Документ введен в действие с 5 февраля 2009 года. Текст документа
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
5 февраля 2009 г.
Дата введения:
с момента утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ СУДАН I, СУДАН II, СУДАН III, СУДАН IV И PARA RED В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2483-09
- Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В.А.Тутельян, к.т.н. В.Г.Байков, к.х.н. В.В.Бессонов, Ю.В.Ведищева, к.ф.н. О.И.Передеряев, Е.П.Хромченкова).
- Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 3 от 25.12.2008).
- Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 05.02.2009.
- Введены в действие с момента утверждения.
- Введены впервые.
Введение
Красители Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) (далее — Судан I-IV и Para Red) в сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов, и относятся к непищевым красителям. Необходимость определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) обусловлено их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.
- Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных добавках к пище (БАД) и других пищевых продуктов (в состав которых входят специи и пряности). 1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке. 1.3. Присутствие непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.
2. Краткая характеристика красителей Cудан I, Cудан II, Cудан III, Cудан IV и Para Red (Пара Ред)
Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются синтетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющих интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведена на рис. 1 (не приводится).
R1 R2 R3 Судан I H H H Судан II H CH3 H Судан III H H Ph-N=N- Судан IV CH3 H o-CH3-Ph-N=N- Para Red (Пара Ред) H H NO2
Рис. 1 Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред)
Рисунок не приводится.
3. Принцип метода определения красителей Судан I-IV и Para Red
Обнаружение и определение содержания непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) проводится методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектированием (при длине волны 504 нм). В качестве арбитражного метода используют метод ВЭЖХ с масс-детектированием (по молекулярным и дочерним ионам, — см. таблицу 1).
Таблица 1
Параметры масс-детектирования представлены
Наименование Молекулярные Энергия Основные дочерние ионы, m/z разрушения ионы, m/z + Para Red 294 (M+H ) 0,9 277 156 - + Судан-I 249 (M+H ) 1,0 232 156 - + Судан-II 277 (M+H ) 1,2 260 156 120 + Судан-III 352 (M+H ) 1,2 197 336 156 + Судан-IV 382 (M+H ) 1,2 224 364 156
4. Средства измерения, материалы и реактивы
- Высокоэффективный жидкостной хроматограф.
- Хроматографическая колонка C18, 5мю, 4,6×250 мм.
- Ультразвуковая баня.
- Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью + 0,0001 г.
- Дистиллятор.
- Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы.
- pH-метр лабораторный.
- Центрифуга лабораторная ОПН-8 8000 об./мин.
- Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
- Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-10 или 2-2-2-10 или 3-2-2-10 по ГОСТ 29227.
- Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2 по ГОСТ 1770-74.
- Вода дистиллированная.
- Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.
- Тетрагидрофуран для жидкостной хроматографии.
- Трифторуксусная кислота квалификации «ОСЧ».
- Ацетон квалификации «ХЧ».5. Определение содержания Суданов I-IV и Para Red методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
5.1. Подготовка стандартных растворов
Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95% этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этого объем доводят до метки 95% этанолом (основной раствор). В мерную колбу на 50 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95% этанолом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.
5.2. Подготовка проб для анализа
Около 1,0 г (точная навеска) образца помещают во флакон, объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 минут. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6000 об./мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95% добавленного количества каждого из исследуемых красителей.
5.3. Приготовление подвижной фазы
При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до pH = 2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2-8 град. C не более 3 месяцев.
5.4. Проведение анализа ВЭЖХ
Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя, УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов. Идентификация красителей Судан I-IV и Para Red только по времени удерживания не будет являться достоверной, ввиду сложного матрикса исследуемых объектов, и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хроматографическим поведением.
5.5. Условия хроматографического анализа
Колонка 5u C18(2), 5мю, 4,6×250 мм
Приготовление подвижной фазы: бидистиллированную воду доводят трифторуксусной кислотой до pH 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды). Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 (Б). Оптимальным является градиентное элюирование смесью ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 (Б): 0 мин. — 80% (А), 10 мин. — 98%(А) (градиент линейный), 20 мин. — 98%(А), 21 мин. — 80%(А). Регенерация колонки занимает не менее 9 мин. Общее время анализа составляет 30 минут. В случае использования только диодно-матричного детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 допускается использование бидистиллированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью ацетонитрила — бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90-95% (в зависимости от параметров колонки). Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон. Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 куб. см/мин. Детектирование: лямбда = 504 нм.
Объем вводимой пробы 5 мкл.
Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведены в таблице 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red представлен на рисунке 2 (не приводится). Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается, поскольку они являются не пищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан 1-4 и Пара Ред приведены в Таблице 2.
Таблица 2
Пределы обнаружения непищевых красителей Судан I-IV и Пара Ред в специях, пряностях, продуктах их переработки и БАД к пище
N Наименование Предел обнаружения на Предел обнаружения
красителя диодной матрице, на масс-детекторе, мг/кг мг/кг 1. Para Red 0,5 0,5 2. Судан-I 0,5 0,5 3. Судан-II 0,5 0,5 4. Судан-III 0,5 0,5 5. Судан-IV 0,5 0,5
Количественное определение <*>
<*> Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается.
Количественное определение проводят абсолютной градуировкой. Содержание красителей Судан I-IV и Para Red проводят по следующей формуле:
S2 x C1 x V C, мг/кг = -----------, S1 x m
где:
C, мг/кг — содержание красителя, мг/кг. C1 — концентрация красителя в стандартном растворе, мкг/мл. S1 — площадь пика красителя в стандартном растворе. S2 — площадь пика красителя в определяемом образце. V — объем раствора образца, мл.
m — масса навески, г.
Таблица 3
Основные метрологические показатели
N Наименование Граница относительной Стандартное отклонение
погрешности (+/- дельта) повторяемости (сигма ) % в % при Р = 0,95 r 1. Para Red 2,1 3,2 2. Судан-I 3,6 3,5 3. Судан-II 2,8 3,8 4. Судан-III 3,3 4,9 5. Судан-IV 3,9 4,3
Таблица 4
Параметры определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red
N Наименование Время удерживания, мин. 1. Para Red 6,2 2. Судан-I 7,5 3. Судан-II 10,9 4. Судан-III 12,9 5. Судан-IV 15,5
Рис. 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red
Рисунок не приводится.
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ
ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
ПИСЬМО
5 февраля 2009 г.
N 01И-51/09
О ПРИОСТАНОВЛЕНИИ ОБРАЩЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА
Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития на основании информации, поступившей от Территориального Управления Росздравнадзора по Курганской области о выявлении неблагоприятных побочных реакций при применении лекарственного препарата «Милдронат, раствор для инъекций 0,5 г (ампулы) 5 мл N 10» серии 260808, производства ЗАО «Фарм Фирма Сотекс», Россия, приостанавливает обращение указанной серии лекарственного средства на территории Российской Федерации. Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития предлагает субъектам обращения лекарственных средств провести проверку наличия указанной серии лекарственного средства, о результатах которой проинформировать территориальный орган Росздравнадзора. Территориальным органам Росздравнадзора провести мероприятия в соответствии с Порядком, предусмотренным письмом Росздравнадзора от 08.02.2006 N 01И-92/06 «Об организации работы территориальных управлений Росздравнадзора с информацией о недоброкачественных и фальсифицированных лекарственных средствах».
Руководитель
Н.В.ЮРГЕЛЬ
