«МУК 4.1.3041-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовой концентрации бенз(а)пирена в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания» (утв. Роспотребнадзором 07.09.2012) «МУК 4.1.3040-12 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовой концентрации бенз(а)пирена в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания» (утв. Роспотребнадзором 07.09.2012) «МУК 4.1.3037-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций меди, цинка в желчи методом атомно-абсорбционной спектрометрии. Методические указания» (утв. Роспотребнадзором 07.09.2012) Приказ Минздрава МО от 06.09.2012 N 1045 «О мерах по профилактике заболеваний гриппом и ОРВИ в Московской области в эпидемическом сезоне 2012-2013 годов»

new_adm

11 лет назад

Документ введен в действие с 7 сентября 2012 года. Текст документа

Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
7 сентября 2012 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕНЗ(А)ПИРЕНА В МОЧЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.3041-12

Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора (Т.С.Уланова, Н.В.Зайцева, Е.В.Стенно, Г.А.Вейхман, М.А.Баканина, Ю.В.Шардакова, Т.Д.Карнажицкая, А.В.Кислицина).
Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 7 сентября 2012 г.
Введены в действие с момента утверждения.
Введены впервые.
Область применения и общие положения

Свидетельство об аттестации от 30.11.2010 N 223.1.0273/01.00258/2010. 1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации бенз(а)пирена в моче в диапазоне 0,01-4,00 мкг/дм3. 1.2. Методические указания предназначены для использования органами и организациями Роспотребнадзора, а также иными организациями, деятельность которых связана с вопросами гигиены окружающей среды. 1.3. Бенз(а)пирен

Молекулярная масса — 252,32.

Бенз(а)пирен (3,4-бензпирен) — светло-желтые кристаллы, температура плавления 175-180,5 °С, температура кипения 456 °С, плотность 1,351-1,282 г/см3. Растворим в ацетонитриле, этаноле, метаноле, гексане, метиленхлориде и других органических растворителях [1]. Растворимость бенз(а)пирена в пресной воде 0,11 мкг/дм3, в соленой воде — 0,13 мкг/дм3 [2]. Присутствует в атмосферном воздухе, природной воде, растениях, копченых продуктах как загрязнитель. Краткая токсикологическая характеристика Бенз(а)пирен — вещество 1-го класса опасности. Обладает мутагенным, канцерогенным, эмбриотоксическим и тератогенным эффектами [3].

2. Погрешность измерений

Погрешность измерений, соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

Таблица 1

Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, внутрилабораторной прецизионности, воспроизводимости

  Диапазон измерений,        Показатели прецизионности         Показатель            мкг/дм3            (относительные значения), %         точности                                                                    (границы                           стандартное стандартное  стандартное  относительной                         отклонение  отклонение   отклонение    погрешности                          повторя-    внутрилабо-  воспроизво-  при Р = 0,95),                        емости,     раторной     димости,       +/- дельта                          сигма       прецизион-   сигма            <>, %                                 r      ности,            R                                                         сигма                                                                            Rл                                                                                                                от 0,01 до 4,00 вкл.      3           7            10            20

<> Соответствует расширенной относительной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2.

3. Метод измерений

Измерение концентрации бенз(а)пирена в моче основан на концентрировании 3,4-бенз(а)пирена из мочи методом твердофазной экстракции на полимерном сорбенте Oasis HLB, экстракции с сорбента метиленхлоридом и анализе экстракта на жидкостном хроматографе с использованием флуориметрического детектора. Определению не мешают ароматические углеводороды, фенол, стирол, полиядерные ароматические углеводороды. Диапазон измерений массовой концентрации бенз(а)пирена в моче — 0,01-4,00 мкг/дм3. Средняя полнота извлечения свободного бенз(а)пирена из мочи составляет 92%.

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф, оснащенный

 термостатом колонок, градиентным насосом,         Номер в Государственном устройством для дегазации элюента,                реестре средств измерений флуориметрическим детектором                      16193-06 Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические           ГОСТ Р 53228-2008 Гири Г2-210                                       ГОСТ 7328-2001 Колбы мерные вместимостью 25, 100 см3             ГОСТ 1770-74 Цилиндры мерные вместимостью 1 дм3                ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные вместимостью 1, 5, 10 см3 ГОСТ 29227-91 Микрошприцы Hamilton 700 вместимостью 10, 100 мм3;
или дозаторы жидкости механические с
погрешностью +/- 0,1 мм3; 0,1-1,0 см3;
1,0-5,0 см3 со сменными одноразовыми
наконечниками, модель BIOHIT PROLINE

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.2. Реактивы

Стандартный образец состава раствора
бенз(а)пирена в ацетонитриле (аттестованное значение 100 мкг/см3), ГСО 7515
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч ТУ 6-09-14-2167-84 Метилен хлористый для жидкостной хроматографии,

 осч                                               ТУ 2631-013-44493179-98 Вода дистиллированная                             ГОСТ 6709-72 Кислота серная, осч                               ГОСТ 14262-78 Калий двухромовокислый, чда                       ГОСТ 4220-75

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

4.3. Вспомогательные устройства, материалы

Колонка металлическая Zorbax Eclipse XDB С18 с зернением 5 микрон 4,6 x 150 мм
Предколонка Zorbax Eclipse XDB С18 с
зернением 5 микрон 4,6 х 12,5 мм

 Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон"                   ТУ 9443-001-245.23530-97 Сушильный шкаф ШСС-80                             ТУ 16.531.743-83

Устройство очистки воды «MilliPore»
Устройство для твердофазной экстракции
«Waters»: вакуумный насос и манифолд
Картриджи Oasis HLB Icc (30 мг) для твердофазной экстракции «Waters»
Пробирки типа Falcon полипропиленовые (РР) вместимостью 15 см3 конические с градуировкой с завинчивающейся крышкой
Стакан термостойкий вместимостью 2 дм3 ГОСТ 25336-82 Стеклянные виалы объемом 1,5 см3 с крышкой Шприц медицинский одноразовый типа
«Луер» вместимостью 1 см3 ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 Фильтры капроновые с диаметром пор
не более 5 мкм

Примечание. Допускается применение оборудования и материалов иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5. Требования безопасности и охраны окружающей среды

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 и ГОСТ 12.1.005-88. 5.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в руководстве по правилам эксплуатации прибора, правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2009, противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83, обучение и инструктаж по безопасности труда проводится в соответствии с ГОСТ 12.0.004-90. 5.3. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. 5.4. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 5.5. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в руководстве по правилам эксплуатации жидкостного хроматографа.

6. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод анализа и получившие удовлетворительные результаты оперативного контроля процедуры выполнения измерений.

7. Условия измерений

7.1. Подготовку и проведение измерений проводят при следующих условиях: — температура воздуха °С, влажность не более 80%; — атмосферное давление (630-800) мм рт. ст. 7.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией прибора.

8. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

8.1. Подготовка посуды

Используемуто стеклянную посуду замачивают на 1 ч. в хромовой смеси, промывают проточной водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают в сушильном шкафу при температуре 105 °С, ополаскивают ацетонитрилом.

8.2. Приготовление растворов

8.2.1. Элюент для хроматографии. Смесь ацетонитрила с дистиллированной водой в соотношении 60:40% (объемная доля). Состав элюента задают на двух каналах насоса. 8.2.2. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 дм3 насыпают 50 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм3 концентрированной серной кислоты. 8.2.3. Раствор метиленхлорида в ацетонитриле 1:10 (объемная доля). В мерную колбу объемом 25см3 вносят 2,27 см3 ацетонитрила, доводят метиленхлоридом до метки и перемешивают содержимое колбы. Срок хранения раствора 5 дней. 8.2.4. Раствор ацетонитрила в воде 50%-й (объемная доля). В мерную колбу объемом 25 см3 вносят 12,5 см3 ацетонитрила, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают содержимое колбы. Срок хранения раствора 5 дней. 8.2.5. Исходный раствор бенз(а)пирена N 1, концентрация 1 мкг/дм3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1,0 см3 ГСО бенз(а)пирена с концентрацией 100 мкг/дм3 и доводят ацетонитрилом до метки. Срок хранения раствора 60 дней при хранении в темном месте при температуре 4-6 °С. 8.2.6. Раствор бенз(а)пирена N 2, концентрация 0,025 мкг/дм3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 2,5 см3 раствора бенз(а)пирена N 1 и доводят ацетонитрилом до метки. Используют свежеприготовленный раствор. 8.2.7. Раствор для идентификации бенз(а)пирена, концентрация 0,005 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят 5 см3 раствора бенз(а)пирена N 2 для градуировки и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Используют свежеприготовленный раствор.

8.3. Подготовка хроматографической колонки

8.3.1. Колонку устанавливают в хроматограф и подают элюент со скоростью 1,5 см3/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора. 8.3.2. Проводят холостую разгонку с установлением ступеней градиента: от 0 до 2,5 мин. — 60% ацетонитрила, от 2,5 до 12 мин. — повышение до 90% ацетонитрила, от 12 до 20 мин. — повышение до 100% ацетонитрила, от 20 до 22,5 мин. — 100% ацетонитрила, от 22,5 до 23 мин. — снижение до 60% ацетонитрила, от 23 до 28 мин. — 60% ацетонитрила.

8.4. Установление градуировочной характеристики

8.4.1. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика на хроматограмме (единицы оптической плотности, е.о.п.) от массовой концентрации бенз(а)пирена (мкг/дм3), устанавливают на градуировочных растворах бенз(а)пирена в ацетонитриле методом абсолютной градуировки. Градуировочную характеристику устанавливают по результатам измерений 6 серий по 5 концентрациям вещества в каждой серии. 8.4.2. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 25 см3. Для этого в каждую колбу вносят растворы бенз(а)пирена для градуировки N 1 и 2 в соответствии с табл. 2, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Таблица 2

Градуировочные растворы бенз(а)пирена в ацетонитриле

Номер раствора 1 2 3 4 5

Объем раствора N 1 (С = 1 мкг/см3), мм3 — — — 46 92

Объем раствора N 2 (С = 0,025 мкг/см3), мм3 9,2 46 460 — —

Массовая концентрация бенз(а)пирена 0,0092 0,046 0,46 1,84 3,68 в ацетонитриле, мкг/дм3

Массовая концентрация бенз(а)пирена в моче 0,010 0,05 0,50 2,0 4,0 (с учетом степени экстракции), мкг/дм3

8.4.3. Анализируют градуировочные растворы в количестве 20 мм3 на жидкостном хроматографе в условиях: — колонка 4,6 x 150 мм, заполненная сорбентом Zorbax Eclipse XDB ; — градиент: 2,5 мин. подача подвижной фазы (60% ацетонитрила и 40% воды), увеличение ацетонитрила с 60 до 90% от 2,5 до 12 мин., увеличение ацетонитрила с 90 до 100% от 12 до 20 мин., подача 100% ацетонитрила от 20 до 22,5 мин., снижение ацетонитрила до 60% в течение 0,5 мин., подача 60% ацетонитрила до уравновешивания колонки (5 мин.);

скорость движения элюента 1,5 см3/мин. ;
температура термостата колонки 28 °С;
флуориметрический детектор:
длина волны возбуждения 265 нм; длина волны эмиссии 412 нм;
время удерживания бенз(а)пирена: (12,5 +/- 0,05) мин. Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

, где:

массовая концентрация бенз(а)пирена в градуировочном растворе, мкг/дм3;
среднее значение двух измерений площади пика бенз(а)пирена i-й концентрации, усл. ед.; n — количество градуировочных смесей (n = 5). 8.4.4. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация бенз(а)пирена соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:

, где:

С — заданная массовая концентрация бенз(а)пирена в градуировочном растворе, мкг/дм3; X — результат измерения массовой концентрации бенз(а)пирена в градуировочном растворе, мкг/дм3. При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.

8.5. Отбор проб

Отбирают пробу мочи объемом не менее 20 см3 в стеклянную тару с плотно закрывающейся крышкой. Срок хранения проб в холодильнике 8 ч.

9. Выполнение измерений

Выполняют два параллельных измерения образца мочи. В коническую пробирку с завинчивающейся крышкой переносят 10,0 см3 мочи и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин. Отбирают 1,0 см3 верхнего слоя и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 1cc 1 см3 раствора метиленхлорида в ацетонитриле (1:10), 1 см3 дистиллированной воды, 1 см3 анализируемой мочи, промывают картридж с нанесенной пробой 1 см3 дистиллированной воды, 0,2 см3 50%-го раствора ацетонитрила в воде. Высушивают картридж в токе воздуха с помощью вакуумного насоса и пропускают через сорбент 1 см3 метиленхлорида, собирая экстракт в виалу. Скорость потока во время экстракции не должна превышать 1 см3/мин. Полученный экстракт высушивают в токе воздуха, растворяют сухой остаток в 1,0 см3 ацетонитрила, фильтруют раствор через капроновый фильтр, используя медицинский шприц «Луер», в стеклянную виалу, и анализируют в количестве 20 мм3 на жидкостном хроматографе в условиях, указанных в п. 8.4.3. Идентификацию бенз(а)пирена проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и стандартном растворе.

10. Обработка (вычисление) результатов измерений

10.1. Массовую концентрацию бенз(а)пирена в моче (мкг/дм3) вычисляют по формуле:

, где:

X — массовая концентрация бенз(а)пирена в анализируемой пробе, мкг/дм3;

площадь пика бенз(а)пирена на хроматограмме, усл. ед.; K — градуировочный коэффициент; 1,087 — коэффициент, учитывающий степень экстракции бенз(а)пирена из мочи, равную 92%. Рассчитывается как отношение площадей пиков бенз(а)пирена до и после экстракции из мочи. 10.2. За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости , (параллельных определений), для которых выполняется условие:

, где: (1)

r — предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл. 3. При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:

, где: (2)

критический диапазон. . При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).

Таблица 3

Пределы повторяемости, внутрилабораторной прецизионности, воспроизводимости при вероятности Р = 0,95

       Диапазон                Пределы (относительные значения), %                 измерений,                                                                     мкг/дм3       повторяемости  внутрилабораторной     воспроизводимос-                       (допускаемое     прецизионности       ти (допускаемое                         расхождение      (допускаемое        расхождение                             между двумя  расхождение между двумя между двумя                            результатами  результатами измерений, результатами                           параллельных  полученными в условиях  измерений,                             определений),   внутрилабораторной    полученными                                  r         прецизионности), Rл   в разных                                                                     лабораториях), R                                                                                от 0,01 до 4,0 вкл.       8                 20                   28

10.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости:

, где: (3)

и , — результаты измерений массовой концентрации бенз(а)пирена, полученные в разных лабораториях — средние арифметические двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие (1), мкг/дм3. При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в табл. 3.

11. Оформление результатов измерений

Результат измерений в документах, предусматривающих его использование, может быть представлен в виде:

, Р = 0,95, где:

характеристика погрешности, мкг/дм3, при Р = 0,95, значение рассчитывают по формуле:

, где:

Значение приведено в табл. 1.

12. Процедуры обеспечения достоверности измерений

Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и РМГ 76-2004 ГСИ. Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

12.1. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок

Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры с нормативом контроля К. Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле:

, где:

результат измерений массовой концентрации бенз(а)пирена в пробе с известной добавкой — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1), мкг/дм3;
результат измерений массовой концентрации бенз(а)пирена в исходной пробе — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1), мкг/дм3;
величина введеной добавки, мкг/дм3. Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

, где:

, — значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики измерений, соответствующие массовой концентрации бенз(а)пирена в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно, мкг/дм3. Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики измерений в лаборатории устанавливать на основе выражения: с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений. Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

(4)

При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

12.2. Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности

Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб мочи. При реализации контрольной процедуры получают два результата контрольных измерений (первичного и повторного ) массовой концентрации бенз(а)пирена в условиях внутрилабораторной прецизионности. Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:

(5)

Значение предела внутрилабораторной прецизионности (, %) не превышает 20%.

13. Разработчики

Уланова Т.С., Зайцева Н.В., Карнажицкая Т.Д., Кислицина А.В. (ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора).

Приложение 1
(справочное)

Библиография

Химическая энциклопедия/Под ред. И.Л.Кнунянц, М.: «Советская энциклопедия», 1988. Т. 1.
Майстренко В.Н., Клюев Н.А. Эколого-аналитический мониторинг стойких органических загрязнителей. М.: Бином. Лаборатория знаний, 2004. 323 с.
Лазарев Н.В. Вредные вещества в промышленности. Т. 1. Органические вещества. Л.: Химия, 1976. 590 с.

Приложение 2
(справочное)

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие документы. ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Ч. 1. Метрологические и технические требования. Испытания». ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия». ГОСТ 6709-72 «Вода дистиллированная. Технические условия». ГОСТ 14262-78 «Кислота серная. Технические условия». ГОСТ 4220-75 «Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия». ГОСТ 7328-2001 «Гири. Общие технические условия». ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры». ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные». Ч. 1. Общие требования. ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные». ГОСТ 12.0.004-90 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда». ГОСТ 12.1.004-91 «ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования». ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны». СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». ГОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности». ГОСТ 12.1.019-2009 «ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты». ГОСТ 12.4.009-83 «ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание». ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». РМГ 76-2004 ГСИ «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа». ТУ 9443-001-245.23530-97 «Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-«Элекон». ТУ 16.531.743-83 «Сушильный шкаф ШСС-80». ТУ 6-09-14-2167-84 «Ацетонитрил».
ТУ 2631-013-44493179-98 «Метилен хлористый для жидкостной хроматографии».

Примечание. При использовании настоящих методических указаний целесообразно проверить действие ссылочных стандартов на территории Российской Федерации по соответствующему указателю стандартов, составленному на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящими методическими указаниями следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Документ введен в действие с 7 сентября 2012 года. Текст документа

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕНЗ(А)ПИРЕНА В КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.3040-12

Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора (Т.С.Уланова, Н.В.Зайцева, Е.В.Стенно, Г.А.Вейхман, М.А.Баканина, Ю.В.Шардакова, Т.Д.Карнажицкая, А.В.Кислицина).
Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 7 сентября 2012 г.
Введены в действие с момента утверждения.
Введены впервые.
Область применения и общие положения

Свидетельство об аттестации от 30.11.2010 N 223.1.0332/01.00258/2010. 1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации бенз(а)пирена в крови в диапазоне 0,02-2,00 мкг/дм3. 1.2. Методические указания предназначены для использования органами и организациями Роспотребнадзора, а также иными организациями, деятельность которых связана с вопросами гигиены окружающей среды. 1.3. Бенз(а)пирен

Молекулярная масса — 252,32.

2. Погрешность измерений

Погрешность измерений, соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

Таблица 1

  Диапазон измерений,        Показатели прецизионности         Показатель            мкг/дм3            (относительные значения), %         точности                                                                    (границы                           стандартное стандартное  стандартное  относительной                         отклонение  отклонение   отклонение    погрешности                          повторя-    внутрилабо-  воспроизво-  при Р = 0,95),                        емости,     раторной     димости,       +/- дельта                          сигма       прецизион-   сигма            <>, %                                 r      ности,            R                                                         сигма                                                                            Rл                                                                                                                от 0,02 до 2,00 вкл.      5           9            12            24

<> Соответствует расширенной относительной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2.

3. Метод измерений

Измерение концентрации бенз(а)пирена в крови основан на экстракции бенз(а)пирена из биопробы ацетонитрилом в присутствии высаливателей, очистке экстракта на сорбенте и анализе очищенного экстракта на жидкостном хроматографе с использованием флуориметрического детектора. Определению не мешают ароматические углеводороды, фенол, стирол, полиядерные ароматические углеводороды. Диапазон измерений массовой концентрации бенз(а)пирена в крови — 0,02-2,00 мкг/дм3. Средняя полнота извлечения свободного бенз(а)пирена из крови составляет 62%.

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф, оснащенный

 термостатом колонок, градиентным насосом,         Номер в Государственном устройством для дегазации элюента,                реестре средств измерений флуориметрическим детектором                      16193-06 Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические           ГОСТ Р 53228-2008 Гири Г2-210                                       ГОСТ 7328-2001 Колбы мерные вместимостью 25, 100 см3             ГОСТ 1770-74 Цилиндры лабораторные вместимостью 1 дм3          ГОСТ 1770-74 Пипетки градуированные вместимостью 1, 5 см3      ГОСТ 29227-91 Микрошприцы МШ-10                                 ТУ 2.833.106-2000

или дозаторы жидкости механические с
погрешностью +/- 0,1 мм3; 0,005-0,05 см3; 0,1-1,0 см3; 1,0-5,0 см3 со сменными
одноразовыми наконечниками, модель
BIOHIT PROLINE

4.2. Реактивы

Стандартный образец состава раствора
бенз(а)пирена в ацетонитриле (аттестованное значение 100 мкг/см3), ГСО 7515

 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч     ТУ 6-09-14-2167-84 Вода дистиллированная                             ГОСТ 6709-72

Экстракционные наборы VetexQ, содержащие смесь для экстракции (состав: магния сульфат, натрия хлорид, натрия цитрат, динатриевая соль лимонной кислоты) и смесь для очистки экстракта (состав: магния сульфат, сорбент С18) (InterLab кат. N IL-5056)

 Кислота серная, осч                               ГОСТ 14262-78 Калий двухромовокислый, чда                       ГОСТ 4220-75 Раствор гепарина в ампулах (5000 ед. в 1 см3)     ФС 42-1327-99

4.3. Вспомогательные устройства, материалы

Колонка металлическая Zorbax Eclipse XDB С18 4,6 x 150 мм зернением 5 микрон
Предколонка Zorbax Eclipse XDB С18 с
зернением 5 микрон 4,6 х 12,5 мм

 Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон"                   ТУ 9443-001-245.23530-97 Сушильный шкаф ШСС-80                             ТУ 16.531.743-83 Устройство очистки воды "MilliPore" Стакан термостойкий вместимостью 2 дм3            ГОСТ 25336-82

Пробирки типа Falcon полипропиленовые (РР) вместимостью 15 см3 конические с градуировкой с завинчивающейся крышкой
Вакуумные пробирки для забора крови с
литий-гепарином вместимостью 6 см3
Шприц медицинский одноразовый типа
«Луер» вместимостью 1 см3 ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 Фильтры капроновые с диаметром пор
не более 5 мкм
Стеклянные виалы объемом 1,5 см3 с крышкой

5. Требования безопасности и охраны окружающей среды

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 и 12.1.005-88. 5.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в руководстве по правилам эксплуатации прибора, правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2009, противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83, обучение и инструктаж по безопасности труда проводится в соответствии с ГОСТ 12.0.004-90. 5.3. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. 5.4. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 5.5. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в руководстве по правилам эксплуатации жидкостного хроматографа.

6. Требования к квалификации операторов

7. Условия измерений

8. Подготовка к выполнению измерений

8.1. Подготовка посуды

Используемую стеклянную посуду замачивают на 1 ч. в хромовой смеси, промывают проточной водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают в сушильном шкафу при температуре 105 °С, ополаскивают ацетонитрилом.

8.2. Приготовление растворов

8.2.1. Элюент для хроматографии. Смесь ацетонитрила с дистиллированной водой в соотношении 60:40% (объемная доля). Состав элюента задают на двух каналах насоса. 8.2.2. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 дм3 насыпают 50 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм3 концентрированной серной кислоты. 8.2.3. Исходный раствор бенз(а)пирена N 1, концентрации 1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1,0 см3 ГСО с массовой концентрацией бенз(а)пирена 100 мкг/см3 и доводят ацетонитрилом до метки. Срок хранения раствора 60 дней при хранении в темном месте при температуре 4-6 °С. 8.2.4. Раствор бенз{а)пирена N 2, концентрация 0,005 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,5 см3 раствора бенз(а)пирена N 1 и доводят ацетонитрилом до метки. Используют свежеприготовленный раствор. 8.2.5. Раствор для идентификации бенз(а)пирена, концентрация 0,0005 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят 2,5 см3 раствора бенз(а)пирена N 2 и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Используют свежеприготовленный раствор.

8.3. Подготовка хроматографической колонки

8.4. Установление градуировочной характеристики

8.4.1. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика на хроматограмме (единицы оптической плотности, е.о.п.) от массовой концентрации бенз(а)пирена (мкг/дм3), устанавливают на градуировочных растворах бенз(а)пирена в ацетонитриле методом абсолютной градуировки. Градуировочную характеристику устанавливают по результатам измерений 6 серий по 5 концентрациям вещества в каждой серии. 8.4.2. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 25 см3. В каждую пробирку вносят растворы бенз(а)пирена для градуировки N 1 и 2 в соответствии с табл. 2, доводят до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Таблица 2

Градуировочные растворы бенз(а)пирена в ацетонитриле

Номер раствора 1 2 3 4 5

Объем раствора N 1 (С = 1 мкг/см3), мм3 — — — 15 30

Объем раствора N 2 (С = 0,005 мкг/см3), мм3 60 122 500 — —

Массовая концентрация бенз(а)пирена 0,012 0,024 0,10 0,6 1,2 в ацетонитриле, мкг/дм3

Массовая концентрация бенз(а)пирена в крови 0,02 0,04 0,166 1,0 2,0 (с учетом степени экстракции), мкг/дм3

8.4.3. Полученные растворы фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц «Луер», в стеклянную виалу и анализируют 20 мм3 на жидкостном хроматографе в условиях; — колонка 4,6 x 150 мм, заполненная сорбентом Zorbax Eclipse XDB ; — градиент: 2,5 мин. подача подвижной фазы (60% ацетонитрила и 40% воды), увеличение ацетонитрила с 60 до 90% от 2,5 до 12 мин., увеличение ацетонитрила с 90 до 100% от 12 до 20 мин., подача 100% ацетонитрила от 20 до 22,5 мин., снижение ацетонитрила до 60% в течение 0,5 мин., подача 60% ацетонитрила до уравновешивания колонки (5 мин.);

скорость движения элюента 1,5 см3/мин. ;
температура термостата колонки 28 °С;
флуориметрический детектор:
длина волны возбуждения 265 нм; длина волны эмиссии 412 нм;
время удерживания бенз(а)пирена: (12,5 +/- 0,05) мин. Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

, где:

массовая концентрация бенз(а)пирена в градуировочном растворе, мкг/дм3;
среднее значение двух измерений площади пика бенз(а)пирена i-й концентрации, усл. ед.; n — количество градуировочных смесей (n = 5). 8.4.4. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация бенз(а)пирена соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:

, где:

8.5. Отбор проб

Отбирают венозную кровь объемом не менее 2 см3 в вакуумную пробирку для забора крови. Срок хранения проб в холодильнике 6 ч.

9. Выполнение измерений

Выполняют два параллельных измерения образца крови. В коническую пробирку с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см3 переносят 1 см3 пробы крови, прибавляют 1 см3 ацетонитрила, интенсивно встряхивают 1 мин., добавляют в качестве высаливателя 0,25 г смеси солей для экстракции из набора VetexQ, встряхивают интенсивно в течение 1 мин., центрифугируют 10 мин. со скоростью 2 тыс. об./мин. В пробирку содержащую 0,1 г смеси для очистки из набора VetexQ (сорбент ), переносят 0,8 см3 верхнего слоя, встряхивают 1 мин., центрифугируют 10 мин. со скоростью 2 тыс. об./мин. и отбирают верхний слой. Полученный экстракт фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц «Луер», в стеклянную виалу и анализируют 20 мм3 на жидкостном хроматографе в условиях, указанных в п. 8.4.3. Идентификацию бенз(а)пирена проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и стандартном растворе.

10. Обработка (вычисление) результатов измерений

10.1. Массовую концентрацию бенз(а)пирена в пробах крови (мкг/дм3) вычисляют по формуле:

, где:

X — массовая концентрация бенз(а)пирена в анализируемой пробе, мкг/дм3;

площадь пика бенз(а)пирена на хроматограмме, усл. ед.; K — градуировочный коэффициент; 1,65 — коэффициент, учитывающий степень экстракции бенз(а)пирена из крови, равную 62%. Рассчитывается как отношение площадей пиков бенз(а)пирена до и после экстракции из крови. 10.2. За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости , (параллельных определений), для которых выполняется условие:

, где: (1)

, где: (2)

критический диапазон. . При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).

Таблица 3

Пределы повторяемости, внутрилабораторной прецизионности, воспроизводимости при вероятности Р = 0,95

Диапазон Пределы (относительные значения), % измерений,

       мкг/дм3      повторяемости   внутрилабораторной     воспроизводимос-                      (допускаемое     прецизионности       ти (допускаемое                       расхождение       (допускаемое        расхождение                           между двумя   расхождение между двумя между двумя                           результатами  результатами измерений, результатами                          параллельных  полученными в условиях   измерений,                          определений),    внутрилабораторной    полученными                                r          прецизионности), Rл   в разных                                                                    лабораториях), R                                                                               от 0,02 до 2 вкл.       14                 25                   34

, где: (3)

11. Оформление результатов измерений

Результат измерений в документах, предусматривающих его использование, может быть представлен в виде:

, Р = 0,95, где:

характеристика погрешности, мкг/дм3, при Р = 0,95, значение рассчитывают по формуле:

Значение приведено в табл. 1.

12. Процедуры обеспечения достоверности измерений

Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 и РМГ 76-2004 ГСИ. Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

12.1. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок

, где:

результат измерений массовой концентрации бенз(а)пирена в пробе с известной добавкой — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1), мкг/дм3;
результат измерений массовой концентрации бенз(а)пирена в исходной пробе — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1), мкг/дм3;
величина введеной добавки, мкг/дм3. Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

, где:

(4)

12.2. Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности

Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб крови. При реализации контрольной процедуры получают два результата контрольных измерений (первичного и повторного ) массовой концентрации бенз(а)пирена в условиях внутрилабораторной прецизионности. Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:

(5)

Значение предела внутрилабораторной прецизионности (, %) не превышает 25%.

13. Разработчики

Приложение 1
(справочное)

Библиография

Химическая энциклопедия/Под ред. И.Л.Кнунянц. М.; «Советская энциклопедия», 1988. Т. 1.
Майстренко В.Н., Клюев Н.А. Эколого-аналитический мониторинг стойких органических загрязнителей. М.: Бином. Лаборатория знаний, 2004. 323 с.
Лазарев Н.В. Вредные вещества в промышленности: Органические вещества. Л.: Химия, 1976. Т. 1. 590 с.

Приложение 2
(справочное)

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие документы. ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия». ГОСТ 4220-75 «Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия». ГОСТ 6709-72 «Вода дистиллированная. Технические условия». ГОСТ 7328-2001 «Гири. Общие технические условия». ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные». ГОСТ 14262-78 «Кислота серная. Технические условия». ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры». ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования». ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания». ГОСТ 12.0.004-90 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда». ГОСТ 12.1.004-91 «ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования». ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны». ГОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности». ГОСТ 12.4.009-83 «ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание». ГОСТ 12.1.019-2009 «ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты». СП 1.3.2322-08 «Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». РМГ 76-2004 ГСИ «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа». ТУ 2.833.106-00 «Микрошприцы МШ-10».
ТУ 9443-001-245.23530-97 «Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-«Элекон». ТУ 16.531.743-83 «Сушильный шкаф ШСС-80». ТУ 6-09-14-2167-84 «Ацетонитрил».
ФС 42-1327-99 «Гепарин».

Документ введен в действие с 7 сентября 2012 года. Текст документа

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ МЕДИ, ЦИНКА В ЖЕЛЧИ МЕТОДОМ АТОМНО-АБСОРБЦИОННОЙ СПЕКТРОМЕТРИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.3037-12

Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора (Т.С.Уланова, Н.В.Зайцева, Е.В.Стенно, Г.А.Вейхман, М.А.Баканина, Ю.В.Шардакова, Т.Д.Карнажицкая, А.В.Кислицина).
Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 7 сентября 2012 г.
Введены в действие с момента утверждения.
Введены впервые.
Область применения и общие положения

Свидетельство об аттестации от 30.11.2010 N 223.1.0239/01.00258/2010. 1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод атомно-абсорбционной спектрометрии в пламени для определения в желчи массовой концентрации меди и цинка в диапазонах измерений в анализируемом растворе 0,05-0,5 мкг/см3 и 0,1-2,0 мкг/см3 соответственно. Методика может быть использована для определения более высоких концентраций элементов после разбавления минерализата. 1.2. Методические указания по определению массовых концентраций меди и цинка в желчи предназначены для использования органами и организациями Роспотребнадзора, а также лечебными и научными организациями, осуществляющими деятельность в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды. 1.3. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля содержания металлов в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды. 1.4. Медь (Cu), атомная масса — 63,55.
Медь — розовый или красноватый металл. Тпл. — 1083 °С, Ткип. — 2543 °С, плотность — 8,93 г/см3. Растворим в HNO3 и горячей концентрированной H2SO4. Порошкообразная медь растворяется в 0,3%-м растворе HCI и желудочном соке [1]. Кратная токсикологическая характеристика Относится ко 2-му классу опасности [1]. Гепатотоксичность меди и ее соединений связана со способностью повышать проницаемость мембран митохондрий [2]. Токсическая доза 200-250 мг/сут. [3].
1.5. Цинк (Zn), атомная масса — 65,37.
Цинк — голубовато-серебристый металл. Тпл. — 419,5 °С. Ткип. — 906,2 °С, плотность — 7,14 г/см3. Растворим в кислотах и щелочах [1]. Краткая токсикологическая характеристика Относится к 3-му классу опасности [1].
Вдыхание паров цинка в течение 4-6 ч. при сварке или гальванизации может приводить к возникновению «цинковой лихорадки». Вдыхание хлорида цинка может вызывать воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей, отек легких [2]. Токсическая доза — 600 мг/день [3].

2. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей для меди +/- 16%, для цинка +/- 14% при доверительной вероятности 0,95, соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

Таблица 1

Диапазон измерений, показатели точности измерений

     Наименование            Показатели прецизионности         Показатель        определяемого            (относительные значения)          точности          компонента,                                               (границы      диапазон измерений, стандартное  стандартное  стандартное  относительной          мкг/см3       отклонение   отклонение   отклонение    погрешности                         повторя-     внутрилабо-  воспроизво-  при Р = 0,95),                       емости,      раторной     димости,       +/- дельта                         сигма , %    прецизион-   сигма , %        <>, %                                r       ности,            R                                                         сигма  , %                                                                       RA                                                                                                                        Медь             4            6            8             16

от 0,05 до 0,5 вкл.

Цинк 4 5 7 14 от 0,1 до 2 вкл.

<> Соответствует расширенной относительной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2.

3. Метод измерений

Измерения массовых концентраций меди и цинка выполняют методом атомно-абсорбционной спектрометрии, основанным на измерении величины поглощения света соответствующего длине волны исследуемого элемента в пламени. Для измерения используется поглощение с длиной волны, соответствующей максимуму поглощения определяемого металла при прохождении через содержащий пары атомов металлов слой воздуха: меди — 324,8 нм, цинка — 213,9 нм [4]. Длительность выполнения анализа составляет около 4 ч., с учетом прогрева лампы, юстировки аппаратуры, приготовления градуировочных растворов, построения градуировочных характеристик. Нижний предел измерения в анализируемом растворе для меди — 0,05 мкг/см3, для цинка — 0,1 мкг/см3. Методика может быть использована для определения более высоких или низких концентраций элементов после разбавления или концентрирования минерализата.

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4.1. Средства измерений

 Атомно-абсорбционный спектрофотометр           Номер в Государственном                                                реестре средств измерений                                                14427-95 Весы аналитические ВЛР-200                     ГОСТ Р 53228-08 Гири                                           ГОСТ 7328-01 Колбы мерные вместимостью 50, 100, 200, 250, 500 см3                                        ГОСТ 1770-74 Пипетки вместимостью 1, 5, 10 см3              ГОСТ 29227-91 Пробирки П-1-10-01 центрифужные                ГОСТ 1770-74 Пробирки П-2-10-14/23 ПМ                       ГОСТ 1770-74

Пробирки из полипропилена конические с
винтовыми крышками ТС 15А
Государственные стандартные образцы
растворов (ГСО):

 - ионов меди                                   ГСО 7255-96 - ионов цинка                                  ГСО 7256-96

4.2. Реактивы

Кислота азотная, осч ГОСТ 11125-84 Ацетилен растворенный и газообразный

 технический                                    ГОСТ 5457-75 Водорода перекись                              ГОСТ 177-88 Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная)        ГОСТ Р 52501-2005

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией.

4.3. Вспомогательные устройства, материалы

 Редуктор ацетиленовый ДАП-1-65                 ТУ 2605-463 Бидистиллятор БС                               ТУ 25-11.1592 Сушильный шкаф ШСС-80                          ОСТ 16.0.801.397 Шкаф вытяжной химический                       ТУ 25-11.1630

Холодильник бытовой любого типа
Прибор для получения деионизованной воды «Водолей» ЖНЛК 2.015.000.000 РЭ Компрессор для получения сжатого воздуха характеристики давления 100 psi, 7 bar
Пробирочный электронагреватель модель
HACH COD REACTOR

 Пробирки химические П-1-14-120 ТС              ГОСТ 25336-82 Баллон для ацетилена                           ГОСТ 949-73 Таблетки "Део-Хлор"                            ТУ 9392-001-26433370 Моющее средство                                ТУ 2381-034-04643752

5. Требования безопасности

5.1. При выполнении измерений массовых концентраций соблюдают требования противопожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91, правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2009, имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. 5.2. При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях» [5] и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением» [6]. 5.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76 и ГОСТ 12.1.005-88. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. 5.4. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». 5.5. При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в руководстве по правилам эксплуатации атомно-абсорбционного спектрофотометра. 5.6. Обучение и инструктаж по безопасности труда проводят в соответствии с ГОСТ 12.0.004-90.

6. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на атомно-абсорбционном спектрофотометре и получивших удовлетворительные результаты при проведении проверки процедуры измерений. Операции по подготовке проб желчи к анализу может выполнять лаборант или техник, имеющий опыт работы в химической лаборатории. К обслуживанию атомно-абсорбционного спектрометра допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже инженера КИП и А, прошедших инструктаж по технике безопасности на рабочем месте и ознакомленных с правилами обслуживания атомно-абсорбционного спектрофотометра.

7. Условия измерений

7.1. При подготовке к проведению измерений и приготовлении растворов соблюдают следующие условия: — температура воздуха 15-25 °С;
— атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.; — влажность воздуха не более 80%.
7.2. Выполнение измерений на атомно-абсорбционных спектрофотометрах проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.

8. Подготовка к выполнению измерений

При подготовке к выполнению измерений проводят следующие работы: подготовка химически чистой и обеззараженной посуды, подготовка атомно-абсорбционного спектрофотометра к работе, приготовление деионизованной воды, приготовление 1%-й азотной кислоты (HNO3), приготовление градуировочных растворов, построение градуировочной характеристики.

8.1. Подготовка посуды

Посуду моют в моющем средстве с добавлением 6%-го раствора перекиси водорода, многократно ополаскивают проточной водой, на сутки замачивают в растворе азотной кислоты, приготовленной в соотношении 1:5, а затем 2-3 раза ополаскивают бидистиллированной и 1-2 раза деионизованной водой. Посуду, которая использовалась для отбора и хранения биологических сред, перед мытьем дезинфицируют с применением дезинфицирующих средств.

8.2. Подготовка прибора к анализу

Подготовку атомно-абсорбционного спектрофотометра к работе проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Устанавливают необходимую для анализа спектральную лампу, прогревают не менее 20 мин. и после настройки прибора выводят на рабочий режим согласно инструкции. Для настройки прибора в качестве нулевого раствора используют 1%-й раствор азотной кислоты.

8.3. Приготовление растворов для установки градуировочной характеристики

8.3.1. Основной раствор с содержанием определяемого металла 100 мкг/см3 (раствор готовят отдельно для каждого определяемого металла). Раствор готовят из ГСО с массовой концентрацией ионов металла 1 мг/см3. В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3 ГСО состава раствора ионов металла и доводят объем в колбе до метки 1%-м раствором азотной кислоты. Раствор устойчив в течение 1 месяца. 8.3.2. Рабочие растворы определяемых металлов (меди, цинка) с массовой концентрацией 5 мкг/см3. Готовят из основного раствора с массовой концентрацией 100 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 5 см3 основного раствора определяемого металла и доводят объем в колбе до метки 1%-м раствором азотной кислоты. Раствор устойчив в течение 3 дней. 8.3.3. Рабочие растворы определяемых металлов с массовой концентрацией 5 мкг/см3 используют для получения градуировочных растворов. Объем рабочего раствора согласно табл. 2, 3 вносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки 1%-м раствором азотной кислоты. Применяют свежеприготовленными. 8.3.4. Раствор азотной кислоты 1%-й.
Концентрированную азотную кислоту объемом 8 см3, плотностью 1,415 г/см3 смешивают с 512 см3 деионизованной воды.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации меди

Номер раствора для градуировки 1 2 3 4

Объем рабочего раствора (С= 5 мкг/см3), см3 1,00 2,00 5,00 10,00

Массовая концентрация меди, мкг/см3 0,050 0,100 0,250 0,500

Таблица 3

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации цинка

Номер раствора для градуировки 1 2 3 4

Объем рабочего раствора (С= 5 мкг/см3), см3 2,00 10,00 20,00 40,00

Массовая концентрация цинка, мкг/см3 0,100 0,500 1,00 2,00

8.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на приготовленных градуировочных растворах металлов. Она выражает зависимость величины абсорбции от концентрации металла (мкг/см3). Градуировочную характеристику устанавливают по результатам измерений 4 серий по 4 концентрациям вещества в каждой серии. Устанавливают начало отсчета, вводя в пламя 1%-й раствор азотной кислоты (нулевой раствор). Для построения градуировочной характеристики для каждого элемента измеряют абсорбцию градуировочных растворов в порядке возрастания концентрации определяемого элемента. Измерения повторяют дважды. По результатам измерений строят график зависимости средней величины атомного поглощения определяемого металла от его массовой концентрации в градуировочном растворе. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят через 5 проб в анализируемой серии измерений. Содержание металла определяют в градуировочном растворе, концентрация которого соответствует середине градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между известным значением массовой концентрации иона металла в растворе для градуировки и измеренным значением концентрации металла в этом растворе не превышает 5%:

, где:

С — измеренное значение массовой концентрации металла в растворе для градуировки, мкг/см3;

известное значение массовой концентрации металла в растворе для градуировки, мкг/см3.

8.5. Отбор проб

Отбор проб желчи производят из дуоденального содержимого при зондировании. Пробы для анализа на металлы объемом не менее 5 см3 отбирают в химически чистые, обеззараженные пробирки из полипропилена вместимостью 15 см3 с винтовыми крышками. Пробы помещают в морозильную камеру. Возможно хранение проб в холодильнике (от 0 до 4 °С) до 3 суток или длительное хранение при замораживании.

8.6. Подготовка проб к анализу

Замороженные пробы слегка размораживают и тщательно перемешивают стеклянной палочкой в целях гомогенизации исходного материала. Гомогенизированную пробу полностью размораживают, для минерализации отбирают 1 см3 желчи в химически чистую мерную пробирку, добавляют 1 см3 концентрированной азотной кислоты, выдерживают 15-20 мин., затем 5 мин. в пробирочном электронагревателе при температуре 120-130 °С. Полученную смесь оставляют на 2,5-3,0 ч. при комнатной температуре, добавляют 1 см3 концентрированной перекиси водорода, подогревают в пробирочном электронагревателе 5-10 мин. при температуре 120-130 °С. Объем пробы желчи для минерализации можно увеличить до 2 см3, увеличивая объемы азотной кислоты и перекиси водорода также до 2 см3. Полученный раствор охлаждают. Для каждой серии анализов ставят 2 холостые пробы, повторяя процедуру подготовки проб желчи. Для этого используют чистые пробирки из той же серии посуды, которая используется для анализа, и добавляют реактивы, как и в анализируемых пробах. Желчь в холостой пробе заменяют деионизованной водой. Объемы полученных растворов проб желчи и холостой пробы доводят до 5-6 см3 (при отборе 1 см3 желчи) деионизованной водой и направляют на измерение на атомно-абсорбционном спектрометре. Измерение холостых проб проводят вместе с подготовленными пробами желчи. Среднее значение концентрации холостой пробы учитывают в формуле расчета анализа каждой пробы (п. 10). Подготовку проб к анализу проводят в вытяжном шкафу.

9. Выполнение измерений

9.1. Подготовленные к анализу растворы проб желчи (минерализаты) и холостые пробы анализируют на атомно-абсорбционном спектрофотометре для определения исследуемого металла (меди или цинка). 9.2. Спектральную лампу устанавливают в прибор и прогревают не менее 20 мин. Устанавливают монохроматор на нужную длину волны, выбирают ширину спектральной щели, ставят на распыление деионизованную воду, подбирают необходимое соотношение газов (ацетилен-воздух) для поддержания горения и поджигают пламя. Капилляр, подающий раствор в пламя опускают в 1%-й раствор азотной кислоты и определяют нулевую линию. 9.3. Распыляют в пламя градуировочные растворы определяемого металла для построения градуировочной характеристики, затем вводят пробы и регистрируют значения концентраций исследуемых проб. Точность настройки прибора проверяют введением раствора заданной концентрации через каждые пять проб, в случае необходимости повторяют процедуру построения градуировочной характеристики. При высоком содержании определяемого компонента аликвоту пробы разбавляют 1 %-м раствором азотной кислоты, коэффициент разбавления учитывают при расчете результата анализа.

10. Обработка (вычисление) результатов измерений

10.1. Массовую концентрацию определяемого металла в желчи рассчитывают по формуле:

, где:

С — массовая концентрация металла в пробе, мкг/см3; а — массовая концентрация металла в растворе пробы, определяемая по градуировочной характеристике, мкг/см3; xn — массовая концентрация металла в растворе холостой пробы, мкг/см3; k — коэффициент разбавления;
V — объем раствора минерализованной пробы, см3; V’-объем пробы желчи, взятой для анализа, см3. 10.2. За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений , , для которых выполняется условие:

, где: (1)

r — предел повторяемости.
Значения предела повторяемости приведены в табл. 4. При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:

, где: (2)

критический диапазон. Значения критического диапазона приведены в табл. 4. При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1). 10.3. Расхождение между результатами измерений не должно превышать предел воспроизводимости:

, где: (3)

и — результаты измерений массовых концентраций металлов, полученные в разных лабораториях — средние арифметические двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие (1), мкг/см3; R — значение предела воспроизводимости, приведенное в табл. 4. При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в табл. 4.

Таблица 4

Пределы повторяемости, критического диапазона, внутрилабораторной прецизионности, воспроизводимости при вероятности P = 0,95

Наименование Пределы (относительные значения) определяемого

      компонента,     повторяемости  критического   внутрилабо-    воспроизводи-    диапазон измерений, (допускаемое     диапазона    раторной       мости <>              мкг/см3        расхождение   (допускаемое   прецизионности (допускаемое                          между двумя    расхождение   (допускаемое   расхождение                          результатами       между      расхождение    между двумя                          параллельных   наибольшим и   между двумя    результатами                         определений),   наименьшим    результатами   измерений,                                r, %       из четырех    измерений,     полученными                                          результатов   полученными    в разных                                             измерений,    в условиях     лабораториях),                                       полученных    внутрилабо-    R, %                                                   в одной     раторной                                                            лаборатории   прецизион-                                                          в условиях    ности), Rл, %                                                     повторяемости),                                                                    CR    (4), %                                                                        0,95                                                                                                                                  Медь              11             14              17             22

от 0,05 до 0,5 вкл.

Цинк 11 14 14 20 от 0,1 до 2,0 вкл.

<> Результаты измерений на идентичных пробах, полученные двумя лабораториями, будут различаться с превышением предела воспроизводимости (R) в среднем не чаще одного раза на 20 случаев при нормальном и правильном использовании методики измерений. Это проверено по экспериментальным данным, полученным при разработке данной методики (здесь и далее по тексту).

11. Оформление результатов измерений

Результат измерений представляют в виде , где:

характеристика погрешности, мкг/см3, при Р = 0,95, значение рассчитывают по формуле:

, где:

значение приведено в табл. 1.
Примечание. При представлении результата измерений в документах, выдаваемых лабораторией, указывают: — количество результатов параллельных определений, использованных для расчета результата измерений; — способ определения результата измерений (среднее арифметическое значение или медиана результатов параллельных определений).

12. Процедуры обеспечения достоверности измерений

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и РМГ 76-2004 ГСИ. Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

12.1. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок

Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры с нормативом контроля К. Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле:

, где:

результат измерений массовой концентрации металла в пробе с известной добавкой — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1), мкг/см3;
результат измерений массовой концентрации металла в исходной пробе — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (1), мкг/см3;
величина введенной добавки, мкг/см3. Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

, где:

значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации металла в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно, мкг/см3. Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения: с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений. Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

(4)

12.2. Алгоритм проведения контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности

Контрольные процедуры при контроле внутрилабораторной (промежуточной) прецизионности получают с использованием рабочих проб желчи. При реализации контрольной процедуры получают два результата контрольных измерений (первичного , и повторного ) массовой концентрации металла в условиях внутрилабораторной прецизионности. Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении следующего условия:

(5)

Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в табл. 5.

Таблица 5

Значения предела внутрилабораторной прецизионности при доверительной вероятности Р = 0,95

      Наименование           Предел внутрилабораторной прецизионности            определяемого       (относительное значение допускаемого расхождения     компонента, диапазон   между двумя результатами измерений, полученными           измерений        в одной лаборатории в условиях внутрилабораторной           мкг/см3                       прецизионности), Rл, %                                                                                                      Медь                                  17

от 0,05 до 0,5 вкл.

Цинк 14 от 0,1 до 2,0 вкл.

13. Разработчики

Уланова Т.С., Зайцева Н.В., Стенно Е.В., Вейхман Г.А., Баканина М.А., Шардакова Ю.В. (ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Роспотребнадзора).

Приложение 1
(справочное)

Библиография

Вредные вещества в промышленности: Справочник для химиков, инженеров и врачей/Под ред. Н.В.Лазарева и И.Д.Гадаскиной, Л.: «Химия», 1977. Т. III. С. 350, 444, 507.
Элленхорн М.Дж. Медицинская токсикология: диагностика и лечение. М.: Медицина. 2003. Т. 2.
Скальный А.В., Рудаков И.А. Биоэлементы в медицине. М.: «Мир», 2004. С. 92, 97, 98.
Ермаченко Л.А. Атомно-абсорбционный анализ в санитарно-гигиенических исследованиях: Методическое пособие. М., 1997. 207 с.
«Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях». Утверждены МЗ СССР 20.12.82. М., 1981.
«Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением». Утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87. М.: Недра, 1989.

Приложение 2
(справочное)

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие документы. ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия». ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия». ГОСТ 7328-01 «Гири. Общие технические условия». ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторное стеклянное. Типы, основные параметры и размеры». ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные». Ч. 1. Общие требования. ГОСТ 12.1.004-91 «ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования». ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санаторно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны». ГОСТ 12.0.004-90 «ССБТ. Организация обучения безопасности труда. Общие положения». ГОСТ 12.1.007-76 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности». ГОСТ 12.1.019-09 «ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты». ГОСТ 12.4.009-83 «ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание». СП 1.3.2322-08 «Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». ГОСТ 949-73 «Баллоны стальные малого и среднего объема для газов». ГОСТ 11125-84 «Реактивы. Кислота азотная. Технические условия». ГОСТ 5457-75 «Ацетилен растворенный и газообразный технический. Технические условия». ГОСТ 177-88 «Водорода перекись. Технические условия». ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Ч. 1. Метрологические и технические требования. Испытания». ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». РМГ 76-2004 ГСИ «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа». ТУ 2605-463-76 «Редуктор ацетиленовый». ТУ 25-11.1592-81 «Бидистиллятор стеклянный БС». ТУ 25-11.1630-84 «Шкаф вытяжной химический». ТУ 64-2-300 «Пробирки из полипропилена с винтовыми крышками».

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

ПРИКАЗ
от 6 сентября 2012 г. N 1045

О МЕРАХ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГРИППОМ И ОРВИ В МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ В ЭПИДЕМИЧЕСКОМ СЕЗОНЕ 2012-2013 ГОДОВ

Грипп и острые респираторные вирусные инфекции остаются самыми массовыми инфекционными заболеваниями, нанося огромный ущерб, как здоровью населения, так и экономике Московской области. В целях усиления мероприятий по предупреждению заболеваний гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями, совершенствования организации оказания медицинской помощи населению Московской области, приказываю: 1. Руководителям органов управления здравоохранением муниципальных образований Московской области. 1.1. Организовать проведение профилактической вакцинации населения против гриппа в рамках национального календаря профилактических прививок в соответствии с приложениями N 1 (план вакцинации) и N 2 (количество выделенной вакцины). Во всех прививочных кабинетах (пунктах) лечебно-профилактических учреждений обеспечить свободный доступ населения для вакцинации. Обеспечить эффективное использование противогриппозных вакцин, а также учет и отчетность о проведенных профилактических прививках. При необходимости развернуть дополнительные прививочные кабинеты в организованных коллективах детей и взрослых, сформировать дополнительные прививочные бригады. 1.2. Обеспечить соблюдение надлежащих условий транспортирования и хранения вакцин в лечебно-профилактических учреждениях в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 3.3.2.1248-03 «Условия транспортирования и хранения медицинских иммунобиологических препаратов». 1.3. Обеспечить готовность лечебно-профилактических учреждений к приему и лечению больных гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями в период сезонного подъема заболеваемости, принять необходимые меры по созданию необходимого запаса лекарственных средств, противовирусных препаратов, средств индивидуальной защиты, дезинфекционных средств и других материальных ресурсов. 1.4. Определить порядок работы лечебно-профилактических учреждений в период сезонного подъема заболеваемости гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями, включая оказание первичной медицинской помощи на дому, обеспечить строгое соблюдение санитарно-противоэпидемического режима работы, организовать раздельный прием больных простудными заболеваниями и больных с соматическими заболеваниями в поликлиниках. 1.5. При необходимости внести корректировки в территориальные планы мероприятий по предупреждению, локализации и ликвидации массовых заболеваний гриппом. 1.6. Организовать оперативный учет и анализ заболеваемости гриппом и ОРВИ на территории обслуживания, при превышении порогового уровня заболеваемости вводить в действие планы мероприятий, предусмотренные на период эпидемии гриппа. 1.7. Предусмотреть в период эпидемического подъема заболеваемости гриппом привлечение дополнительного количества медицинских работников (путем перепрофилирования) для оказания помощи населению на дому, а также санитарного транспорта, развертывание или перепрофилирование коек для госпитализации больных гриппом и ОРВИ. 1.8. В целях идентификации возбудителя обеспечить забор и доставку для исследования материала от больных гриппом и ОРВИ в вирусологические лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в Московской области, в первую очередь в организованных коллективах, а также у лиц с тяжелой клинической картиной. 1.9. Организовать подготовку медицинского персонала лечебно- профилактических учреждений по вопросам клиники, диагностики и лечения гриппа, мерам личной профилактики. 1.10. Активизировать разъяснительную работу среди населения о преимуществах и эффективности профилактической вакцинации, привлекать для целей вакцинопрофилактики гриппа дополнительно средства бюджетов муниципальных образований, работодателей и личные средства граждан. 1.11. Продолжать информировать Министерство здравоохранения Московской области о ходе иммунопрофилактики гриппа в еженедельном режиме. 1.12. Обеспечить представление оперативной информации в Министерство здравоохранения Московской области об осложнении эпидемической ситуации по гриппу на территории обслуживания. 2. Главному эпидемиологу Министерства здравоохранения Московской области Миленину A.M. организовать проведение анализа эффективности использования противогриппозных вакцин и готовности лечебно-профилактических учреждений к работе в условиях массового поступления больных гриппом и ОРВИ. 3. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на заместителей Министра здравоохранения Московской области К.Б. Герцева, Г.В. Тамазян.

Министр здравоохранения
Московской области
Д.В.ТРИШКИН

Приложение N 1
к приказу МЗ МО
от 6 сентября 2012 г. N 1045

Муниципальное План вакцинации против гриппа в 2012 году образование

детское население взрослое население Итого

                    6 м. - 3 г. - 1 - 11 всего студенты медицина образован. трансп. старше всего                            3 г.  7 лет  класс  дети                                и пр.    60    взр.                                                                                                                Балашиха           700    1500   7700  9900   1500      1800      1600     18700   6900  30500 40400                                                                                                          Бронницы            15    175    800    990    100       400      350       660    1900   3410 4400                                                                                                           Волоколамский      300    1000   2400  3700    300       450      550      3200    4900   9400 13100                                                                                                          Воскресенский      800    4100   9800  14700   850      1800      2200     3500   11000  19350 34050                                                                                                          Восход              5      40    250    295     23       15        74       65     230    407   702                                                                                                           Дзержинский        150    960    3150  4260    300       400      750      1300    2500   5250 9510                                                                                                           Дмитровский         40    1500   6160  7700    500      1500      2000      850   15100  19950 27650                                                                                                          Долгопрудный        30    650    2400  3080    500       950      830      2600    2440   7320 10400                                                                                                          Домодедово          50    1450   5000  6500     0       1100      1400     7000   12000  21500 28000                                                                                                          Дубна               30    570    1100  1700    1500      400      800       800    2600   6100 7800                                                                                                           Егорьевский         50    1500   4000  5550    500      1500      1800     7900    7000  18700 24250                                                                                                          Железнодорожный    800    1700   4900  7400    200       800      1000     5500    8500  16000 23400                                                                                                          Жуковский          750    950    3000  4700    1420     2000      1200     7000    5000  16620 21320                                                                                                          Зарайский           50    600    1700  2350    300       600      800      2000    4000   7700 10050                                                                                                          Звенигород          50    200    1000  1250    140       270      260       800    520    1990 3240                                                                                                           Ивантеевка         100    650    2050  2800    200       500      500      9100    4500  14800 17600                                                                                                          Истринский         300    1050   4600  5950    800      1000      1100     10000   7300  20200 26150                                                                                                          Каширский          100    2450   2800  5350     50       850      900      8900    5300  16000 21350                                                                                                          Климовск            20    960    3250  4230     80       500      700      2900    4100   8280 12510                                                                                                          Клинский           400    2000   3600  6000    800      1500      1400     3200    9000  15900 21900                                                                                                          Коломенский         50    2200   7000  9250    1000     3000      2000     8500   15500  30000 39250                                                                                                          Королев             50    1300   4200  5550    200      1100      600      7000    4000  12900 18450                                                                                                          Котельники          20    250    730   1000    250       230      400       750    1350   2980 3980                                                                                                           Красногорский      600    1400   5700  7700    400      1400      1300     3500    7400  14000 21700                                                                                                          Краснознаменск     100    400    1500  2000    100       300      520      1330    1800   4050 6050                                                                                                           Ленинский           70    160    1900  2130    200       750      750      6500    5800  14000 16130                                                                                                          Лобня               20    650    2000  2670    100       380      400      3000    2700   6580 9250                                                                                                           Лосино-Петровский   70    460    1100  1630     0        150      175       500    1900   2725 4355                                                                                                           Лотошинский         20    130    600    750    100       500      400      1800    700    3500 4250                                                                                                           Луховицкий         100    700    4200  5000    185       920      1200     1710   11170  15185 20185                                                                                                          Лыткарино           50    450    1800  2300    100       650      930       500    3800   5980 8280                                                                                                           Люберецкий          50    2200  10500  12750   500      2500      6000     12000   9500  30500 43250                                                                                                          Можайский           50    800    2500  3350    1300     1020      1080     4400    4500  12300 15650                                                                                                          Молодежный          40     90    250    380     20       32        62       110    296    520   900                                                                                                           Мытищинский        100    1750   7500  9350    3500     2500      3200     13300   9600  32100 41450                                                                                                          Наро-Фоминский     250    1700   7500  9450    700      2500      7500     2500    6000  19200 28650                                                                                                          Ногинский           50    3250  12300  15600   700      3300      3100     11000   5300  23400 39000                                                                                                          Одинцовский        1400   3350   8000  12750   2000     2400      4700     17000  11300  37400 50150                                                                                                          Озерский           300    550    2550  3400     0        450      430       800    3400   5080 8480                                                                                                           Орехово-Зуево       30    2000   5100  7130    1000     1900      1300     2450   12220  18870 26000                                                                                                          Орехово-Зуевский   540    1900   7900  10340   470      1500      2100     1300   10500  15870 26210                                                                                                          Павлово-Посадский  250    950    2900  4100    350       940      1130     12430   3950  18800 22900                                                                                                          Подольск           160    2700  10500  13360   1700     2500      2700     11500   9160  27560 40920                                                                                                          Подольский          30    400    1000  1430     40       500      400       750    2800   4490 5920                                                                                                           Протвино            10    350    860   1220     0        250      250       500    2550   3550 4770                                                                                                           Пушкинский         900    2300   5800  9000    500      1500      1800     5900    9800  19500 28500                                                                                                          Пущино              20    130    300    450     50       300      100       200    650    1300 1750                                                                                                           Раменский          1600   4000   8200  13800   1600     3000      1500     11000   9500  26600 40400                                                                                                          Реутов              20    250    2000  2270    200       700      600      3500    1800   6800 9070                                                                                                           Рошаль             100    160    740   1000     70       350      450      2000    2200   5070 6070                                                                                                           Рузский            150    1500   3550  5200    250       910      850      7450    3900  13360 18560                                                                                                          Сергиево-          170    2300  10150  12620   1790     1530      1620     11700  12300  28940 41560

Посадский

Серебряно- 50 565 1400 2015 0 270 500 2270 1300 4340 6355 Прудский

Серпухов 150 2300 4500 6950 300 1340 910 3650 7200 13400 20350

Серпуховский 20 330 800 1150 60 440 580 2060 4000 7140 8290

Солнечногорский 300 2600 6200 9100 880 1200 1500 5500 10300 19380 28480

Ступинский 50 2700 8400 11150 500 1000 1200 4200 8400 15300 26450

Талдомский 100 1400 3300 4800 340 650 1150 1700 700 4540 9340

Фрязино 20 750 2000 2770 0 800 800 1500 3500 6600 9370

Химки 1000 3700 8500 13200 1000 1393 1400 10436 17000 31229 44429

Черноголовка 0 120 340 460 0 200 200 800 1000 2200 2660

Чеховский 50 1500 2000 3550 82 2100 2902 3700 6000 14784 18334

Шатурский 150 450 1450 2050 300 800 1000 5000 4200 11300 13350

Шаховской 40 230 1100 1370 50 250 330 550 4000 5180 6550

Щелковский 200 2700 7300 10200 200 2200 1500 3700 5000 12600 22800

Электрогорск 100 160 360 620 50 250 450 600 2100 3450 4070

Электросталь 150 1800 4600 6550 1050 1700 1500 12000 6100 22350 28900

Юбилейный 10 350 870 1230 50 100 300 1000 1200 2650 3880

Видновский Дом 60 60 60 60 120

Люберецкий Дом 90 90 110 110 200

Подольский Дом 70 70 60 60 130

Коломенский Дом 90 90 100 100 190

Краснополянский 70 70 80 80 150 Дом

Фрязинский Дом 40 40 50 50 90

Орехово-Зуевский 50 50 60 60 110 Дом

Мытищинский Дом 30 30 50 50 80

МОНИКИ 0 500 500 500

Приложение N 2
к приказу МЗ МО
от 6 сентября 2012 г. N 1045

Вакцина против гриппа

для вакцинации детского населения для вакцинации взрослого населения Итого

                   6 м. - 3 г. - 1 - 11 всего студенты медицина образован. трансп. старше  всего                            3 г.  7 лет  класс  дети                                и пр.    60   взросл.                                                                                                                 Балашиха          1400   1500   7700  10600   1500     1800      1600     18700   6900   30500  41100                                                                                                           Бронницы           30    175     800  1005    100      400        350      660    1900    3410   4415                                                                                                           Волоколамский     600    1000   2400  4000    300      450        550      3200   4900    9400  13400                                                                                                           Воскресенский     1600   4100   9800  15500   850      1800      2200      3500  11000   19350  34850                                                                                                           Восход             10     40     250   300     23       15        74        65    230     407    707                                                                                                            Дзержинский       300    960    3150  4410    300      400        750      1300   2500    5250   9660                                                                                                           Дмитровский        80    1500   6160  7740    500      1500      2000      850   15100   19950  27690                                                                                                           Долгопрудный       60    650    2400  3110    500      950        830      2600   2440    7320  10430                                                                                                           Домодедово        100    1450   5000  6550     0       1100      1400      7000  12000   21500  28050                                                                                                           Дубна              60    570    1100  1730    1500     400        800      800    2600    6100   7830                                                                                                           Егорьевский       100    1500   4000  5600    500      1500      1800      7900   7000   18700  24300                                                                                                           Железнодорожный   1600   1700   4900  8200    200      800       1000      5500   8500   16000  24200                                                                                                           Жуковский         1500   950    3000  5450    1420     2000      1200      7000   5000   16620  22070                                                                                                           Зарайский         100    600    1700  2400    300      600        800      2000   4000    7700  10100                                                                                                           Звенигород        100    200    1000  1300    140      270        260      800    520     1990   3290                                                                                                           Ивантеевка        200    650    2050  2900    200      500        500      9100   4500   14800  17700                                                                                                           Истринский        600    1050   4600  6250    800      1000      1100     10000   7300   20200  26450                                                                                                           Каширский         200    2450   2800  5450     50      850        900      8900   5300   16000  21450                                                                                                           Климовск           40    960    3250  4250     80      500        700      2900   4100    8280  12530                                                                                                           Клинский          800    2000   3600  6400    800      1500      1400      3200   9000   15900  22300                                                                                                           Коломенский       100    2200   7000  9300    1000     3000      2000      8500  15500   30000  39300                                                                                                           Королев           100    1300   4200  5600    200      1100       600      7000   4000   12900  18500                                                                                                           Котельники         40    250     730  1020    250      230        400      750    1350    2980   4000                                                                                                           Красногорский     1200   1400   5700  8300    400      1400      1300      3500   7400   14000  22300                                                                                                           Краснознаменск    200    400    1500  2100    100      300        520      1330   1800    4050   6150                                                                                                           Ленинский         140    160    1900  2200    200      750        750      6500   5800   14000  16200                                                                                                           Лобня              40    650    2000  2690    100      380        400      3000   2700    6580   9270                                                                                                           Лосино-           140    460    1100  1700     0       150        175      500    1900    2725   4425

Петровский

Лотошинский 40 130 600 770 100 500 400 1800 700 3500 4270

Луховицкий 200 700 4200 5100 185 920 1200 1710 11170 15185 20285

Лыткарино 100 450 1800 2350 100 650 930 500 3800 5980 8330

Люберецкий 100 2200 10500 12800 500 2500 6000 12000 9500 30500 43300

Можайский 100 800 2500 3400 1300 1020 1080 4400 4500 12300 15700

Молодежный 80 90 250 420 20 32 62 110 296 520 940

Мытищинский 200 1750 7500 9450 3500 2500 3200 13300 9600 32100 41550

Наро-Фоминский 500 1700 7500 9700 700 2500 7500 2500 6000 19200 28900

Ногинский 100 3250 12300 15650 700 3300 3100 11000 5300 23400 39050

Одинцовский 2800 3350 8000 14150 2000 2400 4700 17000 11300 37400 51550

Озерский 600 550 2550 3700 0 450 430 800 3400 5080 8780

Орехово-Зуево 60 2000 5100 7160 1000 1900 1300 2450 12220 18870 26030

Орехово-Зуевский 1080 1900 7900 10880 470 1500 2100 1300 10500 15870 26750

Павлово- 500 950 2900 4350 350 940 1130 12430 3950 18800 23150 Посадский

Подольск 320 2700 10500 13520 1700 2500 2700 11500 9160 27560 41080

Подольский 60 400 1000 1460 40 500 400 750 2800 4490 5950

Протвино 20 350 860 1230 0 250 250 500 2550 3550 4780

Пушкинский 1800 2300 5800 9900 500 1500 1800 5900 9800 19500 29400

Пущино 40 130 300 470 50 300 100 200 650 1300 1770

Раменский 3200 4000 8200 15400 1600 3000 1500 11000 9500 26600 42000

Реутов 40 250 2000 2290 200 700 600 3500 1800 6800 9090

Рошаль 200 160 740 1100 70 350 450 2000 2200 5070 6170

Рузский 300 1500 3550 5350 250 910 850 7450 3900 13360 18710

Сергиево- 340 2300 10150 12790 1790 1530 1620 11700 12300 28940 41730 Посадский

Серебряно- 100 565 1400 2065 0 270 500 2270 1300 4340 6405 Прудский

Серпухов 300 2300 4500 7100 300 1340 910 3650 7200 13400 20500

Серпуховский 40 330 800 1170 60 440 580 2060 4000 7140 8310

Солнечногорский 600 2600 6200 9400 880 1200 1500 5500 10300 19380 28780

Ступинский 100 2700 8400 11200 500 1000 1200 4200 8400 15300 26500

Талдомский 200 1400 3300 4900 340 650 1150 1700 700 4540 9440

Фрязино 40 750 2000 2790 0 800 800 1500 3500 6600 9390

Химки 2000 3700 8500 14200 1000 1393 1400 10436 17000 31229 45429

Черноголовка 0 120 340 460 0 200 200 800 1000 2200 2660

Чеховский 100 1500 2000 3600 82 2100 2902 3700 6000 14784 18384

Шатурский 300 450 1450 2200 300 800 1000 5000 4200 11300 13500

Шаховской 80 230 1100 1410 50 250 330 550 4000 5180 6590

Щелковский 400 2700 7300 10400 200 2200 1500 3700 5000 12600 23000

Электрогорск 200 160 360 720 50 250 450 600 2100 3450 4170

Электросталь 300 1800 4600 6700 1050 1700 1500 12000 6100 22350 29050

Юбилейный 20 350 870 1240 50 100 300 1000 1200 2650 3890

Видновский Дом 120 120 60 60 180

Люберецкий Дом 180 180 110 110 290

Подольский Дом 140 140 60 60 200

Коломенский Дом 180 180 100 100 280

Краснополянский 140 140 80 80 220 Дом

Фрязинский Дом 80 80 50 50 130

Орехово-Зуевский 100 100 60 60 160 Дом

Мытищинский Дом 60 60 50 50 110

МОНИКИ 0 500 500 500