<Письмо> Роспотребнадзора от 07.08.2007 N 0100/7885-07-32 «Об апробации методики»

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА

ПИСЬМО

7 августа 2007 г.

N 0100/7885-07-32

ОБ АПРОБАЦИИ МЕТОДИКИ

В целях усиления контроля за безопасностью зубных паст направляем для апробации проект методики Агентства пищевых продуктов и лекарств США (FDA) по определению в составе зубных паст диэтиленгликоля. Замечания и предложения просим направить в адрес Лабораторного совета Роспотребнадзора и Роспотребнадзор до 01.10.2007.

Заместитель руководителя
Л.П.ГУЛЬЧЕНКО

Приложение
к письму Роспотребнадзора
от 07.08.2007 г. N 0100/7885-07-32

СКРИНИНГОВАЯ МЕТОДИКА
МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО (ГХ-МС) ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ (ДЭГ) И ЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ (ЭГ) В ЗУБНОЙ ПАСТЕ

Версия 2.0

Метод определения ДЭГ и ЭГ должен рассматриваться как уровень 1 — обязательное использование. Пользователь должен подтвердить эффективность метода в своей лаборатории для каждого типа исследованных образцов и обращать особое внимание на рекомендованные элементы контроля качества. Все результаты должны быть задокументированы.

ЦЕЛЬ:
Методика разработана Центром судебной химии с целью исследования зубных паст на присутствие ДЭГ (и родственного вещества сходной токсичности — ЭГ) на уровне 1 мг/г (0,1% вес) и выше.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ:
Показано, что методика обеспечивает определение ДЭГ и ЭГ на уровне 0,5 мг/г в зубных пастах различных производителей.

ОТВЕТСТВЕННОСТЬ:
В протоколах необходимо отмечать любые отклонения от нижеописанной процедуры выполнения анализа.

ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ:
Техника безопасности — при выполнении методики необходимо соблюдать обычные меры безопасной работы в химической лаборатории (хим. реактивы, сжатые газы, аппаратура).

ОБОРУДОВАНИЕ И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ: 1. ГХ-МС система AGILENT 5973 с капиллярной колонкой длиной 30 м с неподвижной фазой Stabilwax (сшитый карбовакс) или аналогичная система. 2. Лабораторная центрифуга 5000 g с пробирками вместимостью 15 мл. 3. Полипропиленовые центрифужные пробирки вместимостью 15 мл с навинчивающимися крышками.

РЕАКТИВЫ И СТАНДАРТЫ:
1. Экстрагент: вода с добавкой ацетонитрила; 2. Внутренний стандарт 1,3-пропандиол. Готовится рабочий раствор с концентрацией 5,0 мг/мл в 50%-ном водном ацетонитриле. Перед анализом добавляют 0,050 мл этого раствора в 0,500 мл каждой пробы (экстракта) во флаконах (виалках) автосамплера; 3. ДЭГ. Готовят рабочий раствор с концентрацией 10,0 мг/мл в 50%-ном водном ацетонитриле; 4. ЭГ. Готовят рабочий раствор с концентрацией 10,0 мг/мл в 50%-ном водном ацетонитриле; 5. Смешанный стандартный раствор. Смешивают в равных объемах стандарты, приготовленные по п.п. 3 и 4.

ЭЛЕМЕНТЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА:
Метод холостой пробы. Проводят анализ 10 мл экстрагента, в который введена добавка внутреннего стандарта, с целью подтверждения отсутствия каких-либо загрязнений от реактивов и лабораторной посуды. Проверка системы. Перед началом каждой серии анализов проводят 2 инъекции стандарта с высокой концентрацией (см. ниже). Стандарт с низкой концентрацией. Раствор с содержанием 0,10 мг/мл ДЭГ и ЭГ должен быть проанализирован перед началом и в конце каждой серии анализов, чтобы показать чувствительность оборудования. Стандарт с высокой концентрацией. Раствор с содержанием 0,50 мг/мл ДЭГ и ЭГ должен быть проанализирован перед началом и в конце каждой серии анализов, чтобы обеспечить основу полуколичественной оценки и регистрации возможного дрейфа чувствительности определения в процессе анализа серии образцов. Контрольный образец с добавками ДЭГ и ЭГ. Он представляет собой образец зубной пасты, который будет анализироваться и в который введены добавки ДЭГ и ЭГ на уровне 1,0 мг/г (0,1% вес.). Анализ образца должен показать, что методика селективна.

ПРОЦЕДУРА.
A. Подготовка пробы.
Взять навеску около 1,0 грамма зубной пасты в полипропиленовой центрифужной пробирке вместимостью 15 мл, добавить 5 мл воды. Хорошо перемешать. Рекомендуется использовать вихревой миксер (например, Genie 2 Fisher Scientific). Возможно образование пены. Затем добавить для подавления пенообразования 5 мл ацетонитрила двумя порциями с тщательным перемешиванием после каждой добавки. Отцентрифугировать в течение 10 минут при G = 5000 или выше. Перенести 0,50 мл верхнего слоя в склянку автосамплера, добавить 0,050 мл раствора внутреннего стандарта (т.е. 1,3-пропандиола, 5,0 мг/мл).

Анализ.
B. Условия проведения измерений.
Для улучшения формы пиков газовый хроматограф работает в режиме «с делением потока» (20:1).

ГХ-условия

     Колонка                        Рестек Стабилвакс длиной 30 м,                                    внутренним диам. 0,25 мм с                                    толщиной пленки неподвижной                                    фазы 0,25 мкм и предколонкой                                    длиной 5 м                                    (или эквивалентная)     Температура испарителя         250 град. С     Температура интерфейса         250 град. С     Ввод пробы                     С делением потока 20:1     Объем пробы                    1 мкл     Скорость газа-носителя (гелия) 35 см/сек. (режим постоянного                                    потока)     Температура термостата колонок Программирование со скоростью                                    10 град./мин. от                                    100 град. С (выдержка 1 мин.)                                    до 250 град. С (выдержка 4                                    мин.)     Время анализа                  20 мин.

Для промывки шприца между вводами пробы необходимо использовать в промывочной склянке 50%-ный водный ацетонитрил, который лучше удаляет остаток пробы, что позволит минимизировать ошибки при дозировании. Примечание. В случае плохого разделения анализируемых компонентов режим температурной программы может быть изменен с корректировкой их времен удерживания.

МС-условия (режим полного сканирования, SCAN)

    Настройка (Tune)                       Стандартный спектральный                                           Tune    Диапазон сканирования                  29-400 а.е.м. (около 4                                           сканов/сек)    Порог                                  100    Задержка на время выхода растворителя  4 мин.    Температура источника                  250 град. С    Температура квадруполя                 150 град. С

МС-условия (режим сканирования селективных ионов, SIM) Поскольку использование этого режима маловероятно, то приводимые ниже сведения носят информационный характер. Имеются участки потенциального перекрывания низкомолекулярных ионов. Ионы более высокой массы лучше использовать несмотря на более низкую чувствительность. Молекулярные ионы в спектрах 1,2-пропандиола, 1,3-пропандиола, ДЭГ и глицерина отсутствуют.

      Группа      Время начала                 Ионы                                  съемки ионов                                                       данной группы                                                       <> (мин.)                                                                                                                                            1.       2.      3.       4.                                                                         1,2-пропандиол       4,0         31       43      45       61                                      (11)     (15)    (100)    (5)                                                                         Этиленгликоль        6,6         31       33      43       62                                     (100)     (35)     (8)     (4)                                                                         1,3-пропандиол       7,5         31       43      67       58                                     (100)     (22)    (73)     (68)                                                                        Диэтиленгликоль      9,0         31       46      75       76                                      (11)    (100)    (24)     (12)                                                                        Глицерин            12,0         31       43      60       61                                      (40)     (78)    (13)    (100)    

<> Время начала съемки каждой группы ионов должно настраиваться по реальным временам удерживания анализируемых компонентов

С. Идентификация пиков.

Ориентировочные времена удерживания анализируемых компонентов:

  1,2-пропандиол (сопутствующий компонент)          -  6,4 мин.;  Этиленгликоль                                     -  6,6 мин.;  1,3-пропандиол (внутренний стандарт)              -  8,4 мин.;  Диэтиленгликоль                                   - 10,4 мин.;  Глицерин (обычно входит в рецептуру зубных  паст)                                             - 13,7 мин.;

При съемке в режиме полного сканирования критерием идентификации является расхождение между временами удерживания пиков анализируемых компонентов и стандартов не хуже 0,05 мин. а также совпадение масс-спектров с учетом возможного перекрывания пиков. В режиме SIM критерием идентификации является расхождение между временами удерживания пиков анализируемых компонентов и стандартов не хуже 0,05 мин. а также совпадение соотношений интегрированных интенсивностей селективных ионов анализируемых компонентов и стандартов с расхождением не хуже 10 единиц.

D. Приготовление смешанного стандарта и контрольного образца с добавками ДЭГ и ЭГ. Для приготовления смешанного стандарта взять равные порции двух рабочих стандартных растворов, чтобы в итоге получить раствор с концентрациями 5,0 мг/мл каждого компонента. Приготовление контрольного образца с добавками ДЭГ и ЭГ. Взять в центрифужной пробирке объемом 15 мл навеску 1,0 г предварительно проанализированной зубной пасты, в которой отсутствуют целевые компоненты, добавить 200 мкл смешанного стандарта и провести с ним всю процедуру анализа. Результат анализа этого образца должен фигурировать в отчете с результатами анализа зубной пасты, в которой найденные величины концентраций анализируемых компонентов ниже пороговых (1,0 мг/г). Возможен вариант, когда контрольный образец с добавками ДЭГ и ЭГ представляет собой образец зубной пасты, который будет анализироваться и в который введены добавки ДЭГ и ЭГ на уровне 1,0 мг/г (0,1% вес.).

Стандарт с высокой концентрацией.
Раствор с содержанием 0,50 мг/мл ДЭГ и ЭГ необходимо получить разбавлением смешанного стандарта 50%-ным водным ацетонитрилом. Взять в склянке 500 мкл этого раствора и добавить к нему 50 мкл раствора внутреннего стандарта. Стандарт с низкой концентрацией.
Раствор с содержанием 0,10 мг/мл ДЭГ и ЭГ необходимо получить разбавлением смешанного стандарта 50%-ным водным ацетонитрилом. Взять в склянке 500 мкл этого раствора и добавить к нему 50 мкл раствора внутреннего стандарта.

E. Составление протокола. В результате того, что анализируемые вещества обнаружены в представительном контрольном образце с добавкой на уровне 1,0 мг/г и никаких аналитических сигналов до внесения в него добавок не было получено, можно сделать вывод, что исследуемый образец не содержит этиленгликоля и диэтиленгликоля на уровне, превышающем 0,1% от веса (т.е. 1 мг/г) Очевидно, что если один или оба из определяемых компонентов выявлены (на основании критериев идентификации, изложенных ранее) и их содержание выше или равно 1 мг/г, тогда результаты должны быть признаны положительными.

F. Полуколичественная оценка анализируемых компонентов. Выберите ион, используемый для оценки суммы анализируемых компонентов (например: 75 для диэтиленгликоля и 62 для этиленгликоля). Используя стандарт с высокой концентрацией (0,5 мг/мл), который был исследован в начале процедуры анализа серии образцов, и тот же стандарт, который был исследован в конце процедуры анализа серии образцов, вычислить площадь пика селективного иона. Расчет выполнять по следующим формулам:

Сэкстр = [Sобр/Sсредн] x 0,50 мг/мл

Сэкстр — Концентрация в экстракте пробы (мг/мл) Sобр — Площадь пика анализируемого компонента в исследуемой пробе Sсредн — Средняя площадь пика стандарта с высокой концентрацией

Спроб = Cэкстр X 10,0 мл x [1/М]

Спроб — Концентрация в пробе (мг/г)
М — масса пробы (г)

Cпроб% = Cпроб x 1/10

Спроб% — Концентрация в пробе (% от веса) Спроб — Концентрация в пробе (мг/г)

Если площади пика внутреннего стандарта различаются более чем на 20% между тестируемой пробой и стандартом, тогда скорректируйте площадь пика каждого анализируемого компонента путем деления на интегрированную площадь от внутреннего стандарта по иону 58 а.е.м. Необходимо использовать эти соотношения вместо интегрированных площадей. Анализ следует повторить, если различия слишком велики, т.к. это может указывать на загрязнение микрошприца или другие технические проблемы. Наконец, если сигнал от иона пробы более чем на порядок превышает сигнал от стандарта с высокой концентрацией, пробу необходимо дополнительно разбавить. Главное эмпирическое правило — чем ближе аналитический сигнал от неизвестной концентрации к сигналу стандартного раствора, тем ближе к истинному будет результат анализа.