В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Иммуноглобулины человека
ОФС.1.8.1.0003.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на группу иммунобиологических препаратов — иммуноглобулины человека, которые представляют собой иммунологически активную белковую фракцию сыворотки или плазмы крови человека, несущую антительную активность различной специфичности. Препараты иммуноглобулинов представляют собой жидкость или порошок (гигроскопичную массу), содержащие иммуноглобулины, преимущественно класса G (Ig G) — антитела против различных возбудителей бактериальных и вирусных инфекций и/или их токсинов. Сырьем для производства иммуноглобулинов человека является плазма крови здоровых доноров, соответствующая требованиям ФС «Плазма для фракционирования». Иммуноглобулины человека подразделяют на: — иммуноглобулины нормальные (для внутримышечного, подкожного, внутривенного введения и энтерального применения), которые используют для специфической профилактики бактериальных и вирусных инфекций, для повышения неспецифической резистентности организма, а также для лечения инфекционно-токсических и вирусных заболеваний; — иммуноглобулины специфические, применяемые для профилактики и/или лечения определенной инфекции; — иммуноглобулины специального назначения (для лечения аллергических заболеваний и др.) В состав иммуноглобулинов человека входит не менее 95% иммуноглобулинов класса G. Иммуноглобулины человека не содержат консервантов и антибиотиков.
ПРОИЗВОДСТВО
Иммуноглобулины человека изготавливаются из пула плазмы крови, полученной не менее чем от 1000 здоровых доноров (для специфических иммуноглобулинов количество доноров не ограничено), методами с доказанной эффективностью выделения иммуноглобулиновой фракции и обеспечения вирусной и специфической безопасности. Производство иммуноглобулинов человека должно гарантировать сохранение структуры и функции белков иммуноглобулинов, обеспечивающих специфическую и вирусную безопасность препаратов, исключающих контаминацию чужеродными агентами и включающих стадию/стадии производства, которые обеспечивают инактивацию и элиминацию инфекционных агентов. Антибактериальная и противовирусная эффективность препаратов должна быть обеспечена соответствующей степенью концентрации антител в процессе производства (не менее чем в 3 раза при содержании белка в препарате 4,5-5,5% и не менее чем в 6 раз при содержании белка в препарате 9,0-16,0%).
ИСПЫТАНИЯ
Описание. Жидкий препарат — бесцветный или со светло-желтой окраской, прозрачный или слабо опалесцирующий раствор; лиофилизированный препарат — белый или светло-желтый порошок или аморфная гигроскопическая масса (если в фармакопейной статье или нормативной документации не указаны другие требования). Подлинность. Подлинность подтверждают наличием только сывороточных белков крови человека. Испытание проводят методом иммуноэлектрофореза в геле с использованием сывороток против сывороточных белков крови человека, крупного рогатого скота, лошади и свиньи в соответствии с ОФС «Иммуноэлектрофорез в агаровом геле». Допустимо проведение испытания методом иммунодиффузии в геле. Метод определения указывают в фармакопейной статье или в нормативной документации. В результате испытания должны выявляться линии преципитации только с сывороткой против сывороточных белков крови человека. Время растворения (для лиофилизированных препаратов). Не более 20 мин., если в фармакопейной статье или нормативной документации нет других указаний. Приводят описание методики с указанием применяемого растворителя, его объема и условий растворения (температура растворителя, необходимость перемешивания и др.). Прозрачность. Прозрачный или слегка опалесцирующий раствор, если нет других указаний в нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей». Допустимо спектрофотометрическое определение оптической плотности раствора в соответствии с ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях». Метод определения указывают в нормативной документации. Цветность. Бесцветный или светло-желтый раствор, если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей». Допустимо спектрофотометрическое определение оптической плотности раствора в соответствии с ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях». В разделе «Цветность» или «Цветность восстановленного раствора» указывают требования к цветности препарата или раствора, полученного при использовании растворителя, определенного инструкцией по применению, методы определения и оценки данных показателей. Потеря в массе при высушивании (для лиофилизированных препаратов). Не более 3% Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или другими валидированными методами, указанными в фармакопейной статье или нормативной документации. Механические включения. Видимые механические включения должны отсутствовать. Определение проводят в соответствии с ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах». pH. Нормативные требования указывают в нормативной документации. Перед испытанием лекарственный препарат разводят до 1% концентрации 0,9% раствором натрия хлорида (pH 7,0-7,2). Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия». Для сухих лекарственных форм указывают название растворителя, описывают методику восстановления лекарственного препарата и приводят нормативные требования к восстановленному препарату. Белок. В нормативной документации указывают нормативные требования. Определение проводят колориметрическим методом с биуретовым реактивом в соответствии с ОФС «Определение белка». Электрофоретическая однородность. Основная фракция иммуноглобулинов IgG должна составлять не менее 95% от общего белка. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы». Молекулярные параметры. В нормативной документации указывают нормативные требования. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение молекулярных параметров иммуноглобулинов методом ВЭЖХ». Фракционный состав. Должна выявляться интенсивная линия преципитации IgG и не более четырех дополнительных линий. Испытание проводят методом иммуноэлектрофореза в геле, используя сыворотку против сывороточных белков крови человека в соответствии с ОФС «Иммуноэлектрофорез в агаровом геле». Термостабильность (для жидких лекарственных форм). Препарат должен оставаться жидким и не образовывать геля после выдерживания в водяной бане или водяном термостате при температуре () °С в течение 4 ч. Стерильность. Должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Стерильность». Пирогенность или бактериальные эндотоксины (для парентеральных лекарственных форм). Должен быть апирогенным или содержать бактериальные эндотоксины в пределах установленных норм. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность» или ОФС «Бактериальные эндотоксины». Аномальная токсичность. Должен быть не токсичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Содержание антител (специфическая активность). В нормативной документации указывают количественное содержание антибактериальных антител (минимум против одного возбудителя) и/или противовирусных антител (минимум против одного возбудителя). Определение проводят по методике, указанной в фармакопейной статье, с использованием соответствующих стандартных образцов. Поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg). Препарат не должен содержать поверхностного антигена вируса гепатита B. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению и имеющих чувствительность не ниже 0,1 МЕ/мл в соответствии с инструкциями по применению. Антитела к вирусу гепатита C. Антитела к вирусу гепатита C должны отсутствовать. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению и имеющих 100% чувствительность и специфичность в соответствии с инструкциями по применению. Антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген р24 ВИЧ-1. Препарат не должен содержать антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген р24 ВИЧ-1. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению и имеющих 100% чувствительность и специфичность в соответствии с инструкциями по применению. Упаковка и Маркировка. В соответствии с ОФС «Лекарственные препараты из плазмы крови человека». На вторичную (потребительскую) упаковку лекарственных средств, должна наноситься надпись: «Антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, к вирусу гепатита C и поверхностный антиген вируса гепатита B отсутствуют». Хранение. Хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °С, если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Иммунобиологические лекарственные препараты ОФС.1.8.1.0002.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на иммунобиологические лекарственные препараты. Иммунобиологические лекарственные препараты (ИЛП) — лекарственные препараты биологического происхождения, предназначенные для иммунологической диагностики, профилактики и лечения различных заболеваний. Введение ИЛП в организм человека приводит к развитию искусственно приобретенного активного (вакцины, анатоксины) или пассивного (иммуноглобулины человека нормальные и специфические, в том числе, гипериммунные плазмы, гетерологичные иммуноглобулины и сыворотки и моноклональные антитела) иммунитета. К ИЛП относятся и другие лекарственные препараты биологической природы (бактериофаги, пробиотики, цитокины, включая интерфероны, аллергены и аллергоиды, ферменты микробов), а также лекарственные препараты, произведенные путем биотехнологических процессов, в том числе, с применением методов генетической инженерии. По своему назначению ИЛП подразделяют на лечебные и лечебно-профилактические, собственно профилактические и диагностические. ИЛП могут содержать живые или инактивированные микробы (бактерии, вирусы), их антигены, в том числе, белки, пептиды или производные белков и пептидов, гликопротеины; антитела к ним и другие действующие вещества биологического происхождения (например, цитокины, моноклональные антитела, рецепторы клеток, рекомбинантные белки, подобные факторам свертывания из плазмы крови, вакцины на основе рекомбинантных белков и т.п.). ИЛП выпускают в виде монопрепаратов и комплексных (комбинированных или ассоциированных) препаратов. В состав ИЛП могут входить вспомогательные вещества различного функционального назначения (адъюванты, сорбенты, консерванты, стабилизаторы, наполнители и др.), разрешенные в производстве ИЛП.
ПРОИЗВОДСТВО
Производство ИЛП отличается сложностью и многообразием технологических процессов (например, культивирование штаммов микроорганизмов и клеток эукариот, экстракция веществ из биологических тканей и крови человека и животных, применение технологии рекомбинантной ДНК, гибридомной технологии и др.). Производство ИЛП должно осуществляться в условиях соблюдения надлежащих требований организации производства и контроля качества лекарственных средств. При изменениях производственного процесса, введении нового регламента или способа производства, оказывающих влияние на качество ИЛП и/или стабильность и воспроизводимость процесса, представляются доказательства их пригодности для серийного производства и материалы по валидации. Качество ИЛП обеспечивается следующими основными условиями: — в производстве используют только изученные, генетически стабильные производственные штаммы микробов, охарактеризованные и депонированные в официальных коллекциях, ежегодно контролируемые по всем биологическим свойствам в соответствии с регламентированными требованиями; при этом генетическая стабильность производственного штамма является критерием, ограничивающим число пассажей микроба; — используют адекватные питательные среды, обладающие высокими ростовыми свойствами (сырье, реактивы и реагенты, используемые при производстве питательных сред, должны иметь сертификаты, подтверждающие их качество); — используют культуры клеток, в соответствии с рекомендациями ВОЗ, депонированные в официальных коллекциях и разрешенные к использованию для производства (при культивировании клеток не допускается использование нативной сыворотки крови человека, а также антибиотиков группы пенициллина); — куриные эмбрионы, используемые для производства ИЛП, получают только от здоровой птицы из птицехозяйств, благополучных по инфекционной заболеваемости кур; качество поставляемых эмбрионов должно подтверждаться ветеринарными свидетельствами и справками ветеринарной лаборатории о санитарном состоянии поголовья, включающими микробиологические и биохимические контроли; — животные и птицы, используемые для производства ИЛП, получают из хозяйств, благополучных в отношении бактериальных, вирусных, прионных и других болезней, опасных для человека, что подтверждается ветеринарными свидетельствами и справками ветеринарной лаборатории о санитарном состоянии поголовья, включающими микробиологические и биохимические контроли; — при производстве ИЛП из плазмы и клеток крови и органов человека должны соблюдаться требования, предъявляемые к состоянию здоровья донора; — ИЛП по всем показателям качества должны соответствовать требованиям нормативной документации. Субстанции, используемые при приготовлении лекарственных форм, выпускаемые на разных производствах, должны быть зарегистрированы в установленном порядке. При производстве и/или испытании препарата с использованием микроорганизмов I-II или III-IV группы патогенности (опасности) работу проводят при соблюдении соответствующих санитарно-эпидемиологических правил. Некоторые испытания, являющиеся критическими стадиями/точками в технологии производства, должны быть определены на промежуточных этапах производства. Например, к таким испытаниям относится определение герметизации и наличия вакуума. Герметизация и наличие вакуума
1. Герметизацию ампул и флаконов определяют физическим методом. Флаконы и ампулы должны быть герметичны, испытанию подлежат все флаконы и ампулы серии ИЛП. Флаконы и ампулы с препаратом помещают в кассету и погружают в емкость, заполненную водой очищенной, подкрашенной раствором метиленовой сини (образцы должны быть полностью покрыты водой). Емкость закрывают крышкой, создают избыточное давление ( МПа) и выдерживают 1-3 мин. Затем устанавливают атмосферное давление, емкость открывают, вынимают кассету с образцами и просматривают на наличие во флаконах воды, подкрашенной раствором метиленовой сини. Образцы, содержащие подкрашенную воду, бракуют. 2. Наличие вакуума в ампулах определяется визуально по цвету свечения газовой среды (определение цвета свечения газовой среды ампул с ИЛИ при возбуждении ее высокочастотным электрическим полем с помощью аппаратов типа д’Арсонваль или Тесла). При контроле качества герметизации ампул под вакуумом определяющим параметром является давление воздуха в ампулах. Диапазон измеряемых величин от 10 Па до 100 кПа. Допустимыми величинами являются давления порядка 10 Па — 1 кПа. Частота электрических колебаний составляет от 20 до 50 кГц, напряжение — от 15 до 20 кВ. В зависимости от величины давления (глубины вакуума) цвет свечения будет различным. Контролю на наличие вакуума подвергают все ампулы серии. При хранении ампул и флаконов с препаратом при пониженной температуре, перед началом испытаний их выдерживают при комнатной температуре. Определение величины давления проводят в соответствии с Таблицей 1.
Таблица 1
Зависимость цвета свечения от величины давления
Величина давления
Цвет свечения
10-100 Па
бледно-голубое
100-1000 Па
розово-голубое
1-5 кПа
фиолетовое
5-100 кПа
нет свечения
При контроле качества герметизации ампул с ИЛП, запаянных после заполнения защитным газом при атмосферном давлении, испытанию подлежат все ампулы серии. При проведении анализа не следует прикасаться высокочастотным электродом к месту запайки ампул. Требования к величине давления (глубине вакуума) регламентируются фармакопейными статьями или нормативной документацией. Контроль флаконов осуществляют выборочно, объем выборки составляет , где N — число флаконов в серии. При обнаружении в выборке хотя бы одного негерметичного флакона, проводят контроль всех флаконов серии. ИЛП выпускают в различных лекарственных формах: лиофилизаты, порошки, растворы, суспензии, таблетки, капсулы, гранулы, суппозитории, мази. Лиофилизаты могут быть выпущены в комплекте с растворителем, разрешенным к медицинскому применению, в соответствующей дозировке при данном способе применения. Растворитель не должен влиять на качество препарата.
ИСПЫТАНИЯ
Методики, используемые для проведения испытаний, должны быть описаны максимально подробно с указанием квалификации реактивов, реагентов, лабораторного оборудования, приборов, требований к животным, штаммам микробов и культур клеток и т.д. Требования к чувствительности методов испытаний ИЛП и результатам исследований должны соответствовать рекомендациям ВОЗ. ОФС «Таблетки», «Суппозитории», «Порошки», «Капсулы» регламентируют показатели качества ИЛИ соответствующих лекарственных форм. Описание. Приводится описание свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного препарата. Подлинность. Подтверждают различными лабораторными методами, позволяющими специфически идентифицировать лекарственный препарат: биологическими, иммунобиологическими, молекулярными, химическими или физико-химическими. Прозрачность. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей». В разделе «Прозрачность» или «Прозрачность восстановленного раствора» указывают требования к жидкому или растворенному препарату, прозрачности, наличию опалесценции, взвеси или осадка. При необходимости растворения препарата указывают состав и объем растворителя. Цветность. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей». В разделе «Цветность» или «Цветность восстановленного раствора» указывают требования к цветности раствора препарата, полученного при использовании растворителя, определенного инструкцией по применению, методы определения и оценки данных показателей. Окраску жидкостей определяют визуально в сравнении с соответствующими эталонами. Механические включения. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах» и ОФС «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения». Указывают отсутствие видимых и допустимое содержание невидимых частиц и методы их контроля. Контроль сорбированных препаратов и корпускулярных бактерийных вакцин проводят визуально. Время восстановления препарата (для лиофилизатов или порошков). Время восстановления препарата указывается в фармакопейной статье. В емкость с препаратом с помощью пипетки или шприца для инъекций осторожно прибавляют необходимое количество растворителя. В течение нормированного времени содержимое емкости должно полностью раствориться или диспергироваться с образованием раствора или суспензии. В фармакопейной статье указывают условия проведения анализа (применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, температуру растворителя, необходимость встряхивания). Время распадаемости (для таблеток и капсул). Указывают применяемый растворитель, его объем и, при необходимости, условия распадаемости (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Распадаемость таблеток и капсул». Температура и время плавления или время полной деформации (для суппозиториев). Для суппозиториев, изготовленных на липофильной основе, определяют время полной деформации в соответствии с ОФС «Определение времени полной деформации суппозиториев на липофильной основе». pH. Указывается допустимый интервал значений pH. Уточняются условия подготовки испытуемого образца; разведение (при необходимости); растворение с указанием объема и названием растворителя. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия». Извлекаемый объем. Извлекаемый объем должен быть не менее номинального и должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейных статьях. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения». Потеря в массе при высушивании или Вода. Определение проводят в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или «Определение воды». Средняя масса и отклонения от средней массы (для таблеток, суппозиториев, содержимого капсул, дозированных порошков и лиофилизатов). Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС «Однородность массы дозированных лекарственных форм». Стерильность. Иммунобиологические лекарственные препараты в инъекционных лекарственных формах и глазных каплях должны быть стерильными. Испытание стерильности проводят методом прямого посева или мембранной фильтрации в соответствии с ОФС «Стерильность». Микоплазмы. При необходимости в фармакопейную статью включают испытания на отсутствие микоплазм. Определение проводят в соответствии с ОФС «Испытание на присутствие микоплазм». Микробиологическая чистота. Допустимые количества непатогенных микроорганизмов указывают в фармакопейных статьях. Испытание на микробиологическую чистоту, которому подлежат неинъекционные лекарственные формы ИЛП, проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота». Отсутствие посторонней микрофлоры. Испытанию подлежат живые бактериальные и вирусные вакцины и пробиотики (лиофилизаты во флаконах, порошки). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота», если в фармакопейной статье не указан иной метод испытания. Пирогенность. Испытанию на пирогенность подлежат лекарственные формы ИЛП, предназначенные для внутривенного, внутримышечного и подкожного введения. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность». Требования к пробоподготовке препарата, тест-дозе в весовых, объемных или других единицах указывают в фармакопейной статье. Бактериальные эндотоксины. Испытанию на бактериальные эндотоксины подлежат лекарственные формы ИЛИ, предназначенные для внутривенного, внутримышечного и подкожного введения. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины». Исключение составляют препараты, содержащие в своем составе бактериальные эндотоксины в качестве активного компонента. Требования к пробоподготовке препарата, тест-дозе в весовых, объемных или других единицах, указывают в фармакопейной статье. Аномальная токсичность. Испытания аномальной токсичности препаратов, предназначенных для внутривенного, внутримышечного и подкожного введения, проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Пробоподготовку препаратов, дозы и способ введения указывают в фармакопейной статье. Определение аномальной токсичности других лекарственных форм описывают в фармакопейной статье. Специфическая безопасность. Испытание специфической безопасности должно включать метод (методы) контроля in vitro и/или in vivo, результаты которых свидетельствуют об отсутствии вирулентных (токсических) свойств, присущих исходным микробным штаммам, используемым для изготовления активного компонента (компонентов) препарата. Для неживых инактивированных или субъединичных (например, химических вакцин) бактерийных и вирусных препаратов к таким показателям относят отсутствие жизнеспособных микробов производственного штамма. Для анатоксинов — отсутствие следов необезвреженного токсина; для бактериофагов — отсутствие бактерий производственных штаммов; естественного интерферона — отсутствие вируса-индуктора и т.п. Соответствующие испытания должны быть проведены с использованием максимально чувствительных методов. Определение специфической безопасности описывают в фармакопейной статье. Специфическая безвредность. Испытанию подвергают неинъекционные препараты, содержащие живые микробы. Определение специфической безвредности пробиотиков проводят в соответствии с ОФС «Безопасность пробиотиков в тестах in vivo». Указываются критерии специфической безвредности; требования к животным, используемым для контроля, и их количество, дозы, условия разведения и методы введения лекарственного средства; продолжительность наблюдения; учитываемые показатели. Специфическая активность. Испытание проводят с помощью методов количественного определения содержания антигена или другого активного компонента. Методы определения специфической активности in vitro и/или in vivo зависят от вида ИЛП и с наибольшей достоверностью характеризуют его эффективность при практическом применении. Определение специфической активности должно осуществляться с использованием соответствующих стандартных образцов (референс-препаратов), откалиброванных по отношению к Международным стандартным образцам (при наличии последних). При использовании математических методов расчета результатов анализа в фармакопейной статье приводят соответствующую формулу с расшифровкой обозначений, а в случае необходимости, и пример расчета. Если расчет осуществляется с применением компьютерной программы, приводят соответствующую ссылку. Химические показатели. В ИЛП определяют количественное содержание белка, нуклеиновых кислот, полисахаридов, Сахаров, фосфора и т.п., в случае, если определение этих показателей не предусмотрено разделами «Подлинность», «Специфическая безопасность», «Специфическая активность». Каждый определяемый показатель излагают в самостоятельном разделе. Вещества, вносимые в препарат. Определяют количественное содержание веществ, используемых для инактивации бактерий или вирусов, сорбента, консерванта, стабилизатора и др. Каждый определяемый показатель излагают в самостоятельном разделе. Примеси. Определяют допустимое содержание в ИЛП (единице объема или массы) веществ, в том числе и биологической природы, которые могут в него попасть в процессе производства или образоваться в процессе хранения. Например, содержание в иммуноглобулинах других белков сыворотки крови; наличие вирусов-контаминантов биологических субстратов (клеточные культуры, сыворотки и др.); содержание овальбумина в препаратах, для изготовления которых используют эмбрионы птиц; содержание ионов аммония в сывороточных препаратах; содержание белка и ДНК клеток-продуцентов в ИЛП, полученных методом генной инженерии. Содержание белка и ДНК клеток-продуцентов в ИЛП не должно превышать показателей, определенных международными требованиями. Допустимо определение примесей в процессе производства до внесения вспомогательных веществ. Вирусная безопасность. В ИЛП, полученных из крови, плазмы крови, органов и тканей человека, должна быть подтверждена вирусная безопасность в разделах: Поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg); Антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1, 2), антиген р24 ВИЧ; Антитела к вирусу гепатита C. Производственные штаммы микроорганизмов и штаммы для контроля. При использовании производственных штаммов микроорганизмов и штаммов для контроля указывают их наименование на латинском языке, место депонирования, номер депозита, условия хранения, допустимое количество пассажей (при необходимости) с указанием условий их проведения и субстрата для культивирования. При необходимости указывают дополнительные к паспортным данным требования к характеристике штамма (например, LD50). Растворители, выпускаемые в комплекте с лиофилизированным препаратом. В качестве растворителей лиофилизированных препаратов используют растворители, разрешенные к медицинскому применению при соответствующем пути введения, не влияющие на качество препарата. Требования к качеству растворителя должно быть определено в фармакопейной статье, в которую должны быть включены все показатели качества для контроля растворителя. Упаковка. Первичная упаковка ИЛП должна обеспечивать сохранение заявленных свойств препарата в течение регламентированного срока его годности и быть разрешена для упаковки лекарственных средств при соответствующих методах их введения. Вместимость ее для лиофилизированных препаратов, как правило, должна обеспечивать возможность внесения регламентированного объема растворителя и последующего полноценного перемешивания содержимого. Для упаковки инъекционных форм препаратов в многодозовой расфасовке не рекомендуется использовать ампулы. Маркировка. На первичной упаковке указывают наименование лекарственного препарата, наименование или логотип производителя, номер серии, дату производства, дату истечения срока годности («годен до»), дозировку или концентрацию, или активность. На потребительской (внешней) упаковке указывают наименование лекарственного препарата, наименование и адрес производителя, лекарственную форму, номер серии, дату производства, дату истечения срока годности («годен до»), способ применения, дозировку или концентрацию, или активность, информацию о составе, количестве лекарственного препарата в упаковке, условия хранения, условия отпуска, номер регистрационного удостоверения, штриховой код, предупредительные надписи. При вложении в потребительскую (внешнюю) упаковку дополнительных компонентов (растворитель лиофилизированного препарата, тест-контрольная жидкость, разведенная сыворотка для постановки кожной пробы и т.п.), указывают наименование дополнительного компонента, концентрацию, информацию о составе, объем, номер серии. При вложении дозирующих устройств, изделий медицинского назначения и пр. на потребительской (внешней) упаковке дополнительно указывают сведения об их наличии. На потребительскую (внешнюю) упаковку лекарственных препаратов, полученных из крови, плазмы крови, органов и тканей человека, должна наноситься надпись: «Антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, к вирусу гепатита C и поверхностный антиген вируса гепатита B отсутствуют». Хранение. Условия хранения ИЛП должны обеспечивать сохранность всех свойств препарата на протяжении регламентированного срока его годности. Температурный режим хранения, как правило, должен находиться в пределах от 2 до 8 °С, если в фармакопейной статье нет других указаний. Адсорбированные на адъювантах препараты не должны подвергаться замораживанию. Транспортирование. Температурные и другие условия транспортирования, как правило, не должны отличаться от таковых для условий хранения. Возможность транспортирования препарата при другом температурном режиме должна быть обоснована соответствующим фактических материалом. При этом в соответствующем разделе нормативной документации должно содержаться указание о правилах фиксирования продолжительности данного режима транспортирования.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Лекарственные препараты из плазмы крови человека ОФС.1.8.1.0001.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на препараты крови человека, полученные из плазмы крови здоровых доноров, соответствующей требованиям ФС «Плазма человека для фракционирования». Препараты крови человека выпускают в жидком или сухом виде. Препараты крови человека включают:
— препараты альбумина человека;
— препараты иммуноглобулинов человека;
— препараты факторов свертывания крови, содержащие один из факторов свертывания крови или их комбинацию. Препараты крови человека получают методами фракционирования, хроматографии и другими. Препараты крови не содержат и антибиотиков и консервантов.
ПРОИЗВОДСТВО
Для производства препаратов крови человека используется плазма крови здоровых доноров, соответствующая требованиям ФС «Плазма человека для фракционирования». Доноры крови и плазма крови должны проходить обследование в соответствии с действующими нормативными правовыми документами. Каждая индивидуальная порция плазмы должна контролироваться на отсутствие маркеров инфекций, переносимых при гемотрансфузиях. Для заготовки плазмы крови необходимо использование разрешенных в установленном порядке гемоконсервантов. Производство препаратов крови должно гарантировать сохранение структуры и функции белков крови, обеспечивать специфическую и вирусную безопасность препаратов и исключать контаминацию чужеродными агентами. Для предотвращения попадания вирусов в готовые лекарственные формы предусматривается введение в технологию производства нескольких стадий вирусной инактивации и/или элиминации вирусов, для которых доказано снижение концентрации модельных вирусов.
ИСПЫТАНИЯ
Препараты крови человека, используемые в лекарственных формах для парентерального применения, должны соответствовать требованиям ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» по показателям «Стерильность», «Пирогенноеть», «Бактериальные эндотоксины», «pH», «Механические включения» (видимые механические включения), выдерживать требования к вспомогательным веществам. Описание. Приводится описание свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного препарата. Подлинность. Подлинность подтверждают наличием только сывороточных белков крови человека методом иммуноэлектрофореза в геле в соответствии с ОФС «Иммуноэлектрофорез в агаровом геле», методом иммунодиффузии в геле в соответствии с ОФС «Иммунодиффузия в геле», при необходимости активностью специфического компонента и другими методами. Время получения восстановленного препарата (для лиофилизированных препаратов). Указывают время растворения препарата, приводят описание методики с указанием применяемого растворителя, его объема и условий растворения. Потеря в массе при высушивании или вода (для лиофилизированных препаратов). Указывают требования к потере в массе при высушивании или воде. Определение проводят в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или в соответствии с ОФС «Определение воды». Извлекаемый объем (для жидких лекарственных форм). Извлекаемый объем должен быть не менее номинального и должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейных статьях. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения». Белок. Указывают требования содержания белка. Определение проводят подходящим методом в соответствии с ОФС «Определение белка». Электрофоретичеекая однородность (электрофоретический состав). Указывают требования электрофоретической однородности препаратов альбумина и иммуноглобулинов. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы». Специфическая активность (кроме препаратов альбумина). Указывают содержание специфического компонента. Определение проводят по методике, указанной в фармакопейной статье, с использованием соответствующих стандартных образцов.
Вирусная безопасность
Поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg). Препарат не должен содержать поверхностного антигена вируса гепатита B. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих чувствительность не ниже 0,1 МЕ/мл в соответствии с инструкциями по применению. Антитела к вирусу гепатита C. Антитела к вирусу гепатита C должны отсутствовать. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих 100% чувствительность и специфичность в соответствии с инструкциями по применению. Антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген р24 ВИЧ-1. Препарат не должен содержать антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген р24 ВИЧ-1. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих 100% чувствительность и специфичность в соответствии с инструкциями по применению. Упаковка и маркировка. Первичная упаковка должна обеспечивать сохранение заявленных свойств препарата в течение регламентированного срока годности и быть разрешена для упаковки лекарственных средств при соответствующих методах их введения. Вместимость ее для лиофилизированных препаратов, как правило, должна обеспечивать возможность внесения регламентированного объема растворителя и последующего полноценного перемешивания содержимого. На первичной упаковке указывают наименование лекарственного препарата, наименование или логотип производителя, номер серии, дату производства, дату истечения срока годности («годен до»), дозировку или концентрацию, или активность. На потребительской (внешней) упаковке указывают наименование лекарственного препарата, наименование и адрес производителя, лекарственную форму, номер серии, дату производства, дату истечения срока годности («годен до»), способ применения, дозировку или концентрацию, или активность, информацию о составе, количестве лекарственного препарата в упаковке, условия хранения, условия отпуска, номер регистрационного удостоверения, штриховой код, предупредительные надписи. При вложении в потребительскую (внешнюю) упаковку дополнительных компонентов (растворитель лиофилизированного препарата указывают наименование дополнительного компонента, концентрацию, информацию о составе, объем, номер серии. При вложении дозирующих устройств, изделий медицинского назначения и др. на потребительской (внешней) упаковке дополнительно указывают сведения об их наличии. На вторичную (потребительскую) упаковку лекарственных средств, должна наноситься надпись: «Антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, к вирусу гепатита C и поверхностный антиген вируса гепатита B отсутствуют». Хранение. Хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °С, если нет других указаний в фармакопейной статье.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение подлинности аллергенов
ОФС.1.7.2.0034.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод определения подлинности (выявления специфических аллергенных компонентов) препаратов аллергенов, представляющих собой водно-солевые экстракты, с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).
ОБЩАЯ ЧАСТЬ
Принцип твердофазного иммуноферментного метода анализа изложен в ОФС «Метод иммуноферментного анализа». Исследуемый препарат сорбируют в лунках полистиролового планшета. На аллергосорбент наносят образцы специфических сывороток крови, содержащие специфические IgE-антитела к данному аллергену. В результате образуется комплекс антиген-антитело (АГ-АТ). К образовавшемуся в лунке планшета комплексу (АГ-АТ) добавляют конъюгат — моноклональные анти-IgE-антитела, меченные пероксидазой, и индикатор — тетраметилбензидин (ТМБ) в субстратном буфере. В лунках планшета с положительной реакцией проявляется цветное окрашивание. Оптическую плотность растворов в лунках планшета оценивают фотометрическим методом. Оценку уровня реакции осуществляют по показателям оптической плотности четырех разведений референс-сыворотки (1:1; 1:5; 1:25; 1:50, которые соответствуют 4, 3, 2 и 1 классу специфических IgE-антител. Учет результатов реакции проводят с помощью референс-системы, состоящей из референс-аллергена (аллерген из пыльцы амброзии) и референс-сыворотки (сыворотка крови больных с содержанием IgE-антител к аллергену из пыльцы амброзии на уровне не менее 4 класса).
АЛЛЕРГЕНСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СЫВОРОТКИ
(получение и оценка уровня IgE-антител)
Венозную кровь для получения аллергенспецифических сывороток получают от больных, страдающих аллергическими заболеваниями, с положительными кожными пробами, специфичность которых подтверждена. Пробы крови от каждого больного в количестве 10-15 мл отбирают в стерильные химические пробирки и помещают на 1 ч в термостат при температуре () °С, а затем на 16-18 ч в холодильник при температуре от 2 до 8 °С. Образовавшийся сгусток крови отделяют от стенок пробирок стеклянной палочкой. Сыворотку осторожно отделяют от сгустка. Если в сыворотке присутствуют примеси форменных элементов крови, их удаляют центрифугированием. Полученную сыворотку хранят при температуре от 2 до 8 °С в течение 5 дней или при температуре минус 40 °С до 1 года. Уровень специфических IgE-антител оценивают с помощью набора реагентов для количественного определения специфических IgE-антител согласно инструкции по применению набора. Для оценки подлинности препаратов применяют только сыворотки крови, содержащие аллергенспецифические антитела к исследуемым аллергенам на уровне 3-4 класса, которые далее используют в качестве положительного контроля.
Примечания.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
1. Испытуемый препарат — лекарственная форма аллергена или аллергоида. 2. Референс-аллерген — стандартный образец аллергена из пыльцы амброзии. 3. Референс-сыворотка — сыворотка крови от пациентов с амброзийным поллинозом, имеющая уровень специфических IgE-антител, соответствующий 4 классу. 4. Положительный контроль — аллергенспецифические сыворотки от пациентов с аллергическими заболеваниями, имеющие уровень специфических IgE-антител к исследуемому аллергену, соответствующий 3-4 классам. 5. Отрицательный контроль — сыворотка крови, не содержащая аллергенспецифических IgE-антител; также используется для разведения референс-сыворотки. 6. 0,05 М буферный раствор натрия карбоната — буферный раствор для сорбции. 7. Система тетраметилбензидин (ТМБ) — субстрат пероксидазы. 8. Конъюгат — мышиные моноклональные антитела к IgE человека, меченные пероксидазой, концентрированные. 9. Разводящий и промывающий раствор — фосфатно-солевой буферный раствор с твином 20 концентрированный (pH 7,1-7,3). 10. Стоп-реагент — 10% раствор серной кислоты. 11. Вода очищенная.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Многоканальный фотометр вертикального сканирования для 96-луночных планшетов с длиной волны 450 нм. 2. Термостат () °С.
3. Холодильник () °С.
4. Автоматические или электронные дозаторы с переменным объемом (от 50 до 5000 мкл). 5. Прозрачные разборные 96-луночные планшеты с высокими сорбционными свойствами.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ
1) 0,01 М буферный раствор натрия карбоната (pH 9,5). Смешивают 2 мл 0,05 М раствора натрия карбоната с 8 мл воды очищенной. Полученный раствор используют на один планшет для ИФА. Хранят при температуре () °С в течение 1 сут. 2) Раствор тетраметилбензидина (ТМБ). Смешивают 2,5 мл ТМБ пероксидазы субстрата с 2,5 мл раствора B пероксидазы субстрата (расходуют на один планшет для ИФА). Раствор готовят за 10 мин. до внесения в планшет (хранению не подлежит). 3) Приготовление рабочих растворов реагентов (растворы NN 1-2, растворы референс-сыворотки) — приведено в табл. 1.
Таблица 1
Приготовление рабочих растворов реагентов
Рабочие растворы
Приготовление
(на 1 планшет)
Хранение
Разводящий и промывающий раствор (N 1)
50 мл фосфатно-солевого буферного раствора концентрированного с твином довести до 500 мл водой очищенной (pH 7,2-7,4) При температуре () °С в течение суток
Раствор конъюгата (N 2)
0,1 мл мышиных моноклональных антител к IgE человека концентрированных, меченных пероксидазой, довести до необходимой концентрации рабочим раствором N 1 Готовить непосредственно перед применением Растворы референс-сыворотки
— Раствор A (без разведения)
Референс-сыворотка с уровнем специфических IgE-антител 4 класса При температуре () °С в течение суток
— Раствор B (1:5)
К 0,1 мл раствора A добавляют 0,4 мл отрицательного контроля -«-
— Раствор C (1:25)
К 0,05 мл раствора A добавляют 0,95 мл отрицательного контроля -«-
— Раствор D (1:50)
К 0,05 мл раствора B добавляют 0,450 мл отрицательного контроля -«-
МЕТОДИКА ОЦЕНКИ ПОДЛИННОСТИ ПРЕПАРАТОВ АЛЛЕРГЕНОВ
Подготовка аллергенов к сорбции. Испытуемый препарат и референс-аллерген амброзии с помощью буферного раствора для сорбции разводят до концентрации белкового азота, равной PNU/мл. Сорбция препаратов. Референс-аллерген в объеме 100 мкл вносят в первые два вертикальных ряда планшета. Во все лунки с 3 по 12 вертикальных рядов (стрипов) вносят растворы тестируемых аллергенов (или аллергоидов) в объеме 100 мкл (по 1 стрипу на одну тестируемую серию препарата). Планшет закрывают крышкой и инкубируют 16-18 ч при температуре () °С. После инкубации содержимое лунок планшета удаляют и промывают 3 раза промывающим и разводящим раствором (по 200 мкл на лунку).
Примечание.
Аллергоид тестируется параллельно на одном планшете с одноименным аллергеном. Количество стрипов с аллергеном и аллергоидом должно быть одинаковым. Микст-аллерген/аллергоид тестируется параллельно не менее чем с 3 аллергенами, входящими в его состав.
Методика проведения твердофазного ИФА
- Во все лунки 1 вертикального ряда (контроль конъюгата) вносят по 100 мкл раствора N 1, в оставшиеся лунки остальных рядов — по 50 мкл этого же раствора.
- Во 2 ряд вносят по 50 мкл растворов референс-сыворотки: в лунки A, B — раствор A; в лунки C, D — раствор B; в лунки E, F — раствор C; в лунки G, H — раствор D.
- В оставшиеся ряды вносят по 50 мкл положительного и отрицательного контролей: в лунки A-F — одноименные положительные сыворотки к тестируемому препарату, в лунки G, H — сыворотку крови, не содержащую аллергенспецифических IgE-антител (отрицательный контроль).
- Планшет закрывают крышкой и помещают в термостат при температуре () °С на 1 ч.
- После инкубации жидкость из лунок удаляют и в каждую лунку вносят по 200 мкл рабочего раствора N 1 (промывающий и разводящий раствор) на 2-3 мин, после чего жидкость вновь удаляют. Процедуру отмывки повторяют не менее 3 раз.
- В каждую лунку планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора N 2 (конъюгат) и помещают в термостат при температуре () °С на 1 ч.
- Отмывку планшета проводят согласно п. 5, повторив процедуру не менее 5 раз.
- Во все лунки планшета вносят по 50 мкл раствора ТМБ. Планшет помещают в темное место и выдерживают в течение 15-20 мин. при температуре () °С.
- Реакцию останавливают добавлением по 25 мкл стоп-реагента во все лунки и проводят учет результатов. В лунках, где прошла реакция, появится окрашивание разной степени интенсивности. Лунки первого ряда (контроль конъюгата) должны оставаться неокрашенными.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят фотометрически при длине волны 450 нм в течение 10 мин. после остановки реакции. Вычисляют средние арифметические показателей оптической плотности (ОП) одноименных лунок. Критерии приемлемости результатов:
— среднее значение показателей ОП в лунках с контролем конъюгата (КК) не превышает 0,10 (визуально окрашивания лунок не видно); — среднее значение показателей ОП в лунках с референс-сывороткой без разведения (A) больше 1,0, но меньше 2,5; — соотношение средних показателей ОП с разведениями референс-сыворотки (растворы A, B, C, D) следующие: ОП раствора A > ОП раствора B > ОП раствора C > ОП раствора D; — среднее значение показателей ОП раствора D в 1,5-2,0 раза больше среднего значения показателей ОП отрицательного контроля. Рассчитывают уровень специфических IgE-антител в аллергенспецифических сыворотках (положительный контроль) (табл. 2).
Таблица 2
Соответствие классов IgE-антител и показателей оптической плотности
Уровень
специфических IgE-антител (классы)
Интервалы оптической плотности (ОП)
растворов референс-сыворотки
4
От ОП лунок A и выше
3
От ОП лунок B до A
2
От ОП лунок C до B
1
От ОП лунок D до C
0
Меньше ОП лунок D
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Аллерген следует считать подлинным (выявлены специфические аллергенные компоненты), если уровень IgE-антител в специфической сыворотке (положительный контроль) будет не менее 2 класса. Аллергоид (модифицированный аллерген) следует считать подлинным (выявлены специфические аллергенные компоненты), если уровень IgE-антител в специфической сыворотке (положительный контроль) будет не менее 1 класса. Пример: оценка подлинности аллергена из пыльцы полыни горькой и алпергоида пыльцевого полыни горькой. Тестируемые препараты:
— аллерген из пыльцы полыни горькой (10000 PNU/мл);
- аллергоид пыльцевой полыни горькой (10000 PNU/мл). Контрольные сыворотки:
- положительный контроль — сыворотка крови, содержащая специфические IgE-антитела к аллергену из пыльцы полыни горькой (уровень антител 3 класс);
- отрицательный контроль — сыворотка крови, не содержащая специфических IgE-антител к пыльце растений. Последовательность проведения анализа Приготовление рабочих растворов (раздел «Приготовление растворов»). Аллерген из пыльцы полыни, аллергоид пыльцевой полыни горькой и референс-аллерген амброзии с помощью буферного раствора для сорбции разводят до концентрации белкового азота, равной 10001250 PNU/мл. Референс-аллерген в объеме 100 мкл вносят в первые два вертикальных ряда планшета. В лунки вертикального ряда 3 вносят раствор аллергена из пыльцы полыни в объеме 100 мкл, ряда 4 вносят раствор аллергоида пыльцевого полыни в объеме 100 мкл (схема заполнения планшета приведена в табл. 3).
Таблица 3
Схема заполнения планшета
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
A
КК
A
AC
AC
B
КК
A
AC
AC
C
КК
B
AC
AC
D
КК
B
AC
AC
E
КК
C
AC
AC
F
КК
C
AC
AC
G
КК
D
OC
OC
H
КК
D
OC
OC
Референс-аллерген
Референс-аллерген
Аллерген полыни
Аллергоид полыни
Примечание:
1, 2, 3, 4 — ряды лунок планшета;
КК — контроль конъюгата — «холостая» проба; A, B, C, D — растворы референс-сыворотки; AC — аллерген-специфическая сыворотка (положительный контроль); OC — отрицательная сыворотка (отрицательный контроль);
Планшет закрывают крышкой и инкубируют 16-18 ч при температуре () °С в холодильнике. Во все лунки 1 вертикального ряда (контроль конъюгата) вносят по 100 мкл раствора N 1, в оставшиеся лунки остальных рядов — по 50 мкл этого же раствора. Во 2 ряд вносят по 50 мкл растворов референс-сыворотки: в лунки A, B — раствор A; в лунки C, D — раствор B; в лунки E, F — раствор C; в лунки G, H — раствор D. В ряды 3 и 4 вносят по 50 мкл положительного и отрицательного контроля: в лунки A-F — аллергенспецифическая сыворотка (AC), содержащая 3 класс IgE-антител к аллергену полыни, в лунки G, H — не содержащую IgE-антител сыворотку. Планшет закрывают крышкой и помещают в термостат при температуре () °С на 1 ч. По истечении времени инкубации жидкость из лунок удаляют в емкость с дезинфицирующим раствором. В каждую лунку вносят по 200 мкл раствора N 1 на 2-3 мин., после чего жидкость вновь удаляют. Процедуру отмывки повторяют не менее 3 раз. В каждую лунку планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора N 2 (конъюгат) и помещают в термостат при температуре () °С на 1 ч. Отмывку планшета проводят согласно п. 6, повторив процедуру не менее 5 раз. Во все лунки планшета вносят по 50 мкл раствора ТМБ. Планшет помещают в темное место и выдерживают в течение 15-20 мин. при температуре () °С. Реакцию останавливают добавлением стоп-реагента по 25 мкл во все лунки и проводят учет результатов. Время между остановкой реакции и учетом результатов не должно превышать 10 мин. В лунках, в которых прошла реакция, должно появиться окрашивание разной степени интенсивности. Лунки первого ряда (контроль конъюгата) должны оставаться неокрашенными. Учет результатов
Учет результатов проводят фотометрически при длине волны 450 нм. Вычисляют средние арифметические показателей оптической плотности (ОП) одноименных лунок и заполняют по табл. 4.
Таблица 4
Результаты анализа
Показатели ОП
Уровень
специфических IgE-антител (классы)
Растворы референс-сыворотки A
4
B
3
C
2
D
1
Отрицательный контроль
0
Положительный контроль (аллерген)
3
Положительный контроль (аллергоид)
2
Аллерген из пыльцы полыни горькой и аллергоид пыльцевой полыни горькой считаются подлинными (выявлены специфические аллергенные компоненты, присутствующие в тестируемых препаратах).
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Метод иммуноферментного анализа
ОФС.1.7.2.0033.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод иммуноферментного анализа (ИФА). Метод ИФА является высокочувствительным и высокоспецифичным иммунодиагностическим методом, с помощью которого проводят качественное и количественное определение различных веществ, обладающих свойствами антигена, гаптена (неполноценного антигена) или антитела. Метод ИФА широко используется для диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний человека и животных и может также применяться для подтверждения качества иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП). Принцип метода заключается в реакции специфического взаимодействия антигена с антителом с образованием иммунного комплекса и последующей детекции полученного комплекса с помощью спектрофотометрии, хемилюминесценции и других адекватных методик. Детекция может быть как прямой (когда исследуемое вещество само обладает ферментативной активностью, либо оно помечено ферментной меткой), так и косвенной или непрямой (когда исследуемое вещество, связавшееся с иммобилизованными на твердой фазе антителами, инкубируется с антителами, меченными ферментом). Качественный анализ позволяет получить информацию о содержании антигена или антитела в исследуемом материале по принципу «есть/»нет». При проведении количественного анализа определяют концентрацию антигена или антитела в исследуемом материале с использованием калибровочного графика.
ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Метод ИФА включает 3 основных этапа: 1) образование иммунного комплекса «антиген (исследуемое вещество) — специфическое к нему антитело» или наоборот; 2) формирование связи конъюгата с образовавшимся на предыдущем этапе иммунным комплексом или со свободными местами связывания (детерминантами); 3) преобразование субстрата под действием ферментной метки в регистрируемый сигнал в результате биохимической реакции. Все методики выполнения иммуноферментного анализа классифицируются как гомогенные или гетерогенные. Методики, в которых все 3 стадии ИФА проходят в растворе, и между основными стадиями нет дополнительных этапов разделения образовавшихся иммунных комплексов от непрореагировавших компонентов, относятся к группе гомогенных методов ИФА. В основе гомогенного ИФА, применяемого, как правило, для определения низкомолекулярных субстанций, лежит процесс ингибирования активности фермента при его соединении с антигеном или антителом. В результате реакции антиген-антитело активность фермента восстанавливается. При образовании иммунного комплекса антиген-антитело, содержащего ферментную метку, происходит ингибирование активности фермента на 95% по отношению к высокомолекулярному субстрату, что обусловлено стерическим исключением субстрата из активного центра фермента. По мере увеличения концентрации антигена происходит связывание все больше антител, и сохраняется все больше свободных конъюгатов «антиген-фермент», способных гидролизовать высокомолекулярный субстрат. Гомогенный метод ИФА проводится очень быстро. На анализ одного определения требуется 1 мин. Чувствительность метода достаточно высока. С его помощью можно определить вещество на уровне пикомолей. Для гетерогенных методов характерно проведение анализа в двухфазной системе с участием твердой фазы — носителя и обязательна стадия разделения иммунных комплексов от непрореагировавших компонентов (отмывка), которые находятся в разных фазах (образовавшиеся иммунные комплексы находятся на твердой фазе, а непрореагировавшие комплексы — в растворе). Гетерогенные методы, в которых формирование иммунных комплексов на первой стадии протекает на твердой фазе, называют твердофазными методами. Методы относятся к гомогенно-гетерогенным, если 1 стадия — образование специфических комплексов — происходит в растворе, а затем для разделения компонентов используют твердую фазу с иммобилизированным реагентом. Метод гетерогенного ИФА состоит из 3 основных этапов: 1) иммобилизация антигена или антитела на твердой фазе, полученный комплекс называется иммуносорбентом; 2) удаление несвязавшегося реагента и блокирование сайтов связывания на твердой подложке с помощью блокирующих белков, таких, например, как альбумин, казеин; инкубация анализируемого препарата с иммуносорбентом для того, чтобы произошло их связывание; 3) детекция благодаря ферментативной активности самого исследуемого вещества или благодаря связанной с анализируемым препаратом ферментативной метке (прямой вариант). В некоторых случаях производится дополнительная инкубация комплекса «иммуносорбент-исследуемое вещество» с вторичными антителами, конъюгированными с ферментативной меткой (непрямой вариант). Количественное определение исследуемого вещества осуществляется путем добавления подходящего для используемого детектора субстрата и сравнения сигнала исследуемого вещества со стандартным образцом. Метод гетерогенного ИФА подразделяют на неконкурентный ИФА и конкурентный ИФА. Схемы анализа могут быть модифицированы в процессе разработки лекарственного препарата в соответствии с необходимыми требованиями. Изменения должны быть указаны в фармакопейной статье или нормативной документации. Выбор способа постановки ИФА зависит от природы исследуемого вещества и его количества, так как разные виды ИФА обладают различной чувствительностью. Для оценки качества веществ, содержащих антитела, возможно использование специфичных антиидиотипических антител.
Неконкуретный метод ИФА
Неконкурентный метод ИФА подразделяется на несколько видов по типу детекции (прямой конкурентный, косвенный (непрямой) конкурентный) и по типу иммобилизованного на твердой фазе вещества (антиген или антитело). Прямой вариант ИФА.
Может выполняться 2 способами. В первом случае исследуемое вещество (антиген) непосредственно иммобилизовано на твердой фазе; тогда связавшееся с антигеном меченое антитело является детектором. При выполнении теста иным способом используют иммобилизованные на твердой фазе антитела. В этом случае детектором является исследуемое вещество, меченное ферментом. Косвенный (непрямой) вариант ИФА.
При выполнении непрямого варианта ИФА антиген иммобилизован на твердой фазе. После блокировки к антигену прибавляют раствор специфических к нему антител. После инкубации образовавшийся комплекс антиген-антитело отмывают от несвязавшихся антител и добавляют меченный ферментом анти-иммуноглобулин (анти-Ig), выступающий в роли детектора. Анти-Ig детекторы коммерчески доступны для конкретных классов и подклассов Ig, что делает этот формат анализа удобным для изотипирования антител. Кроме того, использование меченого анти-Ig усиливает сигнал по сравнению с прямым методом иммуноферментного анализа, тем самым увеличивая чувствительность анализа. Метод «сэндвича» как вариант постановки ИФА. Наиболее распространенным неконкурентным методом является «сэндвич» метод. При его выполнении на твердой фазе иммобилизуют первичные антитела с их последующей блокировкой. Затем к ним прибавляют исследуемое вещество, содержащее антиген, и инкубируют. После инкубации комплекс антиген-антитело отмывают от несвязавшегося антигена и добавляют вторичные антитела, меченные ферментом, и проводят детекцию.
Конкурентный метод ИФА
Конкурентный метод ИФА подразделяется на несколько видов: по типу детекции (прямой конкурентный, косвенный (непрямой) конкурентный) и по типу иммобилизованного на твердой фазе вещества (антиген или антитело). Прямой конкурентный вариант ИФА.
Для обнаружения или количественного определения растворимых антигенов применяют прямой конкурентный вариант ИФА с иммобилизованным на твердой фазе антигеном. Для этого используют антиген-специфические антитела, конъюгированные с соответствующим детектором (например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, рутений или флуоресцеин). На твердую фазу иммобилизуют стандартный антиген с последующей блокировкой. Конъюгированное с ферментативной меткой антитело инкубируют с исследуемым веществом (растворимым антигеном). Затем эту смесь добавляют к иммобилизованному антигену, инкубируют, а потом отмывают от несвязавшегося комплекса антиген-антитело. Следующий шаг заключается в добавлении подходящего субстрата для используемого в качестве метки фермента. Ингибирование реакции, обусловленное наличием 2 антигенов в системе, по сравнению с контрольным образцом без конкурентного растворимого антигена, является обратно пропорциональным значению количества исследуемого вещества. Выполнение прямого конкурентного варианта ИФА с иммобилизованным на твердой фазе антителом аналогично прямому конкурентному ИФА с иммобилизованным на твердой фазе антигеном, однако используется для обнаружения или количественного определения антител. Косвенный (непрямой) конкурентный вариант ИФА. Этот способ постановки ИФА аналогичен прямому конкурентному варианту, однако вместо меченого антитела или антигена при детекции используется меченый анти-Ig реагент или меченые вторичные антитела, соответственно.
Общие условия проведения метода ИФА
В качестве твердой фазы для проведения иммуноферментного анализа применяют различные материалы: силикон, нитроцеллюлоза, полиамиды, полистирол, поливинилхлорид, полипропилен, акрил и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и другие планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки. От выбора твердой фазы зависит принцип иммобилизации (гидрофобное, гидрофильное, ковалентное взаимодействие). Чаще других в качестве твердой фазы используют 96-луночные пластиковые планшеты для микротитрования. Количество лунок в планшете может варьироваться. Планшет может быть прозрачным (колориметрическая детекция) и матовым (хемилюминесцентная детекция, флуориметрия). Иммобилизацию необходимо проводить без пузырьков воздуха в лунке, так как их присутствие изменяет показание оптической плотности. Возможно использование биотинилированных иммобилизованных реагентов. В этом случае в реакции используют стрептавидин и биотинилированную ферментативную метку. Данный метод используется для усиления сигнала. Время и температура иммобилизации, зависящие от кинетической природы, стабильности и концентрации реагента, должны быть указаны в фармакопейной статье и нормативной документации. Все стадии иммуноферментного анализа, промывочные и блокирующие растворы, временные промежутки и температурные условия для каждой стадии, количество оборотов в минуту для инкубации на шейкере, условия детекции также должны быть указаны в фармакопейной статье и нормативной документации.
Примеры методик для некоторых видов ИФА
Косвенный неконкурентный метод ИФА
I. Сорбция антигена. В каждую лунку 96-луночного планшета вносят 0,1-0,5 мкг антигена и 100 мкл 0,05 М карбонат-бикарбонатного буферного раствора (pH 9,6), если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации, и далее проводят сорбцию при температуре 4 °С в течение 16 ч. Возможно использование других буферных растворов с высокими значениями pH. Инкубация проводится при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка (двукратная) несвязавшихся молекул антигена осуществляется фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 0,1% твин-20 (по 300 мкл на лунку), если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации. II. Блокировка. Для блокирования мест неспецифического связывания антигенов или антител лунки планшета заполняют фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0) или другим буферным раствором, указанным в фармакопейной статье или в нормативной документации, содержащим 1% раствор бычьего сывороточного альбумина или других белков (казеина, желатина, сухого молока и др.), и инкубируют в течение 10-15 мин. при комнатной температуре (если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации). III. Титрование специфических антител. При необходимости количественной оценки исследуемое вещество (антиген или антитело) титруют в серийных разведениях параллельно со стандартным образцом (CO). Титрование можно проводить как в горизонтальных, так и в вертикальных рядах планшета. Необходимо отметить, что титрование антител проводится в том случае, если необходимо подобрать оптимальную концентрацию антител или определить их титр. В том случае, если оптимальная концентрация и/или титр антител определены, то используют рекомендованное для данных антител (сыворотки) разведение. При титровании в первую лунку ряда вносят готовое разведение антител — в среднем 1-10 мкг на лунку, далее производят последовательное разведение антител в лунках. Инкубацию со специфическими антителами проводят в течение 30 мин. при комнатной температуре при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется не менее 3-4 раз с помощью фосфатно-солевого буферного раствора pH 9,0, содержащего 0,1% твин-20. IV. Добавление антивидовых (антиглобутиповых) антител, коньюгированных с ферментной меткой. В качестве детекторных (вторичных) антител используются антивидовые поликлональные антитела, конъюгированные с ферментативной меткой. Чаще всего используются козьи или кроличьи антитела, специфичные к целой молекуле или к Fc-фрагментам специфических антител. Концентрация детекторных антител, как правило, указывается производителем в виде разведения исходного раствора (например, 1:1000). Инкубация с вторичными мечеными антителами проводится в течение 30 мин. при комнатной температуре при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется не менее 3-4 раз с помощью фосфатно-солевого буферного раствора (pH 9,0), содержащего 0,1% твин-20. Инкубация проводится в течение 10 мин. при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта. В лунки вносят по 100 мкл раствора субстрата и инкубируют в течение 10 мин. при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Для остановки ферментативной реакции применяют «стоп реагент», который добавляют во все исследуемые и контрольные пробы в равных количествах. Наиболее часто в качестве «стоп реагента» применяют серную кислоту.
Прямой неконкурентный метод ИФА
Методика прямого ИФА имеет лишь небольшие отличия от методики непрямого неконкурентного ИФА. Так, I и II стадии одинаковы в обоих типах анализа. Отличие заключается в том, что в прямом варианте ИФА на стадии III используют специфические исследуемому антигену антитела, конъюгированные с ферментной меткой, и они прямо взаимодействуют с исследуемым веществом. При необходимости также можно проводить титрование конъюгатов аналогично принципу, описанному ранее для неконъюгированных антител. Стадия IV в рамках прямого неконкурентного ИФА не проводится.
«Сэндвич» метод ИФА
В данном варианте ИФА используется пара антител (первичные и вторичные), специфичных к пространственно удаленным эпигонам исследуемого антигена. I. Сорбция антител на твердой фазе. Методика сорбции антигена аналогична методике сорбции антител в разделе «Косвенный неконкурентный метод ИФА». II. Блокировка. Методика блокировки мест неспецифического связывания на подложке (твердой фазе) аналогична методике блокировки, описанной в разделе «Косвенный неконкурентный метод ИФА». III. Инкубация с антигеном. В лунки планшета с преадсорбированными антителами вносят по 50 мкл исследуемого вещества и стандартных разведений антигена, если нет других указаний в фармакопейной статье или нормативной документации. Разведения антигена должны быть приготовлены на основе фосфатно-солевого буферного раствора (pH 9,0), содержащего 0,1% твин-20, поскольку твин-20 снижает неспецифическое связывание белковых молекул друг с другом и с поверхностью планшета. И исследуемое вещество, и стандартные разведения антигена вносят попарно в соседние в горизонтальном ряду лунки (либо по 3 повторности), используя по 2 (3) лунки на каждое разведение белка. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 30 мин. при постоянном перемешивании. Отмывка осуществляется не менее 3-4 раз фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 0,1% твин-20, или другим буферным раствором, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. IV. Инкубация с антителами, конъюгированными с ферментной меткой. В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфических антител, конъюгированных с ферментной меткой. Оптимальная концентрация конъюгированных антител, как правило, указывается в фармакопейной статье или нормативной документации (обычно используют концентрацию 2-4 мкг/мл). Инкубация с антителами, содержащими ферментную метку, проводится в течение 30 мин. при комнатной температуре при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется не менее 3-4 раз с помощью фосфатно-солевого буферного раствора (pH 9,0), содержащего 0,1% твин-20, или другим буферным раствором, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта. Методика проведения ферментативной реакции аналогична методике, описанной в разделе: «Косвенный неконкурентный метод ИФА».
Детекция
Как было указано выше, для детекции используются меченные ферментной меткой или другим реагентом антитела. В качестве ферментной метки могут выступать, например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза или галактозидаза. В качестве детектора могут быть использованы антитела или антигены с другими метками. Выбор реагента-детектора зависит от типа метки, конъюгированной с антителом или антигеном и способа детекции. В качестве методов детекции могут быть использованы спектрофотометрия, хемилюминесценция, флуориметрия и другие методы, исходя из выбора метки.
Результаты количественного метода ИФА
Результаты количественного метода ИФА рассчитывают по линейной калибровочной кривой с обратной регрессией или с помощью комплексного метода, использующего нелинейную калибровочную кривую с обратной регрессией. Методика интерпретации результатов зависит от используемого способа постановки ИФА. Например, по результатам испытания с помощью калибровочной кривой можно оценивать концентрацию неизвестного образца, проводить оценку полумаксимальной концентрации ингибирования или эффективной концентрации. Это позволяет определять количество исследуемого вещества или его активность в сравнении с эталонным/калибровочным стандартным образцом (CO). Обычно вид калибровочной кривой при выполнении количественного метода ИФА, характеризующий концентрацию анализируемого препарата, зависит от рассчитанного среднего значения нелинейно. В связи с этим, рекомендуется использовать различные математические модели для анализа полученной кривой. В остальных случаях метод ИФА используют как качественный метод, позволяющий оценить наличие того или иного исследуемого вещества в пробе в пределах чувствительности методики. Примечание.
Приготовление карбонат-бикарбонатного буферного раствора (pH 9,6). В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл вносят 1,59 г натрия карбоната (безводного) или 4,29 г натрия карбоната 10-водного и 2,93 г натрия гидрокарбоната, растворяют в 800 мл воды очищенной, доводят pH до 9,6, перемешивают, далее доводят объем раствора до метки водой очищенной и вновь перемешивают.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания ОФС.1.7.2.0032.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания, которая основана на способности анатоксинов образовывать комплекс антиген — антитело со специфическими антитоксинами. При внесении в раствор анатоксина определенного количества соответствующего антитоксина часть последнего связывается с анатоксином в эквивалентном соотношении. Содержание не связавшегося антитоксина определяют по его токсиннейтрализующей способности. На основании полученных результатов определяют содержание анатоксина в испытуемом растворе. Для проведения испытания используют стандартные образцы антитоксинов, калиброванные в Международных единицах (ME). Количество анатоксина, которое связывает 1 ME соответствующего антитоксина, принимают за 1 единицу связывания (ЕС). Специфическую активность анатоксинов, определяемую в реакции антитоксинсвязывания, выражают в ЕС/мл.
ИСПЫТАНИЯ
Перед проведением испытания устанавливают опытную дозу токсинов, используемых при определении содержания антитоксинов в испытуемой среде.
Столбнячный анатоксин
За опытную дозу принимают минимальное количество столбнячного токсина, которое при введении мышам в смеси с 0,01 ME столбнячного антитоксина вызывает гибель 50% животных в течение 4 сут. При определении опытной дозы готовят не менее 7 последовательных разведений токсина в 0,9% растворе натрия хлорида, отличающихся одно от другого на 10-20%. В ряд пробирок вносят по 1 мл столбнячного антитоксина, содержащего 0,1 ME, 1 мл одного из разведений токсина и 2 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Смеси инкубируют при температуре () °С в течение () мин. и вводят 4 белым мышам массой тела 16-18 г подкожно в объеме 0,4 мл. За животными наблюдают в течение 4 сут., регистрируя количество павших от каждого разведения токсина. В результате испытания отмечают наибольшее разведение токсина, вызвавшее гибель 50% животных в группе. Готовят разведение токсина, содержащее 10 опытных доз в 1 мл. Для использования в опыте антитоксинсвязывания готовят разведение токсина.
Проведение реакции антитоксинсвязывания
Исходя из предполагаемого содержания анатоксина в растворе, готовят несколько его последовательных разведений до 0,1 ЕС/мл, отличающихся друг от друга на 10-25% (табл.). Подготовленные разведения вносят по 1 мл во флаконы и добавляют по 0,2 ME столбнячного антитоксина в объеме 2 мл. Смеси тщательно перемешивают и инкубируют при температуре () °С в течение () мин. для связывания анатоксина с антитоксином. После окончания инкубации определяют содержание оставшегося свободным антитоксина. С этой целью в каждый флакон вносят 1 мл токсина, содержащего 10 опытных доз. Смеси инкубируют при тех же условиях и вводят группам мышей (не менее 4 животных в каждой) подкожно по 0,4 мл. Испытания проводят совместно с контролем опытной дозы токсина. Смесь, состоящую из 2 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида, 1 мл раствора столбнячного антитоксина (0,1 МЕ/мл) и 1 мл раствора токсина, содержащего 10 опытных доз, инкубируют при температуре () °С в течение () мин. и вводят мышам подкожно по 0,4 мл. За животными опытной и контрольной групп наблюдают в течение 4 сут., регистрируя появление симптомов заболевания у животных в каждой группе. Мышей с признаками столбняка усыпляют. Результат выражают как отношение количества выживших животных к общему количеству животных в каждой группе. Отмечают разведение анатоксина с наименьшей предполагаемой активностью, которое при введении мышам опытной группы вызвало такой же эффект, как у мышей контрольной группы. Это означает, что из 0,2 ME столбнячного антитоксина, находившихся в смеси, 0,1 ME антитоксина не связалась с анатоксином и вступила в реакцию нейтрализации токсина. Следовательно, 0,1 ME антитоксина связала анатоксин и его активность равна 0,1 ЕС/мл. Для определения содержания анатоксина в исходном растворе учитывают его разведение (табл.).
Таблица
Схема приготовления разведений испытуемого анатоксина
Показатель
N флакона (разведения)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Предполагаемая активность анатоксина ЕС/мл 200
250
300
350
400
450
500
550
600
Количество анатоксина в разведении 1:100 мл 1
1
1
1
1
1
1
1
1
Количество 0,9% раствора натрия хлорида мл 19
24
29
34
39
44
49
54
59
Ботулинические анатоксины типов А, В и Е
Перед проведением испытания устанавливают опытную дозу ботулинических токсинов типов А, В и Е, используемых в реакции антитоксинсвязывания. За опытную дозу (L+/50) ботулинических токсинов типов А, В и Е принимают минимальное количество токсина, которое при внутривенном введении мышам в смеси с 1/50 ME соответствующего антитоксина вызывает гибель 50% животных в течение 4 сут. Для определения опытной дозы готовят 5-7 последовательных разведений токсина в 0,9% растворе натрия хлорида, отличающихся одно от другого на 10-20%. Для этого в ряд пробирок вносят по 1,5 мл одного из разведений токсина, 1 мл соответствующего антитоксина, содержащего 0,1 ME, и 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Смеси инкубируют в термостате при температуре () °С в течение () мин. и вводят группам белых мышей с массой тела 16-18 г (не менее 4 животных в каждой группе) внутривенно в объеме 0,7 мл. За животными наблюдают в течение 4 сут., учитывая количество павших животных от каждого разведения токсина. Наибольшее разведение токсина, вызвавшее гибель 50% животных в группе, считают рабочим разведением (1,5 мл этого разведения содержат 5 опытных доз).
Проведение реакции антитоксинсвязывания
Исходя из предполагаемого содержания анатоксина в испытуемом препарате, готовят несколько его последовательных разведений в 0,9% растворе натрия хлорида, отличающихся друг от друга на 10-25% до 0,1 ЕС/мл (табл.). По 1 мл одного из разведений анатоксина помещают во флаконы и добавляют по 1 мл соответствующего антитоксина, содержащего 0,2 ME. Смеси тщательно перемешивают и инкубируют при температуре () °С в течение () мин. Во время инкубации происходит связывание испытуемого анатоксина с антитоксином в эквивалентном соотношении. Содержание антитоксина, не связавшегося с анатоксином, определяют по его токсиннейтрализующей способности. С этой целью в каждый флакон вносят 1,5 мл соответствующего токсина, содержащего 5 опытных доз. Смеси инкубируют при тех же условиях и вводят внутривенно по 0,7 мл группам мышей (не менее 4 животных в каждой). Испытания проводят совместно с контролем опытной дозы токсина. С этой целью готовят смесь, состоящую из 1 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида, 1 мл раствора антитоксина (0,1 МЕ/мл) и 1,5 мл раствора токсина, содержащего 5 опытных доз. Смеси тщательно перемешивают, инкубируют при температуре () °С в течение () мин. и вводят внутривенно по 0,7 мл мышам опытных и контрольной групп. За животными наблюдают в течение 4 сут., учитывая количество больных и павших в каждой группе. Отмечают разведение анатоксина с наименьшей предполагаемой активностью, вызвавшее у мышей опытной группы такой же эффект, как в контрольной группе. Это означает, что из 0,2 ME антитоксина, находившихся в смеси, 0,1 ME антитоксина не связалась с анатоксином и вступила в реакцию нейтрализации токсина. Следовательно, 0,1 ME антитоксина связала анатоксин, активность которого равна 0,1 ЕС/мл. При определении содержания анатоксина в исходном растворе учитывают его разведение.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Испытание на присутствие микоплазм
ОФС.1.7.2.0031.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья описывает испытание на присутствие микоплазм посевных (исходных) клеток, мастер банка, рабочих банков, производственных и контрольных клеточных культур, посевного и рабочего вирусных банков, вирусных сборов, готового лекарственного препарата до розлива, готовой лекарственной формы препарата, которые согласно нормативной документации не должны содержать микоплазм. Кроме этого, испытанию на присутствие микоплазм подлежат клеточные культуры, используемые в лечебной практике, а также добавки к питательным средам (трипсин, сыворотка крови животных и пр.).
Условия проведения испытания
Испытание на присутствие микоплазм проводят при строгом соблюдении всех правил асептики в условиях, не оказывающих влияние на выявляемые микроорганизмы, исключающих контаминацию испытуемого образца, и обязательном мониторинге условий испытания.
Методы испытания
Испытание на присутствие микоплазм проводят следующими методами: микробиологическим (культуральным) — посев на питательные среды для выделения и культивирования микоплазм, и методом индикаторной клеточной культуры (цитохимическим) с использованием флюоресцирующего красителя ДНК. Испытание посевных (исходных) клеток, мастер банка, рабочих банков, производственных и контрольных клеточных культур проводят 2 методами — микробиологическим и методом индикаторной клеточной культуры. Испытание посевного и рабочего вирусного банков, вирусного сбора, готового препарата до розлива и готовой формы препарата на присутствие микоплазм проводят только микробиологическим методом. Могут быть также использованы альтернативные методы испытания при условии проведения соответствующей валидации.
Микробиологический метод
Микробиологический метод испытания на присутствие микоплазм может быть выполнен по следующим схемам; Схема 1 — посев испытуемого образца на полужидкую питательную среду для выделения и культивирования микоплазм, содержащую 0,3% агара (среда Каган полужидкая), и последующее инкубирование посевов во влажной атмосфере при температуре () °С в течение 14 сут. Схема 2 — посев испытуемого образца в жидкую питательную среду для выделения и культивирования микоплазм (среда Каган жидкая), инкубирование в течение 7 сут. во влажной атмосфере при температуре () °С с последующим пересевом на полужидкую питательную среду, содержащую 0,3% агара, и инкубированием в течение 14 сут. во влажной атмосфере при температуре () °С. Учет результатов при проведении испытаний по обеим схемам проводят путем визуального просмотра засеянных пробирок в проходящем свете на 3, 7, 10 и 14 сут. В качестве отрицательного контроля одновременно инкубируют образцы стерильных (незасеянных) питательных сред.
Питательные среды
Для проведения испытания на присутствие микоплазм используют полужидкую питательную среду для выделения и культивирования микоплазм, содержащую 0,3% агара (среда Каган полужидкая). Для подтверждения наличия микоплазм используют плотную питательную среду, содержащую 1,3% агара (среда Каган плотная), на которой микоплазмы формируют характерные колонии в форме яичницы-глазуньи. Жидкую питательную среду для выделения и культивирования микоплазм (среда Каган жидкая) используют как вспомогательную для накопления микоплазм. Все среды Каган для выделения и культивирования микоплазм готовят на одной основе — среде Каган жидкой, в состав которой входят: — Гидролизат бычьего сердца жидкий — 200 мл (сухой — 20 г); — Мясная вода — 400 мл или
— Мясной экстракт — 13 г (3,0-3,5% сухих веществ на 1 л среды); — Дрожжевой экстракт (экстракт хлебопекарных дрожжей) — 5,0 г (1,5 г сухих веществ на 1 л среды); — Натрия хлорид — 5,0 г;
— Вода очищенная — до 1 л.
Значение pH готовой среды после стерилизации (). Для приготовления полужидкой среды, содержащей 0,3% агара, дополнительно вносят 3,0 г агара микробиологического на 1 л среды. Для приготовления плотной среды, содержащей 1,3% агара, дополнительно вносят 13 г/л агара микробиологического. Приготовление питательных сред. В воду очищенную по прописи добавляют гидролизат бычьего сердца, мясной экстракт (или мясную воду), экстракт хлебопекарных дрожжей, натрия хлорид и перемешивают. Для приготовления полужидкой или плотной среды дополнительно вносят 3,0 г или 13,0 г агара соответственно. Доводят pH среды до () 10% раствором натрия гидроксида. Среду нагревают до кипения, кипятят 2-3 мин. и фильтруют. С помощью 5% раствора хлористоводородной кислоты устанавливают pH (). Среды разливают во флаконы и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 °С в течение 30 мин. Готовые среды хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 4 мес. Стерильность питательных сред. После стерилизации не менее 5% емкостей от каждой партии питательной среды инкубируют параллельно с посевом испытуемого образца. Рост микроорганизмов должен отсутствовать. Подготовка сред для проведения испытания. Перед применением полужидкую среду, содержащую 0,3% агара, нагревают на водяной бане до полного расплавления агара и охлаждают до температуры 40-45 °С. Добавляют 15-20% нормальной сыворотки крови лошади без консерванта, предварительно прошедшей контроль на стерильность и отсутствие контаминации микоплазмами. При необходимости возможно внесение во все готовые питательные среды стерильного раствора аргинина до конечной концентрации 1% и стерильного раствора глюкозы до конечной концентрации 1%. В качестве индикатора роста микоплазм допускается внесение в жидкую среду Каган раствора фенолового красного 5,0 мл (0,6 г/л). Готовую полужидкую среду разливают по 10 мл в пробирки и хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 7 сут. При проведении испытания на присутствие микоплазм допустимо использование альтернативных питательных сред при условии подтверждения их соответствия требованиям по ростовым свойствам в отношении соответствующих штаммов.
Определение ростовых свойств среды
Каждую партию приготовленной полужидкой питательной среды, предназначенной для проведения испытания на присутствие микоплазм, проверяют на ростовые свойства, используя «Стандартный образец тест-штамма Mycoplasma arginini G230», в соответствии с инструкцией по применению. Для проверки ростовых свойств, в зависимости от типа испытуемого препарата, также можно использовать другие виды микоплазм, полученные из музейных коллекций: М. orale, M. fermentans, M. gallisepticum, М. hyorhinis, М. synoviae, М. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii. При проведении испытания по определению ростовых свойств среды тест-штамм М. arginini G230 в количестве 10-100 КОЕ вносят в 3-4 пробирки с испытуемой полужидкой питательной средой. Инкубируют во влажной атмосфере в течение 7 сут. при температуре () °С. Если в течение времени инкубации в инокулированной среде визуально отмечают рост микоплазм, среду считают пригодной для использования.
Определение ингибирующего действия испытуемого образца
Для правильной оценки проводимого испытания на присутствие микоплазм однократно определяют наличие ингибирующего действия для каждого наименования испытуемого образца. Определение ингибирующего действия может быть проведено одновременно с определением ростовых свойств питательной среды. При проведении испытания по схеме 1 в 3-4 пробирки с 10 мл полужидкой питательной среды, содержащей 0,3% агара, вносят 0,5 мл испытуемого образца и 10-100 КОЕ тест-штамма М. arginini G230. Инкубируют во влажной атмосфере в течение 7 сут. при температуре () °С. При проведении испытания по схеме 2 в 100 мл жидкой питательной среды вносят 10 мл испытуемого образца и 10-100 КОЕ тест-штамма М. arginini G230, инкубируют во влажной атмосфере в течение 7 сут. и далее высевают по 0,5-1 мл на полужидкую среду, содержащую 0,3% агара. Инкубируют во влажной атмосфере в течение 7 сут. при температуре () °С. В качестве положительного контроля, в зависимости от применяемой схемы, используют аналогичное объему испытуемого образца количество стерильного 0,9% раствора натрия хлорида и 10-100 КОЕ тест-штамма М. arginini G230. В качестве отрицательного контроля одновременно инкубируют стерильные образцы питательных сред. Учет результатов проводят визуально в проходящем свете. Если в контроле наблюдают рост тест-штамма, а в опыте рост отсутствует, считают, что испытуемый препарат обладает ингибирующим действием, которое следует устранить разведением или другим способом.
Схема 1. Испытание на присутствие микоплазм методом прямого посева
Испытуемый образец вносят по 0,5 мл в каждую из 10 пробирок с полужидкой питательной средой, содержащей 0,3% агара (среда Каган полужидкая). Посев производят прокалыванием всего столбика питательной среды концом пипетки, выпуская равномерно ее содержимое при продвижении пипетки в толще среды от дна к ее поверхности. Посевы инкубируют во влажной атмосфере в течение 14 сут. при температуре () °С. При проведении испытания на присутствие микоплазм в качестве положительного контроля может быть использован тест-штамм М. arginini G230 в количестве 10-100 КОЕ или один из тест-штаммов, использованных при оценке ростовых свойств.
Схема 2. Испытание на присутствие микоплазм методом посева с предварительным накоплением
Испытанию подлежат препараты, вызывающие помутнение питательной среды или обладающие ингибирующим действием. Методика посева включает предварительный высев испытуемого образца в жидкую питательную среду (среда Каган жидкая) для накопления и инкубирование в течение 7 сут. с последующим пересевом на полужидкую питательную среду, содержащую 0,3% агара, и инкубированием в течение 14 сут. Микробиологический метод испытания позволяет обнаруживать одну и более колоний микоплазм в объеме не более 100 мл. Обнаружение микоплазм микробиологическим методом с предварительным накоплением состоит из следующих этапов: 1. Внесение 10 мл испытуемого образца в 100 мл жидкой питательной среды, инкубирование во влажной атмосфере в течение 7 сут. при температуре () °С. 2. Пересев на 7 сут. от начала исследования по 0,5-1,0 мл бульонной культуры в каждую из 10 пробирок с полужидкой средой, содержащей 0,3% агара. Инкубирование во влажной атмосфере в течение 14 сут. при температуре () °С. При проведении испытания в качестве положительного контроля может быть использован тест-штамм М. arginini G230 в количестве 10-100 КОЕ или один из тест-штаммов, использованных при оценке ростовых свойств среды. В качестве отрицательного контроля одновременно инкубируют образцы стерильных питательных сред.
Учет и интерпретация результатов
Учет результатов испытания по обеим схемам проводят путем визуального просмотра засеянных пробирок в проходящем свете на 3, 7, 10 и 14 сут., сравнивая результат с контрольными пробирками. На 14 сут. проводят окончательный учет результатов. Наличие роста микоплазм оценивают визуально по обнаружению легкой мутности или зернистости в зоне посева. При отсутствии видимого роста микоплазм испытуемый образец считают прошедшим испытание. В случае роста микоплазм испытуемый образец считают не удовлетворяющим требованиям испытания. Испытание считается недействительным, если обнаружен нетипичный, вызывающий сомнения, рост микоплазм, обнаружен рост посторонних микроорганизмов в отрицательном контроле или ростовые свойства питательной среды неудовлетворительны, а также при отсутствии роста микоплазм в положительном контроле или, напротив, при обнаруженном росте в отрицательном контроле. В случае признания испытания недействительным проводят повторные испытания.
Метод индикаторной клеточной культуры
(цитохимический метод)
Метод обнаружения микоплазм с использованием индикаторной клеточной культуры Vero (или другой клеточной культуры, чувствительной к микоплазмам) основан на внесении испытуемого образца в клеточную культуру и последующей обработке клеток культуры тканей специфическим флюоресцирующим красителем Hoechst-33258 (Bisbenzimide).
Методика испытания
Испытания на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры проводят в асептических условиях, выполняя следующие операции. 1. В стерильную чашку Петри помещают стерильное предметное стекло и вносят 20-23 мл суспензии клеточной культуры Vero в питательной среде Игла MEM или ДМЕМ в концентрации не более 105 кл/мл и добавляют не более 5% сыворотки эмбриональной, предварительно прошедшей контроль на стерильность и отсутствие контаминации микоплазмами. 2. Вносят 1 мл испытуемого образца в чашку Петри и инкубируют в течение 3-5 сут. при температуре () °С в атмосфере с ()% CO2 до формирования 50-70% монослоя. Образование монослоя наблюдают в световом микроскопе при увеличении ок. 10x, об. 20x. 3. Культуральную жидкость сливают, промывают препарат фосфатным буферным раствором (pH 7,2-7,4). 4. Помещают предметное стекло на 30-35 мин. в 96° этиловый спирт. 5. Спирт сливают и сушат препарат на воздухе. 6. Окрашивают рабочим раствором красителя Hoechst-33258 в защищенном от света месте при температуре () °С в течение 30-35 мин. 7. Краситель сливают, препарат промывают стерильной водой очищенной, подсушивают на воздухе и микроскопируют в люминесцентном микроскопе.
Примечания.
1. Приготовление красителя Hoechst-33258 (Bisbenzimide) А. Приготовление концентрированного раствора. В 100 мл стерильной воды очищенной растворяют 5 мг красителя. Раствор хранят в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °С не более 1 года. Б. Приготовление основного раствора. К 100 мл стерильной воды очищенной добавляют 0,5 мл концентрированного раствора красителя и перемешивают. Раствор готовят перед использованием. В. Приготовление рабочего раствора. Основной раствор красителя смешивают с раствором Хенкса без индикатора в соотношении 1:9 и используют для окраски испытуемых образцов немедленно. 2. Подготовка люминесцентного микроскопа. Устанавливают и используют для анализа препаратов фильтры: ФС1-4, СС15-2, БС8-2. Просматривают препараты в люминесцентном микроскопе при увеличении ок. 10x, об. 90x (масляная иммерсия) или об. 70x/85x (водная иммерсия). 3. Подготовка предметных стекол. Предметные стекла промывают в проточной водопроводной воде в течение 10-15 мин., затем кипятят 5-7 мин. в воде очищенной, протирают стерильной салфеткой и помещают на 1 сут. в смесь Никифорова (смесь равных объемов 96° этилового спирта и эфира для наркоза). Стекла извлекают из смеси Никифорова с помощью пинцета, протирают стерильной салфеткой и стерилизуют в течение () мин. при температуре () °С.
Учет и интерпретация результатов
Учет результатов испытания на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры (цитохимическим методом) проводят, просматривая препараты в люминесцентном микроскопе. Микоплазмы преимущественно выявляются по границам клеток и в межклеточном пространстве как однородно окрашенные тела сферической формы расположенные попарно или цепочками клеток с ярким зеленоватым свечением. Положительными контрольными образцами служат контаминированные микоплазмами культуры клеток, а отрицательными — клеточные культуры, в которых микоплазмы не выявлены. При отсутствии характерного для микоплазм свечения испытуемый образец считают удовлетворяющим требованиям испытания. Обнаружение микоплазм свидетельствует о контаминации испытуемого образца микоплазмами, и образец считается не соответствующим требованиям испытания.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Количественное определение хлоридов методом осадительного титрования в иммунобиологических лекарственных препаратах ОФС.1.7.2.0030.15
Вводится впервые
Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения хлоридов методом обратного осадительного титрования в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП) и их растворителях, не содержащих другие галогениды (иодиды, фториды, бромиды), окислители или соли ртути. Методы осадительного титрования основаны на реакциях осаждения определяемого компонента титрантом — раствором, образующим осадок с определяемыми компонентами. Для проведения реакции осаждения при титриметрическом анализе необходимо соблюдение следующих условий: 1) осадок должен быть практически нерастворим; 2) выпадение осадка должно происходить достаточно быстро; 3) результаты титрования не должны искажаться явлениями адсорбции (соосаждения); 4) при титровании должна фиксироваться точка эквивалентности. Ионы хлора (Cl-) определяют тиоцианометрическим (роданометрическим, аргентометрическим) методом по Фольгарду (обратное титрование). В качестве титранта используют стандартный раствор аммония тиоцианата (аммония роданида) NH4SCN, в качестве индикатора для определения точки эквивалентности — насыщенный раствор квасцов железоаммонийных (NH4Fe(SO4)2 · 12H2O). Сущность метода обратного титрования по Фольгарду заключается в следующем: при добавлении к раствору, содержащему ионы хлора, избытка титрованного раствора серебра нитрата (AgNO3) образуется осадок серебра хлорида (AgCl). Избыток серебра нитрата оттитровывают раствором аммония тиоцианата с образованием практически нерастворимого осадка серебра роданида (AgSCN) в присутствии индикатора — квасцов железоаммонийных. В точке эквивалентности ионы железа (III) взаимодействуют с тиоцианат-ионами (SCN-), образуя растворимое комплексное соединение темно-красного цвета. Процесс обратного титрования (по методу Фольгарда) протекает по следующей схеме реакций:
Fe3+ + 3 SCN- = [Fe(SCN)3]
Определение хлоридов в лекарственных средствах
В коническую колбу вместимостью 50-100 мл вносят точный объем образца (А), содержащий 0,3-1,5 мг хлор-ионов (что при пересчете соответствует 0,5-2,5 мг натрия хлорида), прибавляют 8-10 мл воды очищенной, 5 мл (точный объем) 0,01 М раствора серебра нитрата, 1,0 мл азотной кислоты концентрированной и перемешивают. Содержимое колбы нагревают, доводят до кипения, и осторожно по каплям прибавляют насыщенный раствор калия перманганата, не допуская вспенивания и выплескивания, до получения фиолетово-коричневого окрашивания, не исчезающего в течение 5 мин. выдерживания колбы при температуре кипения. К горячему испытуемому раствору на конце шпателя прибавляют глюкозу (40-140 мг) до исчезновения окраски. Пробы охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора квасцов железоаммонийных и при непрерывном перемешивании избыток 0,01 М раствора серебра нитрата медленно титруют 0,01 М раствором аммония тиоцианата до появления отчетливой светлой коричневато-оранжевой окраски. Параллельно проводят контрольный опыт с пробой, не содержащей испытуемый образец (А). Количество ионов Cl-, вступивших в реакцию с AgNO3, определяют по разнице объемов 0,01 М раствора NH4SCN, пошедшего на титрование контрольного и анализируемого растворов. Содержание хлоридов (X) в процентах вычисляют по формуле:
,
где: Vк — объем 0,01 М раствора аммония тиоцианата, пошедший на титрование контрольного раствора, мл; Vоп — объем 0,01 М раствора аммония тиоцианата, пошедший на титрование испытуемого раствора, мл; А — объем испытуемого раствора, взятого на анализ, мл; K — поправочный коэффициент к молярности аммония тиоцианата; 0,0003544 — титр по хлор-иону <> — количество хлоридов в г, соответствующее 1 мл 0,01 М раствора аммония тиоцианата;
<> Для пересчета на натрия хлорид используют значение титра по натрия хлориду — 0,0005844, г/мл.
100 — коэффициент пересчета в проценты. Примечания.
1. Приготовление испытуемого раствора — указывают в фармакопейной статье или нормативной документации. 2. Приготовление 0,1 М титрованного раствора серебра нитрата. В мерной колбе вместимостью 1000 мл растворяют в воде очищенной 17 г серебра нитрата, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Около 0,15 г (точная навеска) натрия хлорида, прокаленного при температуре 250-300 °С до постоянной массы, растворяют в 50 мл воды очищенной, добавляют 1,0 мл 5% раствора калия хромата (K2CrO4) и титруют приготовленным раствором серебра нитрата до появления слабой красновато-оранжевой окраски, не исчезающей при перемешивании. Молярность (M) приготовленного раствора серебра нитрата проверяют по формуле:
M = a / 0,05844 · V,
где: а — навеска натрия хлорида, г;
0,05844 — количество натрия хлорида, соответствующее 1 мл 1 М раствора натрия хлорида, г/мл; V — объем раствора серебра нитрата, пошедший на титрование навески натрия хлорида, мл. При несоответствии заданной молярности раствор укрепляют или разводят до 0,1 М, повторно проверяя титр раствора. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой в защищенном от света месте при комнатной температуре. 3. Приготовление 0,01 М раствора серебра нитрата. В мерную колбу вместимостью 50 мл вносят 5 мл 0,1 М титрованного раствора серебра нитрата, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор готовят перед использованием. 4. Приготовление 0,1 М титрованного раствора аммония таоцианата. В мерной колбе вместимостью 1000 мл в воде очищенной растворяют 7,6-8,0 г аммония тиоцианата, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Титр аммония тиоцианата устанавливают по 0,1 М раствору серебра нитрата. К 20 мл 0,1 М раствора серебра нитрата прибавляют 25 мл воды очищенной, 0,5 мл азотной кислоты концентрированной, 1 мл насыщенного раствора квасцов железоаммонийных и титруют приготовленным раствором аммония тиоцианата до появления светлой жидкости коричневато-оранжевого цвета. Молярность раствора аммония тиоцианата вычисляют по формуле:
M = M0 · V0 / V,
где: M0 — молярность 0,1 М раствора серебра нитрата, г; V0 — объем 0,1 М раствора серебра нитрата, мл; V — объем 0,1 М раствора аммония тиоцианата, мл. После определения титра раствор укрепляют или разводят до 0,1 М раствора, повторно проверяя титр. Возможно приготовление 0,1 М раствора аммония тиоцианата из стандарт-титра в ампуле (фиксанала) согласно инструкции по применению. 5. Приготовление 0,01 М раствора аммония тиоцианата, В мерную колбу вместимостью 50 мл вносят 5 мл 0,1 М раствора аммония тиоцианата, доводят объем раствора водой очищенной до метки и тщательно перемешивают. Раствор готовят перед использованием. 6. Приготовление насыщенного раствора квасцов железоаммонийных. В 100 мл воды очищенной растворяют 40 г квасцов железоаммонийных, фильтруют, добавляют 16% раствор азотной кислоты до перехода коричневой окраски в желтовато-зеленую. Раствор хранят во флаконе из темного стекла в защищенном от света месте при комнатной температуре. 7. Определение поправочного коэффициента к молярности аммония тиоцианата. Поправочный коэффициент определяют как отношение теоретически заданного объема титранта (5 мл) к его объему в контрольном эксперименте (5/Vк). Показатель поправочного коэффициента должен находиться в пределах ().
В соответствии с Приказом Ростехрегулирования от 20.10.2009 N 462-ст данный документ введен в действие с 1 марта 2010 года. Текст документа
Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 20 октября 2009 г. N 462-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ТАРА СТЕКЛЯННАЯ ДЛЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
ОБЩИЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ
Glass containers for medicines.
General specifications
ГОСТ Р 53416-2009
Дата введения —
1 марта 2010 года
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».
Сведения о стандарте
- Разработан Обществом с ограниченной ответственностью «Эксперт-Стандарт» (ООО «Эксперт-Стандарт»).
- Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 74 «Стеклянная тара и посуда».
- Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 октября 2009 г. N 462-ст.
- Введен впервые.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
- ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Настоящий стандарт распространяется на стеклянную тару — банки и флаконы (далее — изделия), используемые в медицинской промышленности для расфасовывания и хранения лекарственных средств. Стандарт устанавливает классификацию изделий, технические требования к качеству, пределам допускаемых отклонений основных размеров и вместимостей от номинальных значений, правилам приемки и методам контроля, требования к упаковке, маркировке, транспортированию, хранению и условиям эксплуатации изделий.
2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р ИСО 2859-1-2007 Статистические методы. Процедура выборочного контроля по альтернативному признаку. Часть 1. Планы выборочного контроля последовательных партий на основе приемлемого уровня качества ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 166-89 (ИСО 3599-76) Штангенциркули. Технические условия ГОСТ 618-73 Фольга алюминиевая для технических целей. Технические условия ГОСТ 1341-97 Пергамент растительный. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 13903-2005 Тара стеклянная. Метод контроля термической стойкости ГОСТ 14192-96 Маркировка грузов
ГОСТ 14961-91 Нитки льняные и льняные с химическими волокнами. Технические условия ГОСТ 15150-69 Машины, приборы и другие технические изделия. Исполнения для различных климатических районов. Категории, условия эксплуатации, хранения и транспортирования в части воздействия климатических факторов внешней среды ГОСТ 17527-2003 Упаковка. Термины и определения ГОСТ 19808-86 Стекло медицинское. Марки ГОСТ 19809-85 Стекло медицинское. Метод определения водостойкости ГОСТ 24980-2005 Тара стеклянная. Методы контроля параметров ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной меткой ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования ГОСТ 30005-93 Тара стеклянная. Термины и определения дефектов ГОСТ 30288-95 Тара стеклянная. Общие положения по безопасности, маркировке и ресурсосбережению ГОСТ 31292-2006 Тара стеклянная. Методы контроля остаточных напряжений после отжига Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р ИСО 2859-1, ГОСТ 17527 и ГОСТ 30005, а также следующие термины с соответствующими определениями: 3.1. Номинальная вместимость: объем жидкости, который изделие вмещает при его заполнении до объема, для которого оно предназначено. 3.2. Полная вместимость: объем жидкости, который изделие вмещает при заполнении его до края. 3.3. Предел допускаемого отклонения: максимальное значение положительного или отрицательного отклонения, при котором изделие считают еще годным для выпуска в обращение.
4. КЛАССИФИКАЦИЯ, ОСНОВНЫЕ ПАРАМЕТРЫ И РАЗМЕРЫ
4.1. Изделия в зависимости от назначения, конструкции, основных параметров и размеров, венчика горловины подразделяют на следующие виды: — БВ — банки с винтовым венчиком;
— БТ — банки с треугольным венчиком;
— ФВ — флаконы с винтовым венчиком.
4.2. Назначение, конструкцию, основные параметры и размеры, тип венчика горловины, номинальную и полную вместимость, толщину стенок и дна, рекомендуемую массу изделий устанавливают в документах по стандартизации на конкретные виды изделий. 4.3. Предел допускаемых отклонений внутреннего и наружного диаметров горловины, диаметра резьбы или наружного диаметра горловины по краю треугольного венчика изделия указывают на рисунках (чертежах), приведенных в документах по стандартизации на конкретные виды изделий. 4.4. Контролю подлежат следующие размеры изделий: общая высота, диаметр цилиндрической части корпуса, толщина стенок и дна, полная вместимость. 4.5. Контролю подлежат следующие размеры венчиков горловин изделий: внутренний диаметр горловины (на глубине не более 5 мм), диаметр резьбы, наружный диаметр горловины по краю треугольного венчика. 4.6. Остальные размеры изделий и венчиков горловин, указанные в документах по стандартизации, даны для изготовления формовых комплектов. 4.7. Условное обозначение изделия должно содержать: обозначение вида изделия (банка или флакон), номинальную вместимость, наружный диаметр горловины, марку стекла и обозначение настоящего стандарта. Примеры условных обозначений:
Банка типа БВ, номинальной вместимостью 10 см3, с наружным диаметром горловины по резьбе 28 мм, из стекла марки ОС-1:
Банка БВ-10-28-ОС-1-ГОСТ Р 53416-2009
Банка типа БТ, номинальной вместимостью 10 см3, с наружным диаметром горловины по краю треугольного венчика 27,5, из стекла марки ОС-1:
Банка БТ-10-27,5-ОС-1-ГОСТ Р 53416-2009
Флакон типа ФВ, номинальной вместимостью 10 см3, с наружным диаметром горловины по резьбе 20 мм, из стекла марки ОС-1:
Флакон ФВ-10-20-ОС-1-ГОСТ Р 53416-2009
Допускается дополнять условное обозначение изделий в зависимости от назначения.
5. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
5.1. Характеристики
5.1.1. Изделия должны соответствовать требованиям настоящего стандарта. 5.1.2. Изделия изготовляют из стекла по ГОСТ 19808 марок МТО, ОС, ОС-1 или других составов, разрешенных Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Водостойкость стекла марок МТО, ОС, ОС-1 должна соответствовать классификации по ГОСТ 19809. 5.1.3. На наружной и внутренней поверхностях изделий не допускаются: 5.1.3.1. Прилипы стекла, стеклянные нити, сколы, сквозные посечки, трещины, инородные включения, имеющие вокруг себя посечки и трещины. 5.1.3.2. Острые швы, открытые пузыри.
5.1.3.3. Закрытые пузыри и инородные включения в количестве и размером более указанных в таблице 1.
Таблица 1
Номинальная вместимость изделий, см3
Размер <>, мм
Количество, шт.
пузыря
инородных включений
пузырей
инородных включений
От 5 до 100 включ.
От 0,8 до 2,0 включ.
1,0
3
1
Св. 100 до 500 включ.
От 8,0 до 2,0 включ.
1,0
4
2
Св. 2,0 » 4,0 «
2
Св. 500 до 2000 включ.
От 0,8 до 2,0 включ.
2,0
6
3
Св. 2,0 » 4,0 «
4
» 4,0 » 10,0 «
1
<> Для круглых пузырей — наибольший диаметр, для овальных — половина суммы длины и ширины.
5.1.3.4. На торцевой поверхности венчика горловины поверхностные посечки, пузыри, инородные включения, заусенцы, складки. 5.1.3.5. Резко выраженные: складки, морщины, след отреза ножницами, кованость, двойные швы и волнистость, заметная при заполнении изделия водой. 5.1.3.6. Шлиры и свили, резко выраженные и/или сопровождаемые внутренними напряжениями. Удельная разность хода лучей поляриметра при контроле напряжений не должна превышать 100 нм/см. 5.1.3.7. Потертость поверхности со сколами. 5.1.3.8. Неотмываемые загрязнения.
5.1.3.9. Поверхностные посечки на стенках корпуса и дне изделий длиной более 1 мм в количестве более 2 шт. 5.1.4. Допускаются закрытые пузыри размером не более 0,8 мм (мошка), редко расположенные и/или в виде отдельных скоплений. 5.1.5. На дне изделий допускается оттиск насечек высотой 0,1 — 0,8 мм, не выходящих за размер диаметра дна. 5.1.6. Предел допускаемого отклонения фактической вместимости изделия в сторону уменьшения — не более 8%, а в сторону увеличения — не более 15% полной вместимости. 5.1.7. Предел допускаемого отклонения на номинальную высоту изделия , вычисляют по формуле
, (1)
где H — номинальная высота изделия, мм. 5.1.8. Предел допускаемого отклонения на номинальный диаметр корпуса изделия , вычисляют по формуле
, (2)
где D — номинальный диаметр корпуса изделия, мм. 5.1.9. Овальность корпуса цилиндрических изделий и горловины венчика не должна превышать пределов допускаемых отклонений на диаметр. 5.1.10. Предел допускаемого отклонения от перпендикулярности вертикальной оси относительно плоскости дна для флаконов номинальной высотой не более 120 мм составляет 1,5 мм, а номинальной высотой более 120 мм вычисляют по формуле
, (3)
где H — номинальная высота изделия, мм. 5.1.11. Предел допускаемого отклонения от параллельности плоскости торца венчика горловины плоскости дна изделия должен соответствовать указанному в таблице 2.
Таблица 2
В миллиметрах
Диаметр венчика горловины
Предел допускаемого отклонения от параллельности плоскости торца венчика горловины плоскости дна изделия До 10 включ.
0,30
Св. 10 до 20 «
0,45
» 20 » 30 «
0,60
» 30 » 40 «
0,70
» 40 » 50 «
0,80
5.1.12. Переход торца венчика горловины к внутренней полости должен быть закруглен согласно рисунку изделия. 5.1.13. Высота швов на шейке горловины, корпусе и дне изделий не должна превышать 0,3 мм. На боковой поверхности и торце венчика горловины изделий высота швов не должна превышать 0,2 мм. 5.1.14. Изделия должны быть термически стойкими при перепаде температуры не менее 40 °C. 5.1.15. При контроле остаточных напряжений удельная разность хода лучей в полярископе-поляриметре не должна превышать 100 нм/см. При контроле остаточных напряжений с использованием полярископа в изделиях не допускаются цвета: оранжевый, светло-желтый, желтый, белый, голубовато-зеленый, зеленый, желто-зеленый. 5.1.16. Изделия должны быть химически устойчивыми. Выщелачивание внутренней поверхности изделий при их испытании на химическую устойчивость не должно превышать значений, указанных в таблице 3.
Таблица 3
Номинальная вместимость изделий, см3
Объем раствора серной кислоты моль/дм3, израсходованной на титрование 100 см3 испытуемого раствора, см3 Количество в 100 см3 испытуемого раствора, мг От 5 до 10 включ.
5,0
3,1
Св. 10 до 20 включ.
4,0
2,48
Св. 20 до 50 включ.
3,0
1,86
Св. 50 до 100 включ.
2,5
1,55
Св. 100 до 200 включ.
2,0
1,24
Св. 200 до 500 включ.
1,8
1,12
Св. 500
1,2
0,75
5.1.17. На наружную поверхность изделий допускается нанесение защитно-упрочняющих покрытий, разрешенных Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей. 5.2. Маркировка
5.2.1. Маркировка изделий должна содержать: — товарный знак предприятия-изготовителя; — номинальную вместимость, см3.
5.2.2. Маркировка должна быть четкой и легко читаемой. Допускается наносить дополнительную информацию о номере формы. 5.2.3. Маркировку наносят в виде оттиска на дно или нижнюю часть корпуса изделий. Допускается наносить маркировку частично на дно и частично на нижнюю часть корпуса изделий. При нанесении маркировки на нижнюю часть корпуса изделий толщина маркировочных знаков не должна выходить за размеры наружного диаметра корпуса, а при нанесении маркировки на дно она не должна быть расположена ниже кольцевой поверхности дна. Размеры маркировочных знаков — по ГОСТ 30288. 5.2.4. В транспортную тару вкладывают упаковочный лист, содержащий: — наименование предприятия-изготовителя и/или товарный знак; — условное обозначение изделия;
— марку стекла;
— количество единиц изделий в упаковке; — дату изготовления;
— штамп технического контроля.
5.2.5. Транспортная маркировка грузов — по ГОСТ 14192 с нанесением манипуляционного знака «Хрупкое. Осторожно». Допускается наносить дополнительно другие манипуляционные знаки по ГОСТ 14192 с учетом типа упаковки, если они предусмотрены в договоре (контракте) на поставку.
6. УПАКОВКА
6.1. Упаковка конкретных видов банок и флаконов должна обеспечивать сохранность изделий, защиту от загрязнений и атмосферных осадков при транспортировании и хранении. Изготовитель и потребитель согласовывают типы упаковки и оговаривают требования к упаковке в документах по стандартизации на конкретные виды изделий и контракте (договоре) на поставку.
7. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
7.1. Изделия принимают партиями. Партией считают количество изделий одного вида, типоразмера, одной марки стекла, оформленное одним документом с указанием: — наименования страны-изготовителя;
— наименования предприятия-изготовителя и/или его товарного знака; — юридического или фактического адреса предприятия-изготовителя; — наименования и условного обозначения изделия; — обозначения настоящего стандарта;
— марки стекла;
— количества изделий в партии;
— даты отправки.
7.2. В каждой партии изделий визуально контролируют сохранность упаковки и правильность транспортной маркировки. 7.3. Контроль качества изделий на соответствие требованиям настоящего стандарта проводят по классам несоответствия согласно таблице 4.
Таблица 4
Класс несоответствия
Контролируемый показатель качества
Номер подраздела, пункта
Приемлемый уровень качества AQL, %
А
Критические дефекты
5.1.3.1
0,25
Б
Значительные дефекты (показатели качества, термическая стойкость, отжиг) 5.1.3.2; 5.1.3.4; 5.1.14; 5.1.15
1,0
В
Значительные дефекты (отклонение от формы, параметры и размеры) 4.4; 4.5; 5.1.6 — 5.1.11
2,5
Г
Незначительные дефекты по безопасности (показатели внешнего вида) 5.1.3.3; 5.1.3.5 — 5.1.3.9; 5.1.4; 5.1.5; 5.1.12; 5.1.13 4,0
7.4. Для контроля качества изделий методом выборочного контроля от партии отбирают выборки по ГОСТ Р ИСО 2859-1 в объемах, указанных в таблице 5.
Таблица 5
В штуках
Объем партии
Код объема выборки
Выборка
Объем выборки
Общий объем выборки
От 501 до 1200 включ.
J
Первая
50
50
Вторая
50
100
От 1201 до 3200 включ.
K
Первая
80
80
Вторая
80
160
От 3201 до 10000 включ.
L
Первая
125
125
Вторая
125
250
От 10001 до 35000 включ.
M
Первая
200
200
Вторая
200
400
От 35001 до 150000 включ.
N
Первая
315
315
Вторая
315
630
Изделия со сколами и бой в выборку для контроля не включают. 7.5. Контроль качества изделий на соответствие требованиям настоящего стандарта проводят по двухступенчатому нормальному плану выборочного контроля в соответствии с таблицей 6.
Таблица 6
Код объема выборки
Выборка
Классы несоответствия качества
А
Б
В
Г
Ac
Re
Ac
Re
Ac
Re
Ac
Re
J
Первая
0
1
0
3
2
5
3
6
Вторая
—
—
3
4
6
7
9
10
K
Первая
0
2
1
3
3
6
5
9
Вторая
1
2
4
5
9
10
12
3
L
Первая
0
2
2
5
5
9
7
11
Вторая
1
2
6
7
12
13
18
19
M
Первая
0
3
3
6
7
11
11
16
Вторая
3
4
9
10
18
19
26
27
N
Первая
1
3
5
9
11
16
11
16
Вторая
4
5
12
13
26
27
26
27
Примечание. В настоящей таблице применимы следующие обозначения: Ac — приемочное число, Re — браковочное число.
По показателям качества классов несоответствия А и Г контролируют всю выборку. Контроль термической стойкости (5.1.14) проводят на отдельной выборке, которую допускается отбирать в объеме по коду J и классу несоответствия Б. 7.6. Для контроля химической устойчивости (5.1.16) отбирают следующее количество изделий от выборки: 20 шт. — вместимостью от 5 до 10 см3 включительно, 10 шт. — вместимостью свыше 10 до 100 см3 включительно, 3 шт. — вместимостью свыше 100 см3. 7.7. По результатам контроля первой выборки партию считают приемлемой, если количество несоответствующих изделий в выборке меньше или равно Ac, и неприемлемой, если количество несоответствующих изделий в выборке превышает или равно Re. Если количество несоответствующих изделий первой выборки находится в интервале между Ac и Re, необходимо контролировать вторую выборку в объеме, заданном планом контроля. 7.8. Количество несоответствующих изделий в первой и второй выборках суммируют. Если суммарное количество несоответствующих изделий менее Ac второй выборки или равно ему, то партию считают приемлемой. Если суммарное количество несоответствующих изделий превышает Re второй выборки или равно ему, то партию считают неприемлемой. 7.9. При несоответствии качества изделий требованиям 5.1.16 партию изделий считают неприемлемой, независимо от результатов контроля по остальным показателям. 7.10. На предприятии изготовитель проводит текущий контроль качества по технической документации предприятия.
8. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ
8.1. Внешний вид, цвет, качество стекла и выработки изделий контролируют визуально. Допускается согласовывать с потребителем визуально контролируемые образцы дефектов по 5.1.3.5; 5.1.3.7; 5.1.4. 8.2. Размеры пузырей, инородных включений и длину посечек контролируют измерительной лупой по ГОСТ 25706 или другими средствами измерений, обеспечивающими заданную точность. 8.3. Размеры изделия контролируют по ГОСТ 24980. 8.4. Параллельность плоскости торца венчика горловины плоскости дна изделия контролируют по ГОСТ 24980. 8.5. Перпендикулярность вертикальной оси изделия плоскости дна контролируют по ГОСТ 24980. 8.6. Контроль овальности корпуса изделия и венчика горловины 8.6.1. Средства контроля
Штангенциркуль по ГОСТ 166 или другие средства измерения с погрешностью не более 0,05 мм — для диаметра венчика горловины и не более 0,1 мм — для диаметра корпуса. 8.6.2. Проведение контроля
Измеряют диаметр корпуса или венчика горловины изделия в нескольких местах в одной плоскости, перпендикулярной к его оси. Разность между наибольшим и наименьшим значениями диаметра соответствует овальности. 8.7. Толщину стенок и дна изделия контролируют по ГОСТ 24980. 8.8. Высоту швов на изделии контролируют по ГОСТ 24980. 8.9. Полную вместимость изделия контролируют по ГОСТ 24980. 8.10. Отжиг изделия и свиль контролируют по ГОСТ 31292. Метод B — арбитражный. 8.11. Термостойкость изделий контролируют по ГОСТ 13903. 8.12. Неотмываемые загрязнения контролируют с использованием ерша или ватно-марлевого тампона, применяя 0,5%-ный раствор моющего средства температурой (60 +/- 5) °C. 8.13. Химическую устойчивость изделий контролируют в соответствии с Приложением А.
9. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
9.1. Изделия транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозки грузов, действующими на каждом виде транспорта. 9.2. Хранение и транспортирование изделий по условиям хранения 6 (ОЖ2) по ГОСТ 15150 — не более 1 года. Допускается хранение изделий, упакованных в полиэтиленовую термоусадочную пленку, по условиям хранения 8 (ОЖ3) по ГОСТ 15150 не более 6 месяцев.
10. УСЛОВИЯ ЭКСПЛУАТАЦИИ
10.1. Стеклянные изделия в холодное время года перед использованием должны быть выдержаны в помещении при температуре не ниже 15 °C до тех пор, пока они не нагреются до температуры этого помещения. 10.2. Стеклянная тара на всех участках технологического процесса ее использования не должна подвергаться перепадам температуры, превышающим установленные для нее значения показателей в настоящем стандарте. 10.3. На всех участках перемещения стеклянной тары в процессе эксплуатации должны быть исключены удары, вызывающие ее повреждение и разрушение.
Приложение А
(обязательное)
КОНТРОЛЬ ХИМИЧЕСКОЙ УСТОЙЧИВОСТИ СТЕКЛЯННЫХ ИЗДЕЛИЙ
А.1. Средства контроля и/или испытания, реактивы Автоклав с паровым стерилизатором, обеспечивающим давление в стерилизационной камере 0,2 МПа (2 кгс/см2. pH-метр лабораторный с погрешностью измерения не более +/- 0,05 pH. Термометр ТЛ-20 с максимальной температурой измерения (100 +/- 1) °C. Колбы конические вместимостью 100, 250, 500 см3 по ГОСТ 25336. Колбы мерные вместимостью 100, 250, 1000 см3 по ГОСТ 1770. Пипетки вместимостью 25, 50, 100 см3 по ГОСТ 29169. Бюретки типов 1-1-1-2-0,02; 1-1-1-5-0,02; 1-1-1-50-0,1 по ГОСТ 29251. Стакан вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336. Бикс или кассета из проволочной сетки, фольга алюминиевая по ГОСТ 618. Бумага пергаментная по ГОСТ 1341.
Нитки суровые по ГОСТ 14961.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709, свежеперегнанная, pH (6,0 +/- 0,2). Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор концентрации моль/дм3. Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации c (HCl) = 0,01 моль/дм3. Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор концентрации c (NaOH) = 0,01 моль/дм3. Индикатор метиловый красный, спиртовой раствор с массовой долей 0,2%, приготовленный по ГОСТ 4919.1. Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ Р 51652. А.2. Порядок отбора и подготовки образцов изделий для контроля А.2.1. Количество образцов изделий, отобранных для испытаний на химическую устойчивость, должно соответствовать требованиям 7.6 настоящего стандарта. А.2.2. Для контроля отбирают образцы изделий, которые не подвергались другим видам испытаний. А.2.3. Перед проведением контроля образцы выдерживают не менее 30 мин в помещении при температуре не ниже 18 °C. А.2.4. Отобранные образцы промывают два раза горячей водой температурой не ниже 60 °C, затем моют два раза холодной дистиллированной водой с pH (6,0 +/- 0,2) и температурой (20 +/- 5) °C, при этом образцы заполняют на одну третью часть и встряхивают их по пять раз. А.2.5. Контроль проводят в помещении без сквозняков при температуре воздуха не ниже 18 °C. А.3. Порядок проведения контроля
А.3.1. Условия проведения контроля должны быть одинаковыми для всех образцов изделий одной выборки. А.3.2. Подготовленные к контролю образцы заполняют дистиллированной водой для испытаний с pH (6,0 +/- 0,2), плотно закрывают инертным материалом (пергаментной бумагой или алюминиевой фольгой), обвязывают суровыми нитками и помещают в кассеты или биксы. Инертный материал и суровые нитки должны быть предварительно прокипячены в дистиллированной воде в течение 5 — 10 мин и промыты дистиллированной водой два раза. А.3.3. Кассеты или биксы с образцами изделий помещают в стерилизационную камеру предварительно нагретого автоклава и закрывают его плотно крышкой. Затем создают избыточное давление, равное 0,015 МПа (0,15 кгс/см2), открывают кран для выпуска воздуха и в течение 10 мин вытесняют воздух из стерилизационной камеры. А.3.4. Далее кран закрывают и регулируют подачу пара таким образом, чтобы избыточное давление 0,1 — 0,11 МПа (1,0 — 1,1 кгс/см2) в стерилизационной камере, соответствующее температуре (120 +/- 1) °C, было достигнуто за (10 +/- 2) мин. При этой температуре образцы изделий выдерживают 60 мин, выпуская из стерилизационной камеры через каждые 10 мин воздух в течение 10 — 15 с. А.3.5. После окончания времени выдержки образцов изделий снижают давление до атмосферного в стерилизационной камере автоклава в течение (10 +/- 2) мин и затем извлекают образцы из автоклава. В течение 60 мин образцы изделий охлаждают до температуры (22 +/- 5) °C. После охлаждения образцов проводят методом титрования параллельные анализы содержащихся в них растворов следующим образом: — раствором серной кислоты концентрации моль/дм3 титруют контрольную пробу дистиллированной воды до изменения окраски метилового красного из желтой в оранжевую; — для изделий вместимостью до 100 см3 включительно содержимое всех образцов, подвергнутых испытанию, выливают в одну коническую колбу и перемешивают. Для проведения одного анализа отбирают пипеткой 25 см3 раствора и помещают в коническую колбу вместимостью 100 см3, прибавляют две капли индикатора метилового красного и титруют раствором серной кислоты концентрации моль/дм3 до изменения окраски из желтой в оранжевую. Выполняют не менее двух титрований, фиксируя каждый раз объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование каждого анализа; — для изделий вместимостью свыше 100 см3 содержимое каждого образца выливают в коническую колбу вместимостью 250 см3, отбирают пипеткой 100 см3 испытуемого раствора и титруют, как указано выше. Выполняют не менее двух параллельных титрований. При титровании испытуемых растворов переход окраски из желтой в оранжевую сравнивают с контрольной пробой. А.4. Обработка результатов контроля
А.4.1. Результаты контроля на химическую устойчивость выражают двумя способами: А.4.1.1. Рассчитывают объем раствора серной кислоты концентрации 0,01 моль/дм3. , см3, на титрование 100 см3 испытуемого раствора по формуле
, (А.1)
где V — объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование испытуемого раствора, см3;
- объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование контрольной пробы дистиллированной воды, см3; n — показатель аликвотности
n = 100/a, (А.2)
где a — количество испытуемого раствора, взятого для титрования, см3. А.4.1.2. Рассчитывают количество оксида натрия M, мг, на 100 см3 испытуемого раствора по формуле
, (А.3)
где 0,62 — количество оксида натрия, эквивалентное 1 см3 0,01 моль/дм3 раствора серной кислоты, мг. А.4.2. Результаты химической устойчивости параллельных анализов должны соответствовать требованиям таблицы 3 настоящего стандарта. А.5. Оформление результатов контроля
Результаты контроля записывают в журнал (протокол), который должен содержать: — дату и место отбора образцов;
— характеристику контролируемых изделий (наименование, вместимость, цвет); — количество проверенных образцов;
— объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование испытуемого раствора каждого образца; — объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование 100 см3 испытуемого раствора; — количество оксида натрия в 100 см3 испытуемого раствора каждого образца; — подпись лица, проводившего испытания.
