Введен в действие с 1 апреля 2002 года (п. 3 данного документа) Текст документа
УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
27 января 2002 года
Дата введения —
1 апреля 2002 года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРОБ
С ИМИТАТОРАМИ ПАТОГЕННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 4.2.1103-02
- Разработаны Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России, Волгоградским научно-исследовательским противочумным институтом Минздрава России, Омской медицинской академией и Омским научно-исследовательским институтом природно-очаговых инфекций Минздрава России, Научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии РАМН.
- Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации — Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 27 января 2002 г.
- Введены в действие с 1 апреля 2002 г.
- Введены взамен Методических рекомендаций «Приготовление проб с имитатором биологических поражающих агентов (БПА)», утвержденных Минздравом РСФСР 27.11.90.
- Общие положения и область применения
1.1. Методические указания устанавливают требования к приготовлению проб с применением имитаторов патогенных биологических агентов. 1.2. Методические указания предназначены для учреждений санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации и других учреждений, проводящих в Системе наблюдения и лабораторного контроля индикацию патогенных биологических агентов и лабораторный контроль продовольствия на зараженность возбудителями опасных инфекционных заболеваний и токсинами с применением экспрессных и ускоренных методов исследования. 1.3. Методические указания разработаны с целью установления единого подхода к приготовлению проб с учетом требований по специфической индикации патогенных биологических агентов. Унификация методов приготовления проб наряду с едиными требованиями к проведению тренировочных учений по их индикации способствует разработке единого подхода к оценке полученных результатов.
2. Нормативные ссылки
2.1. Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.00 N 554. 2.2. Положение о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.00 N 554. 2.3. СП 1.2.011-94 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности». Утверждены Госкомсанэпиднадзором России 04.05.94. 2.4. СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». Утверждены Госкомсанэпиднадзором России 28.08.95. 2.5. СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности и гельминтами». Утверждены Минздравом России 03.02.99. 2.6. Методическое пособие для врачей-эпидемиологов и микробиологов. Бактериологическая разведка и индикация бактерийных (биологических) средств. Утверждено Минздравом СССР 16.04.70. 2.7. Дополнение к методическому пособию «Документация, используемая при проведении специфической индикации биологических поражающих агентов». Утверждено Минздравом СССР 26.08.81. 2.8. Инструкция по лабораторному контролю продовольствия на зараженность возбудителями опасных инфекционных заболеваний и токсинами. Утверждена Минздравом СССР, 1983. 2.9. Методические указания по подготовке и применению имитаторов биологических агентов с целью проверки готовности учреждений санэпидслужбы к работе по специфической индикации и лабораторному контролю. Утверждены Минздравом СССР 02.04.86. 2.10. Руководство по индикации и идентификации бактериальных (биологических) средств. Минобороны СССР, 1989. 2.11. Отраслевой стандарт 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. Утвержден Минздравом РФ 29.02.00 N 82. 2.12. Письмо Минздрава России от 24.02.00 N 1100/474-0-113.
3. Термины и определения <*>
<*> В скобках в конце определения указан номер нормативной ссылки, в которой имеется определение.
3.1. Патогенные биологические агенты (ПБА) — патогенные для человека микроорганизмы (бактерии, вирусы, хламидии, риккетсии, простейшие, грибы, микоплазмы), генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал (включая кровь, другие биологические жидкости и экскреты организма), подозрительные на содержание перечисленных агентов (2.5.). 3.2. Специфическая индикация — комплекс специальных мероприятий, проводимых для подтверждения факта применения бактериальных (биологических) средств, выявления и определения вида ПБА в исследуемых пробах (2.10.). 3.3. Экспрессный метод исследования — непосредственное (без накопления) исследование нативного материала, проб (2.6.). 3.4. Ускоренный метод исследования — исследование мазков, взвесей после предварительного биологического накопления на питательных средах, культуре клеток, биопробных животных, эмбрионах (2.6.). 3.5. Медицинские иммунобиологические препараты (МИБП) — лекарственные средства, предназначенные для иммунологической профилактики, иммунологической диагностики и иммунологической терапии (2.11.). 3.6. Вакцины — препараты, получаемые из живых аттенуированных штаммов или убитых культур микроорганизмов или их антигенов, предназначенные для активной иммунизации (2.11.). 3.7. Диагностические иммунобиологические препараты — препараты, предназначенные для диагностики инфекционных заболеваний (2.11.). 3.8. Коммерческие иммунобиологические препараты — МИБП, реализация которых в соответствии с требованиями письма Минздрава России (2.12.) проводится при наличии документов: — свидетельства о регистрации препарата; — сертификата (паспорта) фирмы-изготовителя на данную серию; — сертификата производства (прежнее название — сертификат качества) иммунобиологического препарата, выданного ГИСК им. Л.А.Тарасевича. 3.9. Имитаторы ПБА:
— вакцинные штаммы некоторых возбудителей инфекционных заболеваний I-II группы патогенности; — диагностикумы, содержащие корпускулярные и(или) растворимые антигены микроорганизмов; — штаммы, которые обладают всеми признаками микроорганизмов II группы патогенности, но не имеют патогенных свойств, в связи с чем отнесены к III или IV группе (например — V.cholerae О1 нетоксигенный); — безопасные в работе токсины.
3.10. Проба с имитаторами ПБА (далее — проба) — образец материала для исследования, в который с учетом требований настоящего и других действующих документов добавлены имитаторы ПБА из числа перечисленных в п. 3.9., в целях проведения внешне- и внутрилабораторного контроля готовности учреждений (лабораторий) к проведению специфической индикации этих агентов и контроля продовольствия на зараженность возбудителями опасных инфекционных заболеваний и токсинами.
4. Требования по конструированию проб
4.1. Пробы могут содержать один и более различных агентов, в т.ч. и не относящихся к имитаторам ПБА, в следующих сочетаниях: — один имитатор ПБА;
— два и более имитаторов ПБА (миксты);
— один или более ПБА из группы имитаторов и один или более ПБА IV группы патогенности (условно-патогенных микроорганизмов); — один или более ПБА IV группы патогенности (без имитаторов). Применение проб без ПБА (стерильных) нецелесообразно. 4.2. При осуществлении контроля за готовностью лабораторий к проведению специфической индикации ПБА или лабораторному контролю продовольствия на зараженность возбудителями опасных инфекционных заболеваний и токсинами в качестве имитаторов ПБА должны использоваться коммерческие вакцины, токсины и другие препараты, для индикации которых имеются коммерческие диагностические препараты. Для научно-исследовательских целей (отработка новых методов индикации ПБА и других), учебных и иных специальных задач могут использоваться имитаторы ПБА, не обязательно отвечающие требованиям, изложенным в п. 3.8. Перечень некоторых препаратов, которые могут быть использованы в качестве имитаторов ПБА, представлен в Прилож. 3, куда включено 16 препаратов. По мере увеличения выпуска коммерческих МИБП, в т.ч. диагностических препаратов для проведения иммуноферментного анализа, ДНК-диагностики и других методов исследования, перечень имитаторов ПБА может быть расширен. 4.3. Условно-патогенные микроорганизмы в связи с отсутствием соответствующих коммерческих диагностических препаратов не подлежат идентификации в сроки, необходимые для проведения экспрессного и ускоренного анализа. Они являются «фоном» для имитаторов ПБА, имеющим большое значение, поскольку в реальности практически все пробы из объектов окружающей среды и многие пробы биологического материала, поступающие на исследование, содержат те или иные микроорганизмы (сапрофитные, условно-патогенные и другие). В пробы, которые в нормальных условиях не должны содержать условно-патогенные микроорганизмы или их антигены (кровь и некоторые другие биологические субстанции, консервированные пищевые продукты), эти микроорганизмы могут не добавляться. 4.4. В качестве «фона» можно использовать такие микроорганизмы, как Е.coli, St.aureus, St.epidermidis, В.cereus, Y.enterocolitica, Ps.aeruginosa и другие. Выбранные штаммы этих микроорганизмов должны отвечать следующим требованиям: — не проявлять антагонистического (например, колициногенного) действия по отношению к жизнеспособным микроорганизмам — имитаторам ПБА; — формировать на простых питательных средах, не содержащих ингибиторы роста, зрелые колонии в течение 18-24 часов. Такие колонии служат в определенной степени ориентиром для обнаружения под микроскопом на поверхности пластинки агара мельчайших колоний микроорганизмов, обладающих замедленным ростом (возбудителя чумы, бруцелл и других); — не иметь или иметь слабую и замедленную подвижность на простых питательных средах, не содержащих ингибиторы подвижного (ползучего) роста. Не рекомендуется использовать в качестве «фона» культуру Y.pseudotuberculosis в пробах, содержащих в качестве имитатора вакцинный штамм Y.pestis, в связи с трудностями их дифференциации экспрессными методами. 4.5. В качестве фона может рассматриваться и V.cholerae не О1 и не О139, т.к. коммерческие препараты для обнаружения возбудителя в МФА и РНГА не выпускаются. Однако данные микроорганизмы для отдельных задач можно считать имитатором ПБА, поскольку классический метод исследования с использованием сред накопления без ингибиторов роста (без теллурита калия) позволяет лабораториям, не имеющим возможности проводить экспрессное исследование, выдать тем не менее окончательный ответ о выделении культуры этого микроорганизма в сроки, необходимые для обнаружения других имитаторов ПБА.
4.6. Допускается использование в качестве «фона» смывов с каких-либо объектов окружающей среды, проверенных на содержание в них микроорганизмов. Смывы получают с нескольких участков поверхности, каждый раз ополаскивая тампон в физиологическом растворе до получения значительной мутности. На 5 мл пробы добавляют 2 капли такой взвеси. Т.к. объекты окружающей среды подвергаются многим внешним влияниям, смывы с них, несмотря на проверку, не гарантируют стабильности результатов. Поэтому более предпочтительным является дозированное внесение отобранных условно-патогенных микроорганизмов из взвеси, приготовленной по
9 стандартному образцу мутности 10 единиц (10 для кишечной палочки)
8
или 5 единиц (5 х 10 ). Фактическое количество микробных клеток в такой взвеси для мелких микроорганизмов может быть более высоким,
9
а для крупных — меньшим, чем 10 . Примерное содержание различных микроорганизмов во взвеси представлено в таблице.
ПРИМЕРНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ, СООТВЕТСТВУЮЩЕЕ СТАНДАРТУ МУТНОСТИ 5 И 10 ЕДИНИЦ
N Наименование Соотношение Число микробных клеток п/п микроорганизма размера с по стандарту мутности кишечной палочкой 5 единиц 10 единиц 8 9 1 E.coli Х 5,0 x 10 10 8 9 2 St.aureus 1,0 5,0 x 10 10 8 9 3 Y.pestis 1,0 5,0 x 10 10 8 9 4 Вас.anthracis - споры 1,0 5,0 x 10 10 7 8 5 Вас.anthracis 10,0 5,0 x 10 10 (вегетативная форма) 7 8 6 Вас.cereus 10,0 5,0 x 10 10 (вегетативная форма) 9 9 7 V.cholerae 0,5 10 2,0 x 10 8 9 8 Br.abortus 0,6 8,0 x 10 1,6 x 10 9 9 9 Fr.tularensis 0,2 2,5 x 10 5,0 x 10 8 9 10 R.prowazekii 0,8 6,5 x 10 1,3 x 10 9 9 11 C.burneti 0,15 3,3 x 10 6,6 x 10 8 9 12 B.mallei 1,0 5,0 x 10 10 8 9 13 B.pseudomallei 1,0 5,0 x 10 10 6 6 14 C.immitis 200 2,5 x 10 5,0 x 10 6 7 15 H.capsulatum 100 5,0 x 10 10
4.7. Живые вакцинные штаммы можно подготавливать для внесения в пробы в двух вариантах: — с предварительным подращиванием на плотных питательных средах, что рекомендуется для чумной вакцины, сибиреязвенной вакцины, которую в вегетативной форме целесообразно вносить в биологические объекты. Подращивание проводят при 37 +/- 0,5 град. С в течение 1 суток (для штамма EV чумного микроба — 1 сутки при 28 +/- 0,5 град. С и 1 сутки при 37 +/- 0,5 град. С, что способствует обнаружению микроба за счет образования фракции F1, выявляемой при помощи МФА и РНГА). Более длительное выращивание биологических агентов нежелательно, т.к. оно приводит к увеличению числа отмерших микробных клеток, и в суспензии, приготовленной по стандартному образцу мутности, будут присутствовать как живые, так и нежизнеспособные клетки; — без подращивания, непосредственно после 3-6-часовой регидратации содержимого ампулы. В таком виде хорошо обнаруживаются методами экспрессного анализа вакцинные штаммы туляремийного, бруцеллезного микроба, споры сибиреязвенного микроба, которые целесообразно вносить в небиологические объекты окружающей среды. Этот способ может быть использован и в отношении чумной вакцины, но концентрация микробных клеток должна быть в 5-10 раз выше по сравнению с подрощенным штаммом, т.к. не все клетки обнаруживаются при экспрессном исследовании. 4.8. Концентрация микробных клеток в ампулах с живыми вакцинами может колебаться в зависимости от серии препарата. Определить ее с помощью стандартного образца мутности не всегда представляется возможным из-за цветовых различий жидкости в разведенной вакцине и стандарте. В этом случае определение концентрации клеток для их дозированного внесения в пробы возможно двумя способами: — содержимое ампулы регидратируют до первоначального объема дистиллированной водой, выдерживают несколько часов, готовят ряд промежуточных разведений и проводят непосредственный подсчет микробных клеток одного из разведений в камере Горяева. Концентрацию клеток вычисляют математически с учетом разведения; — содержимое ампулы разводят, как указано выше, и концентрацию клеток рассчитывают математически, исходя из того, что одна прививочная доза вакцины должна содержать определенное количество микробных клеток, обеспечивающих необходимый иммунный ответ. Число прививочных доз указано на ампуле, что позволяет к определенному объему разведенной вакцины (0,1 мл) добавить расчетное количество физраствора для получения необходимой концентрации микробных клеток. Расчеты для некоторых вакцин представлены ниже.
Наименование вакцины Количество Количество Получаемая м.к. в физраствора на концентрация прививочной одну прививочную м.к. в 1 мл дозе дозу (мл) 9 9 Чумная - накожная 3,0 x 10 0,3 10 8 9 Чумная - подкожная 3,0 x 10 0,03 10 10 9 Бруцеллезная 1,33 x 10 1,33 10 8 8 Сибиреязвенная 4,0 x 10 0,4 10 8 8 Туляремийная 2,0 x 10 0,2 10
Пример: в ампуле содержится 7 доз бруцеллезной вакцины в 1 мл.
9 Для получения суспензии 1 млрд. (10 ) м.к./мл необходимо после регидратации вакцины в 1 мл дистиллированной воды отобрать из ампулы 0,1 мл суспензии и добавить физраствор в количестве 1,33 х 7 ~= 9,3 мл.
4.9. Инактивированная холерная корпускулярная вакцина Эль-Тор
10 11 выпускается с содержанием 8 x 10 и 1,6 х 10 м.к./мл. Для
9
получения суспензии 10 м.к./мл содержимое ампулы регидратируют соответственно в 1,0 или в 2,0 мл дистиллированной воды и к 0,1 мл суспензии добавляют 7,9 мл физраствора. 4.10. Сибиреязвенная вакцина из штамма СТИ как после регидратации, так и после подращивания содержит конгломераты споровых или переплетенные цепочки вегетативных клеток. В связи с этим при внесении небольших количеств имитатора в пробу может оказаться, что при микроскопии мазка во многих полях зрения светящиеся клетки не будут обнаружены, а в каком-нибудь одном поле встретится конгломерат из многих клеток. Предупредить такое явление могло бы тщательное разбивание хлопьев на единичные клетки. Однако без специальной обработки (например, ультразвуковой или добавления поверхностно-активных веществ) сделать это затруднительно. Крупные хлопья частично можно разбить тщательным пипетированием через узкий кончик пастеровской пипетки или шприцом с тонкой иглой, но мелкие комочки остаются. В таких случаях избежать ложных отрицательных результатов микроскопического исследования можно за счет предварительного просмотра мазков с объективами х20, х40, позволяющими увеличить размер полей зрения. 4.11. Выбор материала для внесения ПБА и самих агентов не должны противоречить условиям «легенды». Нерационально, например, готовить токсиносодержащую пробу на мембранном фильтре или в «соскоб с карбункула» вносить холерный вибрион. Некоторые из возможных сочетаний наименований проб по легенде с фактическим материалом представлены в таблице. Используемый материал перед внесением биологических агентов должен быть или проверен на содержание микроорганизмов (почва, трава, листья, кровь, сыворотка крови, кал) или быть стерильным (физраствор, тампоны, мембранные фильтры, почва, кал, зерно, сено и др.).
НЕКОТОРЫЕ МАТЕРИАЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОБ
Объекты Наименование пробы по Используемый материал легенде проба объем, вес Окру- Смыв с поверхности физраствор 5; 10 мл жающая среда тампон мембранный фильтр Фураж зерно 2-5 г Подстилочный материал сено, солома 2-5 г Растения трава, листья, хвоя 3-5 г Воздух физраствор 5; 10 мл мембранный фильтр Вода вода 500 мл мембранный фильтр Осколок боеприпаса физраствор 5 мл тампон Почва почва, песок 10 г Биологи- Пунктат бубона физраствор 1 мл ческие Смыв (соскоб) физраствор 1 мл карбункула Смыв с судна физраствор 5; 10 мл (с рвотными массами и пр.) тампон Смыв с носоглотки физраствор 5; 10 мл тампон Кровь кровь, сыворотка крови 2-5 мл Раневое отделяемое физраствор 1 мл тампон Кал кал в физрастворе 1 г; 5 мл тампон
4.12. При внесении в сухие пробы биологических агентов в малом объеме жидкости происходит быстрое ее высыхание, что приводит к отмиранию микроорганизмов. Зерно в месте попадания жидкости после ее высыхания склеивается в плотный комок, требующий тщательного растирания. При необходимости сохранить биологические агенты в жидкой фазе достаточно длительное время целесообразно добавлять физиологический раствор или вносить ПБА из менее концентрированных исходных суспензий. 4.13. Рекомендуется добавлять жидкие компоненты в пробы в следующей очередности: — физиологический раствор в сухие пробы; — диагностикумы, токсины и инактивированные вакцинные штаммы; — условно-патогенные микроорганизмы;
— живые вакцинные штаммы неспорообразующих микроорганизмов; — живые вакцинные штаммы спорообразующих микроорганизмов. Живые микроорганизмы одного вида можно вносить одной пипеткой (одним наконечником), начиная с меньших концентраций.
4.14. Имитаторы различных бактериальных агентов удобно вносить
5 9 в пробы из исходных концентраций от 10 до 10 м.к./мл, а
4 5 условно-патогенные микроорганизмы — из концентраций 10 — 10 м.к./мл. В самой пробе объемом 5 или 10 мл происходит уменьшение концентрации клеток (разбавление суспензии) соответственно в 5 и 10 раз, а при усреднении пробы до 20 мл происходит дополнительное разбавление суспензии соответственно в 4 и в 2 раза. Все это следует учитывать для расчета количества микробных клеток не только при подготовке, но и при дальнейшем исследовании проб. Так, например, если исходная концентрация кишечной палочки составляет 5
10 м.к./мл (100 тыс.) и в пробу вносится 50 мкл такой суспензии
3
(5,0 x 10 ) на 5 мл, то в 1 мл пробы теоретически будет
3 2 содержаться 10 м.к./мл, а в посевной дозе (0,1 мл) — 10 или 100 клеток. Исходную суспензию можно вносить в пробу каплями, исходя из предположения, что одна капля на конце тонкой пипетки Пастера равна 25 мкл. Этот метод является более грубым, т.к. размер капли в зависимости от густоты суспензии может меняться. Применение современных механических и электронных пипеток и пипеточных дозаторов позволяет проводить дозирование быстрее и точнее, чем капельное. Объемы исходной суспензии, которые необходимо добавить в пробы для получения требуемой концентрации микробных клеток, указаны в Прилож. 1, которое дано в двух вариантах (1.1. и 1.2.). 4.15. В качестве имитатора ботулотоксина используют стандартный препарат токсического комплекса ботулинического токсина типа С (Прилож. 3, N 16). Случаи пищевого отравления токсином типа С не отмечены, однако работа с препаратом требует соблюдения правил личной гигиены. Целесообразно сначала приготовить промежуточное разведение, для чего к содержимому ампулы (0,1 мл — 2000 dlm) добавляют 4,9 мл физраствора, получая концентрацию 400 dlm/мл. Пробу готовят из расчета добавления 50 мкл (20 dlm) разведенного токсина на 1 мл. Таким образом, в пробу, конечный объем которой составит 20 мл, необходимо добавление 1 мл разведенного токсина (400 dlm). В этой концентрации наглядную гибель белой мыши на 2-3 день (не позже 4 дня) вызывает инокуляция 0,5 мл пробы (10 dlm).
4.16. В качестве имитатора вируса оспы используют коммерческую живую вакцину против оспы (осповакцину). Работа с препаратом должна проводиться при строгом соблюдении правил противоэпидемического режима, особенно непривитыми лицами. Вакцина
6
содержит около 10 оспообразующих единиц (ООЕ) вируса в одной прививочной дозе. В ампулу вносят по 100 мкл дистиллированной воды или физраствора на 1 дозу, а затем вакцину дополнительно разводят в 10 и 100 раз, получая 3 различных концентрации вакцины: цельную
7 -1 (10 град.) с содержанием вируса 10 ООЕ/мл, 1:10 (10 ) с
6 -2 содержанием вируса 10 ООЕ/мл и 1:100 (10 ) с содержанием вируса 5
10 ООЕ/мл. В пробу вносят по 10 мкл вакцины из того или иного разведения на 1 мл пробы с учетом конечного объема пробы (см. п. 4.14.). При этом обычно вирус из разведения 10 град. вызывает заражение большого числа клеток VERO, НЕР-2, RK-13 и других в
-1
первые сутки; из разведения 10 — гнездное заражение клеток в
-2 течение 30-40 часов, а из разведения 10 — заражение отдельных клеток позднее 40 часов. Указанный эффект должен быть предварительно проверен, т.к. он зависит от серии вакцины, условий ее хранения, чувствительности клеток.
4.17. Приготовление проб с имитаторами ПБА проводят с учетом санитарных правил (п. 2.5.).
5. Приготовление проб с имитаторами
возбудителей сапа, мелиоидоза, глубоких микозов
5.1. Имитатор возбудителя сапа (Burkholderia mallei) представляет собой смешанную взвесь бактерий В.mallei 10230, Р-1 и 712, выращенных при 37 град. С в течение 1-2 суток на МПА с 5% глицерина; имитатор возбудителя мелиоидоза (Burkholderia pseudomallei) — взвесь трех штаммов В.pseudomallei С 141, 101 и 111 (из различных эндемичных регионов мира), выращенных при 37 +/- 0,5 град. С в течение 1 суток на МПА с 5% глицерина. Взвеси обеззаражены формалином в конечной концентрации 1%, что определяет возможность проведения только экспрессного анализа. 5.2. Ввиду антигенного родства обоих микроорганизмов их обнаружение и идентификацию проводят с помощью как групповых, так и видоспецифических иммунодиагностических препаратов. Диагностикум эритроцитарный иммуноглобулиновый сапной взаимодействует с растворимыми и клеточными антигенами возбудителей и сапа, и мелиоидоза. При использовании в МФА группоспецифических люминесцирующих иммуноглобулинов, окрашивающих клетки и В.pseudomallei, и В.mallei, дифференциация их по морфологии клеток практически невозможна. Для видовой дифференциации предназначены видоспецифические препараты.
5.3. Оба имитатора расфасованы в ампулы по 1 мл с содержанием
9
1,0 x 10 микробных клеток по оптическому стандарту (ОСО) мутности
5 10 ед. Чувствительность МФА составляет 1,0 х 10 м.к., а РНГА —
5
5,0 x 10 м.к. Дозы имитаторов, вносимые в образцы проб окружающей среды, зависят от характера исследуемых объектов, от их сорбционных свойств. В пробы воздуха, воды, смывов с гладких поверхностей в расчете на 20 мл пробы добавляют 100-200 мкл (1,0
8 8
x 10 — 2,0 x 10 м.к.) имитатора, в пробу почвы — 100 мкл. 5.4. Для приготовления имитатора возбудителя кокцидиоидомикоза используется взвесь мицелиальной фазы С.immitis 36s (штамм Сильвейра), а имитатора возбудителей гистоплазмоза — типичный штамм Н.capsulatum 6650. Возбудители выращивают 28 суток при 28 град. С на агаре Сабуро с 1,5% дрожжевого экстракта и обезвреживают добавлением формалина до конечной концентрации 0,5%. Это определяет возможность проведения только экспрессного исследования. 5.5. Ввиду наличия общих антигенных связей между возбудителями особо опасных глубоких микозов используются как группо-, так и видоспецифические диагностические препараты. Препараты на основе антител к Н.capsulatum могут выявлять имитатор как этого гриба (причем и мицелиальную фазу, и дрожжеподобные формы), так и С.immitis. Кокцидиоидозные люминесцирующие антитела и эритроцитарные иммуноглобулиновые диагностикумы предназначены для видоспецифической идентификации С.immitis. Особенность МФА состоит не только в степени люминесценции взвеси гриба, но и в выявлении специфически окрашенных характерных для данного вида морфологических элементов (артроконидий с «усиками»). В РНГА выявляется комплекс растворимых антигенов гриба, преимущественно полисахаридной природы. 5.6. Концентрация микробных клеток в ампуле, рассчитанная по ОСО 10 ед., отличается от фактического количества грибных клеток при подсчете в камере Горяева (коэффициент пересчета, как показано в таблице п. 4.6., составляет для С.immitis 1:200, для H.capsulatum — 1:100). Концентрация клеток и чувствительность МФА и РНГА при исследовании чистых культур представлены ниже.
Вид возбудителя Содержание в ампуле Чувствительность метода
(м.к./мл) (м.к./мл)
ОСО 10 ед. фактическое ОСО 10 ед. фактическое
9 6 5 3 С.immitis 1 x 10 5 x 10 2 x 10 - 1 x 10 - 6 4 2 x 10 1 x 10 9 7 5 3 H.capsulatum 1 x 10 - 1 x 10 - 6 x 10 - 6 x 10 - 9 7 6 4 5 x 10 5 x 10 6 x 10 6 x 10
5.7. Дозы имитаторов, вносимые в образцы проб окружающей среды, зависят от характера исследуемых объектов, от их сорбционных свойств. Рекомендуемые дозы для проб с конечным объемом 20 мл представлены в таблице.
Вид Воздух, вода, смывы с Почва возбудителя гладких поверхностей
объем содержание объем содержание (в мкл) микробных клеток (в мкл) микробных клеток по ОСО 10 факти- по ОСО 10 факти- ед. ческое ед. ческое 8 6 9 7 С.immitis 40 2 x 10 2 x 10 200 1 x 10 1 x 10 7 5 9 7 Н.capsulatum 40 5 x 10 5 x 10 200 3 x 10 3 x 10
6. Приготовление проб с риккетсиями и коксиеллами
6.1. Для приготовления проб используются коммерческие препараты, представленные в Прилож. 3 (N 7, 12-15). Растворимые антигены в препаратах, предназначенных для постановки реакции связывания комплемента, хорошо выявляются с помощью реакции пассивной гемагглютинации, а корпускулярные антигены — в МФА. При этом возможно проведение только экспрессной диагностики. В целях ускоренной диагностики и проверки режима работы с микроорганизмами используется вакцина Е сыпнотифозная комбинированная живая сухая. Работа с ней требует строгого соблюдения противоэпидемического режима и сопряжена с необходимостью проведения 3-4-кратного пассажа штамма на куриных эмбрионах. Интенсивность роста риккетсий контролируют микроскопией мазков-отпечатков стенок желточного мешка с помощью МФА. 6.2. Оптимальной вносимой в пробу дозой диагностикума Провачека или Сибирика, выпускаемых для целей исследования материала в РСК, является доза с концентрацией антигена, дающей положительный результат в РПГА не менее чем в трех последовательных разведениях. Такая концентрация обеспечивается при использовании 1 ампулы диагностикума для приготовления одной имитированной пробы объемом 20 мл. Недостаточное количество антигена в пробе приводит к получению ложноотрицательного результата РПГА, а его избыточная концентрация — к перерасходу сыворотки для торможения РПГА (РТПГА). 6.3. Диагностикумы разводят согласно указанию на ампуле и выдерживают 3 ч при комнатной температуре для полной регидратации. Корпускулярный антиген после разведения тщательно диспендируют шприцом с тонкой иглой, или пипеткой с тонко оттянутым концом, как это было уже указано в п. 4.10., титруют и приготовляют мазки на предметном стекле (антигенные пятна). Мазки подсушивают, фиксируют 30 мин. в ацетоне или в 96-градусном этаноле и окрашивают люминесцирующей сывороткой. Оптимальным считается наличие 5-10 корпускул в поле зрения. Выбранную концентрацию увеличивают в несколько раз с учетом последующего усреднения пробы. Для корпускулярного Ку-риккетсиозного диагностикума, разведенного в объеме 1 мл, ориентировочной дозой является 15 мкл суспензии на 1 мл пробы. Количество корпускул в пробе для каждой серии диагностикума должно быть проверено указанным выше способом. 6.4. В пробу целесообразно вносить и растворимый, и корпускулярный антигены.
7. Программа составления проб
7.1. При подготовке значительного количества проб для одной или нескольких лабораторий целесообразно заранее составлять программу добавления биологических агентов, которая позволяла бы предвидеть конечный результат специфической индикации ПБА. В программе для каждой пробы указывается «легенда», число микробных клеток в исходной суспензии, объем суспензии и содержащееся в нем число микробных клеток (антигена или количества токсина), добавляемых в пробу, и т.д. Программа оформляется в виде протокола внесения патогенных агентов в пробы. Образец такого протокола представлен в Прилож. 4. Данный образец содержит 17 различных разновидностей биологических агентов (имитаторы ПБА и условно-патогенные микроорганизмы), расположенных в порядке внесения в пробы согласно п. 4.13. Так как некоторые биологические агенты вносятся в пробы из разных разведений, то всего в образце протокола представлено внесение этих 17 БА в 29 различных вариантах. Эти варианты могут быть использованы для приготовления большого количества разнообразных проб. В графе 9 протокола указаны ПБА, внесенные в пробы N 1-24, а последующие всевозможные номера отмечены точками. 7.2. Подготовка имитаторов в разных разведениях позволяет готовить пробы с различными концентрациями имитатора: высокой, средней и низкой. Высокая концентрация обнаруживается достаточно уверенно, а низкая выявляется только при хорошем уровне подготовки лаборатории, после предварительной концентрации проб или заведомо рассчитана на обнаружение ПБА после подращивания микроорганизмов. 7.3. Поскольку экспрессное исследование проводится из пробы объемом 3-5 мл, то теоретически рассчитанное количество БА, указанное в графе 6 Прилож. 4, можно заранее сопоставить с чувствительностью МФА и РНГА. В графе 8 указано теоретическое количество микробных клеток, которое можно ожидать при высевах на плотные питательные среды. 7.4. Протокол внесения патогенных биологических агентов может быть подготовлен в варианте, когда ПБА указаны для каждой пробы индивидуально. Такой вариант для двух лабораторий (для проб N 1-24) представлен в Прилож. 5. 7.5. Протокол внесения биологических агентов может быть подготовлен также с указанием ожидаемых результатов (Прилож. 6). В этом виде протокол можно использовать в ходе проведения специфической индикации. Ожидаемое время получения первого положительного ответа в соответствии с п. 7.3. ориентировано на использование МФА и РНГА. При добавлении «подпороговых» количеств имитатора время ожидаемого первого ответа, как отмечено выше, составляет до 24 ч. Однако при использовании лабораторией дополнительных высокочувствительных методов исследования, таких как ИФА и (или) ПНР, ответ может быть получен уже при экспрессном исследовании. 7.6. V.cholerae не О1 в протоколе 3 отнесен к имитаторам ПБА (см. п. 4.5.), в связи с чем указан результат исследования и возможное время выдачи ответа. Направление должно содержать указание на проведение соответствующих исследований, т.к. в противном случае поиск может ограничиться только теми ПБА, обнаружение которых возможно при экспрессном анализе. 7.7. Содержание БА в пробах N 1-24 всех трех протоколов одинаковое. При передаче проб в исследовательскую лабораторию можно использовать один, два или все три протокола, т.к. они не дублируют друг друга. Каждый из них, как видно из таблицы, имеет определенное назначение.
ВАРИАНТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОТОКОЛОВ ВНЕСЕНИЯ ИМИТАТОРОВ
Показатель N протокола
1 2 3
Возможность перемены посредником номеров х х проб (шифрования проб)
Целесообразность использования при х внесении БА
Наличие информации о содержащемся в пробе х количестве внесенных биологических агентов
Наличие «легенды» х х
Удобство использования лабораторией для х анализа полученных ею результатов
Удобство использования посредником х х
Возможность использования посредником — не х микробиологом
Возможность применения протокола в ходе х проведения специфической индикации
7.8. В пробах, содержащих живые микроорганизмы, при хранении и транспортировании может происходить частичное отмирание клеток, зависящее от влияния «фоновой» среды, антагонизма клеток, температуры хранения и других, не всегда предсказуемых факторов, что приводит в ряде случаев к появлению ложных отрицательных результатов. Из этого вытекает необходимость контроля качества проб, который может осуществляться путем непосредственного наблюдения за ходом проведения исследования в проверяемой лаборатории. При отсутствии такой возможности целесообразно отбирать небольшое количество содержимого проб с низкими концентрациями имитаторов ПБА. Эти контрольные образцы начинают исследовать примерно в одно время с наиболее удаленной из проверяемых лабораторий. Результаты контроля фиксируются в журнале. Полученные в процессе индикации результаты целесообразно сопоставлять не только со сведениями, находящимися у посредника и отражающими состояние проб непосредственно в момент приготовления, но и с контрольными результатами, что особенно важно при наличии расхождений в результатах исследований.
8. Сопроводительная документация
8.1. Приготовление и выдача проб сопровождаются следующей документацией: — сопроводительное письмо, в котором делается отметка об отсутствии опасности или наличии особых требований при транспортировании проб; — акт приема-передачи проб в двух экземплярах, один из которых передается посреднику, а другой остается в лаборатории, приготовившей пробы; — протокол(ы) приготовления проб;
— направления на пробы для каждого проверяемого учреждения в двух экземплярах по утвержденной Минздравом СССР форме А-1 (см. нормативную ссылку N 2.7.). На втором экземпляре, возвращаемом посреднику, делается отметка исследовательской лаборатории о дате и времени приема проб. В Прилож. 2 представлен образец направления на пробы N 1-16 в лабораторию одного из центров госсанэпиднадзора. «Легенда» в направлении составлена в соответствии с протоколами 2 и 3 (Прилож. 5 и 6).
Приложение N 1
(вариант 1)
ОБЪЕМ ИСХОДНОЙ СУСПЕНЗИИ,
ВНОСИМЫЙ В ПРОБУ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НЕОБХОДИМОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБНЫХ КЛЕТОК
Количество микробных Объем исходной суспензии, вносимый клеток в пробу мерно (мкл) и каплями (шт.)
исходная требуемое в пробу 5 в пробу в пробу в пробу суспензия количество мл 10 мл 15 мл 20 мл м.к./мл м.к./мл
мкл шт. мкл шт. мкл шт. мкл шт.
9 8 10 10 500 - 1000 - 1500 - 2000 - 7 10 50 2 100 4 150 6 200 8 6 5 x 10 25 1 50 2 75 3 100 4 6 2 x 10 10 - 20 1 30 1 40 2 8 7 5 х 10 10 100 4 200 8 300 12 400 - 6 5 x 10 50 2 100 4 150 6 200 8 6 2 x 10 20 1 40 2 60 2 80 3 6 10 10 - 20 1 30 1 40 2 8 7 10 10 500 - 1000 - 1500 2000 - 6 5 x 10 250 10 500 - 750 - 1000 - 6 2 x 10 100 4 200 8 300 12 400 - 6 10 50 2 100 4 150 6 200 8 5 5 x 10 25 1 50 2 75 3 100 4 7 6 5 х 10 5 x 10 500 - 1000 - 1500 - 2000 - 6 2 x 10 200 8 400 - 600 - 800 - 6 10 100 4 200 8 300 12 400 - 5 5 x 10 50 2 100 4 150 6 200 8 5 2,5 x 10 25 1 50 2 75 3 100 4 7 6 10 10 500 - 1000 1500 - 2000 - 5 5 x 10 250 10 500 - 750 - 1000 - 5 2,5 x 10 125 5 250 10 375 - 500 - 5 10 50 2 100 4 150 6 200 8 6 5 10 10 500 - 1000 - 1500 - 2000 - 4 5 x 10 250 10 500 - 750 - 1000 - 4 2,5 x 10 125 5 250 10 375 - 500 - 4 10 50 2 100 4 150 6 200 8 5 3 10 2 x 10 100 4 200 8 300 - 400 - 3 10 50 2 100 4 150 6 200 8 2 5 x 10 25 1 50 1 75 3 100 4 4 2 10 5 x 10 250 10 500 - 750 - 1000 - 2 2 x 10 100 4 200 8 300 - 400 - 2 10 50 2 100 4 150 6 200 8
Приложение N 1
(вариант 2)
ОБЪЕМ ИСХОДНОЙ СУСПЕНЗИИ,
ВНОСИМЫЙ В ПРОБУ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НЕОБХОДИМОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБНЫХ КЛЕТОК
Исходная Объем Требуемая концентрация (м.к./мл) суспензия пробы
(м.к./мл) (мл) 8 7 6 5 10 10 5,0 x 2,0 x 10 5,0 x 2,5 x 10 6 6 5 5 10 10 10 10 Объем исходной суспензии (мкл), вносимый в пробу
9 10 5 500 50 25 10 5
10 1000 100 50 20 10
15 1500 150 75 30 15
20 2000 200 100 40 20
8 5 x 10 5 100 50 20 10 5 10 200 100 40 20 10 15 300 150 60 30 15 20 400 200 80 40 20
8 10 5 500 250 100 50 25 13 5
10 1000 500 200 100 50 25 10
15 1500 750 300 150 75 38 15
20 2000 1000 400 200 100 50 20
7 5 x 10 5 500 200 100 50 25 10 10 1000 400 200 100 50 20 15 1500 600 300 150 75 30 20 2000 800 400 200 100 40
7 10 5 500 250 125 50
10 1000 500 250 100
15 1500 750 375 150
20 2000 1000 500 200
Продолжение Прилож. N 1.2
Исходная Объем Требуемая концентрация (м.к./мл) суспензия пробы
(м.к./мл) (мл) 5 4 3 2 10 5,0 x 2,5 x 10 2,0 x 10 5,0 x 2,0 x 10 4 4 3 2 2 10 10 10 10 10 Объем исходной суспензии (мкл), вносимый в пробу
6 10 5 500 250 125 50 10 5
10 1000 500 250 100 20 10
15 1500 750 375 150 30 15
20 2000 1000 500 200 40 20
5 10 5 500 100 50 25 10 5
10 1000 200 100 50 20 10
15 1500 300 150 75 30 15
20 2000 400 200 100 40 20
4 10 5 500 250 100 50
10 1000 500 200 100
15 1500 750 300 150
20 2000 1000 400 200
Приложение N 2
Форма А-1
НАПРАВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛА ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИНДИКАЦИИ ПОРАЖАЮЩИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ
- Куда направляются пробы _______________________________________
- Район взятия проб _____________________________________________
- Время взятия проб: дата ___________ часы ________ минуты ______
- Общее количество проб — шестнадцать на индикацию неизвестного ПБА
- Материал, объем (вес) и место взятия каждой пробы (по N):
Номер Наименование пробы Материал Объем (мл), пробы вес (гр.) Смыв с поверхности жидкость 5 Фураж зерно 2 Смыв с судна жидкость 5 Смыв с поверхности жидкость 5 Пунктат бубона жидкость 1 Смыв с носоглотки жидкость 5 Смыв с носоглотки жидкость 5 Воздух жидкость 5 Фураж зерно 2 Соскоб с кожи жидкость 5 Соскоб с кожи жидкость 5 Смыв с поверхности жидкость 5 Смыв с поверхности жидкость 5 Смыв с носоглотки жидкость 5 Смыв с поверхности жидкость 5 Подстилочный материал солома 2
Предполагаемый способ, время (дата, часы) и имеющиеся признаки применения противником ПБА
7. Метеоусловия при отборе проб __________________________________
(примерная температура, сила ветра
и направление, характер погоды: солнце, туман, пасмурно, дождь) 8. Должность, фамилия лица, проводившего отбор проб
Дата _____________ Подпись ________________________
Примечание. Указать для воды источник, для продуктов — место изъятия и характер тары, для смывов — с какого объекта они сделаны.
Приложение N 3
ПЕРЕЧЕНЬ
НЕКОТОРЫХ ВАКЦИН И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В КАЧЕСТВЕ ИМИТАТОРОВ ПБА
Вакцины
N Наименование Объем Способ Концентра- Производители Направления
п/п вакцинного фа- приме- ция микроб- исследова- препарата совки нения ных клеток ния в мл в 1 дозе 1 Чумная живая 2,0 под- (3,0 +/- НИИЭМ МО, Экспрессное сухая из кожный 8 г. Киров штамма EV 0,6) x 10 накож- (3,0 +/- НПО "Пульс" Ускоренное ный 9 (Ставрополь- 0,6) x 10 ский НИПЧИ) 2 Сибиреязвенная 2,0 под- (5,0 +/- НИИЭМ МО, Экспрессное живая сухая из кожный 6 г. Киров Ускоренное штамма СТИ 1,0) x 10 3 Бруцеллезная 1,0 под- (4 +/- Предприятие по Экспрессное живая сухая из кожный 8 производству Ускоренное штамма 0,6) x 10 бакпрепаратов, Br.abortus 19 г. Омск ВА 4 Туляремийная 1,0 накож- (2 +/- Предприятие по Экспрессное живая сухая ный 8 производству Ускоренное 0,5) x 10 бакпрепаратов, Омск 10 5 Холерная 1,0 под- 8 x 10 Иркутский Экспрессное Эль-Тор кожный 11 НИПЧИ инактивирован- 2,0 1,6 x 10 ная 6 6 Оспенная живая 2,0 накож- 10 ООЕ НПО "Вирион", Ускоренное сухая - (20 ный г. Томск осповакцина доз) 7 Сыпнотифозная 5,0 под- X НПО "Биомед", Экспрессное Е комбиниро- (20 кожный г. Пермь Ускоренное ванная сухая: доз) - живая - после Экспрессное инактивации при 56 град. 30 мин.
Продолжение Прилож. N 3
Диагностические препараты
N Наименование Объем Концент- Произво- Направления п/п фа- рация дители исследования совки микробных в мл клеток в 1 мл по стандарту мутности 10 ед. 9 8 Взвесь микробных 1,0 1 x 10 Волгоград- Экспрессное клеток возбудителей ский НИПЧИ сапа жидкая инактивированная 9 9 Взвесь микробных 1,0 1 x 10 Волгоград- Экспрессное клеток возбудителей ский НИПЧИ мелиоидоза жидкая инактивированная 9 10 Взвесь микробных 1,0 1 x 10 Волгоград- Экспрессное клеток возбудителей ский НИПЧИ кокцидиоидомикоза жидкая инактивированная 9 11 Взвесь микробных 1,0 1 x 10 - Волгоград- Экспрессное клеток возбудителей 9 ский НИПЧИ гистоплазмоза 5 x 10 жидкая инактивированная 12 Диагностикум 0,5 X НПО "Био- Экспрессное риккетсий Провачека мед", сухой для РНГА г. Пермь 13 Диагностикум 0,5 X НПО "Био- Экспрессное риккетсий Провачека мед", корпускулярный г. Пермь сухой для РА 14 Диагностикум 0,5 X НПО "Био- Экспрессное риккетсиозный мед", Провачека сухой г. Пермь для РСК 15 Диагностикум 1,0 X НПО "Био- Экспрессное риккетсиозный мед", Сибирика сухой для г. Пермь РСК Токсины N Наименование Объем Концент- Произво- Направления п/п фа- рация в дители исследования совки ампуле в мл 16 Ботулинический 0,1 2000 DLM НИИЭМ им. Экспрессное токсин типа С Н.Ф. Биологи- Гамалеи ческое (по заказу)
Примечание. Препараты N 8, 9, 10, 11 и 16 не имеют в настоящий момент государственной регистрации и в зависимости от целей проверки могут применяться в качестве имитаторов по усмотрению лаборатории, подготавливающей пробы. Обращение с препаратами N 6 и 8 требует строгого соблюдения мер личной безопасности.
Приложение N 4
ОБРАЗЕЦ ПРОТОКОЛА
ВНЕСЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ В ПРОБЫ N 1-24 (ПРОТОКОЛ 1)
N Патогенный биологический Внесено в пробу Кол-во Кол-во БА Кол-во Номера
ПБА агент (ПБА) объемом 5 мл БА в 1 в 1 мл БА в 0,1 проб, в мл пробы после ус- мл (по- которые наименование исход- объем коли- до ус- реднения сев на внесены ное (мкл) чество реднения пробы до плотные биоло- коли- 20 мл среды) гические чество агенты 1 2 3 4 5 6 7 8 9 8 7 6 6 1 V.cholerae О1 2 x 10 100 2 x 10 4 x 10 10 м.к. Х 3, 22 нетоксигенный м.к./мл м.к. м.к. 8 6 6 5 2 V.cholerae О1 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 Х в N 1 - нетоксигенный м.к./мл м.к. м.к. 24 не внесено 8 7 6 5 3 В.mallei 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 Х 1; 19 м.к./мл м.к. м.к. 8 6 6 5 4 В.pseudomallei 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 Х 20 м.к./мл м.к. м.к. 9 8 7 7 5 С.immitis 10 200 2 x 10 4 x 10 10 м.к. Х 12 м.к./мл м.к. м.к. 9 8 7 7 6 Н.capsulatum 10 200 2 x 10 4 x 10 10 м.к. Х в N 1 - м.к./мл м.к. м.к. 24 нет 7 Ботулинический 400 1000 400 dlm 20 dlm Х 7 токсин dlm/мл 8 R.prowazekii - 24 АЕ в 6000 (1 24 АЕ X 1,0-1,2 Х 14 диагностикум для ампуле амп.) АЕ РСК (сухой) (6 мл) 9 R.prowazekii - Количество, эмпирически выбранное и рассчитанное 14 диагностикум для в соответствии с п. 6.3. РА 5 3 3 2 10 Е.coli 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 25 м.к. 2, 5, м.к. м.к. 6, 18 6 4 4 3 11 Е.coli 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 250 м.к. 3, 9, м.к. м.к. 13, 16, 19 5 3 3 2 12 St.epidermidis 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 25 м.к. 1, 10, м.к. м.к. 20, 22, 23 6 4 4 3 13 St.aureus 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 250 м.к. 4, 7, м.к. м.к. 14, 21 5 3 3 2 14 Вас.cereus 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 25 м.к. 8, 12, м.к. м.к. 17 6 4 4 3 15 Вас.cereus 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 250 м.к. 2, 11, м.к. м.к. 21, 24 7 6 5 5 4 16 V.cholerae не О1 2 х 10 100 2 x 10 4 x 10 10 м.к. 10 м.к. 3 м.к./мл м.к. м.к. 5 4 3 3 17 Осповакцина 10 200 2 x 10 4 x 10 10 ООЕ - 13 ООЕ/мл ООЕ ООЕ 7 6 5 5 18 Осповакцина 10 200 2 x 10 4 x 10 10 ООЕ - 14 ООЕ/мл ООЕ ООЕ 6 5 4 4 19 Осповакцина 10 200 2 x 10 4 x 10 10 ООЕ - в N 1 - ООЕ/мл ООЕ ООЕ 24 нет 8 6 6 5 20 Br.abortus штамм 10 50 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 2,5 x 16 19 BA м.к./мл м.к. м.к. 4 10 м.к. 9 7 6 6 5 21 Br.abortus штамм 10 25 2,5 x 10 5 x 10 10 м.к. 10 м.к. 8 19 BA м.к./мл м.к. м.к. 8 7 7 6 22 Fr.tularensis 10 500 5 x 10 10 м.к. 2,5 x 10 2,5 х 17 м.к./мл м.к. м.к. 5 10 м.к. 8 7 6 5 4 23 Fr.tularensis 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 5 x 10 5, 18 м.к./мл м.к. м.к. м.к. 7 6 5 4 3 24 Fr.tularensis - 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 5 x 10 6, 15 после м.к./мл м.к. м.к. м.к. подращивания 8 7 6 5 4 25 Y.pestis штамм 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 5 x 10 4 EV (после м.к./мл м.к. м.к. м.к. подращивания) 6 5 4 4 3 26 Вас.anthracis 5 х 10 50 2,5 x 10 5 x 10 10 м.к. 10 м.к. в N 1 - штамм СТИ м.к./мл м.к. м.к. 24 не вегетативная внесено форма 7 6 5 4 3 27 Вас.anthracis 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 5 x 10 11 штамм СТИ м.к./мл м.к. м.к. м.к. вегетативная форма 8 7 6 5 4 28 Вас.anthracis 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 5 x 10 10, 24 штамм СТИ м.к./мл м.к. м.к. м.к. вегетативная форма 8 7 6 5 4 29 Вас.anthracis 10 100 10 м.к. 2 x 10 5 x 10 5 x 10 9, 23 штамм СТИ м.к./мл м.к. м.к. м.к. споровая форма
Пробы в количестве 24 приготовлены в соответствии с МУ 4.2.1103-02 «Приготовление проб с имитаторами патогенных биологических агентов», утвержденными Минздравом России 27.01.02. Дата приготовления «__» ___________ 20__ г. в ___ час. Ответственный за приготовление ___________ тел. _________
Приложение N 5
ОБРАЗЕЦ ПРОТОКОЛА
ВНЕСЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ В ПРОБЫ
(ПРОТОКОЛ 2)
(Указаны те же номера ПБА, что в графе 1 протокола 1)
Учреж- Наиме- Мате- Объем Номер пробы Номера биологических агентов дение, нование риал (мл)
лабо- пробы Вес при после V.cho- В.mal- В.pseu- С.im- Н.cap- Боту- R.pro- Е.coli St.epi- St.aure- Вас.ce- V.cho- Оспо- Br.abor- Fr.tu- Y.pes- Вас.an- рато- (гр) изго- шиф- lerae lei doma- mitis sulа- ло- waze- der- us reus lerae вак- tus 19 laren- tis thracis рия тов- рова- О1 llei tum ток- kii midis не О1 цина BA sis штамм штамм лении ния (не- син EV СТИ токси- вегета- ген- тивный ный) ЦГСЭН Смыв с жид- 5 1 3 12 в ____ поверх- кость ности Фураж зерно 2 2 10 15 Смыв с жид- 5 3 1 11 16 судна кость Смыв с жид- 5 4 13 25 поверх- кость ности Пунктат жид- 1 5 10 23 бубона кость Смыв с жид- 5 6 10 24 носо- кость глотки Смыв с жид- 5 7 7 13 носо- кость глотки Воздух жид- 5 8 14 21 кость Фураж зерно 2 9 11 29 Соскоб жид- 5 10 12 28 с кожи кость Соскоб жид- 5 11 15 27 с кожи кость Смыв с жид- 5 12 5 14 поверх- кость ности Смыв с жид- 5 13 11 17 поверх- кость ности Смыв с жид- 5 14 89 13 18 носо- кость глотки Смыв с жид- 5 15 24 поверх- кость ности Подсти- соло- 2 16 11 20 лочный ма мате- риал Вете- Воздух жид- 5 17 14 22
ринар- ности кость ная лабо- Смыв с жид- 5 18 10 23 рато- поверх- кость рия ности
Воздух жид- 5 19 3 11 кость Смыв с жид- 5 20 4 12 туши кость Смыв с жид- 5 21 13 15 поверх- кость ности Смыв с жид- 5 22 1 12 поверх- кость ности Фураж зерно 2 23 12 29 Смыв с жид- 5 24 15 28 туши кость
Приложение N 6
ОБРАЗЕЦ ПРОТОКОЛА
ВНЕСЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ В ПРОБЫ
(ПРОТОКОЛ 3)
Учреж- Наименова- Материал Объем Номер Результат специфической индикации дение, ние пробы (мл) пробы лабора- Вес ожидаемый фактически тория (гр) полученный при пос- ПБА вре- ПБА ПБА обнару- из- ле мя обна- не жен го- шиф- пер- ружен об- дополни- тов- ро- вого в на- тельный ле- ва- от- тече- ру- агент нии ния вета ние жен (наиме- (ча- (ча- нование) сы) сов) ЦГСЭН Смыв с жидкость 5 1 В.mallei 8
в ____ поверхности
Фураж зерно 2 2 ПБА не - обнаружены Смыв с жидкость 5 3 V.cholerae 8 судна Смыв с жидкость 5 4 Y.pestis EV 8 поверхности Пунктат жидкость 1 5 Fr.tularensis 8 бубона Смыв с жидкость 5 6 Fr.tularensis 24 носоглотки Смыв с жидкость 5 7 Ботулинический 48 носоглотки токсин Воздух жидкость 5 8 Br.abortus 8 Фураж зерно 2 9 Вас.anthracis 8 СТИ Соскоб с жидкость 5 10 Вас.anthracis 24 кожи СТИ Соскоб с жидкость 5 11 Вас.anthracis 24 кожи СТИ Смыв с жидкость 5 12 С.immitis 8 поверхности Смыв с жидкость 5 13 осповакцина 72 поверхности Смыв с жидкость 5 14 осповакцина 24 носоглотки R.prowazekii 8 Смыв с жидкость 5 15 Fr.tularensis 24 поверхности Подстилоч- солома 2 16 Br.abortus 19 8 ный BA материал Ветери- Воздух жидкость 5 17 Fr.tularensis 8 нарная лабора- Смыв с жидкость 5 18 Fr.tularensis 8
тория поверхности
Воздух жидкость 5 19 B.mallei 8
Смыв с туши жидкость 5 20 B.pseudomallei 8
Смыв с жидкость 5 21 ПБА не - поверхности обнаружены Смыв с жидкость 5 22 V.cholerae 8 поверхности Фураж зерно 2 23 Вас.anthracis 8 СТИ Смыв с туши жидкость 5 24 Вас.anthracis 24 СТИ
Посредник ________ Дата _________
Приложение N 7
ОБРАЗЕЦ ЖУРНАЛА
ВЫБОРОЧНОГО КОНТРОЛЯ ПРИГОТОВЛЕННЫХ ПРОБ
N Дата Наимено- Расчетное количество БА Результат контроля через про- вание бы при- про- биоагентов в 1 мл пробы в посеве 6-8 часов 24 48 72 <*> го- ве- на часа ча- ча- тов- дения до после пита- МФА РПГА ИФА сов са ле- конт- усред- усред- тельную ния роля нения нения среду, проб культуру тканей и т.д. 4 16 08.02 09.02 Е.coli 10 2,5 x 250 м.к. Х Х Х 32 - - м.к. 3 коло- 10 м.к. нии 6 Вr.abortus 10 2,5 x 2,5 х 2-4 Х Х гус- ти- - 19 ВА м.к. 5 4 в поле той пич- 10 м.к. 10 м.к. зрения рост ный мел- рост ких коло- ний 6 20 08.02 09.02 В.pseudo- 10 2,5 x X то же ++++ - Х Х Х mallei м.к. 5 10 м.к. 3 St.epider- 10 2,5 x 25 м.к. Х Х Х 6 - - midis м.к. 2 коло- 10 м.к. ний 4 24 08.02 09.02 Вас.cereus 10 2,5 x 250 м.к. Х Х Х еди- - - м.к. 3 нич- 10 м.к. ные коло- нии 6 5 4 Вас.anth- 2 x 10 5 x 10 5 x 10 1-2 ++++ по- гус- - - racis (ве- м.к. м.к. м.к. цепоч- ложи- той гетативная ки в тель- рост форма) поле ный зрения
<*> Указан тот же состав проб, что и в Прилож. 5.
УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации —
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
27 января 2002 г.
Дата введения: 1 апреля 2002 г.
3.1.7. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ИНФЕКЦИИ, ОБЩИЕ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ПРОФИЛАКТИКА ЛИСТЕРИОЗА
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 3.1.7.1104-02
- Подготовлены авторским коллективом в составе: Черкасский Б.Л., Малеев В.В., Ладный В.И., Минаев Н.З. (Центральный научно — исследовательский институт эпидемиологии МЗ РФ), Филатов Н.Н., Аксенова О.И., Родина Л.В., Маненкова Г.М., Цвиль Л.А., Тимошков В.В. (Центр госсанэпиднадзора в г. Москве), Бакулов И.А., Котляров В.М. (Всероссийский научно — исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН), Миджидов М.М., Миджидов Ш.М., Омарова С.М. (НПО «Питательные среды» г. Махачкала).
- Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 27 января 2002 г. Введены в действие с 1 апреля 2002 г.
- Введены впервые.
- Назначение и область применения
1.1. Настоящие методические указания предназначены для учреждений Государственной санитарно — эпидемиологической службы Российской Федерации в целях обеспечения эпидемиологического мониторинга, совершенствования эпиднадзора за листериозом и профилактики листериоза у людей.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон «О санитарно — эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 года N 52-ФЗ. 2.2. Закон Российской Федерации «О ветеринарии» от 14 мая 1993 г. N 4979-1. 2.3. Положение о государственном санитарно — эпидемиологическом нормировании, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554. 2.4. Профилактика и борьба заразными болезнями, общими для человека и животных: Сборник санитарных и ветеринарных правил (СП 3.1.084-96; ВП 13.3.4.1100-96). 2.5. Лабораторная диагностика листериоза животных и людей: Методические рекомендации, Минздравмедпром РФ, Минсельхозпрод РФ от 10 апреля 1996 г. 2.6. Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства, дезинвазии, дезинсекции и дератизации: Инструкция, Министерство сельского хозяйства СССР от 1988 г. 2.7. Санитарно — эпидемиологические требования к организациям торговли и обороту в них продовольственного сырья и пищевых продуктов: СП 2.3.6.1066-01. 2.8. Санитарно — эпидемиологические требования к организациям общественного питания, изготовлению и оборотоспособности в них пищевых продуктов и продовольственного сырья: СП 2.3.6.1079-01. 2.9. Приказ «О совершенствовании системы медицинских осмотров трудящихся и водителей индивидуальных транспортных средств», Минздрав РФ от 29 сентября 1989 года N 555. 2.10. Приказ «Об усовершенствовании эпидемиологического надзора за зоонозами», Минздрав СССР от 11 июня 1987 года N 789.
3. Общие положения
Листериоз является природно — очаговой инфекционной болезнью человека и животных и представляет актуальную медико — ветеринарную проблему. Болезнь характеризуется множественностью источников возбудителя инфекции, многообразием факторов и путей его передачи, а также разнообразной клинической картиной. Заболеваемость людей листериозом зарегистрирована практически на всех континентах. Начиная с 80-х гг. прошлого века, листериоз привлек к себе внимание в связи с регистрацией крупных вспышек заболеваний людей, связанных с употреблением продуктов питания, контаминированных возбудителем листериоза, в США, Канаде, Мексике, Великобритании, Швейцарии, Франции и других странах. Не менее опасным является листериоз у беременных, что нередко приводит к развитию патологии беременности, внутриутробной гибели плода или смерти новорожденного в первые дни жизни. В Российской Федерации листериоз имеет широкое распространение. Эпизоотическая ситуация по листериозу в нашей стране остается напряженной, что несомненно отражается на проявлении этой болезни у людей. Листериоз животных учитывается, начиная с 1956 года. Регистрация и учет листериоза у людей как самостоятельной нозологической формы введена Минздравом Российской Федерации в 1992 г.
4. Этиология
Возбудитель листериоза Listeria monocitogynes — подвижная, полиморфная грамположительная мелкая палочка (длина 0,5-2,0 нм; ширина 0,3-0,5 нм) с закругленными концами. Род Listeria включает два патогенных (L. monocitogynes, L. ivanovii,) и четыре апатогенных вида (L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri, L. grayi). Число сероваров этого рода бактерий достигло 18. В настоящее время различают три основных серовара, объединенных в две серогруппы. Серовары 1-й, 3-й и 4-й имеют подтипы а, b, с, d, e. Наиболее часто встречаются серовары 1, 1/2а, 4а и 4b. Известны также фаготипы листерий. Выделены бактериофаги, которые используют при лабораторной диагностике для идентификации листерии. Листерии обладают сравнительно высокой устойчивостью и широко распространены во внешней среде. Микроорганизм хорошо сохраняется и размножается при низких температурах — 4-6 град. С («микроб холодильника»). Возбудитель листериоза длительное время (до нескольких лет) сохраняется в почве, воде, соломе, зерне. Обладает способностью размножаться во внешней среде и пищевых продуктах (молоке, мясе, масле, сыре, овощах и др.). Листерии инактивируются под воздействием солнечных лучей. Гибель микроорганизмов происходит при температуре 70 град. С через 20-30 мин., при 100 град. С в течение 5-10 мин. Возбудитель неустойчив к обычным дезинфицирующим веществам в рабочих концентрациях: 0,5-1,0%-ный раствор формалина, 3-5%-ный раствор хлорамина.
5. Эпидемиологические и эпизоотологические данные
Резервуаром возбудителя в природе являются многие виды диких и синантропных грызунов. Кроме того, листерии обнаружены у зайцев, леммингов, белок, лисиц, норок, енотов, песцов, диких копытных, птиц. Листериоз поражает домашних и сельскохозяйственных животных (свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже кошек и собак), а также домашнюю и декоративную птицу (гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек). Листерии обнаружены также в рыбе и продуктах моря (креветки). Источником инфекции при листериозе являются животные — больные и листерионосители, в т.ч. грызуны и птицы, которые выделяют возбудителя во внешнюю среду с мочой, калом, выделениями из носовой полости, глаз, половых органов, а также околоплодной жидкостью и молоком. Переносчиками возбудителя листериоза у животных могут быть кровососущие членистоногие (иксодовые и гамазовые клещи), а также различные виды блох и вшей. При листериозе имеет место многообразие механизмов передачи возбудителя инфекции: алиментарный, контактный, аспирационный, трансплацентарный. Широкое распространение возбудителя инфекции во внешней среде обусловлено разнообразием путей и факторов передачи листериоза. Листерии проникают в организм человека и животного через желудочно — кишечный тракт, органы дыхания, слизистые оболочки, поврежденную кожу, а также плаценту. Животные заражаются листериозом через воду и корма, загрязненные листериями, а также от больных и переболевших животных, в т.ч. грызунов. В зависимости от вида и возраста животных листериоз имеет различные специфические признаки. У крупного рогатого скота заболевание чаще протекает с поражением центральной нервной системы, у телят — в виде септицемии. У овец, коз и свиней чаще всего наблюдается нервная форма листериоза с характерными признаками: круговые движения («вертячка»), судороги конечностей. Нередко наблюдают массовые аборты, сопровождающиеся задержкой последа и эндометритом, а также мастит с длительным (до нескольких месяцев) выделением листерий с молоком. Листерионосительство длится у переболевших овец и свиней не менее 30 дней, у коров — до 300 дней, у некоторых видов грызунов — до 260 дней. В организмах иксодовых клещей листерии могут сохраняться свыше 500 дней. Заражение человека листериозом может происходить в результате: — употребления в пищу инфицированных продуктов животного происхождения (молоко, мясо, сыры, мороженое), овощей, салатов, морепродуктов, употребляемых без термической обработки; — вдыхания пыли, контаминированной возбудителем, при уборке различных помещений, работе в животноводческих хозяйствах и др.; — контакта с больными животными или листерионосителями; — внутриутробной передачи возбудителя через плаценту и контакта новорожденного с родовыми путями родильницы. В случае нарушения противоэпидемического режима в родильных отделениях возможно заражение листериозом новорожденных детей при контакте с инфицированными предметами ухода и медицинским инструментарием. Наиболее угрожаемыми контингентами риска заражения листериозом являются: беременные, новорожденные, а также лица с ослабленной иммунной системой. Профессиональное заболевание листериозом возможно среди ветеринарных специалистов, работников боен, мясокомбинатов, молочно — товарных ферм, животноводческих хозяйств, звероферм, а также лабораторий, биофабрик, культурно — массовых и спортивных учреждений, содержащих или работающих с животными. Листериоз у людей характеризуется клиническим полиморфизмом. Разнообразие клинических форм связано с множественностью путей проникновения листерий в организм человека: через желудочно — кишечный тракт, органы дыхания, слизистые оболочки зева, глаз, носа, поврежденные кожные покровы и др. Распространение возбудителя в организме человека происходит по лимфатической и кровеносной системам. В местах проникновения и размножения листерий образуются гранулемы (листериомы). Клинические формы заболевания зависят от преобладания поражений отдельных органов и систем. Различают висцеральную, нервную, железистую, гастроэнтеритическую и смешанную формы. Возможно бессимптомное носительство листерий. Госпитализация больных листериозом, а в отдельных случаях и листерионосителей, проводится по клиническим и эпидемиологическим показаниям. В целях ранней диагностики листериоза у людей необходимо проведение лабораторных исследований. Материал от больных для исследований в свежем или консервированном виде (30%-ный водный раствор глицерина) упаковывают в полиэтиленовые пакеты, помещают в металлический контейнер, опечатывают, оформляют сопроводительный документ и направляют в лаборатории отделов особо опасных инфекций центров госсанэпиднадзора. В сопроводительном документе указывают наименование и адрес отправителя, дату взятия материала, опись проб, эпидемиологические или эпизоотологические данные. Научно — производственным объединением «Питательные среды» (Махачкала) разработана питательная среда для выделения и культивирования листерий, а также микротест — система биохимической идентификации листерий для диагностики листериоза у людей.
6. Эпидемиологический надзор за листериозом
Эпиднадзор за листериозом должен осуществляться специалистами санитарно — эпидемиологической службы, с учетом конкретных условий, эпидемической и эпизоотической ситуации, наличия и состояния эпидемиологически значимых объектов и энзоотичных территорий. Эпидемиологический надзор включает:
— сбор, обобщение и анализ эпидемиологических, эпизоотологических, санитарно — гигиенических и др. данных, влияющих на распространение инфекции; — эпизоотолого — эпидемиологическое обследование очагов; — разработку рекомендаций по совершенствованию профилактических, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий и контроль за их реализацией. Для обеспечения эпиднадзора за листериозом необходимы: — данные анализа заболеваемости людей (не менее чем за 5-10 лет); — перечень объектов эпидзначимых и энзоотичных территорий; — перечень и численность контингентов, подвергающихся профессиональному риску заражения; — данные о состоянии заболеваемости и численности животных на эпидзначимых объектах и положительных результатах исследования грызунов (оперативные и ретроспективные); — сведения о санитарно — гигиеническом состоянии объектов, степени благоустройства энзоотичных участков. При выявлении заболеваний листериозом людей или животных необходимо обеспечить взаимный оперативный обмен информацией между лечебно — профилактическими, санитарно — эпидемиологическими учреждениями и ветеринарной службой. Обследование очага листериоза санитарно — эпидемиологическая служба организует и проводит при получении: — экстренного извещения о заболевании человека (форма 058/у) из лечебно — профилактического учреждения; — информации о заболевании животного из учреждений ветеринарной службы; — положительного результата исследования на листериоз грызунов, отловленных на эпидемиологически значимых объектах или открытых территориях; — выделении возбудителя из пищевых продуктов. В соответствии с приказом Минздрава СССР «Об усовершенствовании эпидемиологического надзора за зоонозами» от 11.06.87 N 789 обследование очага листериоза должно носить эпизоотолого — эпидемиологический характер и осуществляться комплексно: эпидемиологом, гигиенистом, специалистами ветеринарной службы. По итогам обследования оформляется «Карта эпизоотолого — эпидемиологического обследования очага зоонозного заболевания», форма 391/у. Учет больных листериозом осуществляется в установленном порядке. Государственная санитарно — эпидемиологическая служба осуществляет эпизоотологический мониторинг и надзор за эпидзначимыми объектами и природными очагами в целях своевременного выявления эпизоотий среди диких и синантропных грызунов, определения их интенсивности, распространения, опасности эпидемических и эпизоотических проявлений. Эпидзначимыми объектами являются животноводческие хозяйства, зверофермы, молочно — товарные фермы, мясо и молококомбинаты, биофабрики, виварии, культурно — массовые учреждения, содержащие или работающие с животными. Подлежит контролю выполнение санитарно — эпидемиологических правил для организаций торговли и общественного питания и соблюдение санитарно — эпидемиологического режима в основных производственных помещениях, а также условия труда рабочих. Особое внимание необходимо уделять контролю за соблюдением технологии приготовления готовых блюд из продуктов животного происхождения, овощей, употребляемых в сыром виде, сроками их реализации, а также хранением, транспортированием пищевых продуктов на объектах общественного питания в организованных коллективах (больницы, дома престарелых, интернаты, школы, детские и дошкольные учреждения). Для ограничения роли организаций общественного питания в распространении заболеваний листериозом людей необходимо выполнение «Санитарно — эпидемиологических требований к организациям продовольственной торговли и обороту в них продовольственного сырья и пищевых продуктов»; «Санитарно — эпидемиологических требований к организациям общественного питания, изготовлению и оборотоспособности в них пищевых продуктов и продовольственного сырья»; «Гигиенических требований к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».
7. Профилактические и противоэпидемические мероприятия
Профилактика листериоза основывается на комплексе санитарно — гигиенических, ветеринарных и медицинских мероприятий, которые включают в региональные программы по зоонозным инфекциям в субъектах, городах, районах. Программы разрабатываются центрами госсанэпиднадзора с учетом эпидемической и эпизоотической ситуации, состояния эпидемиологически значимых объектов, степени благоустройства и оздоровления энзоотичных участков, организации борьбы с грызунами и бесхозными животными и включают источники и объемы финансирования профилактических, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий. Профилактика заражения листериозом людей осуществляется в соответствии с санитарными и ветеринарными правилами «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Листериоз». На эпидзначимых по листериозу объектах систематически организуется и проводится уничтожение грызунов и клещей в помещениях и прилегающей к ним территории. Ежегодно в целях своевременного выявления заболеваний среди контингентов повышенного риска должны проводиться профилактические осмотры работников эпидемиологически значимых по листериозу объектов силами территориальных лечебно — профилактических учреждений. Работники, принимающие участие в уходе за больными животными или разделке туш таких животных, исследовании патологического материала от больных или подозреваемых по заболеванию листериозом людей и животных, а также работающих с культурами листерий, должны строго соблюдать общие меры личной профилактики. Инструктажи по мерам профилактики листериоза проводятся при поступлении на работу и ежегодно специалистами по технике безопасности объекта. В целях обеспечения дифференциальной диагностики листериоза лечебно — профилактические учреждения должны проводить лабораторное обследование на листериоз беременных с неблагополучным гинекологическим или акушерским анамнезом. При выявлении внутрибольничного заражения листериозом в родильном доме необходимо проведение комплекса противоэпидемических мероприятий: изоляция больного новорожденного в инфекционное отделение, выявление лиц, бывших в условиях возможного заражения, лабораторное обследование и установление за ними медицинского наблюдения, проведение генеральной уборки и заключительной дезинфекции.
8. Санитарно — просветительная работа
по профилактике листериоза
Особое внимание следует уделять санитарно — просветительной работе, которая организуется и проводится медицинскими и ветеринарными специалистами. Осуществляется проведение инструктажа по профилактике листериоза среди контингентов профессионального риска на эпидзначимых объектах. Центры госсанэпиднадзора совместно с центрами гигиенического образования разрабатывают тексты лекций, бесед, а также памятки, буклеты, плакаты для населения по профилактике листериоза у людей. При этом осуществляется дифференцированный подход к проведению санитарно — разъяснительной работы среди различных контингентов населения: детей и подростков в школах и детских поликлиниках, женщин детородного возраста и беременных — в женских консультациях, лиц пожилого возраста — на базе поликлиник или по месту жительства. Используются различные методы массовой информации населения (телевидение, радиовещание, пресса).
