МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ПРИКАЗ
23 декабря 1967 г.
N 980
В соответствии с представлением Управления по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники и Главного управления лечебно-профилактической помощи детям и матерям приказываю: 1. Внедрить в практику лечебно-профилактических учреждений экспресс-метод определения резус-фактора, одобренный Комитетом по новой медицинской технике. 2. Министрам здравоохранения союзных и автономных республик, заведующим краевыми и областными отделами здравоохранения: а) организовать силами и средствами службы крови заготовку универсальной [AB(IV) группы крови] сыворотки антирезус для приготовления тестового реактива по определению резус-фактора на плоскости; б) обязать директоров республиканских институтов гематологии и переливания крови, главных врачей республиканских, краевых, областных и городских станций переливания крови, а также заведующих крупными (категорированными) отделениями переливания крови: — обеспечить бесперебойное снабжение лечебно-профилактических учреждений на обслуживаемой территории универсальной сывороткой для определения резус-фактора на плоскости, руководствуясь инструкцией по приготовлению сывороток для определения резус-фактора на плоскости без подогрева (приложение N 1); — организовать инструктаж врачей лечебно-профилактических учреждений по применению экспресс-метода определения резус-фактора на плоскости и установить контроль за использованием противорезусных сывороток; в) обязать главных врачей лечебно-профилактических учреждений в течение 1968 года внедрить экспресс-метод определения резус-фактора на плоскости согласно инструкции по применению экспресс-метода (приложение N 2).
Б.ПЕТРОВСКИЙ
Приложение N 1
к приказу Министра
здравоохранения СССР
от 23 декабря 1967 г. N 980
ИНСТРУКЦИЯ <>
ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ СЫВОРОТОК АНТИ-РЕЗУС ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ НА ПЛОСКОСТИ БЕЗ ПОДОГРЕВА
<> Разработана в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.
Специальное оснащение и реактивы:
- Сыворотки анти-резус группы AB(IV) с титром неполных антител не ниже 1:32.
- Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки AB(IV).
- Образцы свежей резус-положительной и резус-отрицательной крови, взятой на гепарине.
- Альбумин, полученный из плазмы человека, или полиглюкин.
- Гепарин «Гедеон Рихтер».
- Физиологический раствор.
- Центрифужные пробирки.
- Тарелки.
- Стеклянные палочки. Определение резус-фактора на плоскости без подогрева достигается путем добавления к сыворотке анти-резус альбумина или полиглюкина, в присутствии которых сыворотки с неполными антителами приобретают способность агглютинировать резус-положительные эритроциты.
- ПРИГОТОВЛЕНИЕ ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИ-РЕЗУС С ПРИМЕНЕНИЕМ АЛЬБУМИНА
Определение оптимальных соотношений сыворотки анти-резус и раствора альбумина. 1. В штатив устанавливают 9 пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю 20% раствора альбумина в физиологическом растворе, во вторую — 2 капли, в третью — 3 капли и т.д. 2. В каждую пробирку добавляют по одной капле сыворотки анти-резус и содержимое пробирок тщательно перемешивают. 3. Из каждой пробирки по одной капле смеси сыворотки с альбумином переносят на тарелку, располагая в два ряда. 4. В капли верхнего ряда той же пипеткой вносят по одной капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на гепарине (1 капля гепарина на 5 мл крови). В нижний ряд соответственно вносят по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь перемешивают стеклянной палочкой, затем тарелку периодически покачивают в течение 3 минут. 5. В каждую каплю верхнего и нижнего ряда по истечении 3 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором. Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью.
Трактовка результатов
Четкая агглютинация в капле верхнего ряда и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на оптимальное соотношение альбумина и используемой сыворотки анти-резус. Выбранные соотношения применяют для приготовления тестовой сыворотки анти-резус в необходимых объемах. К приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1-2 капли на 10 мл сыворотки. Примечание: 1. На 100 мл альбумина добавляют 2 гр. борной кислоты. 2. Концентрация исходного раствора альбумина может варьировать: а) если агглютинация резус-положительных эритроцитов не достаточно сильно выражена или медленно появляется (к 5 мин.), то концентрацию альбумина в растворе следует увеличить до 25-30%; б) если в капле, где должна быть отрицательная реакция, имеется неспецифическая агглютинация, то концентрацию альбумина в растворе следует понизить до 15%. Приготовленную тестовую сыворотку анти-резус необходимо тщательно проверить по нескольким образцам стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.
II. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИ-РЕЗУС С ПРИМЕНЕНИЕМ ПОЛИГЛЮКИНА
Ввиду того, что сыворотки анти-резус в комбинации с полиглюкином обладают способностью неспецифически агглютинировать эритроциты, их необходимо перед добавлением полиглюкина разводить специально подобранными изогемагглютинирующими сыворотками AB(IV). 1. Выбор изогемагглютинирующей сыворотки для разведения сыворотки анти-резус: а) в штатив помещают 5-10 пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят 2 капли изогемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV) одной серии, во вторую — 2 капли другой серии и т.д. б) в каждую пробирку добавляют по 1 капле 18% раствора полиглюкина. Содержимое пробирок тщательно перемешивают; в) из каждой пробирки переносят на тарелку по 1 капле смеси сыворотки с полигклюкином и рядом помещают по одной капле свежей крови, взятой на гепарине; г) капли перемешивают стеклянной палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 5 минут, после чего выбирают сыворотку, которая в смеси с полиглюкином не вызывает неспецифической агглютинации эритроцитов в течение 3-4 минут. 2. Определение оптимального разведения сыворотки анти-резус, отобранной изогемагглютинирующей сывороткой AB(IV): а) в штатив устанавливают 9 пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю отобранной изогемагглютинирующей сыворотки, во вторую — 2, в третью — 3 и т.д.; б) в каждую пробирку добавляют по одной капле сыворотки анти-резус и содержимое пробирок тщательно перемешивают; в) начиная со второй пробирки, отсасывают содержимое с таким расчетом, чтобы в каждой из них осталось по 2 капли приготовленной смеси сывороток; г) в каждую пробирку добавляют по 1 капле 18% раствора полиглюкина и перемешивают его с сывороткой. д) из каждой пробирки по одной капле приготовленной смеси сыворотки и полиглюкина переносят на тарелку, располагая в два ряда; е) в капли верхнего ряда вносят по 1 капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на гепарине. В нижний ряд соответственно вносят по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь перемешивают стеклянной палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 3 минут; ж) в каждую каплю верхнего и нижнего ряда по истечении 3-4 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором. Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью. Четкая агглютинация в капле верхнего ряда и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на оптимальное разведение сыворотки анти-резус изогемагглютинирующей сывороткой. Выбранное соотношение используют для приготовления тестовой сыворотки анти-резус в необходимых объемах. К приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1-2 капли на 10 мл сыворотки. 3. Освобождение тестовой сыворотки анти-резус от хлопьев, выпадающих при добавлении полиглюкина: а) тестовую сыворотку оставляют в холодильнике на 2 суток при температуре 4-8 град. C. б) выпавшие в тестовой сыворотке хлопья отделяют центрифугированием при 3000-5000 об/мин. в течение 15-20 мин.; в) прозрачную часть сыворотки отсасывают и пропускают через бумажный фильтр; г) приготовленную тестовую сыворотку проверяют по нескольким образцам стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. Примечание. 1. Необходимая концентрация полиглюкина достигается выпариванием 6% раствора до 1/3 его первоначального объема. На 100 мл приготовленного 18% полиглюкина добавляют 4 г борной кислоты. 2. Соотношение полиглюкина и сыворотки может варьировать. Если агглютинация резус-положительных эритроцитов недостаточно сильная или медленно появляется (к 5 мин.), следует на 5 объемов сыворотки анти-резус добавить 3 объема 18% полиглюкина.
III. ПРИГОТОВЛЕНИЕ КОНТРОЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ
При каждом определении резус-принадлежности крови необходимо параллельно проводить контрольное исследование на специфичность. Контрольную сыворотку готовят из изогемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV) с добавлением к ней альбумина или полиглюкина в тех же соотношениях, которые были использованы для приготовления тестовой сыворотки анти-резус. При применении полиглюкина контрольную сыворотку готовят из изогемагглютинирующей сыворотки, которую использовали для разведения сыворотки анти-резус. Агглютинация эритроцитов в капле контрольной сыворотки должна отсутствовать во всех случаях,
IV. ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ
- При определении резус-фактора тестовыми сыворотками анти-резус, приготовленными в сочетании с альбумином или полиглюкином, необходимо одновременно проводить контрольное исследование на специфичность реакции.
- В капле контрольной сыворотки агглютинация эритроцитов должна отсутствовать. Если же в контрольной капле имеется агглютинация эритроцитов, то это следует отнести за счет неспецифичности исследуемого образца крови, что наблюдается у некоторых больных и может привести к неправильной трактовке результатов. В таких случаях заключение о резус-принадлежности крови не может быть выдано, и больным переливают резус-отрицательную кровь.
- Определять резус-фактор можно при температуре 15-35 град. C.
- Срок годности тестовых и контрольных сывороток от 3 до 6 месяцев при хранении в холодильнике (4-6 град. C).
- Тестовые сыворотки контролируются не реже 2 раз в месяц лабораторией, где они изготовлены.
Начальник Главного управления
лечебно-профилактической
помощи детям и матерям
Л.СКОРНЯКОВА
Приложение N 2
к приказу Министра
здравоохранения СССР
от 23 декабря 1967 г. N 980
ИНСТРУКЦИЯ <>
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ НА ПЛОСКОСТИ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ С ПОМОЩЬЮ СЫВОРОТОК, ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА АЛЬБУМИНЕ ИЛИ ПОЛИГЛЮКИНЕ
<> Разработана в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.
Оснащение: сыворотка анти-резус универсальная — AB(IV), контрольная сыворотка, физиологический раствор, тарелки, стеклянные палочки. Кровь для реакции берут из пальца непосредственно перед определением. Можно использовать также свежие (не более 2-х дневного хранения при +4 град. C) эритроциты, взятые со дна пробирки после центрифугирования или отстаивания от плазмы с консервантом. Техника определения: на тарелку слева наносят одну каплю сыворотки анти-резус и справа — одну каплю контрольной сыворотки. Рядом с этими каплями помещают по одной капле крови в количестве 1/2 от объема взятой сыворотки. Стеклянной палочкой перемешивают кровь с сыворотками и размазывают на тарелке до получения тонкого слоя. После этого тарелку периодически покачивают. Через 3-4 мин. в обе капли необходимо добавить по одной капле физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агглютинации и продолжать наблюдение при покачивании тарелки до истечения 5 мин., после чего учитывают результат. Оценка результатов: При положительном результате агглютинация наблюдается только в одной капле — слева, с сывороткой анти-резус. При отрицательном результате агглютинация отсутствует в обоих каплях, и они остаются равномерно окрашенными (см. рис. стр. 8 — не приводится). Агрегацию эритроцитов в зоне подсыхания по периферии капли не учитывают!
Начальник Главного управления
лечебно-профилактической помощи
детям и матерям
Л.СКОРНЯКОВА
