Документ введен в действие с 18 июня 2012 года. Текст документа
Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
18 июня 2012 г.
Дата введения:
с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОРГАНИЗАЦИЯ И ПРОВЕДЕНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ИЕРСИНИОЗЫ НА ТЕРРИТОРИАЛЬНОМ, РЕГИОНАЛЬНОМ И ФЕДЕРАЛЬНОМ УРОВНЯХ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.3019-12
- Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, Ю.В.Демина, Н.В.Шеенков); Федеральным бюджетным учреждением науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Роспотребнадзора (Г.Я.Ценева, Е.А.Воскресенская, Г.И.Кокорина, Е.А.Богумильчик); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока» Роспотребнадзора (М.В.Чеснокова, С.В.Балахонов, В.Т.Климов, К.А.Тирских, М.Б.Черепанова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения (Центр гигиены и эпидемиологии в Новосибирской области» (Т.В.Каримова, О.В.Якунина).
- Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 18 июня 2012 г.
- Введены в действие с момента утверждения.
- Введены впервые.
- Область применения
1.1. Настоящие методические указания (далее — МУ) определяют организацию и порядок проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней. 1.2. МУ предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы медицинскими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы и формы собственности.
2. Нормативные и методические документы
В настоящих методических указаниях использованы ссылки и положения следующих нормативных и методических документов:
Примечание.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: Федеральный закон N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» принят 30.03.1999, а не 03.03.1999.
2.1. Федеральный закон от 03.03.1999 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения». 2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 16.04.2012 N 317 «О лицензировании деятельности в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных (за исключением случая, если указанная деятельность осуществляется в медицинских целях) и генно-инженерно-модифицированных организмов III-IV степени потенциальной опасности, осуществляемой в замкнутых системах». 2.3. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 N 11 «О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера». 2.4. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 07.07.2009 N 415н «Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения». 2.5. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.03.2008 N 88 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней». 2.6. СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Примечание.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: «Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционной заболеваемости человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами» имеет номер СП 1.2.1318-03, а не СП 1.3.1318-03.
2.7. СП 1.3.1318-03 «Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами». 2.8. СП 1.3.2322-08 «Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 2.9. СП 1.3.2518-09 «Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней. Дополнения и изменения N 1 к СП 1.3.2322-08». 2.10. МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». 2.11. МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред».
Примечание.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: Методические указания «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза» имеет номер МУ 3.1.1.2438-09, а не МУ 3.1.2438-09.
2.12. МУ 3.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза». 2.13. МУК 4.2.2746-10 «Порядок применения молекулярно-генетических методов при обследовании очагов острых инфекций с групповой заболеваемостью». 2.14. СП 3.1.7.2615-10 «Профилактика иерсиниозов».
3. Перечень сокращений
БХ — бульон Хоттингера
ЗФР — забуференный физиологический раствор ИФА — иммуноферментный анализ
ЛПО — лечебно-профилактические организации МО — медицинские организации
ОРА — ориентировочная реакция агглютинации ПУС — полиуглеводная среда
ПК — пептонно-калиевая среда
ПЦР — полимеразная цепная реакция
РА — реакция агглютинации
РНГА — реакция непрямой гемагглютинации СанПиН — санитарные правила и нормы
СБТС — среда с бромтимоловым синим
СП — санитарно-эпидемиологические правила УСС — универсальный скошенный столбик
4. Общие положения
Yersinia pseudotuberculosis (возбудитель псевдотуберкулеза) и Yersinia enlerocolitica (возбудитель кишечного иерсиниоза) — энтеропатогенные иерсинии, относимые к возбудителям зооантропонозных инфекций. Заражение) Y. pseudotuberculosis происходит через инфицированные продукты питания (преимущественно овощи), Y. enierocolitica — чаше при употреблении в пищу молочных и мясных продуктов. Иерсиниозы широко распространены в мире. В ряде стран Европы кишечный иерсиниоз занимает третье место по заболеваемости среди кишечных инфекций, после кампилобактериоза и сальмонеллеза. Заболеваемость псевдотуберкулезом в Российской Федерации регистрируется практически повсеместно, преимущественно в виде вспышек, кишечным иерсиниозом — в виде спорадических случаев. Характеристика иерсиний
Род Yersinia включает группу грамотрицательных, не образующих спор, палочковидных (кокки или овоиды) факультативно-анаэробных микроорганизмов, относящихся к семейству Enterobacteriaceae. Среди 17 видов, входящих в род Yersinia, три отнесены к патогенным для человека и животных — возбудитель чумы Y. pestis, возбудитель псевдотуберкулеза Y. pseudotuberculosis и 11 представителей вида Y. enierocolitica патогенных биотипов 1В и 2-5. Y. enierocolitica биотипа 1А относят к непатогенным, однако они могут быть возбудителями оппортунистических инфекций. Также непатогенными являются 13 видов иерсиний: Y. aldovae, Y. bercovieri, Y. frederiksenii, Y. intermedia, Y. kristensenii, Y. mollaretii, Y. rohdei, Y. ruckeri, Y. aleksiciae, Y. similis, Y. massiliensis, Y. nurmii, Y. pekkanenii, Y. entomophaga. Основные биохимические свойства Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica и некоторых других представителей Enterobacteriaceae, которые используются в практической работе при первичном изучении выделенных культур, представлены в табл. 1 и 2. По О-антигену известен 21 серотип Y. pseudotuberculosis. Среди Y. enterocolitica различают 6 биотипов и 30 серотипов, из них 9 наиболее часто ассоциируются с заболеваниями человека: 0:3; 0:4; 0:5,27; 0:9; 0:8; 0:13; 0:18; 0:20; 0:21 (табл. 3). Антигенное родство (по О-антигену) Y. pseudotuberculosis и большинства серотипов Y. enterocolitica выражено слабо. Значительное сходство по антигенной структуре выявлено у Y. pseudotuberculosis серотипа 0:1 и Y. enterocolitica «американских» серотипов 0:8; 0:18 и 0:21.
Таблица 1
Основные дифференциальные признаки Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica и других представителей семейства Enterobacteriaceae
Признаки Y. pseudo- Y. entero- Shigella Salmonella Escherichia Proteus tuberculosis colitica spp. spp. spp. spp. 1 2 3 4 5 6 7 Рост на Окраска Малиновый Желтый, Желтый Желтый или Желтый Малиновый универсальном столбика по уколу черный + + газ скошенном среды черно-бурая газ столбике (УСC) полоска Окраска Малиновая Желтая Красная Красная Желтая Желтая или скошенной малиновая, поверхности верх среды черный Рост на Окраска Малиновый Малиновый Желтый Желтый или Желтый Малиновый трехсахарном столбика (через 20 ч. (через 20 ч. черный + + газ или черный агаре с среды Желтый) Желтый) газ мочевиной (среде И.С.Оль- Окраска Малиновая Малиновая Красная Красная Желтая Малиновая кеницкого) скошенной поверхности среды Рост на Окраска Малиновый со Малиновый со Желтый/ Желтый, Желтый, Малиновый, трехсахарном столбика дна пробирки дна пробирки зеленый + газ + газ + газ агаре с среды мочевиной (среде Окраска Сиреневая Сиреневая Сиреневая Сиреневая Желтый/ Сиреневая Ресселя I) скошенной зеленый поверхности среды Рост на Окраска Желтый Желтый, газ Желтый/ Желтый, Желтый, Желтый/ трехсахарном столбика Красный почернение +/- газ Красный, агаре с среды по уколу почернение сахарозой и по уколу маннитом (среде Окраска Малиновая Желтая Желтая Желтая/ Желтая/ Желтая/ Ресселя II) скошенной Красная Красная Красная поверхности среды Ферментация Сахароза - + - - x x углеводов Рамноза + - -/+ + +/- -/+ Раффиноза -/+ - -/+ - x -/+ Маннит + + +/- + + -/+ Сорбит - + -/+ + +/- - Наличие - + -/+ + x -/+
орнитиндекар- боксилазы
Утилизация — — — +/- — x цитрата
Дезаминирование — — — — — + фенилаланина
Реакция Фогис- — — — — — -/+ Проскауэра (37 +/- 1) °С
Примечание: «+» — положительная реакция; «-» — отрицательная реакция; «+/-» — большинство штаммов позитивно, но некоторые негативно; «-/+» — большинство культур негативно, некоторые штаммы позитивны; «х» — разные реакции.
Таблица 2
Основные биохимические свойства бактерий рода Yersinia (26 +/- 2) °С
Тест или субтрат Y. Y. Y. enterocolitica Y. Y. Y. Y. Y. Y. Y. Y. Y. Y. pestis pseudo- frede- inter- kris- ruc- aldo- roh- molla- berco- alek- simi- tuber- Биотипы rik- media ten- keri vae dei retti vieri siciae lis culosis senii senii I II III IV V 1А 1В 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Гидролиз мочевины - + + + + + + + [+] [+] [+] - [+] В [-] В + + Образование индола - - + + В - - - + + В - - - - - + - Подвижность (22 +/- 2) °С - + + + + + + + + + + В + + + + + + (22 +/- 2) °С (37 +/- 1) °С - - - - - - - - - - - - - - - - - - Реакция (26 +/- 2) °С - - + + + + + + + + - - + - - - - - Фогеса- Проскауэра (37 +/- 1) °С - - - - - - - - - - - - - - - - - Фенилаланиндезаминаза - - - - - - - - - - - - - - - - - - Орнитиндекарбоксилаза - - + + + + + В + + + + В [-] [+] [+] + - Лизиндекарбоксилаза - - - - - - - - - - - В - - - - + - Липаза (Твин-80) - - + + - - - - В В В В - - - - - - Цитрат Симмонса - - - - - - - - В + - + + - - - - - Гидролиз эскулина В + [+] - - - - - [+] + - - - - - [-] - +
Образование кислоты из:
D-ксилозы + + + + + + — В + + [+] — В В В + + +
мальтозы [+] + + + + + + + + + + + — — В + + +
мелибиозы [-] В — — — — — — — [+] — — — В — — — —
L-рамнозы — В — — — — — — + + — — — — — — — +
рафинозы — [-] — — — — — — В В — — — В — — — —
салицина В [-] + — — — — — + + [-] — — — [-] [-] — —
сахарозы — — + + + + + В + + — — [-] + + + — —
D-сорбитола В — + + + + + — + + + В В + + + + —
трегалозы + + + + + + + — + + + + [+] + + + + +
«+» — положительная реакция у 90% и более штаммов; «[+]» — положительная реакция у 76-89% штаммов; «В» — положительная реакция у 26-75% штаммов; «[-]» — положительная реакция у 11-25% штаммов; «-» — отрицательная реакция у 90% и более штаммов.
Таблица 3
Био- и серотипы Y. enterocolitica и их связь с патогенностью
Патогенные свойства Биотип Серотип
есть 1В О:8; О:4; О:13а; О:18; О:20; О:21; 2 О:9; О:5,27; 3 О:1,2,3; О:5,27; 4 О:3; 5 О:2,3 нет 1А О:5; О:6.30; О:6,31; О:7,8; О:10; О:13,7; О:14; О:16; О:19.8; О:22; О:36; О:41,42; О:41,43; О:46; О:63; О:64; О:65; О:66; О:72
Температурный фактор является одним из важнейших определяющих изменчивость микробов и устойчивость их во внешней среде. Оптимальная температура для жизнедеятельности иерсиний — 28-30 °С, однако они могут, хотя и гораздо медленнее, размножаться при температуре 4-1 °С. Достаточно долго иерсинии выживают на различных продуктах питания и даже могут на них размножаться (например, на овощах, особенно приготовленных в виде салатов). В молоке сохраняются до 18 суток, в сливочном масле — до 145 суток, на хлебе, кондитерских изделиях — от 16 до 24 суток. Иерсинии чувствительны к высокой температуре; при 100 °С погибают в течение нескольких секунд, однако при температуре 50-60 °С способны выживать до 20-30 мин., переносят большие (до 10%) концентрации раствора натрия хлорида, особенно при низких температурах. На микробы губительно действует прямая солнечная радиация, чувствительны иерсинии и к высыханию. Во влажной среде и невысокой температуре (14-18 °С) выживают длительно. Кислотность среды (при уровнях рН 3,6-4,0) также губительна для иерсиний. В дезинфицирующих растворах в стандартных разведениях микробы Yersinia погибают в течение 5-10 мин. Раствор перманганата калия в концентрации 0,5-0,3% вызывает гибель бактерий через 3 мин. Патогенные Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica обладают широким набором факторов патогенности, детерминируемых хромосомными и плазмидными генами. Способность Y. pseudotuberculosis к адгезии и инвазии в клетки эпителия кишечника зависит от экспрессии хромосомного inv-гена, кодирующего синтез белка наружной мембраны инвазина с молекулярной массой 108 кДа. Диссеминация микроба в организме хозяина связана с функционированием группы хромосомных генов, ответственных за ассимиляцию ионов железа («остров высокой патогенности», HPI). Штаммы Y. pseudotuberculosis, содержащие HPI, редко выделяются в России (3,9%), в основном они циркулируют в Европе, Австралии, Северной Америке. Важным фактором патогенности Y. pseudotuberculosis является синтез суперантигена (YPM), ответственного за поликлональную активацию Т-лимфоцитов и гиперпродукцию провоспалительных цитокинов. Клинически это выражается развитием синдрома токсического шока. У 98% штаммов этого вида, выделенных от больных в России, Японии, Корее, обнаруживается суперантиген, вызывающий системное поражение органов и тканей. Патогенные Y. enterocolitica также имеют факторы патогенности, обеспечивающие им адгезивные и инвазивные свойства (ген ail). Гены НРI не выявляются у непатогенных Y. enterocolitica биотипа 1А и у низкопатогенных штаммов биотипов 2-5, но они определяются у всех высокопатогенных штаммов биотипа 1В. Энтеротоксигенность Y. enterocolitica биотипов 1В и 2-5 связана с экспрессией хромосомного гена ystA. У непатогенных представителей биотипа 1А обнаружен ген ystB. Плазмидой вирулентности иерсиний pYV 42-48 MDa обладают все штаммы Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica 1В, 2-5 биотипов. Основная функция плазмиды pYV — нейтрализация факторов иммунитета макроорганизма. Плазмида с молекулярной массой 82 MDa (pVM) обнаружена только у Y. pseudotuberculosis 1 серотипа. Штаммы, имеющие плазмиду pVM, вызывают более тяжелое течение псевдотуберкулеза.
5. Порядок организации и проведения лабораторных исследований на иерсиниозы для лабораторий территориального уровня
5.1. Рекомендованный порядок организации и проведения лабораторных исследований на иерсиниозы в материале от людей в лабораториях лечебно-профилактических организаций
5.1.1. Требования к лабораториям, осуществляющим исследования на иерсиниозы Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов. Лаборатории, которые осуществляют исследования на иерсиниозы, должны иметь разрешительные документы на этот вид деятельности согласно действующему законодательству. Проведение исследований на всех этапах: взятие проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов должны соответствовать требованиям действующих нормативных и методических документов. Обеззараживание отходов должно осуществляться в соответствии с действующими нормативными и методическими документами по обращению с медицинскими отходами. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, участвующим в выполнении исследований на иерсиниозы. Исследования на иерсиниозы могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским образованием, имеющие допуск к работе с ПБА III-IV групп патогенности на основании приказа руководителя учреждения, окончившие курсы по специальности «Бактериология», знающие правила работы с ПБА III-IV группы патогенности. Специалисты должны проходить профессиональную переподготовку не реже одного раза в пять лет. Лица, имеющие высшее (среднее) медицинское образование должны иметь сертификат специалиста («Бактериология»/»Лабораторное дело»). Инженерно-технический персонал, дезинфекторы и санитарки проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями. Необходимый уровень подготовки специалистов лабораторий представлен в прилож. 1. Требования к знаниям и умениям специалистов лабораторий приведены в прилож. 2. Требования к обеспечению безопасности работы персонала. Каждая бактериологическая лаборатория должна иметь пакет нормативно-методической документации и инструкций, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале. Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III-IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими нормативными документами. Порядок организации внутреннего и внешнего контроля качества лабораторных исследований. Контроль качества исследований на иерсиниозы в лабораториях включает: — контроль качества питательных сред, диагностических препаратов и тест-систем, дезинфицирующих средств и химических реактивов; — своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования; — контроль качества стерилизации лабораторной посуды; — контроль работы паровых и суховоздушных стерилизаторов; — контроль температурного режима работы холодильников и термостатов; — контроль работы бактерицидных ламп;
— проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности; — проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроля смывов с поверхностей и оборудования. Результаты контроля фиксируют в специальных журналах, формулярах или других учетных документах. Внешний контроль качества лабораторных исследований включает: — участие в межлабораторных сличительных испытаниях (МСИ); — участие в Федеральной системе внешней оценки качества (ФСВОК); — приобретение шифрованных образцов для идентификации иерсиний. Правила ведения документации.
Ведение лабораторной документации, включая состояние регистрационных и рабочих журналов, осуществляют ежедневно в соответствии с требованиями действующих нормативных и методических документов. Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения исследований на иерсиниозы Для проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях должны быть в наличии: — питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 3 к МУ); — диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 4 к МУ); — химические реактивы (прилож. 5 к МУ); — приборы и оборудование (прилож. 6 к МУ); 5.1.2. Номенклатура и объем исследований В лабораториях МО проводят:
— диагностические исследования материала от госпитализированных в стационар и амбулаторных больных с целью дифференциальной диагностики и установления этиологии заболевания при спорадической и вспышечной заболеваемости; — исследования патологоанатомического материала. В лабораториях МО проводят исследования материала в следующем объеме: 1) посев на среды накопления, «холодовое обогащение» с периодическими высевами на дифференциально-диагностические среды, отсев характерных по морфологическим свойствам колоний иерсиний на ПУС; 2) идентификация и дифференциация выделенных культур до вида по морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам, в том числе с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» и др.) при наличии оборудования и тест-систем; 3) выявление антител в парных сыворотках (РА, РНГА, ИФА); 4) экспрессные методы исследования (ПЦР) — при наличии оборудования. 5.1.3. Порядок лабораторных исследований на иерсиниозы 5.1.3.1. Правила отбора и транспортирования проб клинического материала. При проведении бактериологического анализа на иерсиниозы исследуется клинический материал: испражнения, моча, кровь, мазки из зева, операционный или секционный материал: аппендицикулярные отростки, мезентериальные лимфоузлы и патологически измененные органы и ткани, сгустки крови, желчь, содержимое кишечника. Материал от больного (подозрительного на заболевание) отбирает медицинский персонал МО немедленно при выявлении больного (подозрительного на заболевание) до начала лечения антибиотиками. При совместном использовании бактериологического и ПЦР методов отбор материала осуществляется в одноразовую посуду. Правила отбора материала от больных (подозрительных на заболевание): — испражнения <> берут на протяжении всего периода заболевания в количестве 0,5-1,0 г стерильной ложечкой из судна и помещают в стерильный широкогорлый флакон с 5,0-10,0 мл среды накопления;
<> Высеваемость иерсиний наиболее высока в первые 3-5 дней болезни и до назначения антибиотиков, результаты бактериологического исследования улучшаются, если взятие материала производится 3-кратно в течение первой недели болезни (госпитализации).
- мочу исследуют в первые 7 дней болезни, берут 20-30 мл средней порции утренней мочи в стерильную посуду. Осадок после центрифугирования помещают в 5,0 мл среды накопления;
- смыв из зева берут в первые 3 дня болезни натощак с задней стенки глотки и корня языка тампоном, смоченном в физиологическом растворе и помещают в 5,0 мл среды накопления;
- кровь исследуют в течение болезни на высоте лихорадки, весь лихорадочный период и в период рецидива болезни. Кровь забирают натощак в количестве 5-10 мл из локтевой вены с соблюдением правил асептики, выдерживают при комнатной температуре в наклонном положении (под углом 30-45°) до образования сгустка (30-40 мин.), после чего сгусток отделяют от стенки, сыворотку переносят в пробирку для серологических реакций, а сгусток помещают в 5,0 мл среды накопления. Правила отбора операционного или секционного материала:
- Аппендикулярный отросток. Стерильно ножницами измельчают 1,0-2,0 г пробы и помещают в 5,0-10,0 мл среды накопления.
- Мезентериальные лимфоузлы, другие органы и ткани. Стерильно ножницами измельчают 1.0-2,0 г пробы и помещают в 5,0-10,0 мл среды накопления.
- Желчь. В 5,0 мл среды накопления помещают 0,5-1,0 мл.
- Содержимое кишечника. В 5,0 мл среды накопления помещают 0,5-1,0 мл.
- Сгусток крови. Стерильно измельчают 0,5-1,0 мл пробы и помещают в 5,0 мл среды накопления. Пробы этикетируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией, заполняют бланк направления и помещают в контейнер для транспортирования биологического материала на исследование. Транспортирование материала в лабораторию осуществляется при температуре (4-12) °С в течение двух часов после взятия.
I этап исследования
(пробоподготовка и посев нативного материала)
Проводят «холодовое обогащение» исследуемого материала: внесенный в среду ПК, в ЗФР или 1%-ю пептонную воду (среды накопления) материал помещают в холодильник (6 +/- 2) °С и выдерживают в нем до первого положительного высева на 2-3, 5-7 или 10-15 сутки. Постановка ускоренных методов исследования нативного материала: ПЦР или ИФА для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза 1 серотипа <>. При получении положительного результата выдают предварительный положительный ответ.
<> Производственный выпуск «Тест-системы иммуиоферментной для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза 1 серотипа» будет осуществляться в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера с 2012 г.
II этап исследования
(на 2-3 сутки от начала исследования)
Проводят высев со сред накопления (2-3 сутки «холодового обогащения») на плотные дифференциально-диагностические среды (СБТС, Эндо) или другие коммерческие дифференциальные среды для диагностики иерсиниозов, разрешенные к применению на территории Российской Федерации (среда Мак-Конки и др.) — петлей из верхней трети слоя среды (но не с поверхности!), не взбалтывая пробирки (!). Для инактивации посторонней микрофлоры перед каждым высевом на плотную питательную среду проводят щелочную обработку материала 0,72%-м раствором гидроксида калия в 0,5%-м растворе хлорида натрия (30-60 с) или 5%-м раствором тринатрий фосфата. Посевы инкубируют при (26 +/- 2) °С 48 ч. (на среде СБТС) или (на среде Эндо) 24 ч. (не более 30 ч.!). Ускоренные методы исследования материала из сред накопления (2-3-и сутки «холодового обогащения»): ПЦР или ИФА для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза 1 серотипа. При получении положительного результата выдают подтверждение предварительного положительного ответа и продолжают бактериологическое исследование пробы до выделения культуры. При отрицательных результатах ПЦР на этапах I-II дальнейшее бактериологическое исследование пробы прекращают.
III этап исследования
(4-5-е сутки от начала исследования)
Просмотр посевов на дифференциально-диагностических средах, засеянных на этапе II исследования, и учет морфологии колоний. Проводят отбор характерных для Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica колоний на дифференциальную среду с мочевиной (среду Олькеницкого, УСС или среды Ресселя I и II) <> и той же колонии — на скошенные столбики (или сектора) МПА (АХ) для накопления бактериальной массы. Посевы инкубируют на средах Олькеницкого, УСС, Ресселя I при (37 +/- 1) °С, на МПА (АХ), среде Ресселя II — при (26 +/- 2) °С. При наличии сложности отбора колонии на две среды возможен первичный отбор колоний на среды с мочевиной с последующим пересевом уреазоположительных культур на МПА (АХ), среду Рессель II.
<> Прописи сред и способ приготовления представлены в прилож. 8.
IV этап исследования
(5-6-е сутки от начала исследования)
Проводят идентификацию и дифференциацию уреазоположительных культур из пробирки (или чашки) с МПА, засеянных на этапе II исследования (2-3 сутки «холодового обогащения»): — микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — тест на цитохромоксидазу;
— ферментативная активность на средах Гисса <> (26 +/- 2) °С: маннитол, сахароза, рамноза, раффиноза, сорбитол, мелибиоза, салицин, ксилоза;
<> При использовании сред Ресселя I и II проводят постановку следующих биохимических тестов — сахароза, рамноза, раффиноза, салицин, ксилоза, сорбит, индол.
- реакция Фогеса-Проскауэра (среда Кларка) при (20 +/- 2) °С и (37 +/- 1) °С;
- декарбоксилирование орнитина (среда Биргера-Крушинской) при (37 +/- 1) °С;
- утилизация цитрата (среда Симмонса) при (37 +/- 1) °С;
- дезаминирование фенилаланина (агар с фенилаланином) при (37 +/- 1) °С;
- образование индола (0,3% полужидкий агар) при (20 +/- 2) °С и (37 +/- 1) °C;
- проба с псевдотуберкулезным фагом (агар Хоттингера, МПА) при (26 +/- 2) °С;
- постановка ОРА на стекле с псевдотуберкулезной и иерсиниозной сыворотками — культуры с МПА (АХ), среды Ресселя II;
- идентификация возбудителя с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» или аналоги) — при наличии оборудования и тест-систем.
V этап исследования
(5-7-е сутки от начала исследования)
Проводят высев со сред накопления (5-7-е сутки «холодового обогащения») на плотные дифференциально-диагностические среды после предварительной щелочной обработки. Проводят учет результатов биохимической идентификации и дифференциации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, проведенных на IV этапе исследования (2-3-и сутки «холодового обогащения»), определяют биотип Y. enterocolitica. Проводят реакцию агглютинации на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям. Выдача окончательного положительного ответа.
VI этап исследования
(7-8-е сутки от начала исследования)
Просмотр посевов на дифференциально-диагностических средах, засеянных на V этапе исследования (5-7-е сутки «холодового обогащения»). Проводят отбор характерных для Y. pseudotuberculosis и) Y. Enterocolitica колоний на дифференциальную среду с мочевиной (среду Олькеницкого, УСС или среды Ресселя I и II) и МПА (АХ).
VII этап исследования
(8-10-е сутки от начала исследования)
Проводят идентификацию и дифференциацию уреазоположительных культур, засеянных на VI этапе исследования (5-7-е сутки «холодового обогащения») по тестам, предусмотренным на IV этапе исследования.
VIII этап исследования
(9-11-е сутки от начала исследования)
Проводят учет результатов биохимической идентификации и дифференциации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, проведенных на VII этапе исследования (5-7-е сутки «холодового обогащения»), определяют биотип Y. enterocolitica. Проводят реакцию агглютинации на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям. Выдача окончательного положительного ответа.
IX этап исследования
(10-е сутки от начала исследования)
Проводят высев со сред накопления на дифференциально-диагностические среды после предварительной щелочной обработки (10-е сутки «холодового обогащения»).
X этап исследования
(12-е сутки от начала исследования)
Просмотр посевов на дифференциально-диагностических средах, засеянных на IХ-м этапе исследования (10-е сутки «холодового обогащения»), отбор характерных для Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica колоний на дифференциальную среду с мочевиной (среду Олькеницкого, УСС или среды Ресселя I и II) и агар МПА (АХ).
XI этап исследования
(13-е сутки от начала исследования)
Проводят идентификацию и дифференциацию уреазоположительного изолята, засеянного на Х-м этапе исследования (10-е сутки «холодового обогащения»), по набору биохимических тестов, предусмотренных на IV-м этапе исследования.
XII этап исследования
(14-е сутки от начала исследования)
Проводят учет результатов биохимической идентификации и дифференциации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, проведенных на XI-м этапе исследования (10-е сутки «холодового обогащения»). Выдача окончательного положительного ответа.
Передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в специализированную лабораторию возможна на любом этапе исследования. 5.1.3.2. Полимеразная цепная реакция.
Для выявления ДНК иерсиний используют наборы для ПЦР, зарегистрированные в установленном порядке. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению. Материал для исследования отбирается в одноразовую пробирку (или контейнер) в соответствии с п. 5.1.3.1 в среду накопления ЗФР (рН 7,2-7,4). Наиболее информативным для ПЦР являются испражнения и кровь в период лихорадки. Материал забирается немедленно при выявлении больного и до назначения антибиотиков (!). Исследование проб проводят в первые сутки их получения и на 2-3 сутки после «холодового обогащения» в ЗФР. Непосредственно перед исследованием проводят пробоподготовку материала, используя набор для выделения ДНК. При использовании этих методов при пробоподготовке получают препарат суммарной ДНК всех содержащихся в пробе микроорганизмов, что может вызвать ингибирование ПЦР и снижение ее чувствительности. Разработан способ подготовки проб, основанный на использовании щелочной обработки материала, при котором большая часть индигенной микрофлоры погибает и удаляется как супернатант при центрифугировании, а относительно устойчивые к щелочи иерсинии выживают (патент от 27.07.2000 N 2153671): 1. Исследуемый материал (нативный) центрифугируют при 500-1000 об./мин. 1,5-2,0 мин. для осаждения грубых частиц или отстаивают 2-3 ч. при комнатной температуре. 2. Переносят 0,2-0,5 мл верхней фазы (в том числе, после «холодового обогащения» в течение 2-3 суток) в лунки полистиролового планшета для серологических реакций и смешивают с 0.72% КОН в таком же объеме. 3. После 30-60 с. экспозиции проводят посев материала на дифференциально-диагностические среды и сразу же в лунки планшета добавляют 0,2-0,5 мл БХ для прекращения действия щелочи как селективного агента. 4. Материал из лунки переносят в пробирку типа «Эппендорф» и центрифугируют на микроцентрифуге при 10000-12000 об./мин. 3-5 мин. 5. Надосадочную жидкость удаляют, осадок дважды промывают дистиллированной водой путем центрифугирования. 6. К осадку добавляют 20 мкл деионизованной воды, прогревают 10 мин. при 100 °С, центрифугируют при 12000 об./мин. 2 мин. Для ПЦР используют 1-3 мкл надосадочной жидкости. 5.1.3.3. Иммунологические методы выявления специфических антигенов. Для выявления антигенов иерсиний используют тест-систему иммуноферментную для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серотипа. Материал для исследования, сроки и правила его взятия аналогичны п. 5.1.3.1. Исследование проб проводят в первые сутки их получения и затем на 3-5-е сутки после «холодового обогащения» в среде ПК. Непосредственно перед исследованием материал инактивируют 30 мин. при (56 +/- 1) °С, центрифугируют при 3000 об./мин. и берут для исследования надосадочную жидкость. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению. 5.1.3.4. Серологическое исследование на иерсиниозы. Для исследования требуется две пробы крови, взятые в разные периоды заболевания (парные сыворотки!): 1-я неделя начала заболевания и конец 2-й, начало 3-й недели болезни. Серологическая диагностика основывается на появлении или нарастании титра антител в течение болезни. Достоверным считается 2-4-кратное и выше нарастание титра антител при исследовании парных сывороток. Реакция агглютинации (РА). Для постановки РА используют стандартные иерсиниозные антигены распространенных серотипов, представляющие собой 10 млрд взвесь иерсиний эталонных штаммов в S-форме, убитых формалином и суспендированных в 0,9%-м растворе хлорида натрия. Перед постановкой микробную взвесь разводят в 10 раз до рабочей концентрации 1 млрд/мл. Реакцию ставят методом равных объемов (0,5 мл сыворотки + 0,5 мл взвеси). Диагностический титр — 1:160. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Для постановки РНГА используют коммерческие эритроцитарные диагностикумы к Y. pseudotuberculosis I серотипа и Y. enterocolitica серотипов О:3 и О:9, представляющие собой полисахаридные антигены иерсиний, фиксированные на поверхности формалинизированных бараньих эритроцитов. Методика постановки и учета РНГА приведена в инструкции по применению. При постановке РНГА с псевдотуберкулезным диагностикумом диагностический титр равен 1:100, кишечноиерсиниозными — 1:200. Для повышения диагностической эффективности РНГА и исключения ложноположительных результатов рекомендуется соблюдать следующие правила при постановке: 1. Непосредственно перед постановкой РНГА чистые полистироловые пластины ополаскивают дистиллированной водой, а затем высушивают. 2. Накануне постановки РНГА эритроцитарный диагностикум разводят 10 мл ЗФР (рН 7,2) и помешают в холодильник на ночь (для регидратации эритроцитов). Диагностикум, используемый сразу после разведения, часто дает нечеткий результат. 3. Исследуемые сыворотки крови, разведенные ЗФР в соотношении 1:25, необходимо прогреть при 56 °С в течение 30 мин. для устранения неспецифических гемагглютининов, которые могут содержаться в сыворотках крови людей. 4. Поскольку некоторые сыворотки крови человека содержат антитела к эритроцитам барана (последние используются для конструирования коммерческого диагностикума), рекомендуется предварительно перед использованием провести адсорбцию каждой сыворотки 50%-й взвесью бараньих эритроцитов (0,1 мл на 1 мл сыворотки) в течение ночи при температуре холодильника. Иммуноферментный анализ (ИФА). Для постановки ИФА используют тест-системы «Иерсиниоз-ИФА-IgA», «Иерсиниоз-ИФА-IgM», «Иерсиниоз-ИФА-IgG», предназначенные для выявления антител классов A, M и G к возбудителям кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению. 5.1.4. Регистрация и оформление результатов исследования Данные о проведении исследований (испытаний) регистрируются в учетной документации, включающей: — направления на проведение исследований; — журналы регистрации образцов, поступивших на исследование; — журналы регистрации результатов исследований. Результаты каждого исследования (испытания) оформляются по унифицированным формам.
5.2. Порядок организации и проведения лабораторных исследований на иерсиниозы в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации
5.2.1. Требования к лабораториям филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации, осуществляющим исследования на иерсиниозы Согласно п. 5.1.1.
5.2.2. Номенклатура и объем исследований Микробиологические лаборатории филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации при проведении эпидемиологического надзора в соответствии с требованиями СП 3.1.2615-10 «Профилактика иерсиниозов» осуществляют в плановом порядке: — исследование проб с эпидемически значимых объектов («объекты риска»): смывы с оборудования, инвентаря, овощей, пищевых продуктов в овощехранилищах, мясо- и молокоперерабатывающих предприятиях, объектах торговли продуктами растительного происхождения, пищеблоках объектов общественного питания, общеобразовательных учреждениях, детских и медицинских организациях; — исследования продуктов животноводства, птицеводства, плодоовощной продукции в разрезе Программы производственного контроля (по согласованию); — лабораторные исследования материала от больных (подозрительных на заболевание) — осуществляются по согласованию. По эпидпоказаниям исследованию подлежат: — материал от людей, находящихся в одинаковых с больными условиях по риску заражения, в эпидемических очагах при проведении эпидемиологического расследования и санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий; — в эпидемических очагах иерсиниозов или при неблагополучной эпидемиологической ситуации: смывы с овощей, фруктов и других продуктов, не подвергающихся термической обработке; смывы с поверхности оборудования, инвентаря и тары в овощехранилищах, пищеблоках организованных коллективов, домашних очагах; остатки подозреваемых пищевых продуктов (салаты, сок домашнего приготовления, фляжное молоко, творог домашнего приготовления, сырое свиное мясо, субпродукты и т.д.); экскременты домашних и сельскохозяйственных животных, смывы с их подстилок: помет мелких млекопитающих;
вода открытых водоемов и из емкостей для хранения. В лабораториях филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации проводят диагностические исследования материала в следующем объеме: 1) посев на среды накопления, «холодовое обогащение» с периодическими высевами на дифференциально-диагностические среды, отсев характерных по морфологическим свойствам колоний иерсиний на ПУС; 2) идентификация и дифференциация выделенных культур до вида возбудителя по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам; 3) выявление антител в парных сыворотках (РНГА, ИФА). 5.2.3. Порядок лабораторных исследований на иерсиниозы в филиалах (отделениях) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации 5.2.3.1. Правила отбора и транспортирования проб из объектов окружающей среды. Отбор проб и доставку осуществляют специалисты, владеющие методами отбора проб из объектов окружающей среды филиалов (отделений) ФБУЗ «ЦГиЭ». — Пищевые продукты. В стерильную емкость помещают 25 г каждого продукта. — Овощи. Одним влажным стерильным тампоном делают смыв не менее чем 10 экз. каждого вида овощей на границе здоровой и загнивающей части, помещают тампон в 5,0-10,0 мл среды накопления. — Смывы с оборудования, инвентаря, тары. Одним влажным тампоном производят смыв с одноименных поверхностей площадью 100 кв. см каждая, тампон помещают в 5,0-10,0 мл среды накопления. — Вода из емкостей для хранения и открытых водоемов. В стерильные флаконы забирают 1-2 л воды. — Помет. Собирают стерильной палочкой 1-2 г и помещают в 5,0 мл среды накопления. Пробы маркируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией, заполняют бланк-направление и помещают в контейнер для транспортирования материала для исследования. Транспортирование осуществляют при температуре 4-12 °С в течение двух часов после забора. 5.2.3.2. Правила отбора и транспортирования проб от больных (подозрительных на заболевание) и лиц, находящихся с ними в одинаковых условиях по риску заражения. Материал от больных (подозрительных на заболевание) и лиц, находящихся с ними в одинаковых условиях по риску заражения, забирает медицинский персонал МО немедленно при выявлении больного, до начала лечения антибиотиками. Пробы маркируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией и вместе с бланком-направлением транспортируют при 4-12 °С в лабораторию МО или филиал (отделение) ФБУЗ «ЦГиЭ» (по договоренности) в течение двух часов после забора. Взятие материала осуществляют согласно п. 5.1.3.1. 5.2.3.3. Порядок проведения лабораторного исследования на иерсиниозы объектов окружающей среды и материала от людей. Исследование проб объектов окружающей среды, исследование клинического материала на иерсиниозы, видопринадлежность выделенных культур осуществляют в соответствии с п. 5.1.3. 5.2.4. Регистрация и оформление результатов исследования Регистрация результатов анализа производится по учетным формам филиалов (отделений) ФБУЗ «ЦГиЭ» согласно п. 5.1.4. 5.2.5. Порядок передачи информации и выделенных культур лабораториями филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации Информация о выделенных штаммах Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica в лабораториях филиалов (отделений) ФБУЗ «ЦГиЭ» от людей и объектов окружающей среды передается в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации. Культуры Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica направляются в лаборатории ФБУЗ «ЦГиЭ» в субъекте Российской Федерации. Передача и транспортирование осуществляются в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру в одном экземпляре (прилож. 7 к МУ), сопроводительное письмо, акт передачи живых культур.
5.3. Порядок организации и проведения лабораторных исследований на иерсиниозы в лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
5.3.1. Требования к лабораториям ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации Согласно п. 5.1.1.
5.3.2. Номенклатура и объем исследований Микробиологические лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации проводят в плановом порядке: — исследования проб с эпидемиологически значимых объектов «объектов риска» (смывы с оборудования, инвентаря, овощей, пищевых продуктов в овощехранилищах, мясо- и молокоперерабатывающих предприятиях, объектах торговли продуктами растительного происхождения, пищеблоках объектов общественного питания, общеобразовательных учреждениях, детских и медицинских организациях); — исследования продуктов животноводства, птицеводства, плодоовощной продукции в разрезе Программы производственного контроля (по согласованию); — исследования материала от больных (подозрительных на заболевание) (по согласованию); — подтверждение и идентификацию культур иерсиний, выделенных лабораториями МО и филиалами (отделениями) ФБУЗ «ЦГиЭ» по морфологическим, культурально-биохимическим и серологическим свойствам. По эпидпоказаниям исследованию подлежат: — материал от людей, находящихся в одинаковых с больными условиях по риску заражения, в эпидемических очагах при проведении санитарно-противоэпидемических мероприятий; — смывы с овощей, фруктов и других продуктов, не подвергающихся термической обработке; — смывы с поверхности оборудования, инвентаря и тары в овощехранилищах, пищеблоках организованных коллективов, домашних очагах; — остатки подозреваемых пищевых продуктов (салаты, сок домашнего приготовления, фляжное молоко, творог домашнего приготовления, сырое свиное мясо, субпродукты и т.д.); — экскременты домашних и сельскохозяйственных животных, смывы с их подстилок; — помет мелких млекопитающих;
— вода открытых водоемов и из емкостей для хранения; — исследование проб, собранных в ходе эпизоотологического обследования (тонкий кишечник мелких млекопитающих и птиц, брыжейка и мезентеральные лимфоузлы, гнезда грызунов, почва). В лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации проводят исследования материала в следующем объеме: 1) посев на среды накопления, «холодовое обогащение» с периодическими высевами на дифференциально-диагностические среды, отсев характерных для иерсиний колоний на ПУС с одновременным выполнением экспресс-методов диагностики иерсиниозов (ПЦР, Real-time ПЦР); 2) идентификация и дифференциация выделенных культур до вида по морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам, в том числе с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2». «Mini API». «Микроб-2», «Микроб-Автомат» или аналоги) при наличии оборудования и тест-систем; 3) индикация и идентификация культур иерсиний с использованием ПЦР, Real-time ПЦР; 4) выявление антител в парных сыворотках (РНГА, ИФА, РА). 5.3.3. Порядок лабораторных исследований на иерсиниозы в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации 5.3.3.1. Правила отбора и транспортирования проб из объектов окружающей среды. Отбор и транспортирование материала осуществляют согласно п. 5.2.3.1. 5.3.3.2. Правила отбора и транспортирования клинического материала. Отбор и транспортирование материала осуществляют согласно пп. 5.1.3.1 и 5.2.3.2. 5.3.3.3. Правила отбора проб материала от животных, собранных при обследовании природных или антропоургических очагов иерсиниозов. Материал, собранный в ходе обследования природных и антропургических очагов, должен быть свежим, поэтому органы животных следует забирать в максимально короткие сроки или соблюдать низкотемпературный режим для транспортировки и хранения полевого материала. Лабораторному исследованию подвергают: тонкий кишечник мелких млекопитающих, птиц, сельскохозяйственных и домашних животных, субстрат гнезд грызунов: — Тонкий кишечник. 1,0-2,0 г в месте перехода тонкой кишки в толстую с содержимым забирают стерильно и помещают в 5,0 мл среды накопления. — Брыжейка, мезентеральные лимфоузлы. 1,0-2,0 г стерильно измельчают, 1 мл суспензии помещают в 5,0 мл среды накопления. — Гнезда грызунов. Субстраты гнезд (примерно 10 г каждого) растирают в ступке пестиком с фосфатно-буферным раствором, 1,5 мл взвеси вносят в 15,0 мл среды накопления. 5.3.3.4. Порядок проведения лабораторного исследования на иерсиниозы объектов окружающей среды, материала от людей, полевого материала, выделенных культур. Исследование материала от людей с диагностической целью и по эпидпоказаниям, проб из объектов окружающей среды по эпидпоказаниям проводят в соответствии с п. 5.1.3. При осуществлении планового эпизоотологического мониторинга за природными очагами иерсиниозов высевы со сред накопления рекомендуется проводить до 21 суток. Идентификация выделенной культуры проводится по следующим тестам: — характерная морфология колоний;
— типичные биохимические свойства;
— чувствительность к псевдотуберкулезному фагу; — серологическое типирование с использованием диагностических сывороток к Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica; — биотипирование Y. enterocolitica по набору тестов (ферментация салицина, липазная активность, образование индола, ферментация ксилозы, нитратредуктазная активность, реакция Фогес-Проскауэра); — определение вирулентности иерсиний по фенотипическим признакам (тест на аутоагглютинацию, определение кальцийзависимости роста иерсиний); — РА на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям. 5.3.4. Регистрация и оформление результатов исследования Регистрация результатов анализа производится по учетным формам ФБУЗ «ЦГиЭ» согласно п. 5.1.4. 5.3.5. Порядок передачи информации и выделенных культур лабораториями ФБУЗ «Центр гигиены эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности Информация о выделенных или идентифицированных культурах Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica передается в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности. Культуры иерсиний, выделенных от людей, мелких млекопитающих и объектов окружающей среды, и идентифицированные в лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации передаются в установленном порядке в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов II-IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру, сопроводительное письмо и акт передачи патогенных биологических агентов III-IV групп за пределы организации.
6. Порядок организации и проведения исследований на иерсиниозы для лабораторий регионального уровня
6.1. Порядок организации и проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности в федеральных округах
6.1.1. Требования к лабораториям Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности Согласно п. 5.1.1.
6.1.2. Номенклатура и объем исследования Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности проводят: — верификацию культур иерсиний и их расширенную идентификацию; — диагностические исследования материала от больных и объектов окружающей среды — в случае отсутствия диагностических возможностей на местах, трудности дифференциальной диагностики, наличия тяжелых и атипичных форм инфекции и т.д.; — исследование проб, собранных в ходе эпизоотологического обследования природных и антропургических очагов иерсиниозов; — контроль качества питательных сред.
Лаборатории Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности проводят исследования в следующем объеме: — идентификация культур, доставленных (определение биотипа, серотипа возбудителя, определение вирулентности культуры по фенотипическим признакам); — индикация и идентификация культур иерсиний при использовании ПЦР, Real-time ПЦР; — посев на среды накопления с одновременным выполнением экспресс-методов диагностики (ПЦР, Real-time ПЦР); — высев со сред накопления на дифференциально-диагностические среды, отсев подозрительных колоний для последующей родовой и видовой дифференциации; — идентификация возбудителя с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» или аналоги) при наличии оборудования. 6.1.3. Организация и обеспечение исследований на иерсиниозы в лабораториях Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности Порядок исследований клинического материала, проб из объектов окружающей среды, грызунов, птиц, материала от сельскохозяйственных и домашних животных проводят в соответствии с п. 5.1.3. К подтверждающим тестам относительно Y. pseudotuberculosis/Y. enterocolitica относятся: — характерная морфология колоний;
— типичные биохимические свойства;
— чувствительность к псевдотуберкулезному бактериофагу: — серологическое типирование с использованием диагностических сывороток к Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis; — биотипирование Y. enterocolitica по набору тестов (ферментация салицина, ксилозы, образование индола, редукция нитратов, реакция Фогес-Проскауэра); — тест на аутоагглютинацию, определение кальцийзависимости роста иерсиний, определение температурозависимой морфологии колоний; РА на стекле для выявления вирулентных иерсиний с СВИ; — определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом; — определение видоспецифических ДНК-мишений методом ПЦР. 6.1.4. Регистрация и оформление результатов исследования Регистрация результатов исследования оформляется согласно п. 5.1.4. 6.1.5. Порядок передачи информации и выделенных культур лабораториями Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности в Референс-центры Информация о выделенных и идентифицированных культурах Y. pseudotuberculosis и патогенных Y. enterocolitica передается в Референс-центр по мониторингу за возбудителями иерсиниозов (ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» Роспотребнадзора) и Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекций (ФКУЗ «Иркутский НИПЧИ Сибири и Дальнего Востока» Роспотребнадзора). При невозможности проведения диагностических исследований для установления причинно-следственной связи при работе в эпидемическом очаге, верификации и расширенной идентификации культур в Региональном центре по мониторингу за возбудителями II-IV групп патогенности лабораторные исследования (пп. 6.1.2 и 6.1.3) проводятся в других Региональных центрах по мониторингу за возбудителями II-IV групп патогенности по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам (Региональные опорные базы-консультантов). Лаборатории данных центров должны соответствовать требованиям, изложенным в п. 5.1.1. Культуры Y. pseudotuberculosis и патогенных Y. enterocolitica от людей, грызунов и объектов окружающей среды, идентифицированные в лабораториях ФБУЗ «ЦГиЭ» в субъекте РФ, Региональных центрах по мониторингу возбудителей II-IV групп патогенности и в Региональных опорных базах — консультантов в федеральных округах передаются в установленном порядке в Референс-центр по иерсиниозам, а для территорий Сибирского и Дальневосточного федеральных округов — в Референс-центр по природно-очаговым инфекционным болезням. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов II-IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру (прилож. 7 к МУ), сопроводительное письмо и акт передачи патогенных биологических агентов III-IV групп за пределы организации.
7. Порядок организации и проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях федерального уровня (Референс-центр по мониторингу за иерсиниозами, Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных болезней)
7.1. Требования к лабораториям Референс-центра по мониторингу за иерсиниозами и Референс-центра по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных болезней
Согласно п. 5.1.1.
7.2. Номенклатура и объем исследований
Диагностические лаборатории Референс-центров проводят: — расширенную идентификацию и изучение биологических, биохимических, молекулярно-генетических характеристик иерсиний, в том числе культур с атипичными свойствами; — проводят генотипирование иерсиний современными методами; — проводят исследования клинического материала, проб из объектов окружающей среды и проб полевого материала — на договорной основе; — оказывают консультативно-методическую помощь по проведению лабораторных исследований на иерсиниозы организациям Роспотребнадзора и здравоохранения в субъектах Российской Федерации; — обеспечивают повышение профессиональной подготовки специалистов лабораторного звена организаций Роспотребнадзора и здравоохранения при наличии соответствующих разрешительных документов; — направляют в Государственные коллекции штаммы иерсиний в установленном порядке; — организуют работы по внешнему контролю качества лабораторных исследований и мониторинга за иерсиниями по согласованию с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
7.3. Организация и обеспечение деятельности при мониторинге за иерсиниозами
Материалом для исследования служат культуры иерсиний, в том числе культуры с атипичными свойствами, выделенные в лабораториях территориального (муниципального) и регионального уровней; клинический материал, сыворотка крови больных иерсиниозами и подозрительных на инфекцию лиц, пробы из объектов окружающей среды и полевой материал по эпидпоказаниям и на договорной основе. При исследовании культур возбудителей иерсиниозов, в том числе культур с атипичными свойствами, используют биологические и современные высокотехнологичные методы бактериологического, иммуносерологического и молекулярно-генетического анализа, а также современные серологические методы исследования сывороток крови больных иерсиниозами и подозрительных на эти инфекции, обследуемых по эпидпоказаниям. Порядок исследования клинического материала, проб из объектов окружающей среды, мелких млекопитающих на иерсиниозы соответствуют п. 5.1.3. Идентификация поступивших культур осуществляется по полной схеме: — характерная морфология колоний;
— изучение биохимических свойств на расширенной биохимической панели, определение биотипа Y. enterocolitica; — постановка развернутой реакции агглютинации с иерсиниозными агглютинирующими сыворотками (к Y. enterocolitica серотипов О:3; О:5,27; О:8; О:9 и др.; к Y. pseudotuberculosis серотипов О:1, О:3); — определение детерминант патогенности в ПЦР (гены «острова высокой патогенности» HPI; «острова патогенности» YAPI; гены адгезии — инвазии inv, ail, гены энтеротоксинов ystA, ystB, гены плазмиды вирулентности иерсиний); — определение чувствительности к антибиотикам (диско-диффузионным методом, методом разведений в агаре и бульоне); — определение плазмидного спектра выделенных штаммов; — определение серо-генотипа ПЦР (в случае отсутствия диагностических сывороток); — электрофорез в пульсирующем поле (PFGE) — определение пульсотипа;
- мультилокусный вариабельный анализ (MLVA);
- определение вирулентности Y. pseudotuberculosis (определение LD50 при пероральном заражении белых мышей с помощью зонда; постановка кератоконъюнктивальной пробы на морских свинках). При идентификации культур иерсиний с атипичными свойствами используют дополнительные биохимические, серологические, иммунологические и другие методы для подтверждения принадлежности культур к роду Yersinia и известным видам:
- расширенная панель биохимических тестов;
- ПЦР с использованием дополнительных специфических праймеров;
- постановка иммуносерологических реакций с использованием моноклональных антител. Окончанием идентификации должно быть составление молекулярного профиля возбудителя.
7.4. Порядок взаимодействия лабораторий Референс-центра по мониторингу за иерсиниозами с организациями Роспотребнадзора
Информация об идентифицированных культурах иерсиний направляется в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам. Оригинальные штаммы иерсиний, идентифицированные в бактериологических лабораториях Референс-центров, передаются в Государственную коллекцию штаммов микроорганизмов Национального центра верификации диагностической деятельности ФКУЗ «РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру в одном экземпляре, сопроводительное письмо, акт передачи патогенных биологических агентов III-IV групп за пределы организации.
Приложение 1
ПОДГОТОВКА КАДРОВ
ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ ИЕРСИНИОЗОВ
N Перечень Уровни подготовки п/п бактериологи-
ческих Профессиональ- Повышение Сертификаци- Другие виды лабораторий с ная переподго- квалификации онный цикл подготовки учетом уровней товка по каждые 5 лет (тематические специальности (не менее семинары, "Бактериоло- 144 ч.) рабочие места гия" ("Лабора- в лабораториях торное дело") Референс- (не менее центрах (по 500 ч.) согласованию) врачи, лабо- врачи, лабо- врачи лабо- врачи, лабо- биологи ранты биологи ранты ранты биологи ранты 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Территориальный уровень 1. ЛПО + + + + + + + <> + <> 2. Филиалы + + + + + + + <> + <> (отделения) ФБУЗ ЦГиЭ 3. ФБУЗ ЦГиЭ + + + + + + + <> + <> Региональный уровень 1. Региональные + + + + + + - - центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности 2. Опорные базы - + + + + + + - - консультантов, сотрудничающие по согласованию с Референс- центром по иерсиниозам Федеральный уровень 1. Референс-центр + + + + + + - - по мониторингу за возбудите- лями природно- очаговых инфекционных болезней Референс-центр + + + + + + - - по мониторингу за иерсиниозами
+ — обязательный уровень подготовки;
- — не требуется подготовка для такого уровня; <*> — подготовка для такого уровня рекомендуется, но не является обязательной.
Приложение 2
ТРЕБОВАНИЯ
К ПРОФЕССИОНАЛЬНЫМ НАВЫКАМ СПЕЦИАЛИСТОВ, ОСУЩЕСТВЛЯЮЩИХ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ИЕРСИНИОЗОВ
- Требования к знаниям и умениям специалистов МО, выполняющих исследования на иерсиниозы
1.1. Врачи-бактериологи, врачи-лаборанты ПЦР-лаборатории должны знать: — основные положения клинико-эпидемиологических проявлений иерсиниозов и характеристику иерсиний, особенности лабораторного обследования больного в соответствии с клиническими формами заболеваний; — нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы; — требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
- порядок доставки, приема, регистрации клинического материала:
- порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка клинического материала);
- этапы лабораторного исследования;
- методы лабораторного исследования;
- морфологические, культуральные, серологические, биохимические, вирулентные, молекулярно-биологические свойства иерсиний;
- порядок работы на лабораторном оборудовании;
- порядок выдачи результатов лабораторного исследования;
- порядок, сроки передачи культур иерсиний в специализированную лабораторию для дальнейшего изучения;
- требования биологической безопасности при передаче ПБА. 1.2. Врачи-бактериологи должны уметь:
- проводить отбор типичных для иерсиний колоний с питательных сред:
- проводить пересев колоний на полиуглеводные среды;
- проводить биотипирование выделенных культур Y. enterocolitica;
- проводить с выделенными культурами Y. etiterocolitica РА с сывороткой к вирулентным иерсиниям;
- проводить учет полученных морфологических, культуральных, серологических, биохимических, вирулентных свойств исследуемого микроорганизма;
- проводить учет серологического исследования крови;
- выдавать ответ по результатам исследований;
- готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
- вести необходимую документацию. 1.3. Врачи-лаборанты ПЦР-лаборатории должны уметь:
- готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
- проводить выделение нуклеиновых кислот, амплификацию, учет результатов;
- проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
- выдавать ответ по результатам исследований;
- вести необходимую документацию. 1.4. Лаборанты-бактериологи должны знать:
- нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
- требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
- порядок доставки, приема, регистрации клинического материала:
- порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка клинического материала);
- этапы лабораторного исследования;
- методы лабораторного исследования;
- порядок работы на лабораторном оборудовании. 1.5. Лаборанты-бактериологи должны уметь:
- принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований доставки клинического материала;
- проводить подготовку диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовку клинического материала;
- выполнять первичные посевы клинического материала, пересевы со сред обогащения, проведение биохимических тестов;
- выполнять постановку серологических реакций (РА, ИФА, РНГА);
- готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать посевы, биологические отходы;
- готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
- готовить рабочие места врача и лаборанта, после окончания работ проводить обеззараживание;
- вести необходимую документацию. 1.6. Лаборанты ПЦР-лаборатории должны уметь:
- принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований забора, доставки клинического материала;
- готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
- проводить пробоподготовку клинического материала;
- проводить выделение нуклеиновых кислот:
- проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
- готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать биологические отходы.2. Требования к знаниям и умениям специалистов филиалов (отделения) ФБУЗ ЦГиЭ, выполняющих исследования на иерсиниозы
2.1. Врачи-бактериологи должны знать:
— основные положения эпидемиологического надзора за иерсиниозами, в том числе контингент обследуемых, клинические формы заболеваний, виды исследуемых проб из объектов окружающей среды; — нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы; — требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
- порядок доставки, приема, регистрации клинического материала, проб из объектов окружающей среды;
- порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка материала);
- этапы лабораторного исследования;
- методы лабораторного исследования;
- морфологические, культуральные, серологические, биохимические, вирулентные свойства иерсиний;
- порядок работы на лабораторном оборудовании;
- порядок выдачи результатов лабораторного исследования;
- порядок, сроки передачи культур иерсиний в специализированную лабораторию для дальнейшего изучения;
- требования биологической безопасности при передаче ПБА в другую организацию. 2.2. Врачи-бактериологи должны уметь:
- проводить отбор типичных для иерсиний колоний с питательных сред;
- проводить пересев колоний на полиуглеводные среды;
- проводить биотипирование выделенных культур Y. enterocolitica:
- проводить с выделенными культурами Y. enterocolitica РА с сывороткой к вирулентным иерсиниям;
- проводить учет полученных морфологических, культуральных, серологических, биохимических свойств и маркеров вирулентности исследуемого микроорганизма;
- проводить учет серологического исследования крови;
- выдавать ответ по результатам исследований;
- готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
- вести необходимую документацию. 2.3. Лаборанты должны знать:
- нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
- требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов:
- порядок доставки, приема, регистрации клинического материала, проб из внешней среды;
- порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование;
- этапы лабораторного исследования;
- методы лабораторного исследования;
- порядок работы на лабораторном оборудовании. 2.4. Лаборанты должны уметь:
- принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований доставки клинического материала;
- проводить подготовку диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовку исследуемого материала;
- выполнять первичные посевы клинического материала, пересевы со сред обогащения, проведение биохимических тестов, тестов на маркеры вирулентности иерсиний — аутоагглютинации, кальцийзависимости;
- выполнять постановку серологических реакций (РА, ИФА, РНГА);
- готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать посевы, биологические отходы;
- готовить рабочие места врача и лаборанта, после окончания работ проводить обеззараживание;
- готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
- вести необходимую документацию.3. Требования к знаниям и умениям специалистов региональных центров по монигорингу за возбудителями (II-IV групп патогенности), ФБУЗ ЦГиЭ, выполняющих исследования на иерсиниозы
3.1. Врачи-бактериологи должны знать:
— основные положения эпидемиологического надзора за иерсиниозами, в том числе контингенты обследуемых, клинические формы заболеваний, виды исследуемых проб от людей, из объектов окружающей среды; — порядок организации и обеспечения консультативной и практической помощи лабораториям ЛПУ, филиалов (отделения) ФБУЗ ЦГиЭ, ФБУЗ ЦГиЭ территориального уровня; — нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы; — требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
- порядок доставки, приема, регистрации клинического материала, проб из внешней среды;
- порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка материала);
- этапы лабораторного исследования;
- методы лабораторного исследования;
- морфологические, культуральные, серологические, биохимические, вирулентные, молекулярно-биологические свойства иерсиний;
- порядок работы на лабораторном оборудовании;
- порядок выдачи результатов лабораторного исследования;
- порядок, сроки передачи культур иерсиний в Референс-центр по иерсиниозам для дальнейшего изучения;
- требования биологической безопасности при передаче ПБА в другую организацию. 3.2. Врачи-бактериологи должны уметь:
- проводить отбор типичных для иерсиний колоний с питательных сред;
- проводить посев на полиуглеводные среды;
- проводить типирование выделенных культур Y. enterocolitica на наличие маркеров вирулентности;
- проводить с выделенными культурами Y. enterocolitica РА с сывороткой к вирулентным иерсиниям;
- проводить серологическое типирование культур иерсиний;
- проводить учет полученных морфологических, культуральных, серологических, биохимических свойств и маркеров вирулентности исследуемого микроорганизма;
- проводить учет серологического исследования крови;
- выдавать ответ по результатам исследований;
- готовить культуры, материал для передачи в лаборатории Регионального центра по мониторингу за возбудителями I-II группы патогенности. Референс-центр по иерсиниозам;
- вести необходимую документацию; 3.3. Врачи ПЦР-лаборатории должны уметь:
- готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
- проводить выделение нуклеиновых кислот, амплификацию, учет результатов;
- проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
- выдавать ответ по результатам исследований;
- вести необходимую документацию. 3.4. Лаборанты должны знать:
- нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
- требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
- порядок доставки, приема, регистрации клинического материала;
- порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование;
- этапы лабораторного исследования;
- методы лабораторного исследования. 3.5. Лаборанты-бактериологи должны уметь:
- принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований забора, доставки клинического материала;
- проводить подготовку диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовку клинического материала;
- выполнять первичные посевы клинического материала, пересевы со сред обогащения, проведение биохимических тестов, тестов на маркеры вирулентности иерсиний — аутоагглютинации, кальцийзависимости;
- выполнять постановку серологических реакций (РА, ИФА, РНГА);
- готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать посевы, биологические отходы;
- готовить рабочие места врача и лаборанта, после окончания работ проводить обеззараживание;
- вести необходимую документацию. 3.6. Лаборанты ПЦР-лаборатории должны уметь:
- принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований забора, доставки клинического материала;
- готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
- проводить пробоподготовку клинического материала;
- проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
- готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать биологические отходы.4. Требования к знаниям и умениям специалистов МО, ФБУЗ ЦГиЭ (филиалов, отделения филиалов), осуществляющих отбор клинического материала, проб объектов окружающей среды для исследования на иерсиниозы
4.1. Специалисты должны знать:
— основные положения эпидемиологического надзора за иерсиниозами, в том числе контингенты обследуемых, клинические формы заболеваний, виды исследуемых проб от людей, из объектов окружающей среды; — нормативные документы, регламентирующие забор материала, проб для исследований на иерсиниозы; — требования биологической безопасности при заборе, доставке материала, подозрительного на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- порядок доставки клинического материала, проб из внешней среды;
- порядок заполнения сопроводительной документации. 4.2. Специалисты должны уметь:
- проводить отбор проб от людей, из объектов окружающей среды;
- заполнять сопроводительную документацию;
- доставлять клинический материал, пробы из внешней среды в лабораторию в соответствии с требованиями.
Приложение 3
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ИЕРСИНИОЗЫ
N Наименование Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный уровень п/п питательных сред
МО Филиалы ФБУЗ Региональные Опорные базы Референс- Референс- (отделения) "ЦГиЭ" центры по - консуль- центр по центр по ФБУЗ "ЦГиЭ" мониторингу тантов, мониторингу мониторингу за возбуди- сотрудни- за возбуди- за иерсини- телями чающие по телями озами инфекционных согласованию природно- болезней с Референс- очаговых II-IV групп центром по инфекционных патогенности иерсиниозам болезней 1 2 3 5 6 7 8 9 10 1. Мясопептонный + + + + + + + бульон РН 7,6-7,8 2. Бульон Хоттингера + + + + + + + 3. Мясопептонный агар + + + + + + + 4. Агар Хоттингера + + + + + + + 5. Фосфатно-буферный + + + + + + + раствор РН 7,6-7,8 6. Пептонно-калиевая + + + + + + + среда рН 7,6-7,8 7. Транспортная +/- +/- +/- +/- +/- +/- +/- среда Кузнецова РН 7,2-7,4 <> <*> 8. Питательная среда +/- +/- +/- +/- + + + для определения чувствительности к антибактериальным препаратам (АГВ) 9. Среда Эндо <**> + + + + + + + 10. Среда с + + + + + + + бромтимоловым синим (СБТС) <**> 11. Полужидкий агар +/- +/- +/- +/- + + + (0,2-0,4%) для определения подвижности 12. Среда Мак Конки + + + + + + + <**> 13. Бульон Кларка - - - - + + + 14. УСС (универсальный + + + + + + + скошенный столбик) <***> 15. Трехсахарный агар + + + + + + + с мочевиной (среда Олькеницкого) <***> 16. Трехсахарный агар +/- +/- +/- +/- +/- +/- +/- с мочевиной (среда Ресселя I) <> <**> 17. Трехсахарный агар +/- +/- +/- +/- +/- +/- +/- с сахарозой и маниитом (среда Ресселя II) <> <**> 18. Среда с мочевиной + + + + + + + для определения уреазы 19. Среда для + + + + + + + определения гидролиза эскулина 20. Среда с орнитином - - - - + + + для определения орнитин- декарбоксилазы 21. Среда с + + + + + + + фенилаланином 22. Среда с лизином +/- +/- +/- +/- + + + для определения лизинде- карбоксилазы 23. Среда для +/- +/- +/- +/- + + + определения липазы 24. Среда для + + + + + + + определения индолобразования 25. Среда Симмонса +/- +/- +/- +/- + + + для определения способности утилизировать цитрат Среды Гисса для определения ферментации углеводов 26. Среда Гисса + + + + + + + с сахарозой 27. Среда Гисса + + + + + + + с рамнозой 28. Среда Гисса + + + + + + + с раффинозой 29. Среда Гисса + + + + + + + с трегалозой 30. Среда Гисса + + + + + + + с сорбитом 31. Среда Гисса + + + + + + + с ксилозой 32. Среда Гисса + + + + + + + с салицином 33. Среда Гисса +/- +/- +/- +/- + + + с маннитом 34. Среда Гисса - - - - + + + с сорбозой 35. Среда Гисса - - - - + + + с мальтозой 36. Среда Гисса - - - - + + + с мелибиозой
+ — обязательное использование данных сред. +/- — использование данных сред рекомендовано, но не является обязательным.
- — не используются. <> Возможно применение данных сред при наличии в лабораториях ингредиентов для приготовления. <*> Используется любая из предложенных сред или другие среды для выращивания иерсиний коммерческого изготовления, разрешенные к применению на территории Российской Федерации. <***> Используется любая из предложенных полиуглеводных сред или другие дифференциальные иерсиниозные среды, в том числе коммерческого изготовления, разрешенные к применению на территории Российской Федерации.
Приложение 4
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ, ТЕСТ-СИСТЕМЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ИЕРСИНИОЗЫ
N Наименование Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный уровень п/п диагностических
препаратов, МО Филиалы ФБУЗ Региональные Опорные базы Референс- Референс- тест-систем, (отделения) "ЦГиЭ" центры по - консуль- центр по центр по биологических ФБУЗ "ЦГиЭ" мониторингу тантов, мониторингу мониторингу препаратов за возбуди- сотрудни- за возбуди- за иерсини- телями чающие по телями озами инфекционных согласованию природно- болезней с Референс- очаговых II-IV групп центром по инфекционных патогенности иерсиниозам болезней 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1. Иммуноглобулины - - + + + + + диагностические флуоресцирующие псевдотуберкулез- ные адсорбирован- ные лошадиные, лиофилизат для диагностических целей 2. Фаг диагностичес- - - + + + + + кий псевдотуберку- лезный сухой, лиофилизат для диагностических целей 3. Тест-система + - + + + + + иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний I серотипа <> 4. Диагностикум + +/- + + + + + псевдотуберкулез- ный эритроцитарный антигенный сухой 5. Диагностикум + +/- + + + + + эритроцитарный кишечно- иерсиниозный О:9 антигенный сухой 6. Диагностикум + +/- + + + + + эритроцитарный кишечно- иерсиниозный О:3 антигенный сухой 7. Диагностические +/- - +/- +/- + + + сыворотки псевдо- туберкулезные моновалентные (содержат антитела к О-антигенам возбудителей псевдотуберкулеза сероваров I или III) 8. Тест-системы для + - + + + + + выявления ДНК Yersinia pseudotuberculosis 9. Тест-системы для + - + + + + + выявления ДНК Yersinia enterocolitica 10. Набор для + - + + + + + подготовки проб (выделение ДНК) 11. ПЦР-тест-системы - - - + + + + для выявления генов вирулент- ности Yersinia pseudotuberculo- sis, Yersinia enterocolitica 12. Диагностические +/- +/- +/- +/- + + + системы, энтеротесты для идентификации энтеробактерий
+ — обязательное использование данных тест-систем. +/- — использование данных тест-систем рекомендовано, но не является обязательным.
- — не используются. <> Возможно применение данных тест-систем при наличии лабораторного оборудования. Используется любая из предложенных тест-систем или другие тест-системы коммерческого изготовления, разрешенные к применению на территории Российской Федерации.
Приложение 5
ХИМИЧЕСКИЕ РЕАКТИВЫ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ИЕРСИНИОЗЫ
N Наименование Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный уровень п/п химических реактивов МО Филиалы ФБУЗ Региональные Опорные базы Референс- Референс- (отделения) "ЦГиЭ" центры по - консуль- центр по центр по ФБУЗ "ЦГиЭ" мониторингу тантов, мониторингу мониторингу за возбуди- сотрудни- за возбуди- за иерсини- телями чающие по телями озами инфекционных согласованию природно- болезней с Референс- очаговых II-IV групп центром по инфекционных патогенности иерсиниозам болезней 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1. Андредэ + + + + + + + 2. Бриллиантовый +/- +/- +/- +/- + + + зеленый 3. Бромтимоловый + + + + + + + синий 4. Генциан-виолет + + + + + + + 5. Конго красный +/- +/- +/- +/- + + + 6. Метиленовый синий +/- +/- +/- +/- + + + 7. Феноловый красный +/- +/- +/- +/- + + + 8. Фуксин + + + + + + + 9. Сахароза + + + + + + + 10. Рамноза + + + + + + + 11. Раффиноза + + + + + + + 12. Сорбит + + + + + + + 13. Ксилоза + + + + + + + 14. Сорбоза - - - - + + + 15. Фукоза - - - - + + + 16. Мальтоза +/- +/- +/- +/- + + + 17. Мелибиоза - - - - + + + 18. Крахмал + + + + + + + 19. Маннит + + + + + + + 20. Глюкоза + + + + + + + 21. Лактоза + + + + + + + 22. Салицин + + + + + + + 23. Эскулин +/- +/- +/- +/- + + + 24. Трегалоза +/- +/- +/- +/- + + + 25. Орнитин +/- +/- +/- +/- + + + 26. Цистин +/- +/- +/- +/- + + + 27. Фенилаланин +/- +/- +/- +/- + + + 28. альфа-Нафтол + + + + + + + 29. Диметилпара- +/- +/- +/- + + + + фенилендиамин (тетраметилпара- фенилендиамин, оксалат) 30. Тиосульфат натрия + + + + + + + 31. Йод + + + + + + + кристаллический 32. Сернистокислый +/- +/- +/- +/- + + + натрий 33. Хлористый натрий +/- +/- +/- +/- + + + 34. Калия гидрофосфат + + + + + + + 35. Тринатрий фосфат + + + + + + + <> 36. Хлористый натрий + + + 37. Гидроокись калия + + + + + + + <> 38. Молибденово- +/- +/- +/- +/- + + + кислый аммоний 39. Углекислый натрий +/- +/- +/- +/- + + + безводный 40. Железоаммонийные +/- +/- +/- +/- + + + квасцы 41. Мочевина + + + + + + + 42. Танин +/- +/- +/- +/- + + + 43. Леворин +/- +/- +/- +/- + + + 44. Грамицидин +/- +/- +/- +/- + + + 45. Желчь +/- +/- +/- +/- + + + 46. Масло вазелиновое + + + + + + + 47. Масло + + + + + + + иммерсионное 48. Масло +/- - + + + + + иммерсионное нефлуоресцирующее 49. Спирт этиловый + + + + + + + 50. Глицерин + + + + + + + 51. Хлорамин или + + + + + + + другие дезинфек- танты, активные в отношении иерсиний, разрешенные к применению на территории РФ 52. ДП-2Т +/- - + + + + +
+ — обязательное использование данных средств. +/- — использование данных средств рекомендовано, но не является обязательным.
- — не используются.
Приложение 6
ПРИБОРЫ И ОБОРУДОВАНИЕ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ИЕРСИНИОЗЫ
N Наименование Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный уровень п/п оборудования, СИ
МО Филиалы ФБУЗ Региональные Опорные базы Референс- Референс- (отделения) "ЦГиЭ" центры по - консуль- центр по центр по ФБУЗ "ЦГиЭ" мониторингу тантов, мониторингу мониторингу за возбуди- сотрудни- за возбуди- за иерсини- телями чающие по телями озами инфекционных согласованию природно- болезней с Референс- очаговых II-IV групп центром по инфекционных патогенности иерсиниозам болезней 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1. Весы электронные. + + + + + + + Диапазон измерений до 600 г, класс точности или погрешность: +/- 10 мг 2. Весы электронные. + + + + + + + Диапазон измерений до 400 г, класс точности или погрешность: +/- 10 мг 3. РН-метр. Диапазон + + + + + + + измерений: 0-14 рН, погрешность: +/- 0,002 рН 4. Дозатор пипеточный + +/- + + + + + 1-канальный. Диапазон измерений: 25 мкл точность 1,5%, 50 мкл точность 1,0% 5. Дозатор пипеточный +/- +/- + + + + + 1-канальный. Диапазон измерений: 0,5-10 мкл ССП +/- (10,0- 2,5)% СКО 7,0-3,0%, 2-20 мкл СКО 6-3% ССП +/- 8-2%, 10-100 мкл ССП +/- 2,5-1,5% СКО 3,0-2,0%, 100-1000 мкл ССП +/- 1,5-1,0% СКО 2,0-1,0% 6. Термостат + + + + + + + электрический суховоздушный. Основные технические характеристики: 28-55 °С +/- 1 °С 7. Термостат + + + + + + + электрический суховоздушный с охлаждением. Основные технические характеристики: 5-60 °С +/- 1,5 °С или 5-70 °С +/- 0,5 °С 8. Шкаф сушильный + + + + + + + стерилизационный. Основные технические характеристики: 50-350 °С 9. Стерилизатор + + + + + + + паровой. Основные технические характеристики: 2,2 кгс/кв. см или 3,0 кгс/кв. см 10. Центрифуга. + + + + + + + Основные технические характеристики: N: не менее 3000 об.\мин. 11. Аппарат для + +/- + + + + + свертывания и инактивирования сыворотки. Основные технические характеристики: 50-90 °С +/- 0,5 °С 12. Микроскоп + + + + + + + стереоскопический с увеличением: х 3,3-100 13. Микроскоп световой + + + + + + + с увеличением: х 3,3-100 14. Микроскоп +/- +/- + + + + + люминесцентный с увеличением: х 3,3-100 15. Холодильник. + + + + + + + Основные технические характеристики: t° до + 10 °С 16. Морозильная + + + + + + + камера. Основные технические характеристики: t° не менее - 18-20 °С 17. Иммуноферментный + +/- + + + + + анализатор 18. Автоматический +/- - +/- + + + + идентификатор 19. Бокс + +/- + + + + + абактериальной воздушной среды "Ламинар-С" класса II А 20. УФО-бокс + +/- + + + + + 21. Микроцентрифуга. + +/- + + + + + Основные технические характеристики: N: не менее 12000 об.\мин. 22. Вортекс- + +/- + + + + + встряхиватель. Основные технические характеристики: не менее 2000 об.\мин. 23. Медицинский + +/- + + + + + отсасыватель. Основные технические характеристики: 0,17 кгс/кв. см 24. Твердотельный + +/- + + + + + термостат. Основные технические характеристики: до 100 °С +/- 1 °С 25. Экстрактор +/- - +/- + + + + нуклеиновых кислот 26. Амплификатор. + +/- + + + + + Основные технические характеристики: 4-99 °С +/- 0,2 °С 27. Термоциклер с + +/- + + + + + гибридизационно- флуоресцентной детекцией в режиме реального времени 28. Аквадистиллятор. + + + + + + + Основные технические характеристики: 3 25 дм /ч. +/- 10% 29. Шейкер. Основные + + + + + + + технические характеристики: 0-800 об./мин. max нагрузка 2 кг 30. Аппарат для - + + + + + + фильтрации 31. Плита + + + + + + + электрическая
+ — обязательное использование данных средств. +/- — использование данных средств рекомендовано, но не является обязательным.
- — не используются.
Приложение 7
ПАСПОРТ штамма бактерий рода Yersinia (для лабораторий территориального и регионального уровней)
- Видовое название штамма ________________________________________________
- Лабораторный номер штамма ______________________________________________
- Особое обозначение штамма (серотип, биотип) ____________________________
- Источник выделения штамма: _____________________________________________ 4.1. Ф.И.О., возраст, N истории болезни, год, МО, окончательный диагноз (основное заболевание, течение, осложнения) _______________________________
4.2. Вид животного ________________________________________________________ 4.3. Объект окружающей среды или продукт питания __________________________
- Субстрат, из которого выделен штамм ____________________________________
- Дата выделения _________________________________________________________
- Место выделения штамма (область, район, населенный пункт) ______________
- Метод выделения ________________________________________________________
- Ф.И.О. лица, идентифицировавшего штамм _________________________________
- Культурально-морфологические и другие свойства штамма (рост на плотных, жидких питательных средах и пр.) __________________________________________
- Биохимическая активность штамма:
Тест Реакция Образование кислоты из: Реакция
Гидролиз мочевины Глюкозы
Образование H2S Лактозы
Фенилаланиндезаминаза Маннитола
Орнитиндекарбоксилаза Сахарозы
Лизиндекарбоксилаза Рамнозы
Реакция Фогес-Проскауэра Раффинозы (26 +/- 2) °С
Реакция Фогес-Проскауэра Мелибиозы (37 +/- 1) °С
Липаза (Твин 80) Ксилозы
Образование индола Салицина
Подвижность (26 +/- 2) °С Сорбитола
Подвижность (37 +/- 1) °С Мальтозы
Гидролиз эскулина Нитратредуктазная активность
12. Тесты патогенности:
Наличие способности к аутоагглютинации
Наличие кальцийзависимости
13. Другие тесты
Серологический вариант
Биотип
14. Дата последней проверки свойств штамма ________________________________ 15. Условия хранения и транспортирования __________________________________ 16. Дата отправки штамма, координаты отправителя (адрес, электронная почта, тел./факс) ________________________________________________________________
Приложение 8
СОСТАВ И ПРОПИСИ
ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ПЕРВИЧНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ КУЛЬТУР
Трехсахарный агар с мочевиной (Рессель I)
Состав:
N Ингредиенты Количество п/п
- Сухой питательный агар 25,0 г
- Глюкоза 1,0-1,5 г
- Лактоза 7,0-10,0 г
- Мочевина 3,0 г
- Кальций хлористый 2,0 г
- Феноловый красный, 1%-й водный р-р 2,0 мл
- Метиленовый синий 1,0 мл
- Вода дистиллированная 1 л
Приготовление
Твердые ингредиенты помещают в дистиллированную воду в любой последовательности. После того, как растворится агар, смесь нагревают до кипения, добавляют индикаторы — феноловый красный и метиленовый синий. РН 7,0-7,2 (в горячем виде среда грязно-зеленого цвета), разливают по пробиркам (5-6 мл в каждую) и стерилизуют автоклавированием 15 мин. под давлением 0,5 атм. Свежестерилизованная среда приобретает желтый или желто-оранжевый цвет в результате восстановления (обесцвечивание) метиленового синего при автоклавировании. Осторожным встряхиванием (!) каждой пробирки в наклонном положении вновь придают еще горячей среде ее исходную грязно-серую окраску. Это происходит за счет окисления метиленового синего кислородом воздуха. Среду скашивают, оставляя столбик высотой 2 см и косую поверхность 4-5 см. Застывшая среда должна в течение 2-3 дней «дозреть», т.е. приобрести однотонную сиреневато-светло-коричневую окраску, что свидетельствует об окислении, т.е. о восстановлении цветности метиленового синего по всей глубине среды. Посев культуры осуществляют штрихами по скошенной поверхности и уколом в столбик среды.
Трехсахарнын агар с сахарозой и маннитом (Рессель II)
Состав:
N Ингредиенты Количество п/п
- Дистиллированная вода 1 л
- Сухой питательный агар 25,0 г
- Сухой пептон (Семипалатинский) 10,0 г
- Сахароза 8,0-10,0 г
- Маннит 0,8-1,0 г
- Цистин 0,4 г
- Тиосульфат натрия (гипосульфит) 0,3 г
- Железоаммониевые квасцы 0,4 г
- Феноловый красный, 1%-й водный р-р 3,5-4,0 мл
- Крахмал 2,0 г
Приготовление
Ингредиенты вводят в следующем порядке: в холодной воде растворить квасцы, затем добавить крахмал и сухой питательный агар, дать им хорошо раствориться, после чего внести остальные компоненты. Среду доводят до кипения, устанавливают рН 7,2-7,4, разливают в пробирки по 7-8 мл, автоклавируют при 0,5-0,7 атм. 15-20 мин. после чего скашивают. Цвет среды розово-красный.
Универсальный скошенный столбик
Состав:
N Ингредиенты Количество п/п
- Агар сухой питательный 3,5 г
- Лактоза 0,4 г
- Глюкоза 0,08 г
- Крахмал растворимый 0,05 г
- Сахароза 1,5 г
- Мочевина 0,25 г
- Уксуснокислый свинец 0,03 г
- Тиосульфат натрия 0,03 г
- Цистин 0,003 г
- Феноловый красный, 1%-й водный р-р 2,5 мл
- Дистиллированиая вода 100 мл
Приготовление
Ингредиенты вносить в любом порядке. Количество питательного агара, вносимого в среду, зависит от его серии. Если на этикетке указано, что на 100 мл воды его надо брать 5 г, то в среду добавляют 3,5 г, если на этикетке имеется рекомендация 3,5 г на 100 мл, то добавляют 2,5 г. Среду кипятить в течение 10-15 мин., разливать в стерильные пробирки по 5 мл, автоклавировать при 0,5 атм. 15 мин., после чего скашивать. Цвет среды абрикосовый.
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
ПИСЬМО
от 18 июня 2012 г. N 01/6770-12-32
ОБ ИТОГАХ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ГРИППА И ОРВИ В МИРЕ И РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ В ЭПИДСЕЗОН 2011-2012 ГГ.
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека информирует об итогах эпидемического подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ в эпидсезон 2011-2012 гг. в мире и в Российской Федерации. Прошедший сезон гриппа и ОРВИ в большинстве стран мира начался значительно позже, чем в предыдущие годы. В октябре — ноябре 2011 года частота обращаемости за медицинской помощью по поводу гриппа и ОРВИ в странах Европейского региона оставалась низкой, при исследовании клинических образцов от больных ОРВИ вирусы гриппа не определялись. В начале ноября 2011 года активность циркуляции вирусов гриппа отмечалась только в некоторых странах тропической зоны Американских континентов (Куба, Доминиканская Республика, Гондурас), Южной и Юго-Восточной Азии (Камбоджа, Таиланд, Лаос, Вьетнам). Циркуляция вирусов гриппа в странах южной Африки и Южной Америки оставалась низкой. В декабре 2011 года заболеваемость гриппом в странах Северного полушария с умеренным климатом продолжала оставаться ниже пороговых уровней, отдельные спорадические случаи регистрировались в странах Европы, США и Канады, при этом в странах с умеренным климатом Южного полушария заболеваемость гриппом еще более снизилась и достигла межсезонных показателей. Медленный рост заболеваемости гриппом и ОРВИ во всех возрастных группах, прежде всего среди детей раннего возраста, начался с конца января 2012 года в большинстве стран Европейского региона. Наиболее активно эпидпроцесс гриппа и ОРВИ проявился в этот период в Северной Америке, Западной Европе и Северном Китае. В начале марта в некоторых странах Европейского региона (18 стран) рост заболеваемости продолжился, а в ряде стран уровни заболеваемости достигли своих пиковых значений и начали снижаться (Албания, Болгария, Испания и Италия). К концу марта эпидситуация по заболеваемости гриппом в 20 странах Европы стабилизировалась. В эпидсезоне 2011-2012 гг. в Европейском регионе доминировал вирус гриппа A (91%) и вирус гриппа B (9%). Из числа выявленных вирусов гриппа A были субтипированы: A(H3N2) — в 96% и A(H1N1)pdm2009 — в 4%. В целом в странах Северного полушария преобладал вирус сезонного гриппа A(H3N2). Вирус гриппа B являлся доминирующим в Китае, а вирус A(H1N1)pdm2009 — в Мексике, Колумбии и в некоторых штатах на юге Соединенных Штатов. В начале эпидемического сезона антигенные свойства циркулирующих штаммов были близки свойствам вакцинных вирусов. В середине сезона в популяции штаммов вируса гриппа A(H3N2) были выявлены новые антигенные варианты (вирус, подобный вирусу A/Victoria/361/2011), а популяция штаммов вируса гриппа B была представлена штаммами двух эволюционных линий (вирусы линии Виктория, подобные вирусу B/Brisbane/60/2008, и вирусы линии Ямагата, подобные вирусу B/Wisconsin/1/2010), гетерогенность которых была наиболее отмечена в Китае и некоторых странах Европы. В связи с чем на сезон 2012-2013 гг. для стран Северного полушария ВОЗ рекомендует следующий штаммовый состав противогриппозных вакцин: — A/California/7/2009 (H1N1)pdm09,
— A/Victoria/361/2011 (H3N2),
— B/Wisconsin/1/2010 (линия Ямагата).
В Российской Федерации с начала сентября 2011 года регистрировался незначительный сезонный рост заболеваемости острыми респираторными вирусными инфекциями негриппозной этиологии, характерный для данного времени года. В этот период в эпидпроцесс были вовлечены 12 субъектов Российской Федерации с превышением эпидпорогов на 10-57%, при этом отмечалось постепенное увеличение числа выделенных вирусов как негриппозной этиологии, преимущественно вирусов парагриппа и респираторно-синцитиальных вирусов (PC-вирусов) — от 2% до 6,3%, так и вирусов гриппа — по 0,8% каждого сезонного вируса гриппа. В октябре отмечалось снижение заболеваемости в большинстве субъектов Российской Федерации, вовлеченных в эпидпроцесс. Эпидемический рост заболеваемости гриппом и ОРВИ был зарегистрирован только с начала марта 2012 года: превышение эпидемических порогов заболеваемости гриппом и ОРВИ на 10%-74% зарегистрировано в 7 субъектах Российской Федерации (Ярославской, Челябинской, Сахалинской областях, Республике Карелия, Ненецком, Ямало-Ненецком автономных округах, Еврейской автономной области). В марте — апреле 2012 года в эпидпроцесс включились от 9 до 12 субъектов Российской Федерации, преимущественно субъекты Дальневосточного, Северо-Западного и Центрального федеральных округов. Пик подъема заболеваемости отмечался на 15-16 неделе 2012 года (с 09.04.2012 по 22.04.2012), когда превышение эпидемических порогов заболеваемости на 10%-54% было зарегистрировано в 12 субъектах Российской Федерации (6 из 9 субъектов Дальневосточного федерального округа, субъекты Центрального, Сибирского, Северо-Западного и Уральского федеральных округов). Ко второй декаде мая эпидемический подъем заболеваемости гриппом и ОРВИ завершился во всех субъектах Российской Федерации. В большинстве субъектов Российской Федерации, вовлеченных в эпидпроцесс, продолжительность эпидемического подъема в среднем составляла 4-6 недель, в Челябинской области — 7 недель, в Ненецком автономном округе — 11 недель. В эпидемический процесс гриппа и ОРВИ в 2011-2012 гг., почти в одинаковой степени были вовлечены дети всех возрастных групп. По данным лабораторного мониторинга за гриппом и ОРВИ (с 9 по 16 неделю 2012 года), в структуре выделенных вирусов доминирующие позиции занял вирус гриппа A(H3N2), который был выделен от больных острыми респираторными заболеваниями в 10%-15% случаев. Начиная с 17 недели, интенсивность циркуляции вируса A(H3N2) снизилась до 1,9%. Вирус гриппа B циркулировал наряду с вирусом A(H3N2) в течение всего периода подъема заболеваемости: в начале подъема заболеваемости от больных он выделялся в 1,1% случаев, на 16 неделе — в 3% и к завершению эпидемического подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ — в 1,8% случаев. По данным лабораторного мониторинга, в структуре выделенных вирусов циркулировали также вирусы гриппа A(H1N1)pdm09 и A(H1N1) — в 0,2%-0,9% случаев. На протяжении всего эпидсезона активно выделялись другие респираторные вирусы: парагриппа 1, 2 и 3 типа — в 5,5%-7,7%, аденовирусы — в 2,7%-3,8%, PC-вирусы — в 3,0%-4,2% (от числа обследованных больных). Таким образом, эпидемический подъем заболеваемости гриппом и ОРВИ 2011-2012 гг. был низкой интенсивности, смешанной этиологии с преимущественной циркуляцией вирусов гриппа подтипа A(H3N2) и гриппа B. Снижению активности эпидемического подъема заболеваемости способствовала кампания по иммунизации населения Российской Федерации. В сентябре — декабре 2011 года в рамках национального приоритетного проекта по иммунизации населения было привито против гриппа свыше 12,036 млн. детей и 19,924 млн. взрослых. Для достижения высокого охвата прививками населения в ряде субъектов Российской Федерации активно проводилась работа по привлечению дополнительных средств на закупку вакцин. Наиболее активно привлекались дополнительные средства в 13 субъектах Российской Федерации: г. Москве, Санкт-Петербурге, Воронежской, Московской, Калининградской, Ленинградской, Свердловской, Иркутской, Амурской, Магаданской областях, Краснодарском крае, Республике Башкортостан и Ямало-Ненецком автономном округе. Впервые суммарный охват населения прививками против гриппа (с учетом всех источников финансирования) составил более 26% — привито более 37,2 млн. человек. При этом в 19 субъектах Российской Федерации: Воронежской, Рязанской, Липецкой, Пензенской, Самарской, Саратовской, Свердловской, Тюменской, Амурской областях, республиках Калмыкия, Дагестан, Ингушетия, Горный Алтай, Тыва, Саха (Якутия), Бурятия, Краснодарском, Красноярском и Хабаровском краях было иммунизировано более 30% населения. Низкие охваты (менее 17%) населения прививками против гриппа отмечались во Владимирской, Костромской областях, Республике Адыгея и Кабардино-Балкарской Республике. Органами исполнительной власти были приняты меры по укреплению материально-технической базы лечебно-профилактических учреждений, сформированы необходимые запасы лекарственных препаратов, дезинфекционных средств и средств индивидуальной защиты. Вместе с тем в субъектах Центрального, Северо-Кавказского, Приволжского и Сибирского федеральных округов обеспеченность противовирусными препаратами не достигала и 20% от расчетной потребности. В Чеченской Республике и Еврейской автономной области планировалось развернуть недостаточное (по отношению к расчетному) количество коек — 18% и 10% соответственно. В 71 субъекте Российской Федерации применялись меры по приостановлению учебного процесса в детских образовательных учреждениях, своевременное введение которых позволило предупредить рост заболеваемости среди школьников и стабилизировать эпидситуацию в ряде регионов страны. В субъектах Российской Федерации были организованы внеплановые рейдовые проверки по соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в местах массового сосредоточения людей (торговые сети, рынки, крупные торговые центры и т.п.). В период эпидемического подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ были отменены культурно-массовые и спортивные мероприятия. На основании проведенного анализа итогов эпидемического подъема заболеваемости гриппом и ОРВИ в эпидсезоне 2011-2012 гг. и в целях подготовки к предстоящему эпидсезону 2012-2013 гг. предлагаю: 1. Руководителям управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, главным врачам ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации: 1.1. Продолжить еженедельный эпидемиологический и вирусологический мониторинг за заболеваемостью гриппом и ОРВИ с расшифровкой этиологии заболеваний в первую очередь у лиц с тяжелым и нетипичным течением, а также в организованных коллективах детей и взрослых. 1.2. Обеспечить в лабораториях учреждений Роспотребнадзора постоянный запас наборов реагентов для идентификации вирусов гриппа. 2. Руководителям органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации в области охраны здоровья граждан совместно с руководителями управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, главными врачами ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации: 2.1. Проанализировать выполнение комплекса мероприятий по гриппу и ОРВИ в прошедшем эпидемическом сезоне. 2.2. Откорректировать при необходимости региональные планы подготовки и проведения мероприятий по гриппу и ОРВИ с учетом опыта прошедших эпидемий, в том числе потребность субъектов Российской Федерации в противовирусных препаратах, средствах индивидуальной защиты, медицинском оборудовании (аппаратах для искусственной вентиляции легких, пульс-оксиметрах) и других материальных ресурсах, рассчитанную в соответствии с методическими рекомендациями МР 3.1.2.0004-10 «Критерии расчета запаса профилактических и лечебных препаратов, оборудования, имущества, индивидуальных средств защиты и дезинфекционных средств для субъектов Российской Федерации на период пандемии гриппа». 2.3. Внести на рассмотрение руководителей органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации предложения по выделению ассигнований: — на обеспечение неснижаемых запасов противовирусных препаратов, средств индивидуальной защиты, других материальных ресурсов и медицинского оборудования в соответствии с утвержденной расчетной потребностью; — на закупку противогриппозных вакцин для иммунизации лиц, не относящихся к группам риска, определенным национальным календарем профилактических прививок. 2.4. Систематически проводить обучение медицинских работников по вопросам эпидемиологии, клиники, дифференциальной диагностики, лечения и профилактики гриппа. 2.5. Проводить разъяснительную работу с населением о мерах личной и общественной профилактики, необходимости своевременного обращения за медицинской помощью и вреде самолечения. 3. Руководителям управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации: 3.1. В срок до 01.08.2012 представить в Роспотребнадзор предложения, замечания по пересмотренным значениям эпидемических порогов заболеваемости гриппом и ОРВИ по субъекту в целом и центральному городу субъекта для дальнейшего утверждения (информацию направить на бумажном носителе и по E-mail: Vatolina_AA@gsen.ru). 3.2. В срок до 01.10.2012 представить в Роспотребнадзор информацию о ходе подготовки к эпидемическому сезону гриппа и ОРВИ 2012-2013 гг.
Руководитель
Г.Г.ОНИЩЕНКО
