Документ введен в действие с 1 июня 2011 года. Текст документа
Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты
прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
25 мая 2011 г.
Дата введения: 1 июня 2011 г.
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ПОРЯДОК
ОРГАНИЗАЦИИ И ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРИЙ ТЕРРИТОРИАЛЬНОГО, РЕГИОНАЛЬНОГО И ФЕДЕРАЛЬНОГО УРОВНЕЙ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.2870-11
- Разработаны Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора (Ю.М.Ломов, Э.А.Москвитина, Н.Р.Телесманич, В.Д.Кругликов, И.Я.Черепахина, В.В.Балахнова, И.В.Архангельская); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора (В.В.Кутырев, Е.С.Казакова, И.Н.Шарова, Н.А.Осина, С.А.Щербакова, Н.И.Смирнова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора (С.В.Балахонов, Л.Я.Урбанович, Л.В.Миронова, Е.С.Куликалова, А.С.Кожевникова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора (В.Н.Савельев); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Противочумный центр» Роспотребнадзора (В.Е.Безсмертный, С.М.Иванова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (В.Г.Сенникова, М.В.Зароченцев, В.В.Мордвинова); Федеральным государственным учреждением науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора (И.А.Дятлов, С.Ф.Бикетов, Е.И.Баранова, М.В.Храмов, Е.А.Тюрин); Федеральным государственным бюджетным учреждением «ГИСК им. Л.А.Тарасевича» Минздравсоцразвития (И.В.Борисевич, Л.В.Саяпина).
- Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 25 мая 2011 г. и введены в действие с 1 июня 2011 г.
- Введены впервые.
- Область применения
1.1. Настоящие методические указания определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, биологической безопасности проведения работ. 1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов управления здравоохранением и лечебно-профилактических учреждений.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения». 2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 29.10.2007 N 720 «О внесении изменений в п. 5 Положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, утвержденного Постановлением Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 N 31». 2.3. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 N 11 «О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера» (зарегистрировано в Минюсте РФ 10.04.2009 N 13745). 2.4. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 07.07.2009 N 415н «Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения» (зарегистрирован в Минюсте РФ 09.07.2009 N 14292). 2.5. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.03.2008 N 88 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней». 2.6. Санитарные правила «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». СП 1.2.036-95 (утв. Постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 28.08.1995 N 14). 2.7. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». СанПиН 2.1.7.2790-10 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 09.12.2010 N 163. Зарегистрировано в Минюсте РФ 17.02.2011 N 19871). 2.8. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)». СП 1.3.1285-03 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 15.04.2003 N 42 «О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03». Зарегистрировано в Минюсте РФ 10.05.2003 N 4545). 2.9. Санитарно-эпидемиологические правила «Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами». СП 1.3.1318-03 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 30.04.2003 N 85 «О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 1.2.1318-03». Зарегистрировано в Минюсте РФ 19.05.2003 N 4558). 2.10. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». СП 1.3.2322-08 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2008 N 4 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08». Зарегистрировано в Минюсте РФ 21.02.2008 N 11197). 2.11. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Дополнения и изменения N 1 к СП 1.3.2322-08″. СП 1.3.2518-09 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 02.06.2009 N 42. Зарегистрировано в Минюсте РФ 08.07.2009 N 14280). 2.12. Санитарно-эпидемиологические правила «Санитарная охрана территории Российской Федерации». СП 3.4.2318-08 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 22.01.2008 N 3 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.4.2318-08». Зарегистрировано в Минюсте РФ 03.04.2008 N 11459). 2.13. Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации». СП 3.1.1.2521-09 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 09.06.2009 N 43 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.1.2521-09″. Зарегистрировано в Минюсте РФ 09.07.2009 N 14285). 2.14. Методические указания «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности»: МУ 1.3.2569-09. 2.15. Методические указания «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии»: МУ 3.3.2.2124-06. 2.16. Методические указания «Лабораторная диагностика холеры»: МУК 4.2.2218-07. 2.17. Методические указания «Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры»: МУ 3.1.1.2232-07. 2.18. Методические указания «Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чумы, сибирской язвы, холеры, туляремии, бруцеллеза, сапа и мелиоидоза) к антибактериальным препаратам»: МУК 4.2.2495-09. 2.19. Методические указания «Методы контроля бактериологических питательных сред»: МУК 4.2.2316-08. 2.20. Методические указания «Серологические методы в диагностике холеры»: МУК 4.2.2315-08. Дополнения к МУК 4.2.2218-07 «Лабораторная диагностика холеры».
3. Перечень сокращений
АБП — антибактериальные препараты
ИФА — иммуноферментный анализ
ЛПУ — лечебно-профилактическое учреждение МУ — методические указания
МУК — методические указания по контролю МФА — метод флуоресцирующих антител
ООИ — особо опасные инфекции
ПБА — патогенный биологический агент
ПЦР — полимеразная цепная реакция
ПЧС — противочумная станция
РАО — реакция агломерации объемная
РА — реакция агглютинации
РИВ — реакция иммобилизации вибрионов
РВА — реакция вибриоцидных антител
СанПиН — санитарные правила и нормативы СП — санитарные правила
ИХ-тест — иммунохроматографический тест
4. Общие положения
Характеристика болезни и возбудителя холеры Холера — особо опасная инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя инфекции, водным, пищевым и контактным путями распространения. Возбудитель холеры — холерный вибрион относится к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio и виду Vibrio cholerae. К виду Vibrio cholerae отнесены грамотрицательные, аспорогенные, полиморфные, слегка изогнутые или прямые палочки длиной 1,5-3,0 мкм и шириной 0,2-0,6 мкм, с одним полярно расположенным жгутиком, который длиннее тела клетки в 2-3 раза. Холерные вибрионы быстро размножаются в 1%-й пептонной воде, образуя через 6-8 ч на поверхности среды нежную пленку. Через 24 ч роста пленка становится грубой, среда слабо мутнеет. На поверхности плотного питательного агара (щелочной агар, pH 8,0) через 18-24 ч инкубации рост холерных вибрионов проявляется в формировании крупных (2-3 мм), гладких, прозрачных колоний с ровным краем, которые легко эмульгируются в физиологическом растворе. В косо проходящем свете они отсвечивают голубоватым цветом. На элективной среде TCBS на зеленом фоне среды колонии вибрионов круглые, гладкие с ровным краем, плоские, желтого цвета. При более длительной инкубации желтый цвет колоний часто переходит в зеленый цвет. Холерные вибрионы образуют индофенолоксидазу — тест дифференциации от представителей семейства Enterobacteriaceae, ферментируют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях до кислоты без газа — тест дифференциации от представителей родов Pseudomonadaceae, декарбоксилируют лизин и орнитин, но не дигидролизуют аргинин — тесты дифференциации от представителей других семейств (Aeromonas spp., Plesiomonas spp., Enhydrobacter spp., Photobacterium spp.) и отдельных видов рода Vibrio. Помимо этого, холерные вибрионы расщепляют до кислоты без газа сахарозу, маннозу, крахмал, маннит, не расщепляют арабинозу, салицин, дульцит, инозит. В отдельных случаях ферментацию маннозы холерными вибрионами возможно определить только в анаэробных условиях. Холерные вибрионы восстанавливают нитраты в нитриты, образуют индол, разжижают желатину, продуцируют нейраминидазу, лецитиназу, триглицероллипазу. V. cholerae по наличию специфического O-антигена распределяются на серологические группы. В настоящее время известно 206 серологических O групп холерных вибрионов. Возбудителями холеры являются холерные вибрионы O1 и O139 серологических групп. Холерные вибрионы других не O1/не O139 серологических групп могут вызывать спорадические или групповые случаи диарей, не склонные к эпидемическому распространению. Холерные вибрионы O1 серогруппы по различиям в полисахаридном компоненте O-антигена делятся на три серовара: Огава, Инаба и Гикошима. Серовар Гикошима не стабилен и реверсирует в один из основных сероваров, преимущественно — Огава. Известен R-антиген холерных вибрионов, описаны штаммы, агглютинирующиеся RO сывороткой и не агглютинирующиеся сыворотками O1, Огава или Инаба. У холерных вибрионов имеется общий жгутиковый H-антиген. Холерные вибрионы в пределах O1 серогруппы делятся на два биовара: классический и эльтор, имеющие существенные фенотипические и генетические отличия. Деление на биовары основывается на чувствительности к холерным диагностическим бактериофагам — классическому и эльтор, чувствительности к 50 ед./мл полимиксина B, агглютинации куриных эритроцитов, образовании ацетилметилкарбинола в реакции Фогес-Проскауэра.
Холерные вибрионы являются носителями умеренных фагов с низкой литической активностью. Известны фаги, активные в отношении холерных вибрионов O1 и не O1, включая O139 серологическую группу, а также с более узким спектром литического действия, в пределах отдельных групп штаммов,
+ —
например ctx и ctx холерных вибрионов. Одним из основных факторов вирулентности (и эпидемической значимости) холерных вибрионов, определяющих тяжесть клинической картины при холере, является холерный энтеротоксин или СТ (от англ. — cholera toxin), синтез которого контролируется кластером генов ctxAB. Описан ряд дополнительных токсинов: Zot и Ace токсины, цитотоксический комплекс RTX, цитототонический фактор Cef, термостабильный токсин ST, NMDCY токсин, шигаподобный токсин Slt, WO7 токсин, cholix toxin. Не менее важным фактором вирулентности холерных вибрионов являются токсин-корегулируемые пили адгезии или TCP (от англ. — toxin-coregulated pilus) — ключевой фактор колонизации. За синтез пилей TCP отвечают гены tcpA-F, среди них ген tcpA — за биосинтез основной субъединицы пилей. Нетоксигенные штаммы холерных вибрионов обладают гемолитической активностью, которая включает активность нескольких компонентов: рициноподобного галактозоспецифичного лектина (hlyA) и комплекса ферментов гидролаз, ведущим из которых является липаза (lipA). Гемолитическая активность является ведущим фактором патогенности у штаммов возбудителей холеры O1 и O139 серогрупп, не имеющих ген холерного токсина. Такие штаммы могут вызывать спорадические случаи диареи различной степени тяжести, но не склонны к широкому распространению. Способность к гемолизу эритроцитов барана в тесте Грейга, коррелирующая с липазной активностью, является визуализированным тестом, свидетельствующим о том, что штамм не может вызывать тяжелую клиническую картину холеры и не способен к широкому эпидемическому распространению. Понятие эпидемической значимости базируется на определении комплекса показателей: — прямые — выявление гена холерного токсина в ПЦР и определение активности его продукции на кроликах-сосунках; — косвенные — отсутствие гемолитической, липазной активности, поздняя ферментация маннита, высокая адгезивная активность in vitro (на модели эритроцитов). Холерные вибрионы имеют две хромосомы: первую (или большую размером 2 960 т.п.н.) и вторую (или малую размером 1 070 т.п.н.). На большой хромосоме V. cholerae расположены гены патогенности: ctxAB, кодирующий биосинтез CT, гены, определяющие продукцию дополнительных холерных токсинов, гены tcpA-F, кодирующие продукцию TCP, а также гены, необходимые для репликации, транскрипции, репарации ДНК, биосинтеза клеточной стенки и O-антигена. Биосинтез O1 антигена определяет кластер генов, обозначенный как wbe. Продукция O139 антигена кодируется кластером генов, также локализованном на большой хромосоме и имеющим обозначение wbf. Выявление с помощью ПЦР генов wbe и wbf, специфичных для холерных вибрионов O1 и O139 серологических групп, позволяет определить серогруппу возбудителя холеры. На малой хромосоме, помимо генов с неустановленной функцией, локализованы структурные гены hlyA, отвечающие за синтез термолабильного гемолизина, а также остров интегронов, содержащий гены, кодирующие антибиотикоустойчивость, и участвующий в приобретении новых генов. Следует отметить, что ген hlyA присутствует в хромосоме всех штаммов V. cholerae, как способных к биосинтезу термолабильного гемолизина, так и не продуцирующих этот белок. Однако в гене hlyA холерных вибрионов классического биовара, в отличие от такового V. cholerae эльтор, имеется делеция протяженностью 11 п.н., вследствие чего продукция гемолизина вибрионами этого биовара невозможна. Штаммы холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп, содержащие гены ctxAB и tcpA-F, вызывают холеру и являются эпидзначимыми. Эти штаммы не лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Эпидемически не значимые штаммы холерных вибрионов, не содержащие генов ctxAB и tcpA-F, лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина) ctxAB варианты холерных вибрионов O1, также как и других серогрупп могут вызывать спорадические (единичные) или групповые (при общем источнике инфицирования) заболевания, не склонные к эпидемическому распространению. Известна изменчивость холерных вибрионов по морфологии колоний и клеток, по образованию некультивируемых и Л-форм, по агглютинабельности диагностическими O, Инаба и Огава сыворотками (вплоть до полной утраты) и агглютинабельности RO сывороткой. Нередко сочетается изменчивость по культурально-морфологическим признакам, агглютинабельности холерными сыворотками и чувствительности к фагам. Холерные вибрионы O1 и O139 серогрупп, как правило, чувствительны к набору антибактериальных препаратов. Однако широкое применение антибактериальных препаратов в очагах холеры способствовало увеличению резистентности холерных вибрионов к ним. При проведении лабораторной диагностики холеры регламентируется использование зарегистрированных диагностических препаратов и тест-систем в соответствии с прилож. 4, позволяющих выявлять определенные фено- и генотипические признаки холерных вибрионов.
5. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального уровня
5.1. Порядок организации и проведения
лабораторной диагностики холеры для лабораторий лечебно-профилактических учреждений
5.1.1. Требования к бактериологическим лабораториям лечебно-профилактических учреждений, осуществляющим диагностические исследования на холеру
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов Лечебно-профилактические учреждения, лаборатории которых осуществляют диагностические исследования на холеру, должны иметь лицензию на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей III-IV групп патогенности (опасности). Лаборатории ЛПУ должны иметь санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими санитарными правилами о порядке выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами. Учет, хранение, передача и транспортирование выделенных культур холерных вибрионов (подозрительных) должны осуществляться в соответствии с действующими нормативными документами о порядке учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по сбору, хранению и удалению отходов лечебно-профилактических учреждений. Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.
Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, участвующим в выполнении исследований на холеру Исследования на холеру могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие соответствующие курсы по специальности «Бактериология», имеющие допуск к работе с ПБА III-IV групп на основании приказа руководителя учреждения. Специалисты должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет и иметь сертификат специалиста. Инженерно-технический персонал, дезинфекторы и санитарки проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями. Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием, повышение их квалификации по лабораторной диагностике холеры представлен в прилож. 1. Требования к знаниям и умениям специалистов ЛПУ, выполняющих бактериологические исследования на холеру, приведены в прилож. 2.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала Каждая бактериологическая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале. Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III-IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований Контроль качества диагностических исследований на холеру в лабораториях ЛПУ включает: — контроль качества питательных сред, диагностических препаратов, дистиллированной воды, химических реактивов и дезинфицирующих средств; — своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования; — контроль качества стерилизации лабораторной посуды; — контроль работы паровых и суховоздушных стерилизаторов; — контроль работы бактерицидных ламп;
— контроль температурного режима работы холодильников и термостатов; — проверка состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности; — проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования. Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на холеру Для проведения диагностических исследований на холеру в лабораториях ЛПУ должны быть в наличии: — питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 3, 8); — диагностические препараты, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 4, 8); — химические реактивы (прилож. 5);
— приборы, оборудование, расходные материалы (прилож. 6).
5.1.2. Номенклатура и объем исследований
В лабораториях ЛПУ проводят диагностические исследования материала от лиц, подлежащих обследованию на холеру при проведении эпидемиологического надзора в соответствии с требованиями действующих санитарных правил по профилактике холеры, в периоды обследования дифференцированно для территорий, различных по типам эпидемических проявлений холеры. В лабораториях ЛПУ проводят диагностические исследования материала в следующем объеме: 1) посев на среды накопления и дифференциально-диагностические, выделение культуры, подозрительной на холерный вибрион по морфологическим признакам; 2) идентификация культуры, подозрительной на холерный вибрион, по следующим тестам: — ферментация на полиуглеводной среде;
— определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с холерными диагностическими сыворотками; 3) экспресс и ускоренная диагностика: методы МФА и РИВ (при исследовании материала с подозрением на холеру).
5.1.3. Порядок лабораторной диагностики холеры в лабораториях лечебно-профилактических учреждений
Отбор и транспортировка проб клинического материала При проведении бактериологического анализа на холеру исследуется клинический материал: испражнения, рвотные массы, желчь и секционный материл от умерших, причиной смерти которых явились кишечные инфекции неустановленной этиологии. Отбор, упаковка и транспортирование проб клинического материала для исследования осуществляются в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры. Материал от больных забирает медицинский персонал ЛПУ немедленно при выявлении больного, до начала лечения антибиотиками. Кратность отбора проб — в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по эпидемиологическому надзору за холерой. В зависимости от времени забора материала и времени работы лаборатории пробы на исследование отбирают в соответствии со следующей схемой: 1. При круглосуточном режиме работы лаборатории материал забирают в нативном виде, в 5-10 мл 1%-й пептонной воды pH 8,4 +/- 0,1 (транспортная среда) или в 50 мл 1%-й пептонной воды pH 8,4 +/- 0,1 (1-я среда накопления). 2. При односменной работе лаборатории:
а) при взятии материала в 6.00-10.00 ч утра и доставке в бактериологическую лабораторию до 10 ч утра материал забирают в 5-10 мл 1%-й пептонной воды (транспортная среда) или в 50 мл 1%-й пептонной воды (1-я среда накопления); б) при взятии материала после 10 ч утра и доставке в течение рабочего дня лаборатории материал забирают в 5-10 мл 1%-й пептонной воды (транспортная среда); в) при взятии материала по окончании рабочего дня лаборатории и доставке в лабораторию до 10 ч утра следующего рабочего дня материал забирают в 5-10 мл 1%-й пептонной воды (транспортная среда); г) при взятии материала в выходные дни лаборатории и доставке материала до 10 ч утра следующего рабочего дня материал забирают в 50 мл 1%-й пептонной воды с теллуритом калия (транспортная среда). Флаконы и пробирки с 1%-й пептонной водой должны быть этикетированы с указанием названия среды и даты ее изготовления. При этом 1%-я пептонная вода хранится при температуре не выше (10 +/- 0,2) °C. От больных тяжелой формой материал направляют в лабораторию нативным и в 1%-й пептонной воде. В транспортную среду вносят 1-2 мл или 1-2 г материала на 5-6 мл среды. Обильные водянистые испражнения и рвотные массы в количестве 10-20 мл отбирают из индивидуального судна в стерильные контейнеры объемом 60-100 мл стерильными ложками или автоматической пипеткой переменного объема. У больных легкими формами — 1-2 г испражнений собирают в стерильный контейнер объемом 60-100 мл или петлю (зонд) ректальную стерильную смачивают стерильным физиологическим раствором и вводят в прямую кишку на глубину 5-6 см. Материал помещают в пробирку с транспортной средой. Желчь берут при дуоденальном зондировании в лечебном учреждении. В отдельные полимерные контейнеры объемом 60 мл собирают две порции: из желчного пузыря и желчных протоков (B и C). Материал доставляют нативным. Пробы маркируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией, заполняют бланк-направление и помещают в контейнер (кейс) для транспортировки биологического материала на исследование. При необходимости пробы сохраняют при комнатной температуре (24,0 +/- 1,0 °C) в биксе, ящике, шкафу в специально выделенной комнате, закрывающейся на замок.
Исследование клинического материала
Профилактические исследования клинического материала на холеру проводят в течение рабочего дня, диагностические исследования материала от больного с подозрением на холеру, а также в случае выделения культуры, подозрительной на холерный вибрион — в условиях круглосуточного режима работы лаборатории с включением экспресс и ускоренных методов диагностики. При исследовании материала от больных холерой (подозрительных) среды накопления с ингибиторами не используются. Методы исследования клинического материала на холеру в лабораториях ЛПУ: бактериологический и ускоренные (слайд-агглютинация, РИВ и МФА). Все изолированные от людей культуры, подозрительные на холерные вибрионы, независимо от результатов слайд-агглютинации холерными сыворотками, передаются для дальнейшей идентификации в установленном порядке.
- Исследование клинического материала на холеру при круглосуточном режиме работы лаборатории
I этап исследования
Посев нативного материала (испражнения, рвотные массы и др.) и материала, доставленного в транспортной среде, в первую жидкую среду накопления (1%-ю пептонную воду) и на плотные питательные среды: щелочной агар и элективную среду типа TCBS. Материал, доставленный в 5 мл 1%-й пептонной воды, полностью засевают в 50 мл среды накопления. При доставке материала в 50 мл 1%-й пептонной воды не позже 2 ч после забора пробу помещают в термостат на 6 ч (первая среда накопления). При доставке в более поздние сроки 5 мл материала засевают в 50 мл 1%-й пептонной воды. Материал от лиц, принимавших антибиотики, активные по отношению к возбудителю холеры, засевают в большой объем жидкой накопительной среды (200-300 мл) и на 2 чашки щелочного агара. Посевы инкубируют при 37 °C в течение 24 ч, производя высев через каждые 8-10 ч на пластинки щелочного агара. Вторую среду накопления при этом не используют. Постановка ускоренных методов исследования с нативным материалом: МФА и РИВ. При получении положительного результата в двух методах выдают устный предварительный положительный ответ по предусмотренной в учреждении схеме, в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры.
II этап исследования
(через 6-8 ч от начала исследования)
Высев с первой среды накопления на щелочной агар, элективную среду и во вторую среду накопления (1%-ю пептонную воду). Постановка ускоренных методов исследования с материалом из I среды накопления при отрицательных результатах в МФА и РИВ на I этапе исследования. Выдача устного предварительного положительного ответа при положительном результате в двух методах по предусмотренной схеме.
III этап исследования
(через 12-16 ч от начала исследования)
Высев из второй среды накопления на щелочной агар. Просмотр посевов на щелочном агаре, засеянных на I этапе исследования, в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа. Производят отбор подозрительных колоний на полиуглеводную среду и щелочной или другой питательный агар для накопления культур. При наличии достаточного количества подозрительных колоний ставят следующие тесты: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO, при отрицательном результате — с сывороткой O139 серогруппы; — постановка МФА, РИВ.
Выдача устного предварительного положительного ответа при положительном результате в двух методах (наличие индофенолоксидазы, положительный результат слайд-агглютинации, МФА или РИВ) по предусмотренной схеме.
IV этап исследования
(через 18-24 ч от начала исследования)
Просмотр посевов на щелочном агаре и на элективной среде, сделанных на I-II этапах исследования в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа. Отбор колоний, подозрительных на колонии холерных вибрионов, постановка тестов, предусмотренных на III этапе исследования. Отсев подозрительных на холерные вибрионы колоний на одну из полиуглеводных сред и щелочной агар для накопления культуры. Выдача устного предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками; — положительные результаты ускоренной диагностики методами МФА и РИВ.
V этап исследования
(через 24-36 ч от начала исследования)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре, постановка тестов, предусмотренных на III этапе исследования. Выдача устного предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками; — положительные результаты ускоренной диагностики методами МФА и РИВ. Подготовка выделенной культуры к транспортированию. Передача выделенной культуры для идентификации в установленном порядке.
2. Исследование клинического материала на холеру при односменной работе лаборатории
В течение рабочей недели для отбора проб используют 1%-ю пептонную воду без теллурита калия в объеме 5-10 мл (транспортная среда) или 50 мл (среда накопления). В качестве 1-й или 2-й среды накопления используют 1%-ю пептонную воду (pH 8,4 +/- 0,1) с теллуритом калия в конечной концентрации 1:100 000 — 1:200 000 в соответствии с результатами его контроля.
1-й вариант. Клинический материал поступил в лабораторию до 10 ч утра. Время взятия материала — 6.00-10.00 ч утра.
I этап исследования
а) материал доставлен в транспортной среде (5-10 мл 1%-й пептонной воды) или нативным (испражнения, рвотные массы и др.). Посев материала в 50 мл 1%-й пептонной воды — 1-я среда накопления. Кроме того, нативный материал засевают на плотные питательные среды: щелочной агар и элективную среду типа TCBS. б) материал доставлен не позже 2 ч после забора в 50 мл 1%-й пептонной воды. Помещают в термостат на инкубацию как 1-ю среду накопления.
II этап исследования
через 6 ч (в течение 1-го рабочего дня)
Пересев с 1-й среды накопления во 2-ю среду накопления с теллуритом калия и высев на щелочной агар и элективную среду типа TCBS.
III этап исследования
через 24-26 ч от начала исследования (в начале 2-го рабочего дня)
Высев со 2-й среды накопления на щелочной агар и элективную среду типа TCBS. Просмотр посевов на щелочном агаре и элективной среде, засеянных на I и II этапах исследования, в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа. Отсев колоний, подозрительных на колонии холерных вибрионов, на одну из полиуглеводных сред и щелочной агар для накопления культуры. При достаточном количестве подозрительные на холерные вибрионы колонии изучают с использованием следующих тестов: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача устного предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками.
IV этап исследования
через 48-50 ч от начала исследования (в течение 3-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре, постановка тестов, предусмотренных на III этапе исследования. Просмотр посевов на щелочном агаре и элективной среде, сделанных на I-III этапах исследования, в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа. Отбор со щелочного агара и элективной среды подозрительных на холерные вибрионы колоний на одну из полиуглеводных сред и щелочной агар для накопления культуры. Подозрительные на холерные вибрионы колонии изучают с использованием следующих тестов: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками.
V этап исследования
через 72-74 ч (в течение 4-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре и изучение их по тестам, указанным для IV этапа исследования. Подготовка выделенной культуры к транспортированию. Передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в установленном порядке возможна на любом этапе.
2-й вариант. Клинический материал поступил после 10 ч утра, в течение рабочего дня лаборатории. Время взятия материала — 10.00 — до конца рабочего дня лаборатории. Материал доставлен в транспортной среде (5-10 мл 1%-й пептонной воды).
I этап исследования
(в течение 1-го рабочего дня)
Посев 5-10 мл транспортной среды с материалом в 50 мл 1%-й пептонной воды с теллуритом калия — 1-я среда накопления и высев на щелочной агар и элективную среду типа TCBS.
II этап исследования
через 24-26 ч от начала исследования (в начале 2-го рабочего дня)
Высев с 1-й среды накопления во 2-ю среду накопления без теллурита калия, на щелочной агар и элективную среду типа TCBS. Просмотр в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа посевов на щелочном агаре и элективной среде, сделанных на I этапе исследования. Отсев подозрительных на холерные вибрионы колоний на полиуглеводную среду и щелочной или другой питательный агар для накопления культуры. Подозрительные на холерные вибрионы колонии изучают с использованием следующих тестов: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы, на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками.
III этап исследования
через 30-32 ч от начала исследования (в конце 2-го рабочего дня)
Высев через 6 ч инкубации со 2-й среды накопления на щелочной агар.
IV этап исследования
через 48-50 ч от начала исследования (в течение 3-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре, постановка тестов, предусмотренных на II этапе исследования. Просмотр в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа посевов на щелочном агаре и элективной среде, сделанных на II и III этапах исследования. Отсев подозрительных на холерные вибрионы колоний на полиуглеводную среду и щелочной или другой питательный агар для накопления культуры. Подозрительные на холерные вибрионы колонии изучают с использованием следующих тестов: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача устного предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы, на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками.
V этап исследования
через 72-74 ч (в течение 4-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре. Изучение по тестам, предусмотренным на IV этапе. Подготовка выделенной культуры к транспортированию. Передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в установленном порядке возможна на любом этапе.
3-й вариант. Время взятия материала — по окончании рабочего дня лаборатории. Клинический материал доставлен в лабораторию до 10 ч утра следующего рабочего дня.
I этап исследования (1-й рабочий день)
Материал доставлен в транспортной среде (5-10 мл 1%-й пептонной воды без теллурита калия). Посев материала в 50 мл 1%-й пептонной воды (1-я среда накопления), на щелочной агар и элективную среду типа TCBS.
II этап исследования
через 6 ч от начала исследования (в течение 1-го рабочего дня)
Пересев с 1-й среды накопления во 2-ю среду накопления (1%-я пептонная вода с теллуритом калия), высев на щелочной агар и элективную среду типа TCBS.
III этап исследования
через 24-26 ч от начала исследования (в начале 2-го рабочего дня)
Высев со 2-й среды накопления на щелочной агар. Просмотр в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа посевов на щелочном агаре и элективной среде, засеянных на I и II этапах исследования. Отсев подозрительных на холерные вибрионы колоний на полиуглеводную среду и на щелочной или другой питательный агар для накопления культуры. Подозрительные на холерные вибрионы колонии изучают с использованием следующих тестов: — микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — определение индофенолоксидазы;
— слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. При положительном результате в двух методах — выдача устного предварительного положительного ответа по предусмотренной схеме.
IV этап исследования
через 48-50 ч от начала исследования (в течение 3-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре, постановка тестов, предусмотренных на III этапе исследования. Просмотр в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа посевов на щелочном агаре и элективной среде. Отсев на полиуглеводную среду и щелочной или другой питательный агар для накопления культуры, подозрительной на холерные вибрионы. Определение индофенолоксидазы.
Микроскопия мазка, окрашенного по Граму. Слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача предварительного положительного ответа об обнаружении в исследуемом материале культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками.
V этап исследования
через 72-74 ч от начала исследования (в течение 4-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре. Изучение культур по тестам предыдущего этапа. Подготовка выделенной культуры к транспортированию. Передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в установленном порядке возможна на любом этапе.
4-й вариант. Время взятия материала — выходные дни лаборатории. Клинический материал поступил до 10 ч утра следующего рабочего дня.
I этап исследования
(1-й рабочий день)
Материал доставлен в транспортной среде (50 мл 1%-й пептонной воды с теллуритом калия). Посев 5-10 мл среды с материалом в 50 мл 1%-й пептонной воды — 1-я среда накопления.
II этап исследования
через 6 ч от начала исследования (в течение 1-го рабочего дня)
Пересев с 1-й среды накопления во 2-ю среду накопления (1%-я пептонная вода с теллуритом калия), высев на щелочной агар и элективную среду типа TCBS.
III этап исследования
через 24-26 ч от начала исследования (в начале 2-го рабочего дня)
Высев со 2-й среды накопления на щелочной агар. Просмотр в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа посевов на щелочном агаре и элективной среде типа TCBS. Отсев колоний, подозрительных на колонии холерного вибриона, на полиуглеводную среду и щелочной или другой питательный агар для накопления культуры. При достаточном количестве подозрительных на холерные вибрионы колоний ставят тесты: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Грамму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача устного предварительного положительного ответа по предусмотренной схеме.
IV этап исследования
через 48-50 ч от начала исследования (в течение 3-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре, постановка тестов, предусмотренных на III этапе исследования. Просмотр посевов в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа на щелочном агаре и на элективной среде, засеянных на II и III этапах исследования. Отсев колоний, подозрительных на колонии холерного вибриона, на полиуглеводную среду и на щелочной или другой питательный агар для накопления культуры. Определение индофенолоксидазы.
Микроскопия мазка, окрашенного по Граму. Слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO и O139 серогруппы. Выдача предварительного положительного ответа по предусмотренной схеме.
V этап исследования
через 72-74 ч от начала исследования (в течение 4-го рабочего дня)
Отбор культур с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре. Изучение культуры по тестам, предусмотренным на IV этапе. Передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в установленном порядке возможна на любом этапе.
5.1.4. Оформление результатов исследования
Регистрация результатов анализа в лаборатории ЛПУ производится по учетным формам в соответствии с действующими МУК по лабораторной диагностике холеры. Выдача ответов для историй болезней — по унифицированным формам.
5.1.5. Порядок взаимодействия лечебно-профилактических учреждений с учреждениями Роспотребнадзора
Информация о выделенной в лаборатории ЛПУ культуре холерного вибриона передается в соответствии со схемой выдачи результатов исследований (прилож. 9). Культуры холерных вибрионов направляют в лаборатории ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте, при ее отсутствии в лаборатории Регионального центра по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центра индикации и диагностики опасных инфекционных болезней (территориальное противочумное учреждение). Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.
5.2. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте
Российской Федерации
5.2.1. Требования к лабораториям филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации, осуществляющим бактериологические исследования на холеру
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте, на базе филиалов которого функционируют бактериологические лаборатории, должен иметь лицензию на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей III-IV групп патогенности (опасности). Бактериологические лаборатории филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации должны иметь санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими санитарными правилами о порядке выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных болезней человека I-IV групп патогенности (опасности). Лаборатории филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации. Учет, хранение, передача и транспортирование выделенных культур, подозрительных на холерные вибрионы, должны осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по санитарно-эпидемиологическим требованиям к обращению с медицинскими отходами. Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.
Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на холеру Исследования на холеру могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие курсы по специальности «Бактериология», имеющие допуск к работе с ПБА III-IV групп на основании приказа руководителя учреждения. Инженерно-технический персонал, дезинфекторы и санитарки проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями. Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в 5 лет и иметь сертификат специалиста. Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием и повышение их квалификации по лабораторной диагностике холеры представлены в прилож. 1. Требования к знаниям и умениям специалистов, выполняющих бактериологические исследования на холеру, приведены в прилож. 2.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале. Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III-IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований Контроль качества диагностических исследований на холеру в лабораториях филиалов ФБУЗ ЦГиЭ в субъекте Российской Федерации включает: — контроль качества питательных сред, диагностических препаратов и тест-систем, дистиллированной воды, дезинфицирующих средств, химических реактивов; — своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования; — контроль качества стерилизации фильтровальных установок, лабораторной посуды; — контроль качества стерилизации паровых и суховоздушных стерилизаторов; — контроль работы бактерицидных ламп;
— контроль температурного режима работы холодильников и термостатов; — проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности; — проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования. Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на холеру Для проведения диагностических исследований на холеру в лабораториях должны быть в наличии: — питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке и прошедшие контроль качества (прилож. 3, 8); — диагностические препараты и тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 4, 8); — химические реактивы (прилож. 5);
— приборы, оборудование, расходные материалы (прилож. 6).
5.2.2. Номенклатура и объем исследований
Лаборатории филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации при осуществлении эпидемиологического надзора проводят плановые профилактические исследования на холеру в сроки, определенные для территорий, различных по типам эпидемических проявлений холеры, в действующих санитарных правилах: — материала от лиц, подлежащих лабораторному обследованию; — проб из объектов окружающей среды.
В лабораториях филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе), в субъекте проводят диагностические исследования материала в следующем объеме: 1) посев на среды накопления и дифференциально-диагностические, выделение культуры, подозрительной на возбудителя холеры; 2) идентификация культуры, подозрительной на возбудителя холеры, по следующим тестам: — микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — выявление индофенолоксидазы;
— слайд-агглютинация с холерными диагностическими сыворотками; 3) экспресс- и ускоренная диагностика: методы МФА и РИВ.
5.2.3. Порядок лабораторной диагностики холеры в лабораториях филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации
5.2.3.1. Порядок исследования клинического материала
- Отбор проб клинического материала При проведении бактериологического анализа на холеру исследуется клинический материал: испражнения, рвотные массы, желчь. Отбор, упаковка проб клинического материала для исследования, транспортировка, форма направления — в соответствии с действующими МУК по лабораторной диагностике холеры. Материал от больных с дисфункцией кишечника забирает медицинский персонал ЛПУ в соответствии с разделом 5.1.3.
- Исследование клинического материала Методы исследования клинического материала на холеру в лабораториях филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальных образованиях (городах и административных районах субъекта, объединенных по территориальному признаку)»: бактериологический и ускоренные (слайд-агглютинация, МФА и РИВ). Профилактические исследования клинического материала на холеру проводят в течение рабочего дня, диагностические исследования материала от больного с подозрением на холеру, а также в случае выделения культуры, подозрительной на холерный вибрион, — в условиях круглосуточного режима работы лаборатории с включением экспрессных и ускоренных методов диагностики. При исследовании материала от больных холерой (подозрительных) среды накопления с ингибиторами не используются. Порядок исследования материала от лиц, подлежащих обследованию при эпидемиологическом надзоре за холерой, при круглосуточной работе лаборатории осуществляется в соответствии с изложенным в п. 5.1.3 (1. Исследование клинического материала на холеру при круглосуточном режиме работы лаборатории). Порядок исследования на холеру материала от лиц, подлежащих обследованию при эпидемиологическом надзоре, при односменной работе лаборатории осуществляется в зависимости от времени забора и доставки материала в лабораторию — варианты 1-4, изложенные в п. 5.1.3 (2. Исследование клинического материала при осуществлении эпидемиологического надзора за холерой при односменной работе лаборатории). Все изолированные от людей культуры, подозрительные на холерные вибрионы, независимо от результатов слайд-агглютинации холерными сыворотками передаются для дальнейшей идентификации в установленном порядке. Регистрация результатов анализа и выдача ответов производится по учетным формам, предусмотренным в действующих методических указаниях по лабораторной диагностике холеры.
5.2.3.2. Порядок исследования на холеру проб из объектов окружающей среды
- Отбор и транспортирование проб из объектов окружающей среды Отбор и доставка для исследования проб воды из поверхностных водоемов, хозяйственно-бытовых и сточных вод, содержимого выгребных туалетов, ила, гидробионтов, мух, смывов с объектов окружающей среды, пищевых продуктов и другие и форма направления — в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры.
- Исследование проб воды из поверхностных водоемов
I этап исследования
Посевы проб воды из поверхностных водоемов с целью первичного накопления холерных вибрионов в зависимости от времени доставки (варианты). 1-й вариант — к пробе воды добавляют раствор основного пептона до 1%-й концентрации; определяют pH; подщелачивают 10%-м раствором едкого натра до pH 8,4 +/- 0,1 (1-я среда накопления). Время инкубации в 1-й среде накопления — 8-10 ч. 2-й вариант — в воду добавляют раствор основного пептона до 1%-й концентрации и теллурит калия из рабочего разведения 1:1000 до конечной концентрации 1:100000 или 1:200000 в соответствии с результатами его контроля; устанавливают pH 8,4 +/- 0,1 (1-я среда накопления). Время инкубации в 1-й среде накопления — 18-24 ч. 3-й вариант — производят фильтрование воды через мембранные фильтры N 2 или 3, смыв с фильтров сеют в 1-ю среду накопления (1%-я пептонная вода pH 8,4 +/- 0,1) и на щелочной агар.
II этап исследования
1-й вариант — через 8-10 ч от начала исследования: — пересев с 1-й среды накопления во 2-ю (1%-ю пептонную воду с теллуритом калия и без него; при этом время инкубации в среде без теллурита калия — 6 ч, а с теллуритом калия — 18-20 ч) и на щелочной агар. 2-й вариант — через 18-24 ч от начала исследования: — пересев с 1-й среды накопления во 2-ю (1%-ю пептонную воду без теллурита калия; при этом время инкубации в среде без теллурита калия — 6-8 ч) и на щелочной агар. 3-й вариант — через 12-18 ч от начала исследования: — пересев с 1-й среды накопления во 2-ю среду накопления и на щелочной агар. При интенсивном бактериальном загрязнении проб используют 3-ю среду накопления.
III этап исследования
Высев со 2-й среды накопления на щелочной агар.
IV этап исследования
Отбор колоний, подозрительных на колонии холерного вибриона, со щелочного агара в косо проходящем свете стереоскопического микроскопа. Отсев колоний, подозрительных на колонии холерного вибриона, на одну из полиуглеводных сред и щелочной агар для накопления чистой культуры. В случае проведения срочного анализа и при достаточном количестве подозрительных колоний: — определение индофенолоксидазы;
— микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO, O139 серогруппы; — возможно использование методов МФА и РИВ. В этом случае выдача устного предварительного положительного ответа по предусмотренной схеме об обнаружении в исследуемых пробах культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы, на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками; — положительные результаты ускоренной диагностики методами МФА и РИВ.
V этап исследования
Отбор культуры с характерным ростом на полиуглеводной среде и щелочном агаре. Определение индофенолоксидазы.
Микроскопия мазка, окрашенного по Граму. Слайд-агглютинация с сыворотками холерными O1 серогруппы (при положительном результате — с Инаба, Огава), RO, O139 серогруппы. Возможно использование методов МФА и РИВ. Выдача устного предварительного положительного ответа по предусмотренной схеме об обнаружении в исследуемых пробах культур, подозрительных на холерные вибрионы O1, RO или O139 серогруппы, на основании результатов следующих тестов: — характерные морфологические и культуральные признаки; — положительный тест на индофенолоксидазу; — положительная реакция слайд-агглютинации с соответствующими холерными диагностическими сыворотками; — положительные результаты ускоренной диагностики методами МФА и РИВ. Подготовка выделенной культуры к транспортированию. Срочная передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в установленном порядке. Неагглютинирующиеся холерными сыворотками O1 серогруппы, RO и O139 серогруппы культуры идентифицируют на месте по биохимическим признакам с целью уточнения родовой и видовой принадлежности или по согласованию передают в лабораторию ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии».
3. Исследование хозяйственно-бытовых сточных вод Подготовка проб сточной воды. Фильтрация сточной воды (1 л) через фильтр для освобождения от механических примесей (при необходимости). При заборе сточных вод марлевыми тампонами их помещают в емкости с накопительной средой (1%-й раствор пептона); устанавливают pH 8,4 +/- 0,1 (1-я среда накопления). Время инкубации 1-й среды накопления — 8-10 ч, в случае добавления теллурита калия — 18-24 ч. Далее этапы исследования хозяйственно-бытовых сточных вод осуществляются в соответствии с изложенными в п. 5.2.3.2 пп. 2 (Порядок исследования проб воды из поверхностных водоемов).
5.2.4. Оформление результатов исследования
Регистрация результатов анализа в лабораториях филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации производится по учетным формам в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры.
5.2.5. Порядок взаимодействия филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации с учреждениями Роспотребнадзора
Информация о культуре холерного вибриона, выделенной в лаборатории филиала ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации из объектов окружающей среды передается в соответствии со схемой выдачи результатов исследований на холеру (прилож. 10). Культура холерного вибриона направляется в лабораторию ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, а при ее отсутствии в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней (региональное противочумное учреждение). Доставку осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.
5.3. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
5.3.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, в структуре которых отсутствуют отделы
и лаборатории особо опасных инфекций
Лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации, в структуре которых отсутствуют отделы и лаборатории особо опасных инфекций (имеющие санитарно-эпидемиологическое заключение на право работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности), при осуществлении эпидемиологического надзора за холерой проводят плановые профилактические исследования на холеру материала от лиц, подлежащих обследованию, и проб из объектов окружающей среды до этапа выделения культуры в следующем объеме:
- Посев на среды накопления и элективную среду типа TCBS, выделение культуры, подозрительной на холерный вибрион;
- Идентификация культуры, подозрительной на холерный вибрион, по следующим тестам: — микроскопия мазка, окрашенного по Граму; — выявление индофенолоксидазы; — слайд-агглютинация с холерными диагностическими сыворотками;
- Экспресс- и ускоренная диагностика: методы МФА и РИВ. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации, в структуре которых отсутствуют отделы или лаборатории особо опасных инфекций, соответствует порядку для лабораторий филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальных образованиях в субъектах Российской Федерации (раздел 5.2).
5.3.2. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
5.3.2.1. Требования к лабораториям особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, осуществляющим бактериологические исследования на холеру
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, на базе которого функционируют лаборатории ООИ, должны иметь лицензию на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей II-IV групп патогенности (опасности). Лаборатории ООИ должны иметь санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами II-IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими санитарными правилами о порядке выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности). Лаборатории ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации. Учет, хранение, передача и транспортирование выделенных культур холерных вибрионов должны осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по санитарно-эпидемиологическим требованиям к обращению с медицинскими отходами. Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.
Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на холеру Исследования на холеру могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие курсы специализации по особо опасным инфекциям, имеющие допуск к работе с ПБА II-IV групп на основании приказа руководителя учреждения. Инженерно-технический персонал, дезинфекторы и санитарки проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями. Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в 5 лет и иметь сертификат специалиста. Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием, повышение их квалификации по лабораторной диагностике холеры представлен в прилож. 1. Требования к знаниям и умениям специалистов лаборатории ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии», выполняющих бактериологические исследования на холеру, приведены в прилож. 2.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале. Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным и зараженным возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований Контроль качества диагностических исследований на холеру в лабораториях ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» включает: — контроль качества питательных сред, диагностических препаратов и тест-систем, эталонных штаммов, дисков с антибактериальными препаратами, дистиллированной воды, дезинфицирующих средств, химических реактивов; — контроль эффективности мембранных фильтров; — своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования; — контроль качества стерильности фильтровальных установок, лабораторной посуды; — контроль качества стерилизации паровых и суховоздушных стерилизаторов; — контроль работы бактерицидных ламп;
— контроль температурного режима работы холодильников и термостатов; — проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности; — проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования. Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на холеру Для проведения диагностических исследований на холеру в лабораториях должны быть в наличии: — питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 3, 8); — диагностические препараты, тест-системы, антибактериальные препараты, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 4, 7, 8); — химические реактивы (прилож. 5);
— приборы, оборудование, расходные материалы (прилож. 6).
5.3.2.2. Номенклатура и объем исследований
Лаборатории ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации проводят: — исследование материала от больных и умерших с подозрением на холеру; — профилактические исследования материала от лиц, подлежащих обследованию на холеру в соответствии с требованиями эпиднадзора (по согласованию); — исследования проб из объектов окружающей среды; — идентификацию культур холерных вибрионов по полной схеме с определением эпидемической значимости в ПЦР по наличию генов ctxA и tcpA и антибиотикограммы диско-диффузионным методом; — контроль качества питательных сред.
5.3.2.3. Порядок диагностических исследований на холеру в лабораториях особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
Порядок исследования клинического материала осуществляется в соответствии с изложенным в п. 5.2.3.1. Порядок бактериологического анализа на холеру проб из объектов окружающей среды соответствует п. 5.2.3.2. В порядок бактериологического исследования на холеру (клинического материала и проб из объектов окружающей среды) дополнительно включены тесты идентификации культур холерных вибрионов, выделенных на различных этапах, а также культур, поступивших из ЛПУ и филиалов ФБУЗ: — изучение культуральных, морфологических свойств и подвижности микробных клеток; — определение типа расщепления глюкозы (тест Хью-Лейфсона); — определение ферментации углеводов и многоатомных спиртов (сахарозы, маннозы, арабинозы и маннита); — определение декарбоксилазной и дигидролазной активности по отношению к аминокислотам (аргинин, лизин, орнитин); — постановка развернутой реакции агглютинации с холерными агглютинирующими сыворотками O1, Инаба, Огава, RO и реакции слайд-агглютинации с холерной сывороткой O139 серогруппы;
- оценка эпидемической значимости культуры комплексным методом — по гемолитической активности в пробе Грейга, чувствительности к холерным
+ — эльтор фагам ctx и ctx (кроме холерных вибрионов O139), в ПЦР на наличие генов ctxA и tcpA, в реакции объемной агломерации с полимерным антилипазным иммуноглобулиновым диагностикумом (PAO);
- определение принадлежности к биовару холерных вибрионов O1 серогруппы (определение чувствительности к диагностическим бактериофагам классическому и эльтор, постановка реакции гемагглютинации с куриными эритроцитами, определение чувствительности к 50 ед/мл полимиксина B, постановка реакции Фогес-Проскауэра);
- определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом;
- ИХ-тест на определение O1 серогруппы (при положительном результате — ИХ-тест на определение серовара Инаба, Огава) или O139 серогруппы.
5.3.2.4. Оформление результатов исследования
Регистрация результатов анализа в лаборатории ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» производится по учетным формам в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры.
5.3.2.5. Порядок взаимодействия
лабораторий особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации с учреждениями Роспотребнадзора
Информация о выделенных или идентифицированных культурах холерного вибриона передается в соответствии со схемой выдачи результатов исследований на холеру (прилож. 11) и направляется в Референс-центр по мониторингу за холерой. Культуры холерного вибриона, выделенные от людей, из объектов окружающей среды и идентифицированные в лаборатории ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней (региональное противочумное учреждение). Срок доставки эпидемически значимых культур — не более 5 суток, остальные культуры доставляются не позднее одного месяца. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.
6. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий регионального уровня
6.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности в федеральных округах
Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности осуществляют: — диагностические исследования материала от больных и умерших с подозрением на холеру; — профилактические исследования материала от лиц, подлежащих обследованию на холеру в соответствии с требованиями эпидемиологического надзора (по согласованию); — исследования проб из объектов окружающей среды в соответствии с требованиями эпидемиологического надзора; — идентификацию культур холерных вибрионов по полной схеме; — контроль качества питательных сред.
Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности в федеральных округах соответствует п. 5.3.2 «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации». Культуры холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп, выделенные от людей, из объектов окружающей среды и идентифицированные в лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, передают в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней (региональное противочумное учреждение). Срок доставки эпидемически значимых культур — не более 5 суток, остальные культуры доставляются не позднее одного месяца. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.
6.2. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных
инфекционных болезней
6.2.1. Требования к лабораториям Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов Учреждения, на базе которых функционируют Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней I-II групп патогенности и Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, должны иметь лицензию на деятельность, связанную с использованием возбудителей I-II групп патогенности (опасности). Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны иметь санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими санитарными правилами о порядке выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности). Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации. Учет, хранение, передача и транспортирование выделенных культур холерных вибрионов должны осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по санитарно-эпидемиологическим требованиям к обращению с медицинскими отходами. Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.
Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на холеру Исследования на холеру могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие курсы первичной специализации по ООИ по специальности «Бактериология», имеющие допуск к работе с ПБА I-II групп на основании приказа руководителя учреждения. Инженерно-технический персонал и дезинфекторы проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями. Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, должны повышать квалификацию не реже одного раза в 5 лет и иметь сертификат специалиста. Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием, повышение их квалификации по лабораторной диагностике холеры представлен в прилож. 1.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале. Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований Контроль качества диагностических исследований на холеру в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней включает: — контроль качества питательных сред, диагностических препаратов и тест-систем, эталонных штаммов, дисков с антибактериальными препаратами, дистиллированной воды, дезинфицирующих средств, химических реактивов; — контроль эффективности мембранных фильтров; — своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования; — контроль качества стерильности фильтровальных установок, лабораторной посуды; — контроль качества стерилизации паровых и суховоздушных стерилизаторов; — контроль работы бактерицидных ламп;
— контроль температурного режима работы холодильников и термостатов; — проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности; — проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроля смывов с поверхностей и оборудования. Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на холеру Для проведения диагностических исследований на холеру в лабораториях должны быть в наличии: — питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 3, 8); — диагностические препараты, тест-системы, антибактериальные препараты, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 4, 7, 8); — химические реактивы (прилож. 5);
— приборы, оборудование, расходные материалы (прилож. 6).
6.2.2. Номенклатура и объем исследований
Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней проводят: — исследования материала от больных и умерших с подозрением на холеру; — исследования проб из объектов окружающей среды; — идентификацию культур холерных вибрионов, выделенных в прикрепленных субъектах, по полной схеме с определением эпидемиологической значимости; — определение чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам; — серологическое обследование больных холерой, вибриононосителей и других контингентов населения — по эпидпоказаниям; — проверку качества питательных сред и ингибиторов сопутствующей микрофлоры.
6.2.3. Порядок диагностических исследований на холеру в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I — II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней
Порядок исследования клинического материала и проб из объектов окружающей среды соответствует п. 5.2.3. Идентификация культур холерных вибрионов осуществляется по полной схеме, изложенной в действующих методических указаниях по лабораторной диагностике холеры. В порядок бактериологического исследования на холеру дополнительно включены исследования сывороток крови больных (переболевших) холерой, вибриононосителей, а также других контингентов населения (по эпидпоказаниям) на наличие агглютининов и вибриоцидных антител. При определении агглютининов в сыворотке крови ставят: — реакцию агглютинации с живыми культурами холерных вибрионов, выделенных от больных (вибриононосителей) в очаге в макро- или микрообъеме. При определении вибриоцидных антител в сыворотке крови ставят: — реакцию вибриоцидных антител (РВА) на основе чашечного метода (Finkelstein); — РВА на основе ферментации углеводов.
6.2.4. Оформление результатов исследования
Регистрация результатов анализа в лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней производится по учетным формам в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры.
6.2.5. Порядок взаимодействия лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней с учреждениями Роспотребнадзора
Информация о выделенных и/или идентифицированных культурах холерного вибриона передается в соответствии с действующей нормативной документацией и направляется в Референс-центр по мониторингу за холерой и в Национальный Центр верификации диагностической деятельности Роспотребнадзора, осуществляющий функцию Государственной коллекции возбудителей особо опасных бактериальных инфекций I-II групп патогенности. Штаммы холерных вибрионов, выделенные от людей, из объектов окружающей среды, идентифицированные в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и в Центрах индикации и диагностики опасных инфекционных болезней, направляют в Референс-центр по мониторингу за холерой. Срок доставки эпидемически значимых культур — не более 5 суток, остальные культуры доставляются не позднее одного месяца. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.
7. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий федерального уровня
7.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для Референс-центра по мониторингу за холерой
7.1.1. Требования к лабораториям Референс-центра по мониторингу за холерой
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов Учреждение, на базе которого функционирует Референс-центр по мониторингу за холерой, должно иметь лицензию на деятельность, связанную с использованием возбудителей I-II групп патогенности (опасности). Лаборатории Референс-центра по мониторингу за холерой должны иметь санитарно-эпидемиологические заключения о возможности проведения работ с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими санитарными правилами о порядке выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности). Лаборатории Референс-центра по мониторингу за холерой должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации. Учет, хранение, передача и транспортирование выделенных подозрительных культур холерных вибрионов должны осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по санитарно-эпидемиологическим требованиям к обращению с медицинскими отходами. Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.
Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на холеру Исследования на холеру могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие курсы первичной специализации по ООИ по специальности «Бактериология», имеющие допуск к работе с ПБА I-II групп на основании приказа руководителя учреждения. Инженерно-технический персонал, дезинфекторы и санитарки проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями. Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, должны повышать квалификацию не реже одного раза в 5 лет и иметь сертификат специалиста. Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием, повышение их квалификации по лабораторной диагностике холеры представлен в прилож. 1.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале. Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований Контроль качества диагностических исследований на холеру в лабораториях Референс-центра по мониторингу за холерой включает: — контроль качества питательных сред, диагностических препаратов и тест-систем, эталонных штаммов, дисков с антибактериальными препаратами, дистиллированной воды, дезинфицирующих средств, химических реактивов; — контроль эффективности мембранных фильтров; — своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования; — контроль качества стерильности фильтровальных установок, лабораторной посуды; — контроль качества стерилизации паровых и суховоздушных стерилизаторов; — контроль температурного режима работы холодильников и термостатов; — контроль работы бактерицидных ламп;
— проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности; — проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроля смывов с поверхностей и оборудования. Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на холеру Для проведения диагностических исследований на холеру в лабораториях должны быть в наличии: — питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке, и экспериментальные серии (прилож. 3, 8); — диагностические препараты, тест-системы, антибактериальные препараты, зарегистрированные в установленном порядке, и экспериментальные серии (прилож. 4, 7, 8); — химические реактивы (прилож. 5);
— приборы, оборудование, расходные материалы (прилож. 6).
7.1.2. Номенклатура и объем исследований
Лаборатории Референс-центра по мониторингу за холерой: — проводят полную идентификацию и изучение биологических, молекулярно-биологических, биохимических свойств возбудителей холеры, в т.ч. культур с атипичными свойствами и вновь выявленных холерных вибрионов, явившихся причиной эпидемической вспышки; — определяют чувствительность холерных вибрионов к антибактериальным препаратам, изучают механизмы резистентности; — проводят серологическое обследование больных холерой, вибриононосителей и других контингентов населения — по эпидпоказаниям; — проводят исследование клинического материала и проб окружающей среды — по эпидпоказаниям.
7.1.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности при мониторинге за холерой
Материалом для исследования служат культуры холерных вибрионов, в т.ч. культуры с атипичными свойствами, выделенные в лабораториях территориального и регионального уровней; вновь выявленные холерные вибрионы, явившиеся причиной вспышки; клинический материал, сыворотки крови больных холерой, вибриононосителей и других контингентов — по эпидпоказаниям. При исследовании культур возбудителей холеры, в том числе культур с атипичными свойствами и вновь выявленных холерных вибрионов, явившихся причиной вспышки, используют биологические и современные высокотехнологичные методы бактериологического, иммуносерологического и молекулярно-генетического анализа, а также серологические методы при исследовании сывороток крови больных холерой, вибриононосителей и других контингентов населения, обследуемых по эпидемическим показаниям. Порядок исследования клинического материала, проб из объектов окружающей среды на холеру соответствует п. 5.2.3. Идентификация поступивших культур осуществляется по полной схеме: — изучение морфологии микробных клеток; — определение подвижности выделенной культуры в препарате висячей или раздавленной капли с последующим просмотром препаратов под микроскопом с фазово-контрастным устройством; — определение наличия индофенолоксидазы; — исследование методом флюоресцирующих антител; — определение типа расщепления глюкозы в среде Хью-Лейфсона; — определение способности ферментировать углеводы и многоатомные спирты; — определение декарбоксилазной и дигидролазной активности по отношению к отдельным аминокислотам (лизин, аргинин, орнитин); — постановка развернутой реакции агглютинации с холерными агглютинирующими сыворотками O1, Инаба, Огава, RO и реакции слайд-агглютинации с холерной сывороткой O139 серогруппы; — определение биовара холерных вибрионов O1 серогруппы (определение чувствительности к диагностическим бактериофагам классическому и эльтор, постановка гемагглютинации с куриными эритроцитами, определение чувствительности к 50 ед./мл полимиксина B, постановка реакции Фогес-Проскауэра);
- определение эпидемической значимости культуры комплексным методом: по гемолитической активности в пробе Грейга, чувствительности к холерным
+ — эльтор ctx и ctx фагам ( кроме холерных вибрионов O139 серогруппы), в ПЦР на наличие генов ctxA и tcpA, по определению холерогенности на модели кроликов-сосунков, по результатам реакции объемной аггломерации с использованием полимерного иммуноглобулинового антилипазного диагностикума (РАО); — определение чувствительности к антибиотикам (диско-диффузионным методом, методом серийных разведений в агаре и бульоне); — постановка дополнительные тестов, определяющих принадлежность к роду Vibrio и виду Vibrio cholerae или другим видам патогенных вибрионов (определение протеолитических свойств; выявление диастатической активности; определение образования индола; определение образования сероводорода; выявление способности к биолюминесценции; определение галофильности вибрионов; определение способности вибрионов к росту при различных температурах; определение образования нитратредуктазы; определение образования бета-галактазидазы). Расширенная характеристика культур с помощью молекулярно-биологических методов: по генам, ассоциированным с вирулентностью, проведение секвинирования, рестрикции, ген-амплификации, VNTR-типирование. При идентификации культур холерных вибрионов с атипичными свойствами использование дополнительных серологических, иммунологических, биохимических и других методов для подтверждения принадлежности культур к роду Vibrio и виду Vibrio cholerae: — ПЦР с использованием дополнительных специфических праймеров; — реакции агглютинации с кроличьими холерными агглютинирующими сыворотками; — реакции слайд-агглютинации с использованием моноклональных антител: — реакции преципитации в геле; — адсорбции агглютининов по Кастеллани; — реакции агглютинации с убитыми кипячением культурами. Применение серологических методов исследования в соответствии с действующими нормативными документами. В сыворотках больных холерой, вибриононосителей и других контингентов населения, обследуемых по эпидпоказаниям, выявляют агглютинины, вибриоцидные антитела. При определении агглютининов в сыворотке крови ставят: — реакцию агглютинации с живыми культурами холерных вибрионов, выделенных от больных (вибриононосителей) в очаге в макро- или микрообъеме. При определении вибриоцидных антител в сыворотке крови ставят: — реакцию вибриоцидных антител (РВА) на основе чашечного метода (Finkelstein); — РВА на основе ферментации углеводов. Возможно применение препаратов, предназначенных для серологической диагностики.
7.1.4. Порядок взаимодействия лабораторий Референс-центра по мониторингу за холерой с учреждениями Роспотребнадзора
Информация о выделенных и/или идентифицированных культурах холерного вибриона передается в соответствии с действующими нормативными документами и направляется в Центр верификации диагностической деятельности Роспотребнадзора, осуществляющий функцию Государственной коллекции возбудителей особо опасных бактериальных инфекций I-II групп патогенности. Культуры холерного вибриона, идентифицированные в лабораториях Референс-центра по мониторингу за холерой, передают в Национальный Центр верификации диагностической деятельности Роспотребнадзора, осуществляющий функцию Государственной коллекции возбудителей особо опасных бактериальных инфекций I-II групп патогенности. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.
7.2. Порядок и организация
лабораторной диагностики холеры Национального Центра верификации диагностической деятельности
7.2.1. Требования к лабораториям Национального Центра верификации диагностической деятельности
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на холеру, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований, правила ведения документации и требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на холеру, аналогичны п. 7.1.1.
7.2.2. Номенклатура и объем исследований
Лаборатории Национального Центра верификации диагностической деятельности проводят: — верификацию результатов диагностики холеры и идентификации культур, полученных из Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности, Центров индикации и диагностики опасных инфекционных болезней Роспотребнадзора, Референс-центра по мониторингу за холерой; — выполняют диагностические исследования материала от больных холерой и умерших от этого заболевания — по эпидпоказаниям; — осуществляют хранение коллекционных штаммов, охраноспособное и авторское депонирование.
7.2.3. Организация и обеспечение
диагностической деятельности
Порядок исследования клинического материала, проб из объектов окружающей среды на холеру соответствует п. 5.2.3. Идентификацию культур осуществляют по полной схеме, дополнительно проводят: — секвенирование фрагментов генов 16S-23S рДНК и других видоспецифичных локусов; — определение генотипов штаммов холерных вибрионов. На основании результатов расширенной характеристики штаммов холерных вибрионов составляют паспорта на штаммы, хранящиеся в Национальном Центре верификации диагностической деятельности, осуществляющем функции Государственной коллекции.
7.2.4. Порядок взаимодействия лабораторий Национального Центра верификации диагностической деятельности с учреждениями Роспотребнадзора
Национальный Центр верификации диагностической деятельности Роспотребнадзора направляет результаты проведенных исследований в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности, Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, Референс-центр по мониторингу за холерой.
Приложение 1
ПОДГОТОВКА КАДРОВ
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ХОЛЕРЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЯХ РАЗЛИЧНЫХ УРОВНЕЙ
N Перечень Уровни подготовки п/п бактериологических
лабораторий с профессиональная повышение другие виды рабочие места в учетом уровней переподготовка в квалификации подготовки лаборатории или противочумных по ООИ (семинары по отделе особо учреждениях (не (72-500 ч) лабораторной опасных менее 500 ч) диагностике инфекций холеры) врачи лаборанты врачи лаборанты врачи лаборанты врачи лаборанты Территориальный уровень 1 ЛПУ - - +/- +/- + + + + 2 Филиалы ФБУЗ ЦГиЭ - - +/- +/- + + + + 3 ФБУЗ ЦГиЭ без - - +/- +/- + + + + лаборатории ООЧ 4 ФБУЗ ЦГиЭ + + + + +/- +/- - - с лабораториями ООЧ
Региональный уровень
5 Региональные центры + + + + +/- +/- - - по мониторингу II - IV групп патогенности 6 Региональные центры + + + + +/- +/- - - по мониторингу I - II групп патогенности 7 Центры индикации и + + + + +/- +/- - - диагностики Федеральный уровень 8 Референс-центр по + + + + +/- +/- - - мониторингу за холерой 9 Национальный Центр + + + + +/- +/- - - верификации
«+» Обязательный уровень подготовки. «-» Подготовка для такого уровня не требуется. «+/-» Подготовка для такого уровня рекомендуется.
Приложение 2
ТРЕБОВАНИЯ
К ПРОФЕССИОНАЛЬНЫМ НАВЫКАМ СПЕЦИАЛИСТОВ, ОСУЩЕСТВЛЯЮЩИХ ЛАБОРАТОРНУЮ ДИАГНОСТИКУ ХОЛЕРЫ
- Требования к знаниям и умениям специалистов лечебно-профилактических учреждений, выполняющих бактериологические исследования на холеру 1.1. Врачи-бактериологи и биологи должны знать: — основные положения эпидемиологического надзора за холерой, в том числе в части, касающейся обследования больных на холеру; — нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на холеру; — требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности, а также требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителем холеры;
- этапы подготовительной работы (подготовка питательных сред, диагностических препаратов, реактивов);
- требования к доставке клинического материала, регистрации, его хранению, уничтожению;
- порядок исследования материала в условиях односменной и круглосуточной работы лаборатории;
- порядок исследования материала в зависимости от времени отбора и доставки его в лабораторию;
- этапы лабораторного исследования на холеру;
- методы ускоренной диагностики холеры;
- культуральные, морфологические, иммуносерологические и биохимические свойства холерных вибрионов;
- сроки выдачи предварительного положительного результата исследования;
- правила и сроки передачи выделенных (подозрительных) культур. 1.2. Врачи-бактериологи и биологи должны уметь выполнять диагностическое исследование клинического материала на холеру:
- отбирать колонии со щелочного агара и среды TCBS с характерным для вибрионов ростом;
- выполнять микроскопию мазков, окрашенных по Граму, на всех этапах исследования;
- определять индофенолоксидазу;
- ставить с подозрительными на холерный вибрион колониями реакцию слайд-агглютинации с холерными сыворотками O1, Огава, Инаба, RO и O139 и учитывать результаты;
- выполнять микроскопию и оценку результатов мазков, обработанных флюоресцирующими иммуноглобулинами (МФА);
- выполнять реакцию иммобилизации вибрионов (РИВ) под влиянием специфических холерных сывороток;
- вести необходимую документацию. 1.3. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны знать:
- правила работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- этапы подготовительной работы (подготовку посуды, питательных сред, диагностических препаратов, реактивов;
- этапы лабораторного исследования на холеру;
- культуральные, морфологические свойства холерных вибрионов, отношение вибрионов к углеводам в полиуглеводных средах. 1.4. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны уметь:
- готовить к работе необходимые питательные среды (прилож. 3);
- готовить ингредиенты для окраски мазков по Граму;
- готовить разведения сывороток для постановки реакции слайд-агглютинации и иммунофлюоресценции;
- выполнять первичные посевы исследуемого материала и пересевы со сред обогащения;
- готовить мазки, фиксировать их, окрашивать по Граму, а также флюоресцирующими иммуноглобулинами;
- ставить пробу на индофенолоксидазу;
- проводить с подозрительными на холерный вибрион колониями реакцию слайд-агглютинации с холерными сыворотками O1, Огава, Инаба, RO и O139;
- ставить реакцию иммобилизации с холерными сыворотками;
- готовить отработанный материал для автоклавирования.
- Требования к знаниям и умениям специалистов ФБУЗ «ЦГиЭ» и их филиалов, выполняющих бактериологические исследования на холеру 2.1. Врачи-бактериологи и биологи должны знать: — основные положения эпидемиологического надзора за холерой, в т.ч. в части, касающейся сроков, объемов и контингентов, подлежащих обследованию на холеру, сроков, объемов и вида исследуемых проб из объектов окружающей среды; — нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на холеру; — требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности, а также требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителем холеры;
- этапы подготовительной работы (подготовка питательных сред, диагностических препаратов, реактивов);
- требования к доставке клинического материала и проб из объектов внешней среды, регистрации, хранению, уничтожению;
- порядок исследования материала в условиях односменной и круглосуточной работы лаборатории;
- порядок исследования материала в зависимости от времени отбора и доставки его в лабораторию;
- этапы лабораторного исследования на холеру;
- методы ускоренной диагностики холеры;
- культуральные, морфологические, иммуносерологические и биохимические свойства холерных вибрионов;
- сроки выдачи предварительного положительного результата исследования;
- правила и сроки передачи выделенных (подозрительных) культур. 2.2. Врачи-бактериологи и биологи должны уметь выполнять диагностическое исследование клинического материала на холеру:
- отбирать колонии со щелочного агара и среды TCBS с характерным для вибрионов ростом;
- выполнять микроскопию мазков, окрашенных по Граму, на всех этапах исследования;
- определять индофенолоксидазу;
- ставить с подозрительными на холерный вибрион колониями реакцию слайд-агглютинации с холерными сыворотками O1, Огава, Инаба, RO и O139;
- выполнять микроскопию и оценку результатов мазков, обработанных флюоресцирующими иммуноглобулинами (МФА);
- выполнять реакцию иммобилизации вибрионов (РИВ) под влиянием специфических холерных сывороток;
- вести необходимую документацию. 2.3. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны знать:
- правила работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- этапы подготовительной работы (подготовку посуды, питательных сред, диагностических препаратов, реактивов;
- этапы лабораторного исследования на холеру;
- культуральные, морфологические свойства холерных вибрионов, отношение вибрионов к углеводам в полиуглеводных средах. 2.4. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны уметь:
- осуществлять отбор проб воды из поверхностных водоемов, сточных вод и других объектов окружающей среды;
- готовить к работе необходимые питательные среды (прилож. 3);
- готовить ингредиенты для окраски мазков по Граму;
- готовить разведения сывороток для постановки реакции слайд-агглютинации и иммунофлюоресценции (при наличии люминесцентного микроскопа);
- выполнять первичные посевы исследуемого материала и пересевы со сред обогащения;
- готовить мазки, фиксировать их, окрашивать по Граму, а также флюоресцирующими иммуноглобулинами;
- ставить пробу на индофенолоксидазу;
- проводить с подозрительными на холерный вибрион колониями реакцию слайд-агглютинации с холерными сыворотками O1, Огава, Инаба, RO и O139;
- ставить реакцию иммобилизации с холерными сыворотками;
- готовить отработанный материал для автоклавирования.
- Требования к знаниям и умениям специалистов лабораторий ООИ ФБУЗ «ЦГиЭ», выполняющих бактериологические исследования на холеру 3.1. Врачи-бактериологи и биологи должны знать: — основные положения эпидемиологического надзора за холерой, в том числе в части, касающейся обследования больных на холеру; — нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на холеру; — требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями II-IV групп патогенности, а также требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителем холеры; — этапы подготовительной работы (подготовка питательных сред, диагностических препаратов, реактивов); — требования к доставке клинического материала, регистрации, его хранению, уничтожению; — порядок исследования материала в условиях односменной и круглосуточной работы лаборатории; — порядок исследования материала в зависимости от времени отбора и доставки его в лабораторию; — этапы лабораторного исследования на холеру; — методы ускоренной диагностики холеры; — культуральные, морфологические, иммуносерологические и биохимические свойства холерных вибрионов; — сроки выдачи предварительного положительного результата исследования; — правила и сроки передачи выделенных (подозрительных) культур; — методы контроля качества питательных сред и ингибиторов посторонней микрофлоры;
- методы определения чувствительности к диагностическим фагам
+ — классическому и эльтор, холерным эльтор фагам ctx и ctx ; — методы оценки эпидемической значимости холерных вибрионов; — методы определения антибиотикочувствительности холерных вибрионов. 3.2. Врачи-бактериологи и биологи должны уметь выполнять диагностическое исследование материала на холеру: — проводить исследование материала от больных и умерших с подозрением на холеру, от лиц, подлежащих бактериологическому обследованию на холеру, проб воды из стационарных и других точек отбора и других объектов окружающей среды, предусмотренных действующими санитарными правилами;
- идентифицировать выделенные культуры холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп по сокращенной и полной схеме с определением эпидзначимости холерных вибрионов по наличию генов ctxA и tcpA, гемолитической активности
+ — и чувствительности к фагам ctx и ctx ; — определять антибиотикочувствительность выделенных культур; — устанавливать таксономическую принадлежность холерных вибрионов не O1/не O139 серогрупп и других представителей рода Vibrio и семейства Vibrionaceae; — вести необходимую документацию. 3.3. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны знать: — правила работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III-IV групп патогенности;
- этапы подготовительной работы (подготовку посуды, питательных сред, диагностических препаратов, реактивов);
- этапы лабораторного исследования на холеру;
- культуральные, морфологические и антигенные свойства холерных вибрионов, отношение вибрионов к углеводам в полиуглеводных средах;
- методы полной и сокращенной идентификации холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп;
- методы идентификации культур холерных вибрионов не O1/не O139 серогрупп и других представителей рода Vibrio и семейства Vibrionaceae;
- методы определения качества питательных сред и ингибиторов роста посторонней микрофлоры. 3.4. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны уметь:
- готовить к работе необходимые питательные среды (прилож. 3);
- готовить ингредиенты для окраски мазков по Граму;
- готовить разведения сывороток для постановки реакции слайд-агглютинации и иммунофлюоресценции (при наличии люминесцентного микроскопа);
- выполнять первичные посевы исследуемого материала и пересевы со сред обогащения;
- готовить мазки, фиксировать их, окрашивать по Граму, а также флюоресцирующими иммуноглобулинами;
- ставить пробу на индофенолоксидазу;
- проводить с подозрительными на холерный вибрион колониями реакцию слайд-агглютинации и объемную реакцию агглютинации с холерными сыворотками O1, Огава, Инаба, RO и O139;
- ставить реакцию иммобилизации с холерными сыворотками;
- готовить отработанный материал для автоклавирования.
- методы определения чувствительности к диагностическим фагам
- Требования к знаниям и умениям специалистов Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности, Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, Референс-центра по мониторингу за холерой и Национального Центра верификации диагностической деятельности, выполняющих бактериологические исследования на холеру 4.1. Врачи-бактериологи и биологи должны знать: — основные положения эпидемиологического надзора за холерой; — вопросы организации лабораторных исследований на холеру; — требования биологической безопасности при работе с зараженным и подозрительным на заражение микроорганизмами II группы патогенности материалом; — таксономию и классификацию представителей семейства Vibrionaceae; — морфологические, культуральные, биохимические свойства холерных вибрионов; — серологические методы изучения свойств холерных вибрионов;
- определение чувствительности к диагностическим фагам классическому и
+ — эльтор, холерным фагам эльтор ctx и ctx ; — методы определения эпидемической значимости холерных вибрионов; — определение чувствительности к антибиотикам, химиопрепаратам и дезинфектантам; — этапы лабораторного исследования на холеру, сроки выдачи ответов, правила и сроки передачи выделенных культур; — требования к доставке материала, его хранению, регистрации, уничтожению, подготовке к передаче и транспортированию; — этапы подготовительной работы (подготовку питательных сред для выделения и идентификации холерных вибрионов, диагностических препаратов, реактивов); — методы серологической диагностики холеры у людей; — критерии оценки качества питательных сред, используемых для диагностики холеры, ингибиторов посторонней микрофлоры; — нормативные документы, используемые при проведении лабораторных исследований на холеру. 4.2. Врачи-бактериологи и биологи должны уметь: — провести полное исследование по схеме лабораторной диагностики холеры материала от больных и умерших с подозрением на холеру, проб из объектов окружающей среды; — идентифицировать выделенные культуры холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп по сокращенной и полной схеме; — определить эпидемическую значимость культур; — определить чувствительность к антибиотикам выделенных культур; — провести серологическую диагностику материала от больных холерой, вибриононосителей и других контингентов — по эпидпоказаниям; — установить таксономическую принадлежность холерных вибрионов не O1/не O139 серогрупп и других представителей рода Vibrio и семейства Vibrionaceae; — осуществлять контроль качества питательных сред и ингибиторов посторонней микрофлоры; — вести необходимую документацию. 4.3. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны знать: — морфологические, культуральные и основные биохимические свойства холерных вибрионов; — этапы лабораторного исследования на холеру; — методы полной и сокращенной идентификации холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп; — методы идентификации культур холерных вибрионов не O1/не O139 серогрупп и других представителей рода Vibrio и семейства Vibrionaceae; — методы серологической диагностики холеры; — правила работы с материалом, зараженным или подозрительным на заражение возбудителем холеры; — этапы подготовительной работы (подготовку посуды, красок, питательных сред для выделения и идентификации холерных вибрионов, диагностических препаратов, реактивов); — методы определения качества питательных сред и ингибиторов посторонней микрофлоры. 4.4. Лаборанты, медицинские лабораторные техники и медицинские технологи должны уметь: — приготовить или подготовить к работе питательные среды для выделения и идентификации холерных вибрионов (прилож. 3); — приготовить основные ингредиенты для окраски мазков по Граму; — приготовить реактивы для постановки пробы на оксидазу, выявления образования ацетилметилкарбинола, индола, сероводорода, нитратредуктазы, бета-галактозидазы; — подготовить разведения сывороток для постановки слайд- и развернутой реакции агглютинации и иммунофлуоресценции; — произвести первичные посевы и пересевы поступившего материала; — сделать мазки, зафиксировать их и окрасить; — поставить пробу на индофенолоксидазу; — поставить слайд- и развернутую реакцию агглютинации с холерными сыворотками; — поставить реакцию иммобилизации с холерными сыворотками; — провести определение качества питательных сред и теллурита калия; — подготовить отработанный материал для автоклавирования; — участвовать: — в идентификации выделенной культуры по полной и сокращенной схеме; — в определении эпидемической значимости выделенной культуры по регламентированным для этих лабораторий тестам; — в определении антибиотикочувствительности выделенных культур; — в исследовании сывороток крови больных холерой и вибриононосителей в системе серологических реакций.
- определение чувствительности к диагностическим фагам классическому и
Приложение 3
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
N Питательные Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный п/п среды уровень ЛПУ филиалы ФБУЗ ФБУЗ региональ- региональ- центры рефе- нацио- ФБУЗ ЦГиЭ ЦГиЭ (с ные центры ные центры индика- ренс- нальный ЦГиЭ (без лабора- по монито- по монито- ции и центр центр лабора- ториями рингу за рингу за диагно- по мо- верифи- торий ООИ) возбудите- возбудите- стики нито- кации ООИ) лями II- лями I- рингу IV групп II групп за хо- патогенно- патогенно- лерой сти сти 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 Основной - + + + + + + + + раствор пептона 2 1%-я пептонная + + + + + + + + + вода 3 Щелочной агар + + + + + + + + + 4 TCBS + + + + + + + + + 5 СЭДХ + + + + + + + + + 6 Полиуглеводные + + + + + + + + + среды 7 Среда Хью- - + + + + + + + + Лейфсона 8 Среда Гисса с - + + + + + + + + сахарозой 9 Среда Гисса с - + + + + + + + + маннозой 10 Среда Гисса с - + + + + + + + + арабинозой 11 Среда Гисса с - + + + + + + + + лактозой 12 Среда Гисса с - + + + + + + + + глюкозой 13 Среда Гисса с - + + + + + + + + инозитом 14 Среда Гисса с - + + + + + + + + маннитом 15 Среда Гисса с - - - + + + + + + крахмалом 16 Бульон Мартена - - - + + + + + + pH 7,6 17 Среда для - + + + + + + + + определения декарбоксилазы лизина 18 Среда для - + + + + + + + + определения декарбоксилазы орнитина 19 Среда для - + + + + + + + + определения дигидролазы аргинина 20 Бульон Кларка - - - + + + + + + 21 Среда с - - - + + + + + + желатиной 22 Питательный - - - + + + + + + агар pH 7,2 23 Бульон - - - + + + + + + Хоттингера pH 7,2 24 Бульон - - - + + + + + + Хоттингера с 0,1% азотнокислого калия (KNO3) pH 7,2 25 Питательный - - - + + + + + + агар с 10% лактозы 26 Агар Мартена - - - + + + + + + 0,3 - 0,5 - 0,7% pH 7,6 27 Питательная - - - + + + + + + среда для определения чувствительно- сти к антибактериаль- ным препаратам
Приложение 4
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ, ТЕСТ-СИСТЕМЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
N Диагностические Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный п/п препараты, уровень тест-системы, биологические ЛПУ фи- ФБУЗ ФБУЗ региональ- региональ- центры рефе- нацио- препараты лиалы ЦГиЭ ЦГиЭ ные центры ные центры инди- ренс- нальный ФБУЗ (без (с по монито- по монито- кации центр по центр ЦГиЭ лабо- лабо- рингу за рингу за и ди- монито- верифи- рато- рато- возбудите- возбудите- агно- рингу за кации рий риями лями II-IV лями I- стики холерой ООИ) ООИ) групп II групп патогенно- патогенно- сти сти 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 Иммуноглобулины + <> + <> + <> + + + + + + диагностические флуоресцирующие холерные адсорбированные, лошадиные 2 Сыворотка + + + + + + + + + диагностическая холерная O1 адсорбированная сухая для РА 3 Сыворотка + + + + + + + + + диагностическая холерная Огава адсорбированная сухая для РА 4 Сыворотка + + + + + + + + + диагностическая холерная Инаба адсорбированная сухая для РА 5 Сыворотка + + + + + + + + + диагностическая холерная RO адсорбированная сухая для РА 6 Сыворотка + + + + + + + + + диагностическая холерная O139 адсорбированная сухая для РА на стекле 7 Бактериофаги - - - + + + + + + диагностические холерные классический и эльтор 8 Бактериофаги - - - + + + + + + диагностические холерные ctx+ и ctx- 9 Микротест-система - + + + + + + + + для ускоренного определения групп вибрионов по Хейбергу (МТС-Х) 10 Микрообъемная - + + + + + + + + тест-система для биохимической идентификации вибрионов 11 Системы - + + + + + + + + индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов: Система 1 - для идентификации вибрионов 12 Комплемент сухой - - - + + + + + + 13 Эритроциты барана - - - + + + + + + (свежие или консервированные) 14 Эритроциты куриные - - - + + + + + + или морской свинки (свежие или кон- сервированные) 15 Тест-система для - - - + + + + + + выявления ДНК V. cholerae + + (ctx A и tcp A ) 16 Набор реактивов - - - + + + + + + для проведения электрофореза продуктов ПЦР 17 Набор для - - - + + + + + + выделения ДНК на основе метода нуклеосорбции 18 Универсальный - - - + + + + + + набор для амплификации ДНК 19 Тест-система + + + + + + + + + ОКСИ-тест 20 Диагностикум - - - + + + + + + антилипазный иммуноглобулиновый полимерный сухой для выявления гемолитических штаммов холерных вибрионов 21 ИХА-тест на O1 - - - + + + + + + 22 ИХА-тест на O139 - - - + + + + + +
<> При наличии люминесцентного микроскопа
Приложение 5
ХИМИЧЕСКИЕ РЕАКТИВЫ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
N Реактивы и краски Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный п/п уровень ЛПУ фи- ФБУЗ ФБУЗ региональ- региональ- центры рефе- нацио- лиалы ЦГиЭ ЦГиЭ ные центры ные центры инди- ренс- нальный ФБУЗ (без (с ла- по монито- по монито- кации центр по центр ЦГиЭ лабо- бора- рингу за рингу за и диа- монито- верифи- рато- тория- возбудите- возбудите- гнос- рингу за кации рий ми лями II- лями I- тики холерой ООИ) ООИ) IV групп II групп патогенно- патогенно- сти сти 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Краски 1 Бромтимоловый - - - + + + + + + синий 2 Генцианвиолет + + + + + + + + + 3 Феноловый красный + + + + + + + + + 4 Фуксин основной + + + + + + + + +
Сахара и многоатомные
спирты
5 Арабиноза — + + + + + + + +
6 Инозит — + + + + + + + +
7 Глюкоза + + + + + + + + +
8 Маннит — + + + + + + + +
9 Манноза — + + + + + + + +
10 Лактоза + + + + + + + + +
11 Сахароза + + + + + + + + +
Аминокислоты
12 Лизин — + + + + + + + +
13 Орнитин — + + + + + + + +
14 Аргинин — + + + + + + + +
Реактивы
15 альфа-нафтиламин — — — + + + + + +
16 альфа-нафтол + + + + + + + + +
17 Диметил- + + + + + + + + + парафенилендиамин дигидрохлорид (или тетраметил- парафенилендиамин, или аминодиметил- анилин гидрохлорид (оксалат) 18 Железо + + + + + + + + + серно-кислое закисное 19 Йод + + + + + + + + + кристаллический 20 Калий - - - + + + + + + азотно-кислый 21 Калий едкий - - - + + + + + + 22 Калий йодистый + + + + + + + + + 23 Калий - - - + + + + + + фосфорно-кислый двузамещенный (K2HPO4) 24 Калий + + + + + + + + + фосфорно-кислый однозамещенный (KH2PO4) 25 Калия нитрат + + + + + + + + + 26 Калия теллурит + + + + + + + + + 27 Кислота борная - - - + + + + + + 28 Кислота карболовая + + + + + + + + + 29 Кислота лимонная - - - + + + + + + 30 Кислота уксусная - - - + + + + + + 31 Кислота соляная - - - + + + + + + 32 Кислота - - - + + + + + + сульфаниловая 33 Кислота щавелевая - - - + + + + + + 34 Натрий - - - + + + + + + двууглекислый 35 Натрий едкий + + + + + + + + + 36 Натрий - - - + + + + + + лимонно-кислый (цитрат) 37 Натрий углекислый + + + + + + + + + (карбонат) 38 Натрий - - - + + + + + + фосфатно-кислый 39 Натрий хлористый + + + + + + + + + 40 Натрия сульфат + + + + + + + + + 41 Натрия сульфит + + + + + + + + + 42 Натрия тиосульфат + + + + + + + + + 43 Свинец - - - + + + + + + уксусно-кислый 44 O-нитрофенил-бета- - - - + + + + + + Д-галактопиранозид (ONPG) 45 Парадиметиламино- - - - + + + + + + бензальдегид 46 Риванол - - - + + + + + + Прочие 47 Вода + + + + + + + + + дистиллированная 48 Глицерин + + + + + + + + + 49 Желатина - - - + + + + + + 50 Крахмал - - - + + + + + + растворимый 51 Масло вазелиновое - - - + + + + + + 52 Масло иммерсионное + + + + + + + + + 53 Масло иммерсионное + + + + + + + + + нефлуоресцирующее 54 Песок кварцевый - + + + + + + + +
Прочие медикаменты и
дезсредства
55 Спирт этиловый + + + + + + + + +
56 Хлороформ — — — — — — — + +
57 Хлорамин или другие + + + + + + + + + регламентированные дезинфектанты
Приложение 6
ПРИБОРЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РАСХОДНЫЕ МАТЕРИАЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
N Приборы Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный п/п и оборудование уровень ЛПУ фи- ФБУЗ ФБУЗ регио- регио- центры рефе- нацио- лиалы ЦГиЭ ЦГиЭ (с нальные нальные инди- ренс- нальный ФБУЗ (без лабора- центры по центры по кации центр центр ЦГиЭ лабо- ториями монито- монито- и ди- по мо- верифи- рато- ООИ) рингу за рингу за агно- нито- кации рий возбуди- возбуди- стики рингу ООИ) телями телями за хо- II-IV I-II лерой групп па- групп па- тогенно- тогенно- сти сти 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 Автоклав + + + + + + + + + 2 Аппарат для - - - + + + + + + инактивирования сывороток 3 Боксы + + + + + + + + + биологической безопасности II класса 4 Весы + + + + + + + + + 5 Гидропульт + + + + + + + + + 6 Дистиллятор + + + + + + + + + электрический 7 Лабораторный + + + + + + + + + pH-метр 8 Лупа ручная + + + + + + + + + 1 x 10, 1 x 2,5 9 Микроскоп + + + + + + + + + бинокулярный 10 Микроскоп + + + + + + + + + люминесцентный 11 Микроскоп + + + + + + + + + с устройством косого освещения 12 Облучатель - + + + + + + + + бактерицидный 13 Осветители к + + + + + + + + + микроскопам 14 Пипетки + + + + + + + + + автоматические 15 Стерилизаторы + + + + + + + + + электрические разных размеров 16 Сухожаровой шкаф + + + + + + + + + стерилизационный 17 Термостат + + + + + + + + + 18 Устройство + + + + + + + + + фазово- контрастное 19 Холодильник + + + + + + + + + бытовой 20 Центрифуга + + + + + + + + + лабораторная 21 Бикс + + + + + + + + + металлический 22 Ножницы + + + + + + + + + 23 Скальпель + + + + + + + + + 24 Пинцет + + + + + + + + + анатомический 25 Петледержатели + + + + + + + + + 26 Петли бактерио- + + + + + + + + + логические 27 Петли ректальные + + + + + + + + + для забора материала 28 Пробки + + + + + + + + + целлюлозные разного размера 29 Пробки резиновые + + + + + + + + + разного размера 30 Стандарт - - - + + + + + + мутности для приготовления микробной взвеси N 5 и N 10 31 Фильтры - + + + + + + + + мембранные N 2 и N 3 32 Фильтры Зейтца - + + + + + + + + 30 мм с устройством для фильтрации 33 Часы песочные + + + + + + + + + 34 Чашки Петри + + + + + + + + + одноразовые 35 Штативы на 40 и + + + + + + + + + 20 гнезд
Оборудование для ПЦР
диагностики и генетических исследований 1 Автоматический - - - + + + + + + флюориметр типа "Джин" 2 Видеосистема - - - + + + + + + результатов электрофореза 3 Источник - - - + + + + + + постоянного тока 4 Компьютер - - - + + + + + + 5 Комплект для - - - + + + + + + проведения электрофореза 6 Программируемый - - - + + + + + + термоциклер (амплификатор) 7 Пробирки - - - + + + + + + пропиленовые разного объема 8 Твердотельный - - - + + + + + + термостат 9 Ультрафиолетовый - - - + + + + + + трансиллюминатор 310 - 320 нм фильтр 20 x 20 см 10 Фотоаппарат - - - + + + + + + цифровой с комплектом светофильтров 11 Центрифуга - - - + + + + + + лабораторная настольная 12 Микроцентрифуга - - - + + + + + + лабораторная настольная 1200 g 13 Амплификатор для - - - + + + + + + проведения амплификации в режиме реального времени 14 ПЦР-бокс - - - + + + + + + 15 Комплект - - - + + + + + + автоматических пипеток 16 Секвенатор - - - - - - - - + Оборудование
для отбора проб
1 Комплект + + + + + + + + + медицинский (укладка универсальная для забора мате- риала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни)
Стекло лабораторное
1 Банки стеклянные + + + + + + + + + с притертой пробкой разного размера 2 Бутыли емкостью - + + + + + + + + 1 л 3 Пипетки градуи- + + + + + + + + + рованные на 1, 2, 5, 10 мл 4 Пипетки + + + + + + + + + пастеровские 5 Пробирки - - - + + + + + + агглютинационные 6 Пробирки бакте- + + + + + + + + + риологические 7 Пробирки - - - + + + + + + центрифужные 8 Поплавки - - - + + + + + + 9 Стаканы + + + + + + + + + фарфоровые или граненые 10 Стекло + + + + + + + + + предметное 11 Стекло с лункой + + + + + + + + + 12 Стекло покровное + + + + + + + + + 13 Ступки + + + + + + + + + фарфоровые 14 Спиртовки + + + + + + + + + 15 Флаконы разного + + + + + + + + + объема 16 Цилиндры мерные + + + + + + + + + 17 Шпатели - - - + + + + + +
Приложение 7
АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ ПРЕПАРАТЫ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
N Антибактериальные Территориальный уровень Региональный уровень Федеральный п/п препараты уровень и растворители для них ЛПУ фи- ФБУЗ ФБУЗ региональ- региональ- центры рефе- нацио- лиалы ЦГиЭ ЦГиЭ ные центры ные центры инди- ренс- наль- ФБУЗ (без (с ла- по монито- по монито- кации центр ный ЦГиЭ лабо- бора- рингу за рингу за и ди- по мо- центр рато- тория- возбуди- возбудите- агно- нито- вери- рий ми телями лями стики рингу фика- ООИ) ООИ) II-IV I-II за хо- ции групп па- групп па- лерой тогенно- тогенно- сти сти 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 Диметилсульфоксид - - - - - - - + + (растворитель для АБП) 2 Доксициклин - - - - - - - + + 3 Тетрациклин - - - - - - - + + 4 Левомицетин - - - - - - - + + 5 Налидиксовая - - - - - - - + + кислота 6 Ципрофлоксацин - - - - - - - + + 7 Фуразолидон - - - - - - - + + 8 Ампициллин - - - - - - - + + 9 Цефотаксим - - - - - - - + + 10 Рифампицин - - - - - - - + + 11 Стрептомицин - - - - - - - + + 12 Гентамицин - - - - - - - + + 13 Канамицин - - - - - - - + + 14 Сульфаметоксазол/ - - - - - - - + + триметоприм или сульфамонометак- син/триметоприм 15 Полимиксин "M" - - - + + + + + + или "B" 16 Диски с антибак- - - - + + + + + + териальными препаратами: доксициклин тетрациклин левомицетин налидиксовая кислота ципрофлоксацин фуразолидон ампициллин цефотаксим рифампицин стрептомицин гентамицин канамицин сульфаметоксазол/ триметоприм или сульфамонометак- син/триметоприм
Приложение 8
ПЕРЕЧЕНЬ
ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ, ТЕСТ-СИСТЕМ И ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ <*>
<*> Из практического руководства «Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней». М., 2009. — дополненное.
N Наименование препарата Регистрационный Номер удостоверения Разработчик п/п номер нормативной документации удостоверения 1 2 3 4 5 Зарегистрированные препараты, тест-системы и питательные среды 1 Иммуноглобулины ФСР 2007/00 877 ТУ 8961-015-01 898 109-2007 ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" диагностические 410005, г. Саратов, ул. флуоресцирующие Университетская, д. 46 холерные Тел.: (8452) 26-21-31 адсорбированные Факс: (8452) 51-52-12 лошадиные, лиофилизат E-mail: microbe@san.ru для диагностических Веб-сайт: www.microbe.ru целей 2 Сыворотки ФСР 2007/00 467 ТУ 8938-010-01 898 109-2007 -"- диагностические холерные Огава и Инаба адсорбированные сухие для реакции агглютинации (РА) 3 Сыворотка ФСР 2007/00 468 ТУ 8938-009-01 898 109-2007 -"- диагностическая холерная O1 адсорбированная сухая для реакции агглютинации (РА) 4 Сыворотка ФСР 2007/00 469 ТУ 8938-011-01 898 109-2007 -"- диагностическая холерная RO адсорбированная сухая для реакции агглютинации (РА) 5 Тест-система для ФСР 2007/00 100 ТУ 8895-006-01 898 109-2007 -"- выявления ДНК Vibrio + cholerae (ctx A ) методом полимеразной цепной реакции (ГенХол) 6 Бактериофаги 2007/01 532 ТУ 8637-014-01 898 109-2007 -"- диагностические холерные классический и эльтор, лиофилизат для диагностических целей 7 Фаг дифференциально- 2007/00 466 ТУ 8937-013-01 898 109-2007 -"- диагностический (ДДФ) вида V. cholerae, лиофилизат для диагностических целей 8 Бактериофаги ФСР 2007/00 880 ТУ 8937-002-01 898 109-2007 -"- диагностические + холерные эльтор CTX и - CTX , раствор для диагностических целей + - (фаги ctx и ctx ) 9 Микротест-система для 99/86/3 ФСП 42-0504-7632-06 Филиал ФГУП "Микроген" в ускоренного определения г. Махачкала НПО групп вибрионов по "Питательные среды" Хейбергу (МТС-X) 10 Микротест-система для 99/86/2 ФСП 42-0504-7631-06 -"- биохимической идентификации вибрионов (МТС-V) 11 Системы индикаторные ЛС-000 308 ФСП 42-0504 382-704 Филиал ФГУП НПО бумажные для "Микроген" в г. Нижний идентификации Новгород Нижегородское микроорганизмов (СИБ). предприятие по Набор диагностический N производству бактерийных 1 для идентификации препаратов "Имбио" вибрионов 12 Пептон основной сухой ЛС-001 072 ФСП 42-05 042 128-04 Филиал ФГУП "Микроген" в г. Махачкала НПО "Питательные среды" 13 Пептон основной сухой 0014/01-2002 г. ФСП 42-0010-2040-01 ОАО "Биомед" им. И.И. Мечникова Московская обл., п. Петрово-Дальнее
14 Питательная среда для ФСР 2009/05472 ТУ 9385-038-78095326-2008 ФГУН ГНЦ ПМБ
накопления холерного 142279, Московская вибриона сухая "Пептон область, основной сухой" Серпуховский район, п. Оболенск Тел.: (4967) 36-00-09 Тел./факс: (4967) 36-00-20 E-mail: info@obolensk.org Веб-сайт: www.obolensk.org 15 Питательная среда для ЛС-001 094 ФСП 42-0504-2132-04 Филиал ФГУП "Микроген" в выделения и г. Махачкала НПО культивирования "Питательные среды" холерного вибриона (щелочной агар) сухая 16 Питательная среда для 002 122/01-2003 ФСП 42-0010-2989-02 ОАО "Биомед" им. И.И. выделения и г. Мечникова культивирования Московская обл., холерного вибриона п. Петрово-Дальнее сухая (щелочной агар)
17 Питательная среда для ФСР 2009/05473 ТУ 9385-039-78095326-2008 ФГУН ГНЦ ПМБ
выделения и 142279, Московская культивирования область, холерного вибриона Серпуховский район, п. сухая "Щелочной агар" Оболенск Тел.: (4967) 36-00-09 Тел./факс: (4967) 36-00-20 E-mail: info@obolensk.org Веб-сайт: www.obolensk.org 18 Набор реагентов для ФСР 2011/10006 ТУ 9398-111-78095326-201 -"- бактериологических исследований "Питательная среда для первичной идентификации энтеробактерий сухая" (Железо-глюкозо- лактозный агар с мочевиной) 19 Питательная среда для ФСР 2008/03494 ТУ 9398-049-78095326-2008 -"- идентификации энтеробактерий сухая (Среда Гисса-ГРМ с лактозой) 20 Питательная среда для ФСР 2008/03494 ТУ 9398-049-78095326-2008 -"- идентификации энтеробактерий сухая (Среда Гисса-ГРМ с сахарозой) 21 Питательная среда для ФСР 2008/03494 ТУ 9398-049-78095326-2008 -"- идентификации энтеробактерий сухая (Среда Гисса-ГРМ с глюкозой) 22 Питательная среда для ФСР 2008/03494 ТУ 9398-049-78095326-2008 -"- идентификации энтеробактерий сухая (Среда Гисса-ГРМ с мальтозой) 23 Питательная среда для ФСР 2008/03494 ТУ 9398-049-78095326-2008 -"- идентификации энтеробактерий сухая (Среда Гисса-ГРМ с маннитом) 24 Набор реагентов для ФС 01012006/ ТУ 9398-013-78095326-2006 -"- контроля микробной 4122-06 загрязненности (трехсахарный агар с солями железа - для выявления сероводорода и определения ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы) "Питательная среда N 13 ГРМ" 25 Питательная среда для ФСР 2008/02818 ТУ 9398-048-78095326-2007 -"- первичной идентификации энтеробактерий сухая (среда Ресселя-ГРМ) 26 Бактериофаги ФСР 2008/03009 ТУ 8637-019-01 898 109-2007 ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" диагностические 410005, г. Саратов, ул. холерные ТЭПВ-1, Университетская, д. 46 ТЭПВ-2, ТЭПВ-3, Тел.: (8452) 26-21-31 ТЭПВ-4, ТЭПВ-5, ТЭПВ-6, Факс: (8452) 51-52-12 ТЭПВ-7, раствор для E-mail: microbe@san.ru диагностических целей Веб-сайт: www.microbe.ru 27 Сыворотка ФСР 2008/03209 ТУ 9389-018-01 898 109-2008 -"- диагностическая холерная не O1 группы O139 адсорбированная кроличья для реакции агглютинации (РА) на стекле, лиофилизат для диагностических целей Незарегистрированные и разрабатываемые препараты и тест-системы (используются лабораториями территориального и регионального уровней только после регистрации) 28 Питательная среда для ТУ 9398-062-78 095 326-2007 ФГУН ГНЦ ПМБ выделения возбудителя 142279, Московская холеры сухая (типа область, TCBS) Серпуховский район, п. Оболенск Тел.: (4967) 36-00-09 Тел./факс: (4967) 36-00-20 E-mail: info@obolensk.org Веб-сайт: www.obolensk.org 29 Набор реагентов для -"- иммунохроматографичес- кой идентификации микробных клеток возбудителя холеры (ИХ тест-полоска V. cholerae O1) 30 Иммунохроматографичес- -"- кая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя холеры (ИХ тест-система V. cholerae O139) 31 Иммунохроматографичес- -"- кая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя холеры (ИХ тест-система V. cholerae Инаба) 32 Иммунохроматографи- -"- ческая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя холеры (ИХ тест-система V. cholerae Огава) 33 Набор реагентов для ТУ 9398-058-01897593-2010 ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" выявления ДНК Vibrio 410005, г. Саратов, ул. cholerae и Университетская, д. 46 идентификации Тел.: (8452) 26-21-31 патогенных штаммов Факс: (8452) 51-52-12 Vibrio cholerae в E-mail: microbe@san.ru биологическом материале Веб-сайт: www.microbe.ru и объектах окружающей ФГУН ЦНИИ эпидемиологии, среды методом ООО "Интерлабсервис" полимеразной цепной 119021, г. Москва, реакции (ПЦР) с Олсуфьевский переулок, д. гибридизационно- 8, стр. 1 флуоресцентной Тел.: (495) 664-28-84 детекцией "АмплиСенс Факс: (495) 6642889 Vibrio cholerae - FL" E-mail: info@interlabservice.ru Веб-сайт: www.interlabservice.ru 34 Набор реагентов для ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" выявления и ускоренной 410005, г. Саратов, ул. идентификации Vibrio Университетская, д. 46 cholerae методом Тел.: (8452) 26-21-31 полимеразной цепной Факс: (8452) 51-52-12 реакции с E-mail: microbe@san.ru электрофоретическим Веб-сайт: www.microbe.ru учетом результатов "Ген Vibrio cholera - идентификация - РЭФ" 35 Иммуноферментная тест- -"- система для определения токсигенных штаммов холерного вибриона 36 Диагностикум ФГУЗ "РостНИПЧИ" антилипазный 344002, г. Ростов-на- иммуноглобулиновый Дону, ул. Горького, 117 полимерный сухой для т. (863) 240-27-03 выявления т/ф (863) 234-13-76 гемолитических штаммов plage@ic.ru холерных вибрионов 37 Иммуноглобулины -"- диагностические холерные моноклональные сухие для выявления холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп 38 Питательная среда для -"- выделения холерного вибриона элективно- дифференциальная сухая (СЭДХ) 39 Жидкая питательная -"- среда для культивирования холерного вибриона - ХДС-бульон на основе панкреатического перевара пекарских дрожжей (ПППД) 40 Питательная среда для -"- культивирования холерного вибриона-ХДС- агар (ПППД) 41 Жидкая питательная -"- среда холерная накопительная (ХДС-Н) 42 Сыворотки ФГУЗ ИркутскНИПЧИ диагностические 664047, г. Иркутск, ул. холерные Огава и Инаба Трилиссера, 78 адсорбированные сухие Тел./факс: (3952) 22-01-35 для реакции E-mail: агглютинации (РА) adm@chumin.irkutsk.ru Веб-сайт: www.irkutsk.ru/chumin/ 43 Сыворотка -"- диагностическая холерная O1 адсорбированная и неадсорбированная сухая для реакции агглютинации (РА) 44 Питательная среда для -"- выделения и культивирования холерного вибриона (щелочной агар) сухая 45 Тест-система для ФГУ выявления ДНК Vibrio "48 ЦНИИ МО РФ", г. Киров + cholerae (ctxA и + tcpA ) методом ПЦР
Приложение 9
СХЕМА
ПЕРЕДАЧИ ИНФОРМАЦИИ ПРИ ВЫДЕЛЕНИИ КУЛЬТУР, ПОДОЗРИТЕЛЬНЫХ НА ХОЛЕРНЫЕ ВИБРИОНЫ O1, O139 СЕРОГРУПП В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ
Зав. бактериологической лабораторией (врач) ЛПУ
\/
Главный врач ЛПУ
\/ \/
Органы управления здравоохранением < Территориальный отдел в городах, районах > Управления Роспотребнадзора по субъекту . . \/ \/ .................................... .Органы управления здравоохранением.......> Управление Роспотребнадзора < . в субъекте Российской Федерации . по субъекту ... .................................... . . . . . . . . \/ . . ....................... . . . Территориальное ПЧУ . . . .(станция, ПЧЦ, НИПЧИ). . . ....................... . . . \/ .................................. . ............................ . Федеральная служба по надзору . . .Минздравсоцразвития России.<......в сфере защиты прав потребителей.<.. ............................ . и благополучия человека . .................................. ........> Передача информации о предварительном положительном результате при проведении исследований по эпидпоказаниям
Приложение 10
СХЕМА
ПЕРЕДАЧИ ИНФОРМАЦИИ ПРИ ВЫДЕЛЕНИИ КУЛЬТУР, ПОДОЗРИТЕЛЬНЫХ НА ХОЛЕРНЫЕ ВИБРИОНЫ O1, O139 СЕРОГРУПП В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ФИЛИАЛА ФБУЗ «ЦЕНТР ГИГИЕНЫ И ЭПИДЕМИОЛОГИИ» В МУНИЦИПАЛЬНОМ ОБРАЗОВАНИИ В СУБЪЕКТЕ (ГОРОДЕ, АДМИНИСТРАТИВНОМ РАЙОНЕ)
Зав. бактериологической лабораторией филиала «ФБУЗ ЦГиЭ»
в муниципальном образовании в субъекте
\/
Главный врач филиала "ФБУЗ ЦГиЭ" Отдел Управления < в муниципальном образовании > Роспотребнадзора по в субъекте субъекту Российской Федерации
\/
Главный врач ФБУЗ "ЦГиЭ в субъекте" \/ \/ Органы управления \/ Управление Роспотребнадзора .. здравоохранением в > по субъекту Российской Федерации . муниципальном образовании . . . . . . . \/ . \/ ....................... . ............................. . Территориальное ПЧУ . . . Органы управления . .(станция, ПЧЦ, НИПЧИ). . .здравоохранением в субъекте. ....................... . . Российской Федерации . . ............................. . . .................................. . \/ ..................... . Федеральная служба по надзору . . .....>.Минздравсоцразвития.<...в сфере защиты прав потребителей.<.. . России . . и благополучия человека . ..................... .................................. ........> Передача информации о предварительном положительном результате при проведении исследований по эпидпоказаниям
Приложение 11
СХЕМА
ПЕРЕДАЧИ ИНФОРМАЦИИ ПРИ ВЫДЕЛЕНИИ КУЛЬТУР ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА O1, O139 СЕРОГРУПП В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ООИ ФБУЗ «ЦЕНТР ГИГИЕНЫ
И ЭПИДЕМИОЛОГИИ» В СУБЪЕКТЕ
Зав. бактериологической лабораторией ООИ "ФБУЗ ЦГиЭ" в субъекте
\/
< Главный врач > Управление Роспотребнадзора "ФБУЗ ЦГиЭ" в субъекте по субъекту Российской Федерации
\/
Органы управления Территориальное ПЧУ < здравоохранением в муниципальном (станция, ПЧЦ, НИПЧИ) образовании
\/ ............................. .................................. . Органы управления . . Федеральная служба по надзору . .здравоохранением в субъекте. .в сфере защиты прав потребителей.< . Российской Федерации . . и благополучия человека . ............................. ..................................
............................ >.Минздравсоцразвития России.< ............................
ПРАВИТЕЛЬСТВО МОСКВЫ
ДЕПАРТАМЕНТ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ГОРОДА МОСКВЫ
ПРИКАЗ
от 24 мая 2011 г. N 452
О ВНЕСЕНИИ ИЗМЕНЕНИЯ В ГРАФИК ЗАКРЫТИЯ РОДИЛЬНЫХ ДОМОВ И АКУШЕРСКИХ ОТДЕЛЕНИЙ НА ПРОФИЛАКТИЧЕСКУЮ САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКУЮ ОБРАБОТКУ В 2011 ГОДУ
В связи с отключением Мосводоканалом горячего водоснабжения в районе Вешняки, на основании письма главного врача ГКБ N 15 им. О.М.Филатова от 04.04.2011 N 531 приказываю: 1. Изменить срок планового закрытия родильного отделения ГКБ N 15 им. О.М.Филатова, определенный приказом Департамента здравоохранения города Москвы от 16.12.2010 N 2145 "Об утверждении графика закрытия родильных домов и акушерских стационаров городских больниц на профилактическую санитарно-гигиеническую обработку в 2011 году", и закрыть родильное отделение ГКБ N 15 им. О.М.Филатова с 13.06.2011 по 10.07.2011. 2. Главному врачу ГКБ N 15 им. О.М.Филатова Е.Е.Тюлькиной обеспечить контроль за проведением полной санитарной обработки помещений, инвентаря и оборудования, санации медицинского персонала родильного отделения и открытии его в указанный срок. 3. Главному врачу Станции скорой и неотложной медицинской помощи им. А.С.Пучкова В.В.Фетисову учесть настоящий приказ в оперативной работе. 4. Контроль исполнения настоящего приказа возложить на заместителя руководителя Департамента здравоохранения А.А.Корсунского.
Руководитель
Департамента здравоохранения
Л.М.ПЕЧАТНИКОВ
