утвержденным Постановлением Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г. N 1145 (в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Серверное оборудование (Тип 1) <>
- Серверное оборудование (Тип 3) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 1) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 2) <>
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 4) <>
- Неисключительные права на использование комплекта операционных систем и другого программного обеспечения общего назначения
- Неисключительные права на использование комплекса программ поддержки технологического процесса деятельности станции переливания крови (п. 7 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Неисключительные права на использование комплекса программ для статистической отчетности в региональных информационных центрах
Организации здравоохранения субъектов Российской Федерации
- Серверное оборудование (Тип 2) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 1) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 2) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 3) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 4) <>
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 5) <>
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип
- <>
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 2)
<>
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 3) <>
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 4) <*>
- Неисключительные права на использование комплекта операционных систем и другого программного обеспечения общего назначения
- Неисключительные права на использование комплекса программ поддержки технологического процесса деятельности станции переливания крови регионального уровня (включая Единый донорский центр) (п. 12 в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
- Неисключительные права на использование программ «Регистратура ЛПУ источника информации для единого донорского центра»
<*> Спецификация каждого типа серверного оборудования, оборудования автоматизированного рабочего места пользователя и активного сетевого оборудования локальной вычислительной сети включает в себя следующий Перечень оборудования для оснащения учреждений службы крови первого этапа внедрения:
Серверное оборудование <**>
Тип 1
Сервер для электронной почты
Сервер для защиты почты
Сервер для системы управления и мониторинга сетевым оборудованием
Неисключительные права на использование комплекса программного обеспечения почтового сервиса
Неисключительные права на использование комплекса программного сервиса защиты почты
Дистрибутив программного сервиса защиты почты
Экранная панель не менее 160 см
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы для сервера
Дистрибутив операционной системы для сервера
Неисключительные права на использование комплекса программ для статистической отчетности в региональных информационных центрах
Комплект средств защиты информации
Неисключительные права на использование системы управления сохранением и восстановлением данных
Неисключительные права на использование системы мониторинга серверов и приложений
Комплекс программ поддержки функционирования системы защиты персональных данных
Тип 2
Платформа модульного сервера
Серверный модуль станции переливания крови
Серверный модуль базы данных станции переливания крови, единого донорского центра
Комплект средств защиты информации
Источник бесперебойного питания
Дистрибутив операционной системы для сервера
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы для сервера
Дистрибутив системы управления базами данных
Неисключительные права на использование системы управления базами данных
Неисключительные права на использование системы управления сохранением и восстановлением данных
Неисключительные права на использование системы мониторинга серверов и приложений
Неисключительные права на использование комплекса программ поддержки технологического процесса деятельности станции переливания крови регионального уровня (включая Единый донорский центр) (в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
Программы системы автоматизации регистратуры ЛПУ источника информации для единого донорского центра. Серверная часть. (Для 6 ЛПУ в каждом регионе) (в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Программно-аппаратный комплекс мониторинга и администрирования
Принтер лазерный (10 шт. на объект)
Тип 3
Сервер приложений
Комплект средств защиты информации
Источник бесперебойного питания
Неисключительные права на использование сертифицированной операционной системы для сервера
Дистрибутив операционной системы для сервера
Неисключительные права на использование системы мониторинга серверов и приложений
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Программно-аппаратный комплекс мониторинга и администрирования
Неисключительные права на использование комплекса программ поддержки технологического процесса деятельности станции переливания крови (в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
Неисключительные права на использование системы управления сохранением и восстановлением данных
Принтер лазерный (10 шт. на объект)
Неисключительные права на использование комплекса программ репликации данных
Автоматизированное рабочее место пользователя
Тип 1
Системный блок компьютера, клавиатура, мышь, коврик
Монитор
Источник бесперебойного питания, не менее 660 Вт/1100 VA
Сетевой фильтр, не менее 1,5 м, 5 розеток
Позиция исключена. — Приказ Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы на одного пользователя
Клиентская лицензия для работы с сервером для 1 пользователя
Неисключительные права на использование комплекта офисных программ
Дистрибутив офисных программ
Комплект средств защиты информации
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Неисключительные права на использование системы мониторинга
Клиентская лицензия на 1 пользователя на использование системы управления базами данных (для 22 объектов)
Модем Dial-up внешний
Комплект средств защиты информации для переносного компьютера
Переносной компьютер
Неисключительные права на использование комплекта офисных программ для переносного компьютера
Дистрибутив офисных программ для переносного компьютера
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы на одного пользователя для переносного компьютера
Сканер штрих-кода с USB-входом
Комплект в составе: Три термотрансферных принтера (со стартовым пакетом расходных материалов). Бумага для печати этикетки годной продукции (97 x 97). Красящая лента (110 мм, 450 м) (из расчета 100 доноров в день для станции переливания крови с единым донорским центром, и 50 доноров в день для станции переливания крови без единого донорского центра на 0,5 года работы ЛПУ). Бумага для печати технологических штрих-кодовых этикеток (25 x 50). Красящая лента (60 мм, 450 м) (из расчета 100 доноров в день для станции переливания крови с единым донорским центром и 50 доноров в день для станции переливания крови без единого донорского центра на 0,5 года работы ЛПУ).
Веб-камера
Носитель информации USB
Тип 2
Системный блок компьютера, клавиатура, мышь, коврик
Монитор
Клиентская лицензия для работы с сервером для 1 пользователя
Источник бесперебойного питания, не менее 660 Вт/1100 VA
Сетевой фильтр, не менее 1,5 м, 5 розеток
Позиция исключена. — Приказ Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы на одного пользователя
Комплект средств защиты информации
Дистрибутив офисных программ
Неисключительные права на использование комплекта офисных программ
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Неисключительные права на использование системы мониторинга
Клиентская лицензия на 1 пользователя на использование системы управления базами данных (для 22 объектов)
Сканер штрих-кода с USB-входом
Тип 3
Системный блок компьютера, клавиатура, мышь, коврик
Монитор
Источник бесперебойного питания, не менее 660 Вт/1100 VA
Сетевой фильтр, не менее 1,5 м, 5 розеток
Клиентская лицензия для работы с сервером для 1 пользователя
Позиция исключена. — Приказ Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н
Комплект средств защиты информации
Клиентская лицензия на 1 пользователя на использование системы управления базами данных
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы на одного пользователя
Дистрибутив офисных программ
Неисключительные права на использование комплекта офисных программ
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Неисключительные права на использование системы мониторинга
Сканер штрих-кода с USB-входом
Принтер лазерный (10 шт. на объект)
Тип 4
Системный блок компьютера, клавиатура, мышь, коврик
Монитор
Клиентская лицензия для работы с сервером для 1 пользователя
Источник бесперебойного питания, не менее 660 Вт/1100 VA
Сетевой фильтр, не менее 1,5 м, 5 розеток
Позиция исключена. — Приказ Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н
Комплект средств защиты информации
Клиентская лицензия на 1 пользователя на использование системы управления базами данных
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы на одного пользователя
Неисключительные права на использование комплекта офисных программ
Дистрибутив офисных программ
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Неисключительные права на использование системы мониторинга
Сканер штрих-кода с USB-входом
Принтер лазерный (в ред. Приказа Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н)
Тип 5
Системный блок компьютера, клавиатура, мышь, коврик
Монитор
Источник бесперебойного питания, не менее 660 Вт/1100 VA
Модем Dial-up внешний
Клиентская лицензия для работы с сервером для 1 пользователя
Принтер лазерный
Сетевой фильтр, не менее 1,5 м, 5 розеток
Позиция исключена. — Приказ Минздравсоцразвития РФ от 08.12.2010 N 1091н
Комплект средств защиты информации
Неисключительные права на использование сертифицированной лицензионной операционной системы на одного пользователя
Неисключительные права на использование комплекта офисных программ
Дистрибутив офисных программ
Неисключительные права на использование программы защиты от вирусов
Неисключительные права на использование системы мониторинга
Неисключительные права на использование программ системы автоматизации регистратуры ЛПУ источника информации для единого донорского центра. Клиентская часть
Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети
Тип 1
Центральный коммутатор на 24 порта для подключения автоматизированного рабочего места и серверов
Маршрутизатор (не менее чем 2 порта 10/100 BaseT)
Межсетевой экран и обеспечение VPN-доступа в комплекте со средствами защиты информации
Аппаратно-программный комплекс обнаружения компьютерных атак
Структурированная кабельная система для комплекта оборудования N 1
Тип 2
Центральный коммутатор на 24 порта для подключения автоматизированного рабочего места и серверов
Маршрутизатор (2 порта 10/100 BaseT)
Межсетевой экран и обеспечение VPN-доступа в комплекте со средствами защиты информации
Аппаратно-программный комплекс обнаружения компьютерных атак
Структурированная кабельная система для комплекта оборудования N 2
Тип 3
Центральный коммутатор на 24 порта для подключения автоматизированного рабочего места и серверов
Маршрутизатор (2 порта 10/100 BaseT)
Межсетевой экран и обеспечение VPN-доступа в комплекте со средствами защиты информации
Аппаратно-программный комплекс обнаружения компьютерных атак
Структурированная кабельная система для комплекта оборудования N 3
Тип 4
Центральный коммутатор на 24 порта для подключения автоматизированного рабочего места и серверов
Маршрутизатор (2 порта 10/100 BaseT)
Межсетевой экран и обеспечение VPN-доступа в комплекте со средствами защиты информации
Аппаратно-программный комплекс обнаружения компьютерных атак
Структурированная кабельная система для комплекта оборудования N 4
Приложение N 3
к Приказу Министерства
здравоохранения и
социального развития
Российской Федерации
от 27 января 2010 г. N 31н
ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ
ПРОПАГАНДЫ МАССОВОГО ДОНОРСТВА КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ
- Разработка комплекса мероприятий по пропаганде массового донорства крови и ее компонентов в Российской Федерации на 2010 год на основе единых подходов к привлечению граждан Российской Федерации к регулярной сдаче донорской крови и ее компонентов.
- Реализация комплекса мероприятий по пропаганде массового донорства крови и ее компонентов в Российской Федерации на 2010 год.
- Проведение исследований, мониторинга и анализа реализации комплекса мероприятий по пропаганде массового донорства крови и ее компонентов в Российской Федерации на 2010 год.
- Разработка комплекса мероприятий по пропаганде массового донорства крови и ее компонентов в Российской Федерации на 2010 год для организаций, осуществляющих заготовку, переработку, хранение и обеспечение безопасности донорской крови и ее компонентов, который предусматривает повышение организационной и производственной деятельности организаций службы крови.
Приложение N 4
к Приказу Министерства
здравоохранения и
социального развития
Российской Федерации
от 27 января 2010 г. N 31н
Заявка на поставку в 2010 году оборудования по заготовке, переработке, хранению и обеспечению безопасности донорской крови и ее компонентов, компьютерного и сетевого оборудования с лицензионным программным обеспечением для создания единой информационной базы по реализации мероприятий, связанных с обеспечением безопасности донорской крови и ее компонентов, развитием, организацией и пропагандой донорства крови и ее компонентов, и программно-технических средств защиты этой базы
Представляют: федеральные государственные Сроки представления: учреждения, оказывающие медицинскую помощь, I квартал подведомственные Федеральному медико- 2010 года <*> биологическому агентству; федеральное государственное учреждение "Государственное
учреждение Российская детская клиническая больница Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», находящееся в ведении Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации; уполномоченные органы исполнительной власти субъектов Российской Федерации (далее — Заявитель) в Федеральное медико-биологическое агентство
Полное наименование Заявителя _____________________________________________ Ф.И.О. руководителя Заявителя (отчество, если имеется) ____________________ Адрес, тел., тел./факс, e-mail Заявителя __________________________________ Получатель (полное наименование учреждения Заявителя) _____________________ Ф.И.О. руководителя получателя (отчество, если имеется) ___________________ ИНН, адрес, тел., тел./факс, e-mail получателя ____________________________
N Наименование оборудования Количество, п/п шт. 1 2 3
- Аппарат для автоматического цитоплазмафереза
- Аппарат для автоматического донорского плазмафереза
- Автоматический гематологический анализатор
- Автоматический иммуноферментный анализатор
- Автоматизированный комплекс для иммуногематологических исследований открытого типа
- Автоматизированный комплекс для иммуногематологических исследований закрытого типа
- Автоматический анализатор для определения стерильности компонентов донорской крови
- Автоматический биохимический анализатор
- Аппарат для автоматизированного разделения крови на компоненты
- Аппарат дозированного сбора и помешивания крови (весы-помешиватели)
- Аппарат для размораживания плазмы и подогрева компонентов крови
- Запаиватель пластиковых магистралей
- Камера длительного хранения плазмы
- Комплект полуавтоматического ИФА-оборудования
- Криобанк
- Кресло донорское
- Медицинский холодильник для хранения крови, ее компонентов, лекарственных средств и вакцин
- Медицинский холодильник для хранения крови, компонентов лекарственных средств и вакцин при низких температурах (от -20 град. C до -40 град. C)
- Медицинский холодильник для хранения крови, компонентов лекарственных средств и вакцин при низких температурах (от -50 град. C до -80 град. C)
- Мобильный комплекс заготовки крови
- Оборудование для глицеролизации и деглицеролизации эритроцитов
- Перемешиватель донорских тромбоцитов в комплекте с инкубатором донорских тромбоцитов
- Система инактивации вирусов в плазме крови
- Система инактивации патогенов компонентов донорской крови
- Система приборов для проведения скрининга донорской крови и ее продуктов методом генамплификации нуклеиновых кислот
- Установка для замораживания плазмы крови
- Устройство для стерильного запаивания трубок пластиковых контейнеров для заготовки крови и ее компонентов
- Центрифуга рефрижераторная напольная
- Серверное оборудование (Тип 1)
- Серверное оборудование (Тип 2)
- Серверное оборудование (Тип 3)
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 1)
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 2)
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 3)
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 4)
- Автоматизированное рабочее место пользователя (Тип 5)
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 1)
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 2)
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 3)
- Активное сетевое оборудование локальной вычислительной сети (Тип 4)
- Прикладное программное обеспечение
41.1. Неисключительные права на использование комплекта
операционных систем и другого программного обеспечения общего назначения
41.2. Комплекс программ поддержки технологического процесса
деятельности станции переливания крови
41.3. Неисключительные права на использование комплекса
программ, разработанных по технологии dot net для статистической отчетности в региональных информационных центрах
41.4. Комплекс программ поддержки технологического процесса
деятельности станции переливания крови регионального уровня (включая Единый донорский центр)
41.5. Неисключительные права на использование программ
"Регистратура ЛПУ источника информации для единого донорского центра"
Руководитель Заявителя _______________ _______________ ________________
(подпись) (ф.и.о) (дата)
Исполнитель _______________ _______________ Тел. (подпись) (ф.и.о) ________________ Факс ________________ E-mail ________________
<*> В соответствии с пунктом 2 Правил финансового обеспечения в 2010 году за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета мероприятий по развитию службы крови, утвержденных Постановлением Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г. N 1145 («Российская газета» от 22 января 2010 г. N 12).
Примечания:
1. Отсутствие потребности в оборудовании, предусмотренном одной из строк 1-41.5, обязательно отмечать в графе 3 словами «нет потребности». 2. Заявка должна быть составлена в соответствии с перечнем оборудования по заготовке, переработке, хранению и обеспечению безопасности донорской крови и ее компонентов, приобретаемого для оказывающих медицинскую помощь федеральных государственных учреждений, находящихся в ведении Федерального медико-биологического агентства, и федерального государственного учреждения «Государственное учреждение Российская детская клиническая больница Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», находящегося в ведении Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, а также для передачи в собственность субъектов Российской Федерации с последующей передачей при необходимости в собственность муниципальных образований, предусмотренным приложением N 1 к Приказу Минздравсоцразвития России от 27 января N 31н, и перечнем компьютерного и сетевого оборудования с лицензионным программным обеспечением для создания единой информационной базы по реализации мероприятий, связанных с обеспечением безопасности донорской крови и ее компонентов, развитием, организацией и пропагандой донорства крови и ее компонентов, и программно-техническими средствами защиты этой базы, приобретаемого для оказывающих медицинскую помощь федеральных государственных учреждений, находящихся в ведении Федерального медико-биологического агентства, и федерального государственного учреждения «Государственное учреждение Российская детская клиническая больница Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», находящегося в ведении Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, а также для передачи в собственность субъектов Российской Федерации с последующей передачей при необходимости в собственность муниципальных образований, предусмотренным приложением N 2 Приказу Минздравсоцразвития России от 27 января N 31н. Наименование и количество единиц оборудования определяются с учетом отсутствия оборудования.
Документ введен в действие с 6 декабря 2010 года. Текст документа
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
6 декабря 2010 года
Дата введения:
2010 год
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МЕЛИОИДОЗА
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 4.2.2787-10
- Методические указания разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю.В.Демина, Н.Д.Пакскина); ФГУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора (В.И.Илюхин, В.В.Алексеев, Н.П.Храпова, В.А.Антонов, Т.В.Сенина, В.Н.Андрус, Н.И.Погасий, Г.А.Ткаченко, В.В.Алексеева, С.С.Савченко, Е.В.Шубникова, Т.В.Булатова, Ю.И.Сорокина).
- Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
- Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 декабря 2010 г.
- Введены впервые.
Список сокращений
Аг антиген А-ПХ авидин-пероксидаза хрена Aт антитело АСК аминосалициловая кислота БСА бычий сывороточный альбумин Г+Ц гуаниновые и цитидиновые нуклеотиды ДТСГК двутретьосновная соль гипохлорита кальция ДХЦК дихлоризоциануровая кислота ЕД единица действия ЖМАС жидкая минимальная среда с антибиотиками ИПК иммунопероксидазный коньюгат ИФА иммуноферментный анализ КББ карбонатно-бикарбонатный буфер МПГА (МПГБ) мясо-пептонный агар (бульон) с глицерином МПК минимальная подавляющая концентрация МФА метод флуоресцирующих антител НГК нейтральный гипохлорит кальция НКС нормальная кроличья сыворотка НЛС нормальная лошадиная сыворотка НЦМ (НЦФ) нитроцеллюлозная мембрана (фильтр) ППН показатель повреждения нейтрофилов ПЦР полимеразная цепная реакция РА реакция агглютинации РИА радиоиммунный анализ РКоА реакция коагглютинации РНГА реакция непрямой гемагглютинации РСК реакция связывания комплемента РТГА реакция торможения непрямой гемагглютинации ТИФА (М) твердофазный иммуноферментный анализ (метод) ТМБ тетраметилбензидин ТСА (ТСБ) триптиказосоевый агар (бульон) ЦФБР цитратно-фосфатный буферный раствор
- Область применения
1.1. Методические указания предназначены для специалистов лабораторного звена как в системе органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, так и в системе лечебно-профилактических учреждений независимо от форм собственности. 1.2. В методических указаниях определены порядок забора, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных и умерших людей, животных с подозрением на мелиоидоз, материала из объектов окружающей среды, подозрительного на контаминацию возбудителем данного заболевания.
2. Нормативные ссылки
2.1. Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности): СП 1.3.1285-03. М., 2003. 2.2. Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности: СП 1.2.036-95. М., 1996. 2.3. Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности: МУ 1.3.1794-03. М., 2004. 2.4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: МУК 4.2.1890-04. М., 2004. 2.5. Обеззараживание биологического материала и объектов внешней среды, зараженных бактериями I-IV групп патогенности, при исследованиях методом ПЦР: МУ 3.5.5.1034-01. М., 2001. 2.6. Методические рекомендации «Лабораторная диагностика, лечение и профилактика мелиоидоза». Волгоград, 1994. 2.7. Методическое пособие для проведения практических занятий по лабораторной диагностике мелиоидоза с использованием штамма-имитатора Burkholderia thailandensis KM-161. Волгоград, 2008. 2.8. Методические рекомендации по проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий в завозных очагах мелиоидоза. Волгоград, 1982. 2.9. Специфическая индикация патогенных биологических агентов: Практическое руководство. М., 2006. 2.10. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней: Практическое руководство. М., «Медицина», «Шико», 2009.
3. Общие сведения
Мелиоидоз — тропический бактериоз, протекающий с явлениями сепсиса и образованием абсцессов в органах и тканях. Длительное время существовало твердое убеждение, что мелиоидоз эндемичен лишь для влажных субтропиков стран Юго-Восточной Азии. Заболевание мелиоидозом людей и животных и выделение культур В. pseudomallei из внешней среды в Австралии, Чили, Сальвадоре, Франции, Италии и других странах показали всю серьезность проблемы диагностики, лечения при почти непредсказуемых последствиях завоза возбудителя в страны с умеренным климатом. Практически во всех странах Западной Европы, включая Скандинавию, за последние годы зарегистрированы случаи мелиоидоза среди лиц, побывавших в качестве туристов или специалистов в эндемичных зонах. Естественным резервуаром возбудителя являются домашние животные (козы, овцы, свиньи, коровы, лошади, собаки, кошки и др.), среди которых могут возникать эпизоотии, а также некоторые виды грызунов. Инфицированные животные, выделяя возбудителя с естественными жидкостями и экссудатом раневых поверхностей, обсеменяют объекты окружающей среды. В. pseudomallei длительно сохраняется в воде и почве, активно участвуя в процессах денитрификации. Основной механизм заражения человека — контактный, реализуется при контакте поврежденной кожи или слизистых оболочек с инфицированными почвой и водой (например, при работе на рисовых плантациях, купанием в стоячих водоемах). В России, как и в других странах бывшего СССР, не было зарегистрировано до сих пор ни одного достоверного случая мелиоидоза, но существование эндемичных очагов на сопредельных территориях (Иран, Турция, Китай) и наличие обширных экономических и культурных контактов со странами Юго-Восточной Азии, Центральной Америки и Африки диктуют необходимость настороженности со стороны медицинской и ветеринарной служб нашей страны к возможным случаям появления этого заболевания. Необходимость разработки мероприятий по индикации дополнительно усиливается сведениями о возможности использования возбудителя мелиоидоза в качестве агента биотерроризма. Возбудитель мелиоидоза В. pseudomallei относится к роду Burkholderia. Это палочка с закругленными концами размером (0,5-0,8) x (2,0-6,0) мкм, однако могут встречаться также коккобациллярные и нитевидные формы. Подвижен за счет наличия нескольких жгутиков на одном конце клетки (лофотрих). В. pseudomallei — факультативный аэроб, растет при температуре 37 °С на простых питательных средах. Добавление глицерина (1-5%) улучшает ростовые качества сред. Может размножаться в анаэробных условиях в присутствии нитрата. В отличие от возбудителя сапа растет при температуре 42 °С. В бульоне дает помутнение с образованием к концу первых суток нежной слизистой пленки с более толстым пристеночным ободком. Быстро утолщаясь (до 1 мм), пленка приобретает серовато-желтый цвет. При старении культуры на дне пробирки образуется слизистый осадок. На плотных питательных средах отмечается морфологическая диссоциация колоний. S-форма — колонии вначале круглые, прозрачные, выпуклые, с ровными краями, к 48 ч. они достигают диаметра 1-3 мм и начинают диссоциировать (теряют прозрачность, становятся серовато-белыми с металлическим блеском, поверхность — шероховатая). В отдельных случаях появляются мукоидные колонии. При сливном росте наблюдается гладкий, слизистый, блестящий, непрозрачный налет, приподнимающийся над поверхностью агара. R-форма — серовато-желтые непрозрачные колонии диаметром 2-4 мм с морщинистой поверхностью и неровным зубчатым краем. На скошенном агаре образуется морщинистый, сухой, непрозрачный налет серовато-белого цвета. При выращивании на среде Эшдауна мелиоидозные колонии приобретают темно-красный цвет за счет сорбции из среды нейтрального красного, вокруг колоний наблюдается просветление среды. Все известные штаммы В. pseudomailei, выделенные из клинического материала и внешней среды, резистентны к полимиксину В и гентамицину, МПК более 50 и 4 мкг/мл, соответственно. Антигенная структура возбудителя мелиоидоза достаточно сложна. В настоящее время у микроба выявлены жгутиковый (Н), соматический (О), капсульный (К) и слизистый (М) антигены. В составе соматических (липополисахаридных) О-антигенов имеются компоненты, близкородственные антигенам возбудителя сапа. В. pseudomailei патогенен для человека, обезьян, диких грызунов (хомяков, хорьков, крыс, мышей) и лабораторных животных (кроликов, морских свинок, белых крыс и мышей). При внутрибрюшинном заражении самцов лабораторных животных может наблюдаться феномен Штрауса (скротальная реакция). Возбудитель мелиоидоза термолабилен: при температуре 58 °С погибает в течение 15 мин., на холоде (при температуре 4 °С) отмирает в течение 2-3 недель. Устойчив к высушиванию. В гниющих материалах остается жизнеспособным от 8 до 27 дней, в воде — до 44 дней. Дезинфектанты (3-5% фенол, 5% формалин) убивают возбудителя мелиоидоза в течение суток. По морфологическим, биологическим и особенно антигенным свойствам возбудитель мелиоидоза сходен с бактериями сапа. Для их дифференциации используют совокупность фенотипических признаков и серологические реакции.
4. Материал для исследования, отбор и транспортирование проб
Вся работа с исследуемым материалом, подозрительным на зараженность возбудителем мелиоидоза, проводится в соответствии с требованиями по безопасности работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (санитарными правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» и СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности», а также методическими указаниями МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности»). Идентификация возбудителя мелиоидоза предусматривает выделение возбудителя (или выявление его антигенов) из объектов исследования и определение специфических антител в крови людей и животных. Схема лабораторной диагностики мелиоидоза (рис. 1).
Исследуемый материал
> Микроскопия мазков, МФА
> ПЦР
> РНГА, ИФА, РКоА, РОА — выявление антигена
> Заражение биопробных животных
\/ \/ \/
Микроскопия РНГА, ИФА, РКоА, РОА - ПЦР мазков, МФА выявление антигена > > Посев на питательные среды
\/
Выделение чистой культуры
\/
Идентификация
Рис. 1. Схема исследования материала на наличие в нем В. pseudomailei
У больных животных и человека возбудитель мелиоидоза может быть выделен из содержимого абсцессов, мокроты, гнойного отделяемого язв, рвотных масс. При острой септической форме возбудитель обнаруживается в крови, моче, цереброспинальной жидкости и в полостных экссудатах. В пробы, отобранные для бактериологического исследования, с целью подавления роста посторонней микрофлоры добавляют полимиксин В (50 мкг/мл) и гентамицин (4 мкг/мл). До начала исследования материал следует хранить при комнатной температуре. Пробы изучают параллельно согласно представленной ниже схеме бактериологическими и серологическими методами (рис. 1). Забор проб воды и почвы в эндемичных районах проводят в хорошо прогреваемых сырых местах, вблизи водопоев скота, навозохранилищ и жижесборников, на полях орошения. Воду с поверхности луж, рисовых полей, мелких водоемов и искусственных емкостей отбирают в стерильные флаконы в объеме 50-100 мл. Почву в количестве 5-10 г забирают с глубины 20-40 см в пробирки. При необходимости пересылки (транспортировки) материала для исследования используют жидкую минимальную среду с антибиотиками (см. раздел 5.1). Контейнеры с объектами содержат при комнатной температуре, патогенные буркхольдерии при низких температурах (<= 4 °С) отмирают в течение недели. Температурный режим необходимо учитывать и при пересылке чистых культур на плотных питательных средах для окончательной идентификации.
5. Методы исследования материала
5.1. Бактериологический метод
Асептически полученную кровь, цереброспинальную жидкость, экссудат и прочий материал для исследований засевают в мясо-пептонный бульон с 4% глицерина (МПГБ), одновременно делая посев на мясо-пептонный агар с 4% глицерина (МПГА) и селективную среду Эшдауна (триптиказосоевый агар, содержащий 4 мг/л гентамицина, 5 мг/л кристаллвиолета и 50 мг/л нейтрального красного). В. pseudomallei хорошо растет и на минимальной среде с соответствующими добавками. Состав среды:
(NH4)2SO4 — 2,0 г;
NaH2PO4 x H2O — 0,5 г;
К2НРО4 — 0,5 г;
MgSO4 x 7Н2О — 0,2 г;
СаСl2 x 2Н2O — 0,1 г;
дистиллированная вода до 1000 мл.
Добавление к этой среде в конечной концентрации 0,03 М различных С-содержащих соединений свидетельствует о наличии большой адаптационной возможности возбудителя мелиоидоза, способного усваивать обширный набор углеводородов. На этапах идентификации к данной среде добавляют 0,03 М бета-аланин (жидкая минимальная среда), а также полимиксин В (50 мкг/мл) и гентамицин (4 мкг/мл) — так называемая жидкая минимальная среда с антибиотиками (ЖМАС). Дополнительных факторов роста (аминокислоты, витамины) природные штаммы не требуют, так как они прототрофы. Посевы из внутренних органов умерших людей и павших животных, в зависимости от степени загрязнения посторонней микрофлорой, осуществляют методом мазков-отпечатков с последующим рассевом петлей на плотные среды: МПГА, Мак Конки или Эшдауна. Кусочки органов (печень, селезенка, почки, легкие) объемом 1 куб. см помещают в МПГБ или жидкую минимальную среду с антибиотиками и ведут анализ так же, как при обследовании объектов внешней среды. Воду высевают по 0,2 мл на плотную селективную среду Эшдауна. С целью обогащения 2 мл исследуемой воды заливают в 10 мл жидкой минимальной среды с антибиотиками. Пробирки с ЖМАС выдерживают при температуре 37 °С в течение сут., после чего петлей делают посев с поверхности среды на среду Эшдауна и инкубируют в течение суток. Из образцов почвы предварительно готовят суспензии. Для этого 1 г почвы вносят в 10 мл стерильной дистиллированной воды и встряхивают 10 мин. Суспензии дают отстояться в течение 10-30 мин. Жидкость над осадком высевают по 0,1 мл на чашки со средой Эшдауна, а для обогащения по 1 мл переносят в пробирки с ЖМАС, которые инкубируют в течение 1 сут. при температуре 37 °С, после чего делают высев петлей на среду Эшдауна. Чашки инкубируют при температуре 37 °С не менее 8 сут. При посеве на МПГА возбудитель мелиоидоза через сутки формирует полупрозрачные сероватого цвета колонии с округлым ровным краем и гладкой выпуклой поверхностью. Под малым увеличением часть колоний однородна, гомогенна, у других можно заметить начинающуюся складчатость. Через 48 ч. наблюдается морфологическая диссоциация колоний — одни из них блестящие, гладкие, выпуклые, с ровным краем (S-форма); другие имеют шероховатую или складчатую поверхность с неровным зубчатым краем (R-форма). В отдельных случаях выявляются мукоидные колонии. При выращивании на среде Эшдауна мелиоидозные колонии приобретают темно-красный цвет за счет сорбции из среды нейтрального красного, вокруг колоний наблюдается просветление среды. Окраска по Граму. В мазках при окраске по Граму клетки выглядят в форме палочек розового цвета. Флагелляция. Наличие, тип и количество жгутиков определяют специальным окрашиванием для электронной или световой микроскопии. Для этих целей культуры выращивают на полноценной плотной среде при комнатной температуре в течение 18-20 ч. Смыв и обработка культур должны быть максимально щадящими. При подготовке к световой микроскопии используют окраску по Грею. Приготовление мазка для окраски жгутиков по этому методу производится с некоторыми особенностями. Платиновой петлей прикасаются к поверхности агара, затем петлю вносят в пробирку с 2-3 мл стерильной водопроводной воды и, не взбалтывая, держат ее неподвижно в воде 1-2 мин. Вынув петлю, пробирку оставляют стоять 15 мин. для более равномерного распределения микробов в воде. Каплю полученной суспензии наносят на предметное стекло. На высохший мазок наливают протраву, которая готовится из двух растворов. Первый: 5 мл насыщенного водного раствора калийных квасцов, 2 мл 20% танина и 2 мл насыщенного водного раствора двухлористой ртути. Второй: 0,4 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина. Оба раствора смешивают не менее чем за 24 ч. до употребления. Протравливают 4-10 мин., затем споласкивают препарат водой и окрашивают карболовым фуксином 5-10 мин. с подогреванием. В. pseudomallei обладает полярными жгутиками (лофотрих). Молодые бульонные культуры бывают монотрихами.
5.2. Биологический метод
В качестве биопробных животных используют золотистых хомячков. Кровь, цереброспинальную жидкость, экссудат из серозных полостей вводят в объеме 0,5-1,0 мл 2-5 золотистым хомячкам подкожно. Материал из абсцессов, отделяемого ран, рвотных масс, измельченные кусочки внутренних органов (печень, селезенка, почки, легкие) суспендируют в 2-3 мл 0,85% раствора NaCl и после отстаивания надосадочную жидкость вводят двум животным подкожно по 0,5-1,0 мл. Исследуемую воду вводят по 2,0 мл внутрибрюшинно 5 золотистым хомячкам. При анализе сильно загрязненной воды и почвы (надосадочная жидкость) объем инъекции составляет 1,0 мл, заражение проводят подкожно. Мелиоидоз у золотистых хомячков протекает в острой септицемической форме, заканчивающейся к 4-5 дню летально. При посевах из внутренних органов павших животных (легкие, селезенка, печень) на чашках с МПГА выделяют чистую культуру возбудителя мелиоидоза. За выжившими животными наблюдают не менее 20 сут., после чего их забивают, вскрывают и исследуют бактериологически (посев из паренхиматозных органов и крови на МПГА). Отбор подозрительных колоний производят через 36-72 ч. инкубации при температуре 37 °С. При отсутствии золотистых хомячков возможна постановка биопробы на менее чувствительных к мелиоидозу лабораторных животных — морских свинках или белых мышах. Усиление эффекта достигается обработкой биопробных животных гидрокортизоном или циклофосфаном (250 и 200 мг/кг, соответственно).
5.3. Иммунологические методы исследования
Метод флуоресцирующих антител (МФА). Для обнаружения антигенов возбудителя мелиоидоза используют МФА с иммуноглобулинами диагностическими флуоресцирующими мелиоидозными моноклональными. В рабочем разведении эти иммуноглобулины взаимодействуют только с бактериями мелиоидоза и не окрашивают клетки близкородственного возбудителя сапа. При работе с чистыми культурами типичных штаммов возбудителя мелиоидоза они позволяют выявлять
4 5 6 5 x 10 м.к./мл, в бактериальных смесях — 5 x 10 — 1 x 10 м.к./мл, в
5 6 объектах внешней среды — 5 x 10 — 5 x 10 м.к./мл, в зависимости от характера исследуемого объекта, его обсемененности посторонней микрофлорой. На этапе экспресс-анализа используют МФА с контрастированием неспецифического свечения микрообъектов. При идентификации чистых культур микроорганизмов контрастирование не применяют. Мазки-препараты из проб внешней среды и материала от больных и умерших людей и животных (до и после концентрирования) готовят на тонких обезжиренных предметных стеклах, высушивают на воздухе и фиксируют в 96° этиловом спирте в течение 30 мин. Мазки обрабатывают смесью равных объемов флуорохромированных мелиоидозных антител и альбумина, меченного родамином, содержащей каждый из ингредиентов в концентрации, равной их рабочим разведениям. Специфическим считают изумрудно-зеленое свечение по периферии клеток бактерий (феномен Кунса) с яркостью 4+ или 3+ по общепринятой шкале регистрации результатов МФА.
На этапе экспресс-анализа нативного материала обнаружение единичных (не менее 10) клеток в 25-30 полях зрения, обладающих специфическим свечением, является основанием для выдачи предварительного положительного ответа. Отрицательный результат МФА свидетельствует: 1) об отсутствии возбудителя мелиоидоза в исследуемом материале или 2) о том, что концентрация бактерий
5 в данной пробе ниже улавливаемой с помощью МФА (< n x 10 м.к./мл). В мазках-препаратах из объектов внешней среды и смывах с поверхности питательных сред, на которых производили накопление микроорганизмов, бактерии мелиоидоза, окрашенные специфическими иммуноглобулинами, расположены хаотично, в виде изолированных ярко светящихся палочек, изредка соединенных в короткие цепочки. Вследствие характерного для возбудителя мелиоидоза полиморфизма возможно обнаружение кокко- или нитеподобных форм бактерий. В мазках-отпечатках из органов и тканей животных короткие толстые палочки расположены группами внеклеточно, редко внутри лейкоцитов или клеток паренхиматозных органов. Твердофазный иммуноферментный метод (ТИФМ) позволяет выявлять как бактерии, так и растворимые антигены возбудителя мелиоидоза. По чувствительности ТИФМ в 10-20 раз превосходит МФА, в 30 раз - РНГА. Предварительно перед исследованием материала пробы обязательно обеззараживают 1% формалином. С помощью ТИФМ исследуют все объекты, перечисленные выше, за исключением проб почвы. Анализ проб почвы в ТИФМ затруднен из-за их неспецифической сорбции на пластинах и наличия эндогенной пероксидазы в клетках микроорганизмов - представителей сопутствующей микрофлоры. Повышение чувствительности ТИФМ в 10 и более раз достигается за счет перехода на хемилюминесцентную систему детекции результатов анализа (ХЛИА), а также при использовании авидин-биотиновой системы.
Перспективным является дот-вариант ИФА, используемый как для
4 6 обнаружения возбудителя мелиоидоза (1 x 10 — 1 x 10 м.к./мл), так и выявления специфических антител в сыворотках животных. Применение сэндвич-варианта ТИФМ для обнаружения антигенов. Необходимый набор реагентов для выполнения анализа: — полистироловый планшет разборный для иммуноферментного анализа однократного применения; — иммуноглобулины (ИГ) мелиоидозные для сенсибилизации планшетов; — 0,05 М карбонатно-бикарбонатный буфер, рН 9,5 (КББ); — 1% раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА) в 0,05 М КББ, рН 9,5 для блокирования свободных сайтов неспецифического связывания на пластике; — 0,1 М фосфатно-солевой буферный раствор рН 7,2 (ФБР), на основе которого готовят раствор для отмывания пластин, раствор для приготовления разведений исследуемых проб и раствор рабочего разведения конъюгата, добавляя детергент твин-20 до 0,05% по объему; — детергент твин-20;
— антибактериальный иммунопероксидазный конъюгат (ИПК); — цитратно-фосфатный буферный раствор рН 5,0 (ЦФБР); — хромоген тетраметилбензидин (ТМБ), 10 мг, растворяют в 1 мл диметилсульфоксида (ДМСО); — 3% раствор перекиси водорода, приготовленная ex tempore; — субстратно-индикаторная смесь (ЦФБР + ТМБ + H2O2):ТМБ, растворенный в ДМСО, используют для приготовления раствора 1:100 в ЦФБР, затем добавляют 3% раствор перекиси водорода в соотношении 1:100, приготовленная ex tempore; — 0,2 М раствор серной кислоты (стоп-реагент);
+
- заведомо положительный контрольный образец антигена (К );
—
- отрицательный контрольный образец (К ). Методика проведения исследования с помощью сэндвич-варианта ТИФМ. Объем реагентов на всех этапах постановки реакции составляет 100 мкл. Для сенсибилизации планшет готовят предварительно подобранное оптимальное разведение ИГ мелиоидозных в 0,05 М КББ рН 9,5, определяемое заранее для каждой серии данного ингредиента реакции. Время инкубации иммуноглобулинов с твердой фазой составляет 16-18 ч. в условиях холодильника при 4-8 °С. Несорбированные ИГ удаляют из лунок трехкратным промыванием раствором ФБР + Т. Затем во все лунки вносят 1% раствора БСА в 0,05 М КББ рН 9,5. Пластины инкубируют 30 мин. при 37 °С и 3 раза промывают раствором ФБР + Т. На этом, этап подготовки твердой фазы реакции завершается. Исследуемые пробы титруют 2-кратным шагом в растворе ФБР + Т + БСА. Время инкубации — 1 ч. при 37 °С. Удаляют содержимое лунок сильным встряхиванием и пластину вновь трехкратно промывают раствором ФБР + Т. Вносят иммунопероксидазный конъюгат (ИПК) в рабочем разведении. Время инкубации — 1 ч. при 37 °С, затем 4-5-кратное промывание пластин и внесение во все лунки субстратной смеси ЦФБР + ТМБ + Н2O2. Пластины выдерживают при комнатной температуре в темном месте в течение (25 +/- 5) мин. Появление голубого окрашивания содержимого лунок различной интенсивности свидетельствует о прохождении реакции фермент-субстрат. Реакцию останавливают с помощью стоп-реагента, внося во все лунки планшета по 100 мкл 0,2 М раствора серной кислоты. Окраска хромогена меняется с голубой на желтую. Интенсивность окрашивания в лунках пластины пропорциональна содержанию искомого вещества в лунке. На каждой пластине помимо лунок с исследуемым материалом по две лунки используют для постановки следующих контролей:
+
- К — реакция с заведомо положительным мелиоидозным антигеном; —
- К — реакция с гетерологичным антигеном (подтверждение специфичности реакции, выполняемой с данным набором ингредиентов для ТИФМ);
—
- КК — контроль конъюгата для подтверждения отсутствия его неспецифической сорбции на твердой фазе (в лунки пластины внесен только ИПК и на заключительном этапе — субстратная смесь);
—
- КС — контроль субстратной смеси: в лунки подготовленной пластины вносят индикаторную смесь для подтверждения отсутствия влияния твердой фазы на изменение ее цвета. Результаты учитывают на микропланшетном фотометре для имму-ноферментного анализа при длине волны 450 нм. Анализ полученных данных начинают с оценки контрольных реакций.
450 Положительным результатом являются значения ОП , равные или
450 превышающие значения 2 x ОП контроля конъюгата (КК). ОП в лунках контроля субстратной смеси (КС) не должна превышать 0,2. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Наиболее доступным гемагглютинационным тестом является РНГА с иммуноглобулиновым ЭД. Диагностикум эритроцитарный иммуноглобулиновый сапной и мелиоидозный (на основе поли- или моноклональных антител) является группоспецифическим препаратом.
В РНГА диагностикум эритроцитарный иммуноглобулиновый сапной и мелиоидозный взаимодействует как с мелиоидозными, так и сапными клеточными и растворимыми антигенами, обеспечивая обнаружение не менее
5 1 x 10 м.к./мл.
При поиске мелиоидозных бактерий и их антигенов объектами исследования являются все перечисленные выше образцы проб. Особенности подготовительного этапа заключаются в том, что все пробы переводят в жидкую фазу в соответствии с общепринятыми методиками. Исследуемые образцы обеззараживают нейтральным формалином, добавляя его в пробы до 4% концентрации (0,2 мл на 2 мл пробы) и прогревают при 56 °С в течение 30 мин. При исследовании кусочков органов их тщательно измельчают ножницами и суспендируют в 0,85% растворе NaCl в соотношении 1:5. Суспензию кипятят не менее 30 мин. и при необходимости осветляют фильтрацией через ватный тампон с помощью шприца. При работе с чистыми культурами взвесь бактерий в концентрации
9 1 x 10 м.к./мл кипятят 10 мин. и разводят этим же раствором 1:10. Затем в пробирки с инактивированным материалом добавляют 50% взвесь формалинизированных эритроцитов из расчета 1 капля на 1 мл пробы во избежание неспецифических результатов РНГА. Смесь тщательно встряхивают, выдерживают при температуре 37 °С в течение 15 мин. и центрифугируют при 2000-3000 об./мин. 5 мин. Надосадочную жидкость используют для постановки РНГА (макро- или микровариант). Макровариант РНГА. В 8-10 лунок полистиролового планшета вносят по 0,5 мл разводящей жидкости (0,85% раствор NaCl pH 7,0-7,2 с 1% нормальной кроличьей сыворотки (НКС)). В первую лунку вносят 0,5 мл исследуемой пробы и титруют двукратным шагом, из последней лунки 0,5 мл удаляют. Во все лунки добавляют по 0,05 мл 2,5% взвеси ЭД. Учет результатов проводят визуально. При наличии в исследуемых пробах мелиоидозного микроба эритроциты оседают на дно лунки в виде «зонтика», при отрицательном результате — в виде «пуговки» или узкого колечка с ровным краем. Реакция сопровождается следующими контролями: — 0,5 мл разводящей жидкости + 0,05 мл контрольных эритроцитов; — 0,5 мл разводящей жидкости + 0,05 мл диагностикума; — 0,5 мл АГ + 0,05 мл контрольных эритроцитов. Результаты всех контрольных реакций должны быть отрицательными. Для подтверждения специфичности РНГА одновременно с ней ставят реакцию торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА) в 6-10 лунках с использованием агглютинирующей диагностической мелиоидозной сыворотки. Специфичным считают результат РНГА, если различия в титрах РНГА и РТНГА достигают 16-32 и более раз. В лунки, содержащие последовательные разведения исследуемого материала на разводящей жидкости (как и при постановке РНГА), но в объеме 0,25 мл, добавляется по 0,25 мл мелиоидозной агглютинирующей сыворотки, обеспечивающей связывание не менее 20-40 гемагглютинирующих единиц (ГЕ), что ориентировочно соответствует разведению агглютинирующей сыворотки 1:100-1:200. Планшеты выдерживают 1 ч. при комнатной температуре. Во все лунки добавляют по 0,05 мл 2,5% взвеси антительного диагностикума. РНГА с иммуноглобулиновым ЭД применяют на этапах экспресс- и ускоренного анализа проб и идентификации чистых культур. При этом следует помнить о том, что РНГА с коммерческим ЭД не позволяет дифференцировать два близкородственных вида буркхольдрий. Учет результатов РНГА осуществляют через 1,5-2,0 ч. и 24 ч. Предварительный ответ о наличии искомого антигена может быть дан через 1,5-2,0 ч. от момента постановки реакции.
Реакция коагглютинации (РКоА). В настоящее время наряду с РНГА с иммуноглобулиновым ЭД для внедрения в практику рекомендована объемная реакция типа РНГА — реакция коагглютинации (РКоА). Для РКоА готовят диагностикумы, в которых биологическим носителем мелиоидозных иммуноглобулинов являются клетки стафилококка штамма Cowan 1. РКоА ставят на стекле на этапе идентификации чистых культур. Ее чувствительность
6 9 колеблется в пределах 1 x 10 -1 x 10 м.к./мл в зависимости от особенностей тестируемых штаммов возбудителя мелиоидоза. Достоинством РКоА является простота постановки реакции и быстрота получения ответа (10-15 мин.). Серодиагностика мелиоидоза. Основными методами серодиагностики мелиоидоза являются РНГА и ТИФМ. При поиске специфических антител в сыворотках больных мелиоидозом людей и животных желательно исследовать парные сыворотки. Нарастание титров специфических антител свидетельствует о правильности предварительного диагноза. Реакция непрямой гемагглютинации. При поиске специфических антител в сыворотках больных людей и животных чаще всего используют РНГА с диагностикумом эритроцитарным антигенным. Необходимыми ингредиентами для постановки РНГА являются: — диагностикум эритроцитарный для выявления антител к возбудителям сапа и мелиоидоза антигенный, представляющий собой формалинизированные эритроциты барана, сенсибилизированные мелиоидозным и сапным антигенами; — контрольные эритроциты к антигенному диагностикуму (эритроциты барана, обработанные формалином, но не сенсибилизированные); — взвесь 50% формалинизированных эритроцитов барана, которая применяется для удаления из исследуемой сыворотки гетерологичных антител, способных вызвать неспецифическую гемагглютинацию; — нормальная кроличья сыворотка, инактивированная в течение 30 мин. при 56 °С, для приготовления 1% раствора — стабилизатора реакции. Диагностическим титром считают >= 1:40. Нарастание титра антител в случае исследования парных сывороток расценивают как свидетельство прогрессирования заболевания. Относительно невысокие, но сохраняющиеся в течение времени титры антител трактуют как ретроспективное подтверждение факта инфицирования возбудителем мелиоидоза. Реакции нейтрализации антигена. Специфические антитела в сыворотках больных людей и животных можно выявить с помощью трехкомпонентной реакции нейтрализации антигена (РНАг) с диагностикумом эритроцитарным иммуноглобулиновым сапным и мелиоидозным. В основе этой реакции также лежит феномен склеивания эритроцитарного диагностикума (гемагглютинации) вследствие образования комплекса антиген-антитело. Визуально через 1,5-2,0 ч. после постановки реакции регистрируют образование «зонтика» на дне лунки. Выбор гемагглютинационного теста зависит от цели конкретного этапа исследования и от наличия соответствующего эритроцитарного диагностикума (ЭД). Твердофазный иммуноферментный метод (ТИФМ). Необходимый набор реагентов для выполнения анализа: — полистироловый планшет разборный для иммуноферментного анализа однократного применения; — мелиоидозный антиген для сенсибилизациии планшетов (антиген 8, гликопротеин 200 kDa); — 0,05 М карбонатно-бикарбонатный буфер, рН 9,5 (КББ); — 1% раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА) в 0,05 М КББ, рН 9,5 для блокирования свободных сайтов неспецифического связывания на пластике; — 0,1 М фосфатно-солевой буферный раствор рН 7,2 (ФБР), на основе которого готовят раствор для отмывания пластин, раствор для приготовления разведений исследуемых сывороток и раствор рабочего разведения конъюгата, добавляя детергент твин-20 до 0,05% по объему; — детергент твин-20; — антивидовой иммунопероксидазный конъюгат (ИПК) или препарат на основе протеина А; — цитратно-фосфатный буферный раствор рН 5,0 (ЦФБР); — хромоген тетраметилбензидин (ТМБ), 10 мг, растворяют в 1 мл диметилсульфоксида (ДМСО); — 3% раствор перекиси водорода, приготовленная ex tempore; — субстратно-индикаторная смесь (ЦФБР + ТМБ + Н2О2):ТМБ, растворенный в ДМСО, используют для приготовления раствора 1:100 в ЦФБР, затем добавляют 3% раствор перекиси водорода в соотношении 1:100, приготовленная ex tempore; — 0,2 М раствор серной кислоты (стоп-реагент);
+
- заведомо положительная контрольная сыворотка (К );
—
- отрицательная контрольная сыворотка (К ). Непрямой вариант ТИФМ. Для сенсибилизации планшетов используют непрямой вариант ТИФМ. Объем реагентов на всех этапах постановки реакции составляет 100 мкл. В лунки планшета вносят приготовленный раствор антигена с концентрацией 10 мкг/мл в 0,05 М КББ, рН 9,5. Сенсибилизацию планшета антигеном проводят в холодильнике при 4 °С в течение 18-24 ч. Затем раствор антигена удаляют, планшет подсушивают в течение 1-2 мин. и трехкратно промывают ФБР + Т. Свободные сайты неспецифического связывания на пластике блокируют с помощью 1% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА) в 0,05М КББ, рН 9,5 в течение 30 мин. при 37 °С и вновь отмывают планшет. В лунки твердой фазы вносят подготовленные разведения исследуемой сыворотки (1:400, 1:800 и т.д.) в ФБР + Т. Инкубацию проводят при 37 °С в течение 1 ч. После трехкратного отмывания несвязавшихся компонентов реакции в лунки пластины вносят антивидовой конъюгат в рабочем разведении, планшет помещают в термостат при 37 °С на 45-60 мин. После этого планшет промывают 4-5 раз и в лунки вносят субстратно-индикаторную смесь. Пластины выдерживают при комнатной температуре в темном месте в течение (25 +/- 5) мин. Появление голубого окрашивания содержимого лунок различной интенсивности свидетельствует о прохождении реакции фермент-субстрат. Реакцию останавливают с помощью стоп-реагента, внося во все лунки планшета по 100 мкл 0,2 М раствора серной кислоты. Окраска хромогена меняется с голубой на желтую. Интенсивность окрашивания в лунках пластины пропорциональна содержанию специфических антител в лунке. Результаты учитывают на микропланшетном фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 450 нм.
Титром антител считают то наибольшее разведение пробы, значение ОП
450 которого равно или превышает значения 2 x ОП контроля конъюгата (КК). При этом ОП в лунках контроля субстратной смеси (КС) не должна
450 превышать 0,2.
Необходимые контроли:
- реакция с заведомо положительной сывороткой с известным титром
+ антител (К) ; —
- контроль неспецифической сорбции конъюгата (КК ): в сенсибилизированные лунки (две лунки) вносят только рабочее разведение ИПК и проявляют субстратом;
—
- контроль субстрата (КС ): в сенсибилизированные лунки (две лунки) вносят только рабочий раствор субстрата, содержимое лунки должно оставаться без изменений. Дот-иммуноанализ. В качестве твердой фазы реакции используют нитроцеллюлозные мембраны (НЦМ) с диаметром пор 0,22 или 0,45 мкм.
На фильтр наносят взвесь формалинизированных клеток возбудителя
9 мелиоидоза в концентрации 1 x 10 м.к./мл в 0,1 М трис-HCl буфере (рН 8,0). Фильтр оставляют в чашке Петри в холодильнике при 4 °С на 18-24 ч. Перед использованием НЦМ подсушивают и обрабатывают 3-5% раствором БСА в течение 40-45 мин. при 37 °С. Отмывают на шуттеле двукратно по 3 мин. ФБ — Т или 0,85% раствором NaCl. Исследуемую сыворотку наносят в центр расчерченных квадратов. Необходимые разведения готовят на 0,1 М трис-HCl буфере (рН 8,0) с твином-20. Инкубируют 45-60 мин. при 37 °С. Отмывают по 2 мин. двукратно. После этого НЦМ погружают в антивидовой ИПК на 1 ч. при 37 °С. Заключительное отмывание проводят 4 раза по 2 мин. Для проявления реакции в качестве субстратной смеси используют раствор О-дианизидина: 10 мл 0,1 М трис-HCl буфера, рН 8,0, 1 мл 0,1% О-дианизидина на метиловом спирте, 0,1 мл 0,3% перекиси водорода. Результаты учитывают визуально через 15-20 мин. При положительном результате на полоске НЦМ проявляются коричневые пятна. Аллергодиагностика мелиоидоза. Для выявления аллергической перестройки у больных людей рекомендуются пробы in vitro. При этом используется показатель повреждения нейтрофилов (ППН). Необходимые реактивы и оборудование: — 5% раствор цитрата Na; — раствор периодата; — реактив Шиффа; — сернистая вода; — гематоксилин Эрлиха; — формалин 40%; — спектрофотометр. Реагенты, необходимые для постановки реакции ППН, а также технику окраски мазков для учета результатов реакции готовят по методике В.А.Фрадкина (1985). Свежую кровь стерильной пипеткой переносят в две пробирки по 0,08 мл. Одна пробирка (опытная) содержит 0,02 мл раствора водорастворимого аллергена (маллеина) на 5% цитрате Na, другая пробирка (контрольная) — 0,02 мл 5% цитрата Na. Пробы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 2 ч. Из опытной и контрольной пробирок готовят мазки и фиксируют по методике Шабадаша: пропускают через три порции 96° спирта по 10 мин., ополаскивают в дистиллированной воде и помещают в реактив Шиффа на 20 мин. Затем стекла с мазками промывают в трех сменах сернистой воды по 3 мин. и прополаскивают в дистиллированной воде. Мазки окрашивают в течение 5 мин. гематоксилином, промывают 10% HCl. Затем ополаскивают в чистой водопроводной воде и подсушивают при комнатной температуре. Для учета реакции в опытных и контрольных мазках с помощью микроскопа под иммерсией подсчитывают по 100 нейтрофилов, учитывая поврежденные, разрушенные и амебовидные. Показатель повреждения нейтрофилов подсчитывают по формуле 1:
ППН = (N - N )/100, где: (1) о к
N — число поврежденных клеток в опыте; о
N — число поврежденных клеток в контроле. к
Реакция считается положительной при показателях индексов 0,1 и выше. У здоровых людей этот показатель обычно не превышает 0,04-0,07.
5.4. Молекулярно-генетические методы исследования
В основе лабораторной диагностики мелиоидоза лежит принцип полифазного подхода, при котором к традиционной лабораторной диагностике, направленной на выделение чистой культуры возбудителя, добавлены молекулярно-генетические методы, в первую очередь, реакция амплификации. Методы амплификации нуклеиновых кислот используют для экспресс-диагностики при исследовании биологического материала, взятого от человека с целью выявления у него ДНК В. pseudomallei и ее количественной оценки; для специфической индикации возбудителя мелиоидоза в объектах окружающей среды и пищевых продуктах; в качестве ускоренного предварительного теста при выполнении культурального и биологического методов исследования и для идентификации культур; для определения эпидемиологической значимости изолятов на основании выявления генетических маркеров вирулентности и патогенности, антибиотикоустойчивости; для таксономической характеристики штаммов на основании выявления специфических видовых, родовых и других маркеров; для генотипирования штаммов с целью определения их происхождения, а также для прогнозирования течения инфекционного заболевания и оценки эффективности проводимой терапии. Исследование материала, содержащего (подозрительного на содержание) В. pseudomallei, методами амплификации нуклеиновых кислот (сигнала), связано с необходимостью одновременного обеспечения и соблюдения персоналом правил биологической безопасности и требований к организации и проведению данных работ с целью предотвращения контаминации нуклеиновыми кислотами и (или) ампликонами исследуемых проб помещений и оборудования. Исследования методом ПЦР должны проводиться в специализированных лабораториях квалифицированными специалистами, имеющими опыт работы с особо опасными инфекциями. Для предотвращения возможной контаминации работают только в одноразовых перчатках, используют и меняют при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических пипеток с аэрозольным барьером. Забор проб для молекулярно-генетического исследования. Забор, предварительная обработка, хранение и перевозка материала на исследование проводится в соответствии с МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 ч. после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки — 6% ЭДТА) или одноразовым шприцем в пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8% цитрата Na в соотношении 1:9). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным). Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! После центрифугирования отбирают лейкоцитарное кольцо вместе с плазмой. Хранят плазму крови при температуре от 2 до 8 °С не более 3 сут. при температуре не выше минус 16 °С — в течение 1 месяца, при температуре не выше минус 68 °С — в течение 1 года. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. При замораживании клинического материала его транспортировка должна проводиться также в замороженном состоянии. Забор секционного материала при вскрытии умерших от мелиоидоза, а также подозрительных на данную инфекцию проводит патологоанатом или судмедэксперт в присутствии специалиста по особо опасным инфекциям. Из внутренних органов (сердце, печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг) стерильно вырезают кусочек ткани размерами 2-3 см. Стерильным шприцем с длинной иглой или стерильной пастеровской пипеткой с резиновой грушей забирают 8-10 мл крови из сердца, предварительно обеззаразив участок с помощью раскаленного скальпеля. Следует забирать материал из нескольких участков, подвергшихся изменениям, и из участка рядом расположенной ткани, которая выглядит неизмененной. При наличии распада ткани основное внимание обращают на пограничную зону. Забор секционного материала необходимо производить, как можно быстрее после смерти больного (не позднее 20 ч. при комнатной температуре). Забранный материал помещают в стерильные пластиковые пробирки с плотно закрывающимися (завинчивающимися) пробками, этикетируют. Если материал может быть доставлен в лабораторию в течение 2-4 ч., то его транспортируют в термосе со льдом. Если время доставки материала превышает 4 ч., его замораживают и доставляют в лабораторию в сосудах Дьюара с жидким азотом или в термоконтейнерах с сухим льдом. Цельную кровь замораживанию не подвергают. Обеззараживание проб для исследования методом ПЦР. При обработке исследуемого материала, инфицированного (подозрительного на инфицирование) возбудителем мелиоидоза, к исследуемому образцу добавляют мертиолят натрия до конечной концентрации 1:10000 (0,01%) и прогревают его при 56 °С в течение 30 мин. Затем 100 мкл образца переносят в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл, добавляют лизирующий раствор, приготовленный на основе 6М гуанидинизотиоцианата, в объеме указанном в инструкции по применению к набору реагентов и инкубируют 15 мин. при 65 °С. Обработанные таким образом пробы считаются обеззараженными и всю последующую работу проводят как с незаразным материалом. Выделение ДНК. ДНК из проб материала выделяют с помощью коммерческих наборов для выделения ДНК в строгом соответствии с прилагаемой инструкцией. Работу проводят согласно требованиям противоэпидемического режима, используя одноразовую пластиковую посуду в боксах II-III классов биологической безопасности. При работе с чистыми культурами микроорганизмов В. Pseudomallei и инфицированными пробами воды экстракцию ДНК проводят методом нуклеосорбции на силикагеле в присутствии гуанидинизотиоцианата. Выделение ДНК из объектов окружающей среды (пробы почвы, пищевых продуктов) проводится путем гуанидинизотиоцианат-фенолхлороформной депротеинизации с последующей очисткой ДНК методом нуклеосорбции. Подготовленные пробы из объектов окружающей среды в объеме 100 мкл смешивают с лизирующим буфером, содержащим 300 мкл 6М гуанидинтиоцианата натрия и 300 мкл фенола, забуференного Tris-HCl, pH 8,0, лизис клеток проводят при 60 °С в течение 10 мин. После этого образец центрифугируют на микроцентрифуге при 12000 об./мин. в течение 10 с. для осаждения конденсата. Затем к пробе добавляют 300 мкл хлороформа, перемешивают и центрифугируют на микроцентрифуге при 12000 об./мин. в течение 5 мин., после чего верхнюю водную фазу переносят в чистую микроцентрифужную пробирку и экстрагируют равным объемом хлороформа, этот этап повторяют 2 раза. Центрифугируют в течение 5 мин. при 12000 об./мин. Далее верхнюю водную фазу переносят в чистую микроцентрифужную пробирку и добавляют 20 мкл раствора сорбента, содержащего 10 мМ Трис, 2 мМ ЭДТА, рН 8,0 и 10 мкг сорбента SiO2, который предварительно тщательно перемешивают на вортексе. Пробы инкубируют при температуре 60 °С в течение 10 мин., периодически встряхивая на вортексе для лучшей сорбции ДНК. Затем пробы центрифугируют при 12000 об./мин. на микроцентрифуге в течение 30 с., отбирают супернатант, а к осадку добавляют 100 мкл 4 М раствора гуанидинизотиоцианата натрия. Содержимое перемешивают до гомогенного состояния в течение 10-20 с. на вортексе, центрифугируют на микроцентрифуге в том же режиме и отбирают супернатант. К осадку добавляют 500 мкл раствора для отмывки, содержащего 10 мМ Трис, 50 мМ NaCl и 70% этанола, перемешивают на вортексе и центрифугируют при 12000 об./мин. на микроцентрифуге в течение 30 с. Процедуру отмывки повторяют, после чего осадок высушивают при температуре 60 °С в течение 10 мин. Для растворения ДНК к осадку добавляют 100 мкл ТЕ-буфера, выдерживают при температуре 60 °С в течение 10 мин., периодически встряхивая на вортексе. По окончании процедуры десорбции взвесь центрифугируют при 12000 об./мин. на микроцентрифуге в течение 1-2 мин. и отбирают супернатант для проведения ПЦР. Для выделения ДНК возбудителя мелиоидоза из крови используют метод выделения такой же, как и для экстракции и очистки ДНК из почвы. За исключением того, что перед этапом подсушивания осадок ДНК дополнительно промывают 500 мкл ацетона, перемешивают на вортексе и центрифугируют 12000 об./мин. на микроцентрифуге в течение 30 с., после чего высушивают при температуре 60 °С в течение 10 мин. и растворяют в 100 мкл ТЕ-буфера. При исследовании секционного материала часть биоптата (печень, селезенка, легкое, сердце) массой около 30 мг растирают тефлоновым гомогенизатором в микроцентрифужной пробирке объемом 1,5 мл с 300 мкл 6 М гуанидинизотиоцианата натрия, затем добавляют 300 мкл фенола, забуференного Tris-HCl, pH 8,0. После перемешивания на вортексе, инкубируют в течение 30 мин. при температуре 65 °С. Далее выделение ДНК проводят также, как и с пробами крови. Проведение ПЦР для специфической индикации и идентификации возбудителя мелиоидоза. Выявление ДНК возбудителя мелиоидоза методом полимеразной цепной реакции проводят классическим способом с электрофоретическим учетом результата реакции в агарозном геле или флуоресцентной детекцией в режиме реального времени или по «конечной точке». При использовании ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR) учет и анализ результатов проводится в процессе амплификации, согласно инструкции к приборам. Работу проводят в соответствии с инструкциями к диагностическим тест-системам. Для индикации и идентификации возбудителя мелиоидоза можно использовать праймеры, предназначенные для выявления нуклеотидных последовательностей генов 16S рРНК, 23S рРНК, III типа секреции (TTSI) и флагеллярного гена fliC. Детекцию В. pseudomallei целесообразнее проводить методом ПЦР с двумя ДНК-мишенями с последующим секвенированием ампликонов. Генотипирование штаммов возбудителя мелиоидоза можно проводить с помощью пульс-электрофореза, амплификации с произвольными праймерами, мультилокусного сиквенс-типирования (MLST), метода, основанного на анализе вариабельных ампликонов (VAT) и метода мультилокусного анализа вариабельности тандемных повторов (MLVA).
5.5. Идентификация культур
Возбудитель мелиоидоза В. pseudomallei представляет собой бактерии в виде грамотрицательной палочки размером (0,3-0,6) х (2,0-5,0) мкм, которые подвижны в висячей капле; способны расти в анаэробных условиях в присутствии нитрата; окисляют, но не ферментируют глюкозу; обладают аргининдигидролазной активностью; устойчивы к 50 мкг/мл полимиксина В и 4 мкг/мл гентамицина; агглютинируются диагностической мелиоидозной агглютинирующей сывороткой; в отличие от близкородственной апатогенной В. thailandensis не усваивают в качестве источника углерода и энергии L-арабинозу.
Типичные штаммы возбудителя мелиоидоза вызывают гибель золотистых
2 хомячков после внутрибрюшинного заражения в дозе менее 10 м.к. в течение ближайших 7 сут. с выделением из органов (селезенка, печень, легкие) павших животных «чистой» культуры.
Идентификацию культур, подозрительных на принадлежность к виду В. pseudomallei, проводят в два этапа, последовательно определяющих род и вид исследуемой культуры бактерий.
Реакция агглютинации (РА). Несмотря на общеизвестные недостатки РА имеет наибольшее значение для ориентировочной идентификации культур в момент исследования колоний, выросших на плотных питательных средах. Показано, что абсолютно все живые культуры В. pseudomallei, видовая принадлежность которых доказана по характеристикам фено- и генотипа, агглютинируются диагностическими сыворотками в титрах не менее, чем 1:200. В ориентировочной (на стекле) РА используют мелиоидозную диагностическую агглютинирующую сыворотку в рабочем разведении 1:100. Объемную РА ставят в бактериологических пробирках со взвесью суточной агаровой культуры В. pseudomallei. В объеме 0,5 мл готовят двукратные разведения агглютинирующей мелиоидозной сыворотки с 1:50 до титра, затем в каждую пробирку добавляют
9 по 0,5 мл взвеси исследуемой культуры с концентрацией 1 x 10 м.к./мл. Одновременно ставят контроль антигена (0,5 мл взвеси культуры + 0,5 мл 0,85% раствора NaCl) и контроль сыворотки (0,5 мл сыворотки в разведении 1:50 + 0,5 мл 0,85% раствора NaCl). Пробирки встряхивают и выдерживают 2 ч. при 37 °С, после чего производят предварительный учет результатов. Окончательный учет осуществляют по общепринятой методике через 18-20 ч. экспозиции при комнатной температуре. Реакцию считают положительной при наличии четкой агглютинации в разведении 1:200 и выше. РА не позволяет дифференцировать В. pseudomallei от В. mallei и В. thailandensis. Установление родовой принадлежности. Культуры, подозрительные на принадлежность к роду Burkholderia, засевают на МПГА или триптиказосоевый агар (ТСА). Посевы просматривают и отмечают колонии, подлежащие дальнейшему изучению по основным родовым свойствам (табл. 1). Постановка методик бактериологического исследования традиционна для всех глюкозунеферментирующих грамотрицательных бактерий.
Таблица 1
Родовые признаки буркхольдерий
Свойства Проявление у В. pseudomallei
Окраска по Граму (-) грамотрицательные палочки
Флагелляция (+) подвижны, жгутики — полярные
Содержание Г + Ц в ДНК 68-70 моль %
Каталазная активность (+) выделение пузырьков газа в течение 3-х мин.
Цитохромоксидазная активность (+) посинение колоний через 1-3 мин.
Окисление/ферментация глюкозы (+/-) только окисление, ферментация
исключается
Устойчивость к полимиксину В (+) МПК > 300 мкг/мл
Окраска по Граму. В мазках при окраске по Граму клетки выглядят в форме палочек розового цвета. Флагелляция. В. pseudomallei обладает полярными жгутиками (лофотрих). Молодые бульонные культуры бывают монотрихами. Морфология колоний. Через 24-48 ч. на МПГА вырастают колонии нескольких типов. Колонии большинства видов буркольдерий и псевдомонад — блестящие, выпуклые с гладким ровным краем. Из всех известных представителей этих родов только у P. stutzeri колонии в R-форме, а у B. pseudomallei наблюдают явление морфологической диссоциации колоний. Определение каталазной активности. Для определения каталазы на поверхность микробной культуры, выращенной на скошенном в пробирке МПГА, наносят 1-2 капли 3% раствора перекиси водорода. Для возбудителя мелиоидоза характерно появление пузырьков образующегося кислорода в результате расщепления перекиси водорода. Определение цитохромоксидазной активности. Исследуемую культуру выращивают на плотных питательных средах (МПА, ТСА), не содержащих углеводные добавки, которые могут привести к ложноотрицательным результатам. На изолированную колонию 1-2 сут. культуры наносят последовательно петлей по 1 капле 1% спиртового раствора альфа-нафтола и 1% водного раствора аминодиметиланилина — наличие цитохрома С характеризуется покраснением, а затем и потемнением колонии (пурпурный цвет). Окисление-ферментация глюкозы. Способность и характер усвоения глюкозы оценивают по стандартной методике Хью-Лейфсона на полужидкой среде. В две пробирки с 5,0 мл среды уколом засевают петлю исследуемой суточной агаровой культуры. Затем на среду в первой пробирке наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой 2 см. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 48 ч., после чего учитывают результат. Все виды буркхольдерий, включая и В. pseudomallei глюкозу окисляют, но не ферментируют. Окисление других сахаров (ксилоза, лактоза, мальтоза, фруктоза) изучают на той же среде, но в одной пробирке и без вазелинового масла, ферментация исключается a priori. Установление видовой принадлежности. Набор тестов и их проявления у В. pseudomallei и филогенетически близких видов буркхольдерий и P. aeruginosa представлены в табл. 2.
Таблица 2
Дифференциальные признаки В. pseudomallei
Тесты В. pseudo- В. thailan- B. mallei B. cepacia P aeru- mallei densis ginosa 1 2 3 4 5 6
Окисление: глюкозы + + + + +
фруктозы + + + + +
ксилозы + + — + +
лактозы + + + + —
мальтозы + + + + —
Аргинин- + + + — + дигидролаза
Лизин- — — — + _ декарбоксилаза
Орнитин- — — — +/- — декарбоксилаза
Желатиназа + + + +/- +
Денитрификация + + + — +/-
Гидролиз +/- +/- — — — эскулина
Число жгутиков >1 >1 — >1 1
Рост при 42 °С + + — +/- +
Полимиксин R R R R S
Гентамицин R R S R S
Рост при 2,5% — — — + + NaCl
Ассимиляция — + _ + — L-арабинозы
Наличие — — — +/- + пигмента
Г + Ц моль % 69 68 69 67 67
R-колонии на +/- — — — — агаре
Вирулентность + — + — — для з/х
Примечание: (+) и (-) наличие или отсутствие признака у 90 % и более штаммов данного вида.
Диффундирующий пигмент. Для выявления пигмента используют среды, применяемые для выявления у псевдомонад пиоцианина и флуоресцеина. Возбудитель мелиоидоза истинный диффундирующий в среду пигмент не образует. Декарбоксилирование аминокислот. Декарбоксилирование аминокислот (аргинин, лизин, орнитин) исследуют на питательной среде следующего состава:
пептон - 5,0 г конечный рН 6,0, мясной экстракт - 5,0 г зона перехода глюкоза - 0,5 г окраски 5,2-6,8 пиридоксаль - 0,005 г (кислая - желтая, бромкрезол пурпурный - 0,01 г щелочная - пурпурная)
крезол красный — 0,005 г
дистиллированная вода до 1000 мл
Среду стерилизуют при 120 °С в течение 10 мин. Перед разливом в среду добавляют L-аминокислоты до конечной концентрации 1%. При использовании DL-аминокислот их концентрацию повышают вдвое. Растворы аминокислот предварительно стерилизуют на водяной бане в течение 15 мин. В пробирки с 4,0 мл среды, засевают полную петлю суточной агаровой культуры. В качестве контроля используют ту же среду, но без аминокислоты. Наслаивают по 0,5-1,0 мл стерильного вазелинового масла, включая контрольную среду без аминокислот. Посевы инкубируют при 32 °С. При положительной реакции из аргинина образуется путресцин, из лизина — кадаверин. Среда защелачивается и приобретает пурпурный или фиолетовый цвет. Гидролиз желатина. В пробирке, содержащей 0,5 мл 0,85% NaCl, готовят густую суспензию из исследуемых бактерий. Опускают в нее кусочек засвеченной фотографической пленки так, чтобы она была погружена наполовину, и инкубируют при 37 °С 2 сут. При положительной реакции суспензия приобретает серо-черный цвет, а основа пленки становится прозрачной. Гидролиз эскулина. Для постановки теста используют ТСА с 0,1% эскулина и 0,05% лимоннокислого железа. На чашки со средой бляшками засевают суточную агаровую культуру. Результат учитывают через 24 ч. Положительный тест — появление коричневато-черной окраски среды вокруг колоний. Рост при различных температурах. Для дифференциации буркхольдерий учитывают рост в мясо-пептонном бульоне при 4 и 42 °С через 48-72 ч. Наибольшее значение имеет выращивание при температуре 42 °С, по устойчивости к которой дифференцируют В. pseudomallei от В. mallei. Для выделения культур В. pseudomallei из загрязненного материала селективные среды предпочтительнее инкубировать при 42 °С, а не при 32-37 °С. Рост на средах с высоким содержанием NaCl. Рост на средах с 2,5-6,5% содержанием NaCl характерен для галофильных (морских) псевдомонад. Большинство видов, имеющих медицинское значение, на ТСА с 6,5% NaCl не растет, а В. pseudomallei не выдерживает и концентрации 2,5% NaCl. Ассимиляция L-арабинозы. Принципиальное значение для идентификации возбудителя мелиоидоза имеет тест на ассимиляцию L-арабинозы, которую вирулентные клинические штаммы В. pseudomallei не усваивают в отличие от непатогенных культур близкородственного сапробиотического вида В. thailandensis, а также В. cepacia. Тест на денитрификацию. Состав среды:
мясной экстракт - 3,0 г пептон - 5,0 г KNO3 - 1,0 г агар - 12,0 г
дистиллированная вода — до 1 000 мл Посев осуществляют на скошенный агар штрихом и уколом в столбик агара, инкубируют при 37 °С 48 ч. Выделение пузырьков газа и разрыв столбика агара — показатель денитрификации с образованием азотистых газообразных продуктов. Покраснение среды при добавлении на участки роста поочередно по две капли 0,8% сульфациловой кислоты и 0,5% альфа-нафтола в 5 М уксусной кислоте свидетельствует о переходе нитрата в нитрит без образования газообразных продуктов. Штаммы В. pseudomallei могут давать оба типа положительной реакции на денитрификацию.
6. Дезинфекция при работе с возбудителем мелиоидоза
Возбудитель мелиоидоза относительно устойчив к воздействию факторов (химических, физических, биологических) внешней среды, хорошо выживает и размножается в водопроводной, речной и морской воде. В почве сохраняется более трех месяцев, в фекалиях — месяц и более, в моче и трупах — до трех недель. Кипячение, а тем более автоклавирование объектов при 1,5 атм. (125 °С) приводят через несколько секунд к гибели возбудителя. Прогревание при 56 °С — через 10 мин. По устойчивости к различным химическим соединениям В. pseudomallei мало отличается от других грамотрицательных неспорообразующих микроорганизмов. Он погибает через 30 мин. при воздействии растворов 1-3% перекиси водорода, 10-20% хлорной извести, 1-5% хлорамина, 1-10% формалина, 1% сулемы, 70% этилового спирта, 0,01% нейтрального гипохлорида кальция (НГК) и сульфохлорантина, 0,02-0,05% дезама и хлордезина, а также 0,01% ДП-2, 0,1% амфолана и ниртана (препараты на основе трихлоризоциануровой кислоты), 0,5% метафора и 15% альдофора (препараты на основе формальдегидсодержащих отходов химической промышленности) и т. д. В бактериологической лаборатории добавление мертиолата натрия (1:10000) и последующее прогревание в течение 30 мин. при 56 °С стерилизует сыворотки от больных любыми формами мелиоидоза. Если по воздействию дезинфектантов возбудитель мелиоидоза существенно не отличается от других грамотрицательных микроорганизмов, то уровень устойчивости его к антибиотикам значительно выше и спектр уже, чем у других бактерий. Устойчивость возбудителя мелиоидоза к ряду красителей (нейтральный красный, кристалл фиолетовый, бромтимоловый синий) и антибиотикам (пенициллин, полимиксин, гентамицин) используется при изготовлении селективных и дифференциально-диагностических сред. Перечень средств, рекомендованных для обеззараживания вегетативных форм возбудителей особо опасных инфекций бактериальной природы регламентирован прилож. 2 к СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» (М., 2003), а также индивидуальными для каждого из новых препаратов федеральными инструкциями или методическими указаниями по их использованию для целей дезинфекции. Для обеззараживания объектов (различные поверхности, жесткая мебель, санитарно-техническое оборудование, белье, посуда, изделия медицинского назначения), контаминированных возбудителем мелиоидоза, рекомендованы преимущественно композиции на основе четвертично-аммониевых соединений, дополнительно содержащие полигексаметилен гуанидин, метасиликат натрия, спирт, глиоксаль и другие компоненты, а также хлорсодержащее средство — двуосновная соль гипохлорита кальция (ДСГК). Данные препараты по токсикологической характеристике относятся к 3-4 классу опасности и имеют сроки хранения в пределах 3-5 лет. При времени экспозиции от 60 до 120 мин. рабочие концентрации препаратов в зависимости от вида обрабатываемого объекта и состава средства варьируют от 0,2 до 5,0%. Содержащие глутаровый альдегид средства (Лизоформин — 3000, Новодез-форте) более токсичны, но вызывают гибель возбудителя мелиоидоза при низких концентрациях и коротких экспозициях. Хлорсодержащие растворы средства ДСГК, содержащие 0,15-0,44% активного хлора, эффективны против возбудителя мелиоидоза на обеззараживаемых объектах при 60-120 мин. экспозиции. В случае выделения культуры В. pseudomallei, подтвержденной в дальнейшем в специализированном учреждении, сотрудники клинической лаборатории, имевшие контакт с возбудителем мелиоидоза, для исключения вероятности внутрилабораторного заражения, подлежат медицинскому наблюдению в течение 1 месяца с обязательными серологическими исследованиями и ежедневной термометрией.
7. Экстренная профилактика мелиоидоза
при аварии в лаборатории
В случае регистрации аварии проводят мероприятия в соответствии с действующими нормативными методическими документами по работе с возбудителями I-II групп патогенности.
«ГлавВрач», 2010, N 12
РЕГИОНАЛЬНОЕ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО В БОРЬБЕ С ТАБАКОКУРЕНИЕМ
Многочисленные исследования, проведенные нами, свидетельствуют о широком распространении курения среди жителей Красноярского края [1, 2]: курят более 2/3 мужчин и четвертая часть женщин. Очень тревожной остается ситуация с распространенностью курения среди подростков. Наблюдения показывают, что среди юношей края курят 66,3%, среди девушек — 38,4%. «Группа риска» (курящие ежедневно) составляет 63,5% юношей и 37,6% девушек. Антитабачные мероприятия, проводимые в Красноярском крае на протяжении последних десятилетий, несмотря на большое количество частных успехов, особенно в сфере информирования населения об опасности табакокурения, не привели к снижению распространенности этой пагубной привычки. Ограничивают возможности антитабачной деятельности в регионе отсутствие федеральной программы по борьбе с табаком, неэффективное федеральное законодательство по ограничению курения в РФ, а также отсутствие регионального законодательства, способного сократить распространение табака в крае. Известно, что среди комплекса мер, направленных на борьбу с табакокурением, существенная роль отводится законодательным мерам. Анализ Конституции РФ и действующего законодательства РФ в области охраны здоровья граждан подтверждает, что установление запретов и ограничений курения табака находится в совместном ведении РФ и ее субъектов, а именно: — в соответствии с пунктом «б» части первой статьи 72 Конституции РФ в совместном ведении РФ и ее субъектов находится защита прав и свобод человека и гражданина; — согласно подпункту 2 статьи 5 Основ законодательства РФ об охране здоровья граждан от 22.07.1993 N 5487-1 (далее — Основы) к полномочиям федеральных органов государственной власти в области охраны здоровья граждан относятся регулирование и защита прав и свобод человека и гражданина в области охраны и здоровья. В соответствии с подпунктами 1 и 2 статьи 6 Основ, к полномочиям органов государственной власти субъекта РФ в области охраны здоровья граждан относятся: защита прав и свобод человека и гражданина в области охраны здоровья граждан, принятие законов и иных нормативных правовых актов субъекта РФ в области охраны здоровья граждан, надзор и контроль за их соблюдением и исполнением. В соответствии с пунктами 2 и 5 статьи 76 Конституции РФ, по предметам совместного ведения РФ и ее субъектов издаются федеральные законы и принимаемые в соответствии с ними законы и иные нормативные правовые акты субъектов РФ. При этом законы и иные нормативные правовые акты субъектов РФ не могут противоречить указанным федеральным законам. Таким образом, орган государственной власти субъекта РФ вправе принять нормативный правовой акт. в котором устанавливаются запреты или ограничения курения табака. Такой нормативный правовой акт, должен быть принят в соответствии с Федеральным законом от 10.07.2001 N 87-ФЗ «Об ограничении курения табака» и не может ему противоречить. Установление указанных запретов и ограничений есть расширение и усиление защиты права гражданина на охрану здоровья по сравнению с федеральным законом. Это установление дополнительных гарантий защиты данного права к тому минимуму гарантий, который установлен федеральным законом. Например, курение даже в специально отведенных местах в общественных помещениях, в которых курение запрещено, наносит вред здоровью некурящих граждан, находящихся в таких помещениях и посещающих их. Некурящие граждане, так или иначе, соприкасаются со специально отведенными местами, в т.ч. проходя через них; табачный дым имеет способность распространяться из специально отведенных мест в места, в которых находятся некурящие граждане. Кроме того, существуют общественные места, курение в которых еще более опасно для здоровья человека, чем места, определенные федеральным законом (например, места общественного питания, где табачный дым вдыхается и попадает в организм вместе с пищей). Поэтому расширение перечня мест, запрещенных для курения, по сравнению с федеральным законом, и установление запретов и ограничений курения табака в иных местах, не указанных в федеральном законе, есть не противоречие ему, а улучшение положения как некурящих, так и самих курящих граждан. При этом никакие дополнительные ограничения прав других лиц, противоречащие федеральному закону, такими запретами и ограничениями не устанавливаются. Ни в Конституции РФ, ни в действующем законодательстве РФ не существует «права» курящих граждан отравлять табачным дымом некурящих граждан и наносить тем самым вред своему здоровью и здоровью окружающих. Возможность установления в нормативном правовом акте субъекта РФ указанных запретов и ограничений курения табака косвенно подтверждается действующим законодательством РФ в области защиты прав потребителей. Пункт 5 Правил оказания услуг общественного питания, утвержденных постановлением Правительства РФ от 15.08.1997 N 1036, предоставляет исполнителю услуг общественного питания право самостоятельно устанавливать в местах оказания услуг, т.е. в местах общественного питания, правила поведения для потребителей, не противоречащие законодательству РФ, в т.ч. ограничение курения. Считаем, что если исполнитель услуг (организация, индивидуальный предприниматель) может установить ограничение курения в общественном месте, не указанном в федеральном законе, то субъект РФ, используя свои полномочия в сфере совместного ведения с Российской Федерации, также вправе это сделать. Нормативный правовой акт субъекта РФ, устанавливающий запреты и ограничения курения табака, должен быть принят законодательным (представительным) органом государственной власти субъекта РФ, т.к. именно данный орган осуществляет законодательное регулирование по предметам совместного ведения РФ и ее субъектов в пределах полномочий субъекта РФ (подпункт «б» пункта 1 статьи 5 Федерального закона от 06.10.1999 N 184-ФЗ «Об общих принципах организации законодательных (представительных) и исполнительных органов государственной власти субъектов РФ»). Исходя из того, что установление запретов и ограничений курения табака направлено на защиту конституционного права гражданина на охрану здоровья, представляется возможным в нормативном правовом акте субъекта РФ новым краевым законопроектом установить следующие запреты и ограничения курения табака: 1) установить запрет курения табака (в т.ч. без разрешения курения в специально отведенных местах) в общественных местах, указанных в статье 6 Федерального закона «Об ограничении курения табака», определив при этом такие общественные места; 2) установить запрет или ограничение на курение табака (с разрешением курения в специально отведенных местах) в иных общественных местах, не указанных в статье 6 Федерального закона «Об ограничении курения табака», определив при этом такие общественные места. Нормативный правовой акт субъекта РФ, в котором установлены такие запреты и ограничения курения табака, будет принят в соответствии с Федеральным законом «Об ограничении курения табака» и не будет ему противоречить. Установление указанных запретов и ограничений есть расширение и усиление защиты права гражданина на охрану здоровья по сравнению с федеральным законом. По сути, это установление дополнительных гарантий защиты данного права к тому минимуму гарантий, который установлен федеральным законом. Таким образом, успешно справиться с проблемой распространения табака в регионе можно, только объединив усилия органов власти всех уровней и гражданского общества. Для борьбы с курением необходимы не только профилактическая и просветительская работа, но и законодательные меры, препятствующие распространению потребления табака в крае. Действенным компонентом эффективной антитабачной политики в крае в настоящий момент может стать принятие регионального закона по защите жителей региона от воздействия табачного дыма с перечнем запретов и ограничений, усиливающих права граждан на охрану здоровья. Принятие вышеуказанного нормативного правового акта субъекта РФ, в котором установлены запреты и ограничения курения табака, возможно в соответствии с Федеральным законом «Об ограничении курения табака» и не будет ему противоречить.
ЛИТЕРАТУРА
- Кутумова О.Ю., Горный Б.Э. Результаты и экономическая эффективность популяционной программы по отказу от курения в Красноярском крае // Общественное здоровье и профилактика заболеваний. — 2007. — N 5. — С. 63-64.
- Кутумова О.Ю., Горный Б.Э. Результаты и экономическая эффективность программы «Брось курить и выиграй — 2006» в Красноярском крае // Материалы XIII Международного симпозиума «Сложные системы в экстремальных условиях». — Красноярск, 2006 — С. 54-56.
Канд. мед. наук, главный врач
Красноярского краевого центра
медицинской профилактики
О.Ю.КУТУМОВА
Зам. начальника отдела
контрольно-правовой работы,
государственного заказа и
строительства спортсооружений
Министерства спорта, туризма
и молодежной политики
Красноярского края
К.А.ГЛАВАТСКИХ
Приказ Минздравсоцразвития России от 08.12.2010 N 1091н «О внесении изменений в приложения N 1 и 2 к Приказу Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 27 января 2010 г. N 31н «О мерах по реализации Постановления Правительства Российской Федерации от 31 декабря 2009 г. N 1145 «О финансовом обеспечении в 2010 году за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета мероприятий по развитию службы крови» (Зарегистрировано в Минюсте России 29.12.2010 N 19444)
След.Статья. «Организация защиты информации о пациентах при ее компьютерной обработке в соответствии с требованиями Федерального закона «О персональных данных» от 27.07.2006 N 152-ФЗ. Часть 2″ (А.П.Столбов) («Врач и информационные технологии», 2010, N 6)
-
Prehospital Trauma Life Support
342 ₽
-
Microbiology Books 6
342 ₽
-
Детское питание от рождения до года
684 ₽
-
Orthopedic Books 6
684 ₽
-
Immunology Books 6
342 ₽