УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
9 августа 2006 года
Дата введения:
1 сентября 2006 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ХЛОРОФОРМА, 1,2-ДИХЛОРЭТАНА, ТЕТРАХЛОРМЕТАНА, ХЛОРБЕНЗОЛА В БИОСРЕДАХ (МОЧА) ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2114-06
- Область применения
Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений», ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации алифатических и ароматического хлорированных углеводородов в моче в диапазоне концентраций: — хлороформ от 0,012 до 0,500 мкг/куб. см с погрешностью 24,9% при доверительной вероятности 0,95; — тетрахлорметан от 0,001 до 0,030 мкг/куб. см с погрешностью 14,8% при доверительной вероятности 0,95; — 1,2-дихлорэтан от 0,06 до 1,90 мкг/куб. см с погрешностью 25,0% при доверительной вероятности 0,95; — хлорбензол от 0,044 до 2,200 мкг/куб. см с погрешностью 16,0% при доверительной вероятности 0,95.
Хлороформ (трихлорметан)
CHCl3 Молекулярная масса 119,38. Хлороформ — бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. Температура кипения 61,15 град. С, температура плавления -63,5 град. С. Хлороформ растворим в органических растворителях и малорастворим в воде, наркотик [1]. Тетрахлорметан
CCl4 Молекулярная масса 153,82. Тетрахлорметан — бесцветная жидкость. Температура кипения 76,75 град. С, температура плавления -22,87 град. С. Тетрахлорметан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Тетрахлорметан — сильнейший наркотик [1]. 1,2-Дихлорэтан
C2H4Cl2 Молекулярная масса 98,97. 1,2-Дихлорэтан — бесцветная жидкость. Температура кипения 83,5 град. С, температура плавления -35,3 град. С, растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. 1,2-Дихлорэтан является токсичным соединением [1]. Хлорбензол
C6H5Cl Молекулярная масса 112,56. Хлорбензол — бесцветная жидкость. Температура кипения 132 град. С, температура плавления -45,6 град. С. Хлорбензол хорошо растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Хлорбензол — наркотик, действующий на систему крови подобно бензолу, но значительно слабее [1].
2. Сущность метода
Методика основана на предварительном концентрировании анализируемых соединений из биологического материала (моча) экстракцией гептаном (хлороформ, 1,2-дихлорэтан) или гексаном (тетрахлорметан, хлорбензол) и последующем газохроматографическом анализе экстракта. Выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов и хлорбензола проводят методом газовой хроматографии с детектором электронного захвата. Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды, алифатические спирты, трихлорэтилен при содержании каждого из указанных веществ не более 0,5 мкг/куб. см. Длительность анализа одной пробы мочи, включая экстракцию пробы, — 40 мин.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.
3.1. Средства измерений
Хроматограф газовый с детектором
электронного захвата
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-01 Разновесы Г2-210 ГОСТ 7328-01 Секундомер "Агат" ТУ 25-1894.003-90 Микрошприцы МШ-10 ТУ 2.833.106-00 Линейка измерительная ГОСТ 427-75 Лупа измерительная ГОСТ 25706-83 Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 куб. см ГОСТ 1770-74 Пипетки вместимостью 5, 10 куб. см ГОСТ 29227-91 Хлороформ фарм. Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,7 ГСО 7288-96 1,2-Дихлорэтан, хч. Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,6 ГСО 7332-96 Тетрахлорметан. Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,9 ГСО 7211-95 Хлорбензол, хч. Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,9 ГСО 7142-95.
3.2. Вспомогательные устройства
Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм
Бидистиллятор стеклянный БС ТУ 25-11.1592-81 Воронка делительная ГОСТ 23932-90 Редуктор кислородный ТУ 26-05-236-73
Центрифуга СМ-4, 3000 об./мин.
3.3. Материалы
Азот газообразный ГОСТ 9293-74.
3.4. Реактивы
Apiezon L на хроматоне N-супер фракции
0,16-0,20 мм — неподвижная фаза
для заполнения хроматографической колонки Натрия хлорид, хч ГОСТ 4233-77 Гептан этал. Массовая доля основного вещества,
%, не менее 99,9 ГОСТ 25828-83 Гексан, хч. Массовая доля основного вещества, ТУ 6-09-3375-78 %, не менее 99,85 Щавелевая кислота, хч ГОСТ 22180-76 Натрия гидроксид, чда ГОСТ 4328-77 Серная кислота, осч ГОСТ 14262-78 Калия дихромат, чда ГОСТ 4220-75 Ацетон, осч ТУ 2633-039-44493179-00.
3.5. Растворы
Раствор калия дихромата, 3%-й.
Раствор натрия гидроксид, 10%-й.
Раствор щавелевой кислоты, 10%-й.
4. Требования к безопасности
4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. 4.2. При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях» (утверждены МЗ СССР 20.12.82) и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением» (утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87). 4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88. 4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.
6. Условия измерений
6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия: — температура воздуха (20 +/- 5) град. С; — атмосферное давление 630 — 800 мм рт. ст.; — влажность воздуха не более 80% при температуре 25 град. С. 6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка посуды
Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3%-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 куб. см концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120 град. С.
7.2. Подготовка хроматографической колонки
Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают бидистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 куб. см/мин. при температуре 200 град. С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
7.3. Приготовление аттестованных смесей
Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемых компонентов, и готовят серию аттестованных растворов. Исходный аттестованный раствор N 1. В мерную колбу объемом 1000 куб. см, содержащую бидистиллированную воду в объеме 500 куб. см, вводят 0,8 куб. мм хлороформа, ГСО 7288-96, 5 куб. мм 1,2-дихлорэтана, ГСО 7288-96 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание хлорорганических соединений в исходном аттестованном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): хлороформ — 1,19 мкг/куб. см, 1,2-дихлорэтан — 6,29 мкг/куб. см. Срок хранения — 12 ч. Исходный аттестованный раствор N 2. В мерную колбу объемом 1000 куб. см, содержащую бидистиллированную воду в объеме 500 куб. см, вводят 1 куб. мм тетрахлорметана, ГСО 7211-95, 20 куб. мм хлорбензола, ГСО 7142-95 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание хлорорганических соединений в исходном аттестованном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): тетрахлорметан — 1,63 мкг/куб. см, хлорбензол — 22,13 мкг/куб. см. Срок хранения — 12 ч. Раствор гидроксида натрия. В небольшом количестве бидистиллированной воды растворяют 10 г гидроксида натрия, количественно переносят в мерную колбу объемом 100 куб. см и заполняют колбу до метки водой.
7.4. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (кв. мм) от массы хлорорганических соединений (мкг) и строится по 5 сериям рабочих аттестованных растворов. Каждую серию, состоящую из 5 рабочих аттестованных растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 куб. см, содержащих 50 куб. см мочи. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с табл. 1, заполняют колбу до метки мочой.
Таблица 1
РАБОЧИЕ АТТЕСТОВАННЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ
Номер смеси для градуировки 1 2 3 4 5 6
Хлороформ, объем исходной 1,0 2,0 5,0 10,0 20,0 30,0 аттестованной смеси (1,19 мкг/куб. см), куб. см
Концентрация хлороформа, 0,012 0,024 0,060 0,120 0,240 0,360 мкг/куб. см
1,2-Дихлорэтан, объем исходной 1,0 2,0 5,0 10,0 20,0 30,0 аттестованной смеси (6,29 мкг/куб. см), куб. см
Концентрация 1,2-дихлорэтана, 0,063 0,126 0,315 0,630 1,260 1,880 мкг/куб. см
Тетрахлорметан, объем исходной 0,06 0,2 0,5 1,0 1,5 2,0 аттестованной смеси (1,63 мкг/куб. см), куб. см
Концентрация тетрахлорметана, 0,001 0,0033 0,008 0,016 0,024 0,033 мкг/куб. см
Хлорбензол, объем исходной 0,2 0,5 1,0 2,0 5,0 10,0 аттестованной смеси (22,13 мкг/куб. см), куб. см
Концентрация хлорбензола, 0,044 0,110 0,220 0,440 1,100 2,210 мкг/куб. см
Для построения градуировочной характеристики хлороформа и 1,2-дихлорэтана аттестованный раствор в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют 10%-м раствором щавелевой кислоты (pH = 2) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гептана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гептановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин. Для построения градуировочной характеристики тетрахлорметана и хлорбензола аттестованный раствор в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подщелачивают 10%-м раствором гидроксида натрия (pH = 10) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гексановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин. В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 куб. мм каждого экстракта градуировочного раствора и анализируют в условиях:
температура термостата колонок — 90 град. С; температура испарителя — 170 град. С; температура детектора — 250 град. С; расход газа-носителя (азот) — 30 куб. см/мин.; скорость диаграммной ленты — 240 мм/ч; время удерживания хлороформа — 3 мин. 05 с;
тетрахлорметана - 4 мин. 20 с; 1,2-дихлорэтана - 5 мин. 30 с; хлорбензола - 12 мин. 25 с.
На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 6 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.
7.5. Отбор проб
Отбор проб мочи в объеме не менее 400 куб. см производят в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
8. Выполнение измерений
Для определения хлороформа и 1,2-дихлорэтана. Пробу мочи в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют 10%-м раствором щавелевой кислоты (pH = 2) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гептана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гептановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин. Полученный центрифугат в объеме 10 куб. мм хроматографируют и проводят количественное определение анализируемых соединений в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Для определения тетрахлорметана и хлорбензола. Пробу мочи в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подщелачивают 10%-м раствором гидроксида натрия (pH = 10) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гексановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин. Полученный центрифугат в объеме 10 куб. мм хроматографируют и проводят количественное определение анализируемых соединений в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.4.).
9. Вычисление результатов измерений
На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию алифатических и ароматического хлорированных углеводородов в моче. За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений Х , Х ,
max min расхождение между которыми не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3). Расчет концентраций хлорированных углеводородов
n
ведут по формуле:
А х V экст. Х = ----------, V х V 1 2
где:
А — количество компонента, найденное по калибровочному графику, мкг;
V - объем экстрагента, куб. см; экст. V - объем экстрагируемой мочи, куб. см; 1 V - объем хроматографируемой пробы, куб. см. 2 _
Результат измерений представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,
Х + Х _ _ max min где Х - средний результат анализа, мкг/куб. см, Х = -----------, 2 r Х + Х n max min при условии: Х - Х <= ---- х -----------, max min 100 2
где:
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений; max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений; min
r - значение предела повторяемости, %; n
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_ дельта х Х ДЕЛЬТА = ----------, 100
где дельта относительное значение характеристики погрешности, %.
10. Внутренний контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ, ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
Наименование Показатель Показатель Показатель определяемого повторяемости воспроизводимости точности компонента и (относительное (относительное (границы диапазон среднеквадрати- среднеквадратическое относительной измерений, ческое отклонение погрешности при мкг/куб. см отклонение воспроизводимости) вероятности повторяемости), сигма Р = 0,95), сигма , % R , % +/- дельта, % r _ Х L Хлороформ, от 3,6 5,9 24,9
0,012 до 0,5 вкл.
Тетрахлорметан, от 12,3 15,9 14,8 0,001 до 0,03 вкл.
1,2-Дихлорэтан, от 6,2 7,4 25,0 0,06 до 1,9 вкл.
Хлорбензол, от 6,7 12,9 16,0 0,04 до 2,2 вкл.
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95
Наименование Предел повторяемости Предел внутрилабораторной определяемого (относительное воспроизводимости компонента и диапазон значение допускаемого (относительное значение измерений, мкг/куб. см расхождения между допускаемого расхождения двумя результатами между двумя результатами параллельных измерений, полученными в определений), r , % одной лаборатории, но в n разных условиях), R , % _ Х L Хлороформ, 10,1 13,5
от 0,012 до 0,5 вкл.
Тетрахлорметан, 14,1 16,3 от 0,001 до 0,03 вкл.
1,2-Дихлорэтан, 17,1 20,3 от 0,06 до 1,9 вкл.
Хлорбензол, 13,1 16,7 от 0,04 до 2,2 вкл.
10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n Повторяемость результатов параллельных измерений признают
удовлетворительной, если:
r Х + Х n max min Х - Х <= --- х -----------, max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %; n
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений; max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений. min
Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Контроль воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
R _ _ _ Х Х + Х _ _ L 1 2 |Х - Х | <= --- х -------, 1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных 1
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных 2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
_ Х L (табл. 3). _ _ Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных 1 2 условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R при _ Х L
доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3. Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Контроль точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания хлорированных соединений (хлороформ, тетрахлорметан, 1,2-дихлорэтан, хлорбензол) в пробе с известной добавкой 1
_ _ (Х ), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка
д должна составлять не менее 40% от содержания хлорированных соединений в рабочей пробе) с нормативом точности К. Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
1 _ _ |Х - Х - С | = К , д k 1
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см. д
/ 2 1 2 /дельта _ дельта _ К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х ) \/ 100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении условия: К <= К.
k
При превышении норматива контроля К эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их. Периодичность ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
Литература
- Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд. /Под ред. В.А.Филова и др. Л.: "Химия", 1990.
Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.В.Нурисламова, Н.А.Попова).
