Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
9 августа 2006 года
Дата введения:
1 сентября 2006 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МАРГАНЦА, СВИНЦА, МАГНИЯ В ПРОБАХ КРОВИ МЕТОДОМ
АТОМНО-АБСОРБЦИОННОЙ СПЕКТРОМЕТРИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2106-06
- Область применения
Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием металлов в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений», ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа обеспечивает определение марганца в диапазоне концентраций 0,020 — 0,100 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 32,4% при доверительной вероятности 0,95, свинца в диапазоне концентраций 0,050 — 0,500 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 31,3% при доверительной вероятности 0,95, магния в диапазоне концентраций 5,00 — 50,00 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 25,1% при доверительной вероятности 0,95.
Свинец (Pb) Атомная масса 207,2. Свинец - мягкий серый металл, Т - 327,4 град. С, Т - 1744 пл. кип.
град. С, плотность — 11,34 г/куб. см. В разбавленных кислотах практически нерастворим. Растворяется в азотной кислоте, мягкой воде, особенно хорошо в присутствии кислорода воздуха и углекислого газа. При нагревании непосредственно соединяется с кислородом воздуха, галогенами, серой, теллуром. Относится к 1 классу опасности [1].
Марганец (Mn) Атомная масса 54,94. Марганец - серебристо-белый металл, Т - 1245 град. С, Т - 2080 пл. кип.
град. С, плотность — 7,44 г/куб. см. Медленно реагирует с холодной водой. Взаимодействует с кислотами. Относится ко 2 классу опасности [1].
Магний (Mg) Атомная масса 24,32. Магний — легкий серебристо-белый металл, на воздухе покрывается
пленкой окиси, Т - 651 град. С, Т - 1107 град. С, плотность - 1,737 пл. кип.
г/куб. см, давление паров — 2,5 мм рт. ст. (651 град. С). Нижний предел взрывоопасной концентрации магниевой пыли в воздухе — 10 г/куб. м, Т — 520 град. С. При 70 град. С вступает в реакцию с водой, образует воспл.
Mg(OH)2 и H2. Химически активен.
Хлорид магния - бесцветные кристаллы, Т - 708 град. С, Т - 1412 пл. кип.
град. С, плотность — 2,316 г/куб. см, растворимость в воде 54,6 / 100 г (20 град. С).
Оксид магния - белый порошок, Т - 2640-2800 град. С, Т - 3600 пл. кип.
град. С, плотность — 3,6-3,9 г/куб. см. Легкая магнезия растворяется в кислотах, с водой образует Mg(OH)2. Тяжелая магнезия кислотостойка, в воде практически нерастворима [1].
Магний и его соединения относятся к 3 классу опасности.
2. Сущность метода
Методика основана на измерении содержания металлов в биологическом материале (крови) после соответствующей подготовки проб биоматериала. Определение марганца, свинца и магния методом атомно-абсорбционной спектрометрии основано на измерении величины поглощения света соответствующей длины волны исследуемого элемента в высокотемпературном пламени. Для измерения используется поглощение с длиной волны, соответствующей максимуму поглощения определяемого металла при прохождении через содержащий пары атомов металлов слой воздуха: марганца — 248,3 нм, свинца — 283,3 нм, магния — 285,2 нм. Длительность выполнения анализа составляет 9 ч с учетом прогрева лампы, юстировки аппаратуры, приготовления аттестованных смесей, построения градуировочных графиков, подготовки проб к измерению и выполнения измерений.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы
При проведении подготовки проб крови и измерении концентраций металлов в анализируемом растворе применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы или другие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы с характеристиками не хуже представленных в п. 3.
3.1. Средства измерений
Атомно-абсорбционный спектрофотометр С-115-М, 2.851.034-04ТО, Perkin Elmer 3110, либо спектрофотометры другого типа с характеристиками не хуже представленных
Весы аналитические ВЛР-200 ГОСТ 24104-01 Меры массы ГОСТ 7328-01 Колбы мерные емкостью 100, 200, 250, 500, ГОСТ 1770-74 1000 куб. см Пипетки емкостью 1, 5, 10 куб. см ГОСТ 29227-91 Государственные стандартные образцы: марганец ГСО 7266-96 свинец ГСО 7252-96 магний ГСО 7767-2000.
3.2. Вспомогательные устройства
Редуктор ацетиленовый ДАП-1-65 ТУ 2605-463-76 Бидистиллятор стеклянный БС ТУ 25-11.1592-81 Сушильный шкаф ШСС-80 ОСТ 16.0.801.397-87 Холодильник для хранения проб КШД-280/40 УХЛ4,2 ГОСТ 16317-87
Прибор для получения особо чистой воды
«Водолей», ЖНЛК 2.015.000.000 РЭ
Муфельная печь ПМ-1,0-7
Компрессор для получения сжатого воздуха марки «GAST» производства USA, с характеристиками давления 100 psi, 7 bar или другой компрессор с характеристиками не хуже представленного Электроплитка с регулируемым диапазоном ГОСТ 14919-83 температуры типа ЭПТ 2-2,0/220
Пробирки с пришлифованными пробками П 4-5-14/23 ГОСТ 1770-74 Воронки диаметром 2 и 5 см ГОСТ 1770-74 Тигли фарфоровые ГОСТ 9147-80.
3.3. Материалы
Баллон для ацетилена ГОСТ 949-73 Фильтры обеззоленные "белая лента" ТУ 6-09-1678-95 Таблетки "Део-Хлор" ТУ 9392-001-26433370-02 Моющее средство ТУ 2381-034-04643752-04.
3.4. Реактивы
Кислота азотная концентрированная, осч ГОСТ 4461-77 Ацетилен ГОСТ 5457-75 Аммоний серно-кислый, хч ГОСТ 3769-78 Перекись водорода ГОСТ 177-88
Гепарин, Б-1-ЛС N 95/127/59.
3.5. Растворы
Азотная кислота (HNO3), 1%-я
Очищенная бидистиллированная вода, (бидистиллят, очищенный на приборе «Водолей»)
Перекись водорода, 6%-я.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-91 и правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79. 4.2. При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях» (утверждены МЗ СССР 20.12.82) и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением» (утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87). 4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76 и 12.1.005-88. 4.4. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в «Руководстве по правилам эксплуатации спектрофотометра».
5. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускается химик-аналитик, имеющий соответствующую квалификацию и опыт работы на атомно-абсорбционном спектрофотометре, освоивший метод анализа. Операции по подготовке проб крови к анализу на атомно-абсорбционном спектрометре может выполнять лаборант или техник, имеющий опыт работы в химической лаборатории. К обслуживанию атомно-абсорбционного спектрометра допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера КИП и А, прошедшие инструктаж по технике безопасности на рабочем месте и ознакомленные с правилами обслуживания спектрометра.
6. Условия измерений
6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия: — температура воздуха 15-25 град. С;
— атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.; — влажность воздуха не более 80% при температуре 25 град. С. 6.2. Выполнение измерений на атомно-абсорбционных спектрофотометрах проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка обеззараженной и химически чистой посуды, подготовка атомно-абсорбционного спектрофотометра, приготовление очищенной бидистиллированной воды, приготовление стандартных растворов, построение градуировочного графика.
7.1. Подготовка посуды
Подготовка обеззараженной посуды предполагает предварительное обеззараживание посуды, в которую производится отбор биологических сред, с применением таблеток «Део-Хлор» согласно МУК N 11-3/355-99 от 27.09.02. Подготовка химически чистой посуды производится с применением 6%-й перекиси водорода, моющего средства и многократного ополаскивания с использованием очищенной бидистиллированной воды.
7.2. Подготовка прибора к анализу
Атомно-абсорбционный спектрофотометр обеспечивают ацетиленом, сжатым воздухом, спектральными лампами для определения марганца, свинца и магния, образцами стандартных растворов определяемых металлов. Включают необходимую для анализа спектральную лампу, прогревают не менее 20 мин. и после соответствующей настройки прибора выводят на рабочий режим согласно инструкции. Для настройки прибора в качестве нулевого используют 1%-й раствор HNO3.
7.3. Приготовление аттестованных смесей для установки градуировочной характеристики
Для приготовления заданных концентраций металлов аттестованных смесей используют 1%-й раствор азотной кислоты, приготовленный на очищенной бидистиллированной воде. 7.3.1. Приготовление 1%-го раствора азотной кислоты: 8 куб. см концентрированной азотной кислоты смешивают с 512 куб. см очищенной бидистиллированной воды. 7.3.2. Приготовление аттестованной смеси с содержанием анализируемых металлов 100 мкг/куб. см. Смесь готовят из ГСО с содержанием ионов металлов 1 мг/куб. см. В мерную колбу вместимостью 50 куб. см вносят 5 куб. см ГСО и доводят объем в колбе до метки 1%-м раствором HNO3. Раствор устойчив при хранении в течение 1 месяца. 7.3.3. Приготовление рабочей аттестованной смеси определяемых металлов (марганца, магния или свинца) с концентрацией 5 мкг/куб. см. Смесь готовят из растворов с концентрацией 100 мкг/куб. см. В мерную колбу емкостью 100 куб. см вносят 5 куб. см раствора анализируемого металла с концентрацией 100 мкг/куб. см и доводят объем в колбе до метки 1%-м раствором HNO3. Раствор устойчив в течение 3 дней. 7.3.4. Рабочие аттестованные смеси анализируемых металлов с концентрацией 5 мкг/куб. см используют для получения градуировочных растворов: объем рабочей аттестованной смеси согласно табл. 1, 2, 3 вносят в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки 1%-м раствором HNO3.
Таблица 1
СТАНДАРТНЫЕ СМЕСИ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ СВИНЦА
Номер смеси для градуировки 1 2 3 4
Объем рабочей аттестованной смеси 0,2 0,5 1,0 2,0 (5 мкг/куб. см), куб. см
Содержание свинца, мкг/куб. см 0,010 0,025 0,050 0,100
Таблица 2
СТАНДАРТНЫЕ СМЕСИ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ МАРГАНЦА
Номер смеси для градуировки 1 2 3 4
Объем рабочей аттестованной смеси 0,08 0,16 0,20 0,40 (5 мкг/куб. см), куб. см
Содержание марганца, мкг/куб. см 0,004 0,008 0,010 0,020
Таблица 3
СТАНДАРТНЫЕ СМЕСИ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ МАГНИЯ
Номер смеси для градуировки 1 2 3 4
Объем рабочей аттестованной смеси 10,0 20,0 40,0 50,0 (5 мкг/куб. см), куб. см
Содержание магния, мкг/куб. см 0,50 1,00 2,00 2,50
7.4. Построение градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки на аттестованных смесях растворов металлов. Она выражает зависимость величины абсорбции от концентрации металла (мкг/куб. см) и строится по 4 сериям растворов аттестованных смесей. Рабочую серию, состоящую из 4 растворов стандартных смесей, готовят непосредственно перед использованием путем разведения из рабочего раствора аттестованной смеси анализируемого металла. Устанавливают начало отсчета, вводя в пламя нулевой раствор. Для построения градуировочного графика на соответствующий элемент измеряют абсорбцию растворов аттестованной смеси в порядке возрастания концентраций определяемых компонентов. Измерения повторяют дважды. По результатам измерений строят график зависимости средней величины атомного поглощения определяемого металла от его массовой концентрации в растворе аттестованной смеси. Градуировочный диапазон для определения марганца и свинца в пробах крови (табл. 1, 2) указан для измерения разбавленных в 5 раз проб крови (п. 8). Градуировочная характеристика для определения магния в крови приведена для проб, разбавленных в 10 раз после общей пробоподготовки для указанных металлов (аликвоту раствора зольного остатка, растворенного в 5 куб. см 1%-го раствора HNO3, разводят еще в 10 раз) (табл. 3).
7.5. Отбор проб
Отбор проб крови, в зависимости от поставленной задачи, производят из пальца, вены, пупочной вены в химически чистые, обеззараженные пробирки с пришлифованными пробками объемом 1-5 куб. см. В пробы добавляют по одной капле антикоагулянта (гепарин). Пробы можно хранить в морозильной камере 1-5 дней.
8. Подготовка проб к анализу
Измерение концентрации металлов в крови производят после подготовки пробы к анализу. К отобранным пробам крови объемом 1 куб. см добавляют 1 куб. см 1%-го раствора HNO3 и помещают в тигель, высушивают в течение 1,5 ч при температуре 110 град. С в сушильном шкафу, затем в течение 2,5 ч при температуре 250 град. С. После чего к пробе добавляют на кончике шпателя сульфат аммония и при температуре 430-450 град. С пробу озоляют в течение 1,5 ч в муфельной печи. После остывания в эксикаторе к пробе добавляют 0,3-0,5 куб. см концентрированной азотной кислоты и выпаривают до «влажных солей». К охлажденному зольному остатку приливают 5 куб. см 1%-го раствора HNO3 и оставляют на 30-40 мин., отфильтровывают и переносят в пробирку с пришлифованной пробкой. В полученном растворе на приборе определяют содержание марганца и свинца. Для определения магния аликвоту полученного раствора разводят в 10 раз 1%-й азотной кислотой и измеряют его содержание на приборе. Параллельно для каждой серии анализов ставят 2 холостые пробы, для которых повторяется вся процедура подготовки пробы, т.е. начиная с момента озоления в муфельную печь ставят чистые тигли из той же серии посуды, которая используется для анализа, и выполняют все этапы озоления и добавления реактивов, что и в анализируемых пробах, с целью выявления фонового загрязнения пробы реактивами и посудой. Измерение холостых проб проводят вместе с реальными пробами. Среднее значение концентрации холостой пробы учитывают в формуле расчета анализа каждой пробы (п. 10).
9. Выполнение измерений
Полученные после подготовки к анализу растворы проб крови и растворы холостых проб измеряют на атомно-абсорбционном спектрофотометре, подготовленном для определения исследуемого металла (марганца, свинца или магния). 9.1. Соответствующую определяемому металлу спектральную лампу устанавливают в прибор и прогревают 15-20 мин. Устанавливают монохроматор на нужную длину волны, выбирают ширину спектральной щели, ставят на распыление очищенную бидистиллированную воду, подбирают необходимое соотношение газов (ацетилен-воздух) для поддержания горения и поджигают пламя. Капилляр, подающий раствор в пламя, опускают в 1%-й раствор HNO3 и определяют нулевую линию. 9.2. Распыляют в пламя градуировочные аттестованные смеси для установки градуировочной характеристики анализируемого металла, затем вводят пробы и регистрируют значения концентраций исследуемых проб. Точность настройки прибора проверяют введением аттестованной смеси заданной концентрации через каждые пять проб. В случае необходимости осуществляют перекалибровку. При высоком содержании определяемого компонента аликвоту пробы разбавляют 1%-м раствором HNO3. Коэффициент разбавления учитывают при расчете результата анализа. Уровень изменений концентраций магния при разбавлении учтен в диапазоне измерения МВИ.
10. Вычисление результатов измерений
Расчет содержания металлов в крови проводят по формуле:
(С - С') х V Х = ------------, V'
где:
С — концентрация, определяемая по градуировочному графику, мкг/куб. см; С’ — значение концентрации холостой пробы, мкг/куб. см; V — общий объем анализируемой минерализованной пробы, куб. см; V’ — объем пробы крови, взятой для анализа, куб. см; Х — содержание исследуемого металла в крови, мкг/куб. см.
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений Х , Х , расхождение между которыми не должно
max min
превышать предела повторяемости r (табл. 5).
n
Результат количественного анализа в документах, предусматривающих его использование, представляется в виде:
_ (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см, Р = 0,95,
где:
_
Х — средний результат анализа, мкг/куб. см:
Х + Х _ max min Х = -----------; 2
ДЕЛЬТА — характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95:
_ дельта х Х ДЕЛЬТА = ----------, 100
где дельта — относительное значение характеристики погрешности, %.
11. Внутренний контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК) результатов количественного химического анализа (повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 «ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа». Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 4 и 5.
Таблица 4
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ, ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
Наименование Показатель повто- Показатель воспро- Показатель точ- определяемого ряемости (относи- изводимости (отно- ности (границы компонента и тельное среднеква- сительное средне- относительной диапазон измерений дратическое откло- квадратическое от- погрешности при
(мкг/куб. см) нение повторяемос- клонение воспроиз- вероятности
ти), сигма , % водимости), Р = 0,95), r сигма , % +/- дельта, % R Магний, от 5,00 8,15 13,20 25,1
до 50,00 вкл.
Свинец, от 0,050 8,14 14,66 31,3 до 0,500 вкл.
Марганец, от 0,020 10,26 17,31 32,4 до 0,100 вкл.
Таблица 5
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95
Наименование определяемого Предел повторяемос- Предел внутрилабораторной
компонента и диапазон ти (относительное воспроизводимости (относи- измерений, мкг/куб. см значение допускае- тельное значение допускае-
мого расхождения мого расхождения между между двумя резуль- двумя результатами измере- татами параллельных ний, полученными в одной определений), r , % лаборатории, но в разных n условиях), R , % _ Xl Магний, от 5,00 до 50,00 22,56 36,57
вкл.
Свинец, от 0,050 до 0,500 22,56 40,72 вкл.
Марганец, от 0,020 до 28,52 47,76 до 0,100
11.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочного графика проводят через 5 проб в анализируемой серии измерений. Определяют содержание металла в градуировочном растворе, который соответствует середине градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций не превышает 5%.
11.2. Контроль повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух определений, выполненных одним оператором при анализе одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать предела повторяемости r (табл. 5).
n
Повторяемость результатов параллельных определений признают удовлетворительной, если:
r Х + Х n max min Х - Х <= --- х -----------, max min 100 2
где:
Х - максимальный результат из 2-х параллельных определений; max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных определений. min
Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
11.3. Контроль воспроизводимости
Для проведения контроля воспроизводимости пробу делят на две равные части и каждую из них анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условиями проведения анализа, используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Анализы выполняют в разное время или два разных аналитика. Воспроизводимость контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
R _ _ _ Х + Х _ _ Xl 1 2 |Х - Х | <= --- х -------, 1 2 100 2
где:
_
Х - результат анализа рабочей пробы, средний из двух параллельных 1
измерений, мкг/куб. дм;
_
Х - результат анализа этой же пробы, средний из двух параллельных 2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости.
_ Xl
Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
11.4. Контроль точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания определяемого компонента в пробе с
_ _ известной добавкой (Х'), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка должна составлять не менее 40% от содержания компонента в пробе) с нормативом точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
_ _ |Х' - Х - С| <= К,
где:
/дельта _ 2 дельта _ 2 К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х') ; \/ 100 100
_
Х' - содержание определяемого компонента в пробе с известной добавкой, среднее из двух параллельных определений;
_
Х - содержание определяемого компонента в рабочей пробе без добавки, среднее из двух параллельных определений;
С - величина введенной добавки, мкг/куб. см; дельта - показатель точности определяемого компонента, % (табл. 4). При превышении норматива контроля точности эксперимент повторяют, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, их устраняют и процедуру контроля повторяют. Периодичность ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
Литература
- Вредные вещества в промышленности: Справочник для химиков, инженеров и врачей/Под ред. Н.В.Лазарева и И.Д.Гадаскиной. Л.: "Химия", 1977. Т. III. С. 350, 444, 507.
Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Г.Н.Суетина, Л.В.Плахова, Е.В.Стенно).
