Общая фармакопейная статья “Радиофармацевтические лекарственные препараты. ОФС.1.11.0001.15” (“Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II”) Общая фармакопейная статья “Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы. ОФС.1.8.2.0009.15” (“Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II”) Общая фармакопейная статья “Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в лекарственных препаратах из сыворотки крови человека и животных. ОФС.1.8.2.0008.15” (“Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II”) Общая фармакопейная статья “Определение антикомплементарной активности лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения. ОФС.1.8.2.0007.15” (“Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II”) Общая фармакопейная статья “Определение молекулярных параметров иммуноглобулинов методом ВЭЖХ. ОФС.1.8.2.0006.15” (“Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II”) Приказ Минздрава МО от 09.12.2014 N 1780 (ред. от 17.06.2015) <Об утверждении Положения об Общественном совете по проведению независимой оценки качества оказания услуг медицинскими организациями, расположенными на территории Московской области>

new_adm

8 лет назад

В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

КонсультантПлюс: примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Радиофармацевтические лекарственные препараты ОФС.1.11.0001.15
Взамен ст. ГФ XI, вып. 1,
ГФ XII, ч.1, ОФС 42-0073-07

Радиофармацевтические лекарственные препараты применяются для радионуклидной диагностики и лечения различных заболеваний с использованием методов ядерной медицины. Радиофармацевтические лекарственные препараты (РФЛП) предоставляются для использования учреждениям, располагающим необходимыми условиями для правильной и безопасной работы с ними. РФЛП диагностического назначения содержат гамма- или позитрон-излучающий радионуклид, являющийся информационным носителем, излучение которого, проникающее за пределы организма, регистрируется внешними детекторами. В РФЛП терапевтического назначения радионуклид (бета-, альфа-излучатель, радионуклид, распад которого сопровождается электронным захватом или внутренней конверсией электронов) является основным лечебным началом, позволяющим локализовать лечебную дозу излучения непосредственно в органе-мишени и, соответственно, обеспечить минимальное облучение здоровых органов и тканей. В большинстве случаев химические соединения, входящие в состав диагностических радиофармацевтических препаратов, используются в количествах, не вызывающих фармакологического действия. Объем производства РФЛП крайне мал по сравнению с другими лекарственными средствами. Достаточно часто количество упаковок в серии составляет 3-5 единиц. Сроки годности препаратов, в зависимости от периода полураспада соответствующих радионуклидов, составляют от нескольких минут до нескольких суток. Поэтому в контроле качества РФЛП должны преимущественно использоваться экспресс-методы, а также методы, обеспечивающие возможность надежного определения показателей качества при минимальных объемах проб.

Термины и определения

Активность радиоактивного вещества (Activity of radioactive material) – число ядерных превращений (N), происходящих в данном количестве вещества в короткий промежуток времени (t), отнесенное к этому промежутку времени. Часто это называют абсолютной активностью. Синоним: скорость распада. Обозначается:

А = -dN/dt

Активность молярная (Activity, molar) – для определенного изотопа: активность соединения (A), отнесенная к его количеству в молях (n). Обозначается: Am = A/n. Активность объемная (Activity, concentration, Volume activity) -отношение активности (A) радионуклида в препарате (образце) к объему (V) препарата (образца). Обозначается: Av = A/V. Активность удельная (Activity, specific) – для определенного изотопа или смеси изотопов: активность вещества (A), отнесенная к его массе (m). Обозначается: A = A/m. Вспомогательное вещество – вещество неорганического или органического происхождения, используемое в процессе производства, изготовления лекарственных препаратов для придания им необходимых физико-химических свойств. Генератор радионуклидный (Radionuclide generator) – система, содержащая фиксированный первичный радионуклид (материнский), как правило, с более длительным периодом полураспада по отношению к дочернему, в результате распада которого возникают вторичные (дочерние) радионуклиды, извлекаемые посредством элюирования или другим способом и вводимые в состав радиофармацевтического лекарственного препарата. Изотопы (Isotopes) – нуклиды, имеющие одинаковый порядковый номер, но различную атомную массу. Изотопный индикатор (Isotope tracer) – индикатор, который отличается только изотопным составом от интересующего вещества. Набор для приготовления радиофармацевтического лекарственного препарата (Kit for radiophannaceutical preparation) – реагенты, которые должны быть соединены или смешаны с радионуклидом для получения радиофармацевтического лекарственного препарата, как правило, перед его применением. Носитель (Carrier) – вещество, присутствующее в заметных количествах, которое, совместно с изотопным индикатором определенного вещества, извлекает его в химических и физических процессах или предотвращает участие изотопного индикатора в неспецифичных процессах из-за его низкой концентрации. Носитель, изотопный (Carrier, isotope) – носитель, который отличается только изотопным составом от тех веществ, в следовых количествах, которые он должен извлекать с собой. Нуклид (Nuclide) – разновидность атома, характеризующаяся количеством протонов и нейтронов в его ядре (и, следовательно, его атомным номером Z и атомной массой A), а также его энергетическим состоянием. Период полураспада (радионуклида) [Half-life (radionuclide)] – для отдельно взятого процесса радиоактивного распада: время, за которое исходное число ядер радионуклида уменьшается вдвое. Обозначается: T1/2. Постоянная радиоактивного распада (Decay constant) – для радионуклида: вероятность распада его ядра в единицу времени, определяется выражением: , где: Nt – общее число ядер данного радионуклида в момент времени t. связана с периодом полураспада соотношением:

Активность радионуклида убывает со временем по экспоненциальному закону:

где: At и A0 – активности в момент времени t и 0 соответственно. Препарат радионуклида без добавления носителя (Preparation of radionuclide, no carrier added) – препарат, свободный от стабильных изотопов элемента, к которому принадлежит данный радионуклид. Однако препараты, называемые препаратами радионуклида без носителя (carrier free), иногда содержат незначительные количества стабильных изотопов того же элемента или его химического аналога. Источником их могут быть побочные ядерные реакции, примеси химических элементов, содержащиеся в реактивах, применяемых при химических операциях и т. д. Радиоактивный препарат, в котором имеются как радиоактивные, так и стабильные изотопы данного элемента или химического аналога, называется препаратом с носителем. Радиоактивность (Radioactivity) – свойство некоторых нуклидов подвергаться радиоактивному распаду. Радиоизотоп (Radioisotope) – радиоактивный изотоп определенного элемента. Радионуклид (Radionuclide) – нуклид, который радиоактивен. Нуклиды, обладающие нестабильной комбинацией протонов и нейтронов, самопроизвольно с постоянной вероятностью превращаются в стабильные нуклиды или в нуклиды с другой нестабильной комбинацией протонов и нейтронов. О таких нуклидах говорят, что они радиоактивные, и они называются радионуклидами. Исходный радионуклид называют материнским, а образующийся – дочерним. Радионуклидная чистота (Radionuclidic purity) препарата – отношение активности основного радионуклида к общей активности препарата, выраженное в процентах, не является постоянной характеристикой данного препарата, а изменяется с течением времени. Радионуклидные примеси (Radionuclidic impurities) – примеси других радиоактивных нуклидов (как того же, так и других элементов). Количество радионуклидных примесей выражают процентным отношением активности примесей к активности основного нуклида на определенную дату и, при необходимости, время. Дочерние радионуклиды, образующиеся в результате радиоактивного распада материнского (основного) радионуклида, не считаются радионуклидными примесями: например, ксенон-131м не рассматривается как радионуклидная примесь к йоду-131. Радиофармацевтический предшественник (Radiopharmaceutical precursor) – радиоактивное вещество, предназначенное для введения радионуклидной метки в другое лекарственное средство (радиофармацевтический лекарственный препарат) перед его применением. Радиофармацевтический лекарственный препарат (Radiopharmaceutical) – лекарственный препарат, который в готовой для использования лекарственной форме содержит один или несколько радионуклидов (радиоактивных изотопов), имеющих качественные характеристики, пригодные для диагностического и/или терапевтического применения. Радиохимическая чистота (Radiochemical purity) – отношение активности радионуклида, который присутствует в препарате в заявленной химической форме основного вещества, к общей активности радионуклида в этом препарате, выраженное в процентах. Радиохимические примеси (Radiochemical impurities) – примеси химических соединений, отличных от основного вещества, составляющего препарат, но содержащих тот же радионуклид. Величину радиохимических примесей, т.е. активность содержащегося в них радионуклида, выражают в процентах к общей активности радионуклида в препарате. Срок годности радиофармацевтического лекарственного препарата (Storage time of Radiopharmaceutical) – время, в течение которого радиофармацевтический лекарственный препарат удовлетворяет требованиям фармакопейной статьи или, в случае ее отсутствия, требованиям нормативной документации. Ультракороткоживущий радионуклид – радионуклид с периодом полураспада до 2 часов. Химические примеси (Chemical impurities) – примеси посторонних химических соединений и элементов, источниками которых являются исходные вещества и реактивы, а также побочные продукты неполно или параллельно протекающих реакций. Ядерные изомеры (Nuclear isomers) – нуклиды, имеющие одинаковый массовый номер и атомный номер, но отличающиеся энергетическим состоянием их ядер.

Единицы активности и энергии

Радиоактивный распад или переход может включать испускание заряженных частиц, захват электронов (ЭЗ) или изомерный переход (ИП). Заряженные частицы, испускаемые ядром, – это альфа-частицы (ядро атома гелия с атомной массой 4) или бета-частицы (отрицательно заряженные, обычно называемые электронами или положительно заряженные, обычно называемые позитронами). Испускание заряженных частиц ядром может сопровождаться испусканием гамма-квантов. Гамма-кванты также испускаются при изомерном переходе. Такое испускание гамма-квантов может частично сопровождаться выходом электронов, называемых электронами внутренней конверсии. Процесс электронного захвата, приводит к вторичному испусканию рентгеновских лучей (благодаря перегруппировке электронов в атоме). Эта вторичная эмиссия сама по себе может частично замещаться выходом электронов, известных как электроны Оже. Радионуклиды с дефицитом нейтронов могут испускать позитроны. Такие радионуклиды называются позитрон-излучателями. При взаимодействии с электронами позитроны аннигилируют, испуская два гамма-кванта с энергией 511 кэВ каждый, обычно разлетающихся под углом 180° друг к другу. Такой процесс называется аннигилляционным излучением. Как правило, для обозначения активности радионуклида используются общепринятые единицы измерения в соответствии с ОФС “Единицы международной системы (СИ), используемые в фармакопее”. Для энергии отдельных частиц и фотонов применяют внесистемную единицу электронвольт и десятичные кратные ей единицы: 1 эВ = 1,60219 x 10-19 Дж (приближенно) аДж. Соответственно 1 кэВ x 10-16 Дж = 0,16 фДж; 1 МэВ x 10-13 Дж = 0,16 пДж.

Основные ядерно-физические характеристики радионуклидов

К основным ядерно-физическим характеристикам радионуклидов, используемых в составе радиофармацевтических лекарственных препаратов, относятся период полураспада, вид, энергетическая характеристика и интенсивность всех компонентов ионизирующего излучения, возникающего как при распаде радионуклида, так и при энергетической разрядке ядра-продукта. Кроме того, для ядерной медицины важны и характеристики рентгеновского излучения атома, образующегося в результате распада радионуклида [Приложение 1]. Основные ядерно-физические характеристики для радионуклидов, входящих в состав РФЛП, а также используемых в составе стандартных радиоактивных растворов и источников, применяемых для аттестации РФЛП, возможных примесей, представлены в Приложении 1 к настоящей статье.

Защита от излучений

При работе с радиоактивными препаратами необходима соответствующая защита от излучения этих препаратов. Защита имеет своей целью предохранение людей от вредного воздействия радиации, а также снижение фоновых показаний измерительных приборов, регистрирующих ионизирующее излучение. Проникающая способность каждого вида излучения зависит от природы излучения и его энергии. Защита от внешнего альфа- и бета-излучения радиоактивных препаратов осуществляется сравнительно просто вследствие малой проникающей способности этих излучений. Альфа- и бета-излучения характеризуются определенными величинами пробега альфа- и бета-частиц, т.е. расстоянием, на которое они могут проникать в вещество. Альфа-частицы поглощаются резиновыми перчатками, одеждой, стенками стеклянной ампулы и т.п. Пробег бета-частиц в воздухе в зависимости от их энергии составляет величину от сантиметров до нескольких метров. Для защиты от бета-излучения применяют материалы с малым атомным номером, например, специальные экраны из плексигласа, контейнеры из алюминия и пластмасс и т.п. Однако при работе с высокоактивными препаратами следует принимать меры для защиты от тормозного излучения – вторичного излучения, возникающего при прохождении бета-частиц через вещество. По своей природе тормозное излучение является фотонным ионизирующим излучением. Поэтому при работе с высокоактивными препаратами, содержащими бета-излучающие радионуклиды, применяют комбинированную защиту, в которой внутренний слой (со стороны источника) делается из вещества с малым атомным номером для поглощения бета-излучения, а внешний – из вещества с большим атомным номером для ослабления тормозного излучения. Гамма-излучение в отличие от альфа- и бета-излучения не характеризуется определенным пробегом в веществе – оно поглощается по мере прохождения через вещество по экспоненциальному закону. Наиболее эффективно поглощают гамма-излучение вещества с большим атомным номером, например свинец, вольфрам, уран. Гамма-излучение определенной энергии можно характеризовать толщиной слоя половинного ослабления (полутолщина ослабления) в веществе. Это та толщина защитного материала, которая ослабляет первоначальную интенсивность излучения в 2 раза. Например, через защитный материал, толщина которого равна 7 слоям половинного ослабления (полутолщинам), проходит менее 1% излучения незащищенного источника. Защита от гамма-излучения радиоактивных препаратов достигается не только применением поглощающих экранов, но также и путем увеличения расстояния от препарата (интенсивность излучения обратно пропорциональна квадрату расстояния от препарата).

Радионуклидные генераторы

В радионуклидных генераторных системах (см. выше определение “Генератор радионуклидный”) используется относительно долгоживущий материнский радионуклид, который распадается с образованием дочернего радионуклида, обычно с более коротким периодом полураспада. За счет отделения дочернего радионуклида от материнского химическим или физическим способом можно использовать дочерний радионуклид на значительных расстояниях от производства генераторов. Известно более 100 генераторных пар радионуклидов, однако в медицине используют не более 10. В современной радионуклидной диагностике около 80% процедур выполняют с препаратами, получаемыми на основе генератора технеция-99м. Препараты получают, как правило, в медицинских организациях с использованием наборов для приготовления радиофармацевтических лекарственных препаратов, и элюата из генератора. В состав наборов могут входить лиофилизаты, растворы. В данном случае элюат генератора является одновременно растворителем для лиофилизата и исходным раствором радионуклида, то есть активной фармацевтической субстанцией. Иногда вместо лиофилизата для приготовления РФЛП может быть использован раствор или набор реагентов, включающий несколько флаконов, содержащих лиофилизаты и/или растворы. В ряде случаев возможно приготовление РФЛП из раствора радионуклида промышленного производства (например, растворы индия-111, технеция-99м, рения-188 и др.) и набора реагентов.

МАТЕРИАЛЫ МИШЕНЕЙ

Изотопный состав и чистота материала мишени определяют относительное содержание нужного радионуклида и радионуклидных примесей. Использование изотопнообогащенных материалов мишеней, в которых содержание требуемого нуклида искусственно увеличено, может увеличить выход реакции и чистоту нужного радионуклида. Химическая форма, чистота, физическое состояние и химические побочные продукты, так же, как условия облучения, прямое физическое и химическое окружение, определяют химическое состояние и химическую чистоту получаемого радионуклида. При производстве радионуклидов, особенно короткоживущих, не всегда возможно определить все эти критерии качества перед дальнейшим получением радионуклида и соответствующих РФЛП. Поэтому каждая партия материала мишени должна быть протестирована в пробных производственных циклах перед их использованием в рутинном производстве радионуклида и приготовлении РФЛП. Это необходимо проводить для подтверждения того, что в результате процесса производства в описанных условиях будет получен радионуклид в необходимых количествах и нужного качества. Для облучения потоком частиц материал мишени находится в контейнере (ампуле) и/или мишенном устройстве в газообразном, жидком или твердом состоянии. Необходимо убедиться в том, что в процессе облучения (температура, давление, время) не происходит взаимодействия между контейнером и его содержимым. При облучении заряженными частицами держатель материала мишени обычно сделан из подходящего металла с входом-выходом, окружающей охлаждающей системой и, как правило, с окном из тонкой металлической фольги. Вид и толщина окна мишени могут влиять на выход ядерной реакции, а также на радионуклидную чистоту.

Предшественники (исходные соединения) для синтеза

Обычно эти предшественники не производятся в больших количествах. Некоторые предшественники синтезируют непосредственно в радиофармацевтических лабораториях, другие поставляются специальными производителями или лабораториями. Тесты на подлинность, химическую чистоту и анализы должны проводиться по аккредитованным методикам. Рекомендуется предварительное тестирование предшественников в пробном производственном цикле перед их использованием для производства РФЛП и подтверждение, что в указанных условиях производства использование данного предшественника приводит к получению РФЛП в требуемых количествах и с заданным качеством. Производство и/или изготовление РФЛП должно быть организовано в контролируемых зонах, в которых выполняются требования к окружающей среде и радиационной безопасности. Все технологические операции должны выполняться в специальных помещениях и на специальном оборудовании, предназначенном для производства/изготовления радиофармацевтических препаратов. Различные рабочие зоны должны быть ясно определены и разделены, особенно в отношении однонаправленного движения материалов, предшественников и готовых продуктов, чтобы избежать смешивания и использования не по назначению. Одновременное производство и/или изготовление различных РФЛП в одной рабочей зоне (горячей камере, ламинарной зоне или шкафу) не допускается, что вызвано необходимостью снижения до минимума риска перекрестного загрязнения радиоактивными веществами или смешивания исходных материалов. Приготовление дозированной формы конечного РФЛП в практической ядерной медицине обычно включает конкретную (лимитированную) активность на согласованную с потребителем дату (и, при необходимости, время) поставки готового к использованию РФЛП, генераторов, наборов и радиофармацевтических предшественников. Все условия, которые могут влиять на качество продукта (например, радиохимическая чистота и стерильность), должны быть четко определены и должны включать допустимые значения для защиты от радиоактивности.

Перечень показателей качества, которым должны соответствовать радиофармацевтические лекарственные препараты промышленного производства и/или изготавливаемые в медицинских учреждениях

Препараты промышленного производства: – состав – описание; – подлинность; – pH; – объемная активность; – радионуклидные примеси; – радиохимическая чистота (радиохимические примеси); – химические примеси; – количественное определение; – физиологическое распределение в тканях организма (при необходимости); – показатели качества, характеризующие моноклональные антитела, в случае их наличия; – бактериальные эндотоксины или пирогенность; – стерильность; – упаковка; – маркировка; – транспортирование; – хранение; – срок годности.
Препараты, изготавливаемые в медицинских учреждениях: – состав; – описание; – растворимость; – подлинность; – прозрачность; <> – цветность; <> – рН; <> – показатели качества, характеризующие моноклональные антитела, в случае их наличия; – потеря в массе при высушивании; – механические включения (видимые, невидимые); – количественное определение; – бактериальные эндотоксины или пирогенность; – стерильность; – упаковка; – маркировка; – транспортирование; – хранение; – срок годности.

<
> Показатели качества для восстановленного раствора.

Препарат:
– состав;
– описание;
– pH;
– объемная активность;
– радиохимическая чистота (радиохимические примеси); – хранение, включая меры предосторожности; – срок годности.
При определении показателей качества радиофармацевтических лекарственных препаратов руководствуются требованиями общих фармакопейных статей (ОФС), регламентирующих методы и методики фармакопейного анализа: ОФС “Растворимость”, ОФС “Ионометрия”, ОФС “Стерильность”, ОФС “Бактериальные эндотоксины”, соответствующими ОФС для испытания на чистоту и допустимые пределы примесей и др., а также ОФС “Сроки годности лекарственных средств”.

Установление подлинности по радионуклиду

Каждый радионуклид и ядерный изомер характеризуются периодом полураспада и специфическими, присущими только ему спектрами (энергий) ионизирующих излучений. К ним относятся спектры альфа-, бета-, гамма-излучения, конверсионных и Оже-электронов, тормозного излучения, характеристического рентгеновского излучения. Форму и количественные характеристики каждого спектра, а также значение T1/2 используют для проверки подлинности радионуклида. Индивидуальными характеристиками радионуклидов могут служить также аппаратурные спектры, снимаемые в строго воспроизводимых условиях; их используют для определения подлинности радионуклидов в РФЛП. Подлинность радионуклида в препарате считают подтвержденной, если аппаратурный спектр ионизирующего излучения, снятый с источником, приготовленным из данного РФЛП, идентичен спектру, полученному с образцовым источником или источником, приготовленным из образцового раствора с тем же радионуклидом, и снятому в тех же условиях. Естественно, предполагается, что спектр должен быть скорректирован на вклад от радионуклидных примесей, если они имеются в РФЛП. Идентификацию радионуклидов проводят:
– по спектру (гамма-, бета- и рентгеновское излучение); – по слою половинного ослабления (бета-излучение); – по периоду полураспада (любое излучение).

Спектрометрия

Жидкостные сцинтилляционные счетчики используют для получения спектра и -излучателей (смотри измерение активности). Гамма-спектрометр используют для идентификации радионуклидов по энергии и интенсивности гамма-квантов или рентгеновских лучей. Германиевый полупроводниковый детектор предпочтительно использовать для гамма- и рентгеновской спектрометрии. Сцинтилляционный детектор – NaI-Tl – также используют, но он имеет более низкое энергетическое разрешение. Гамма-детектор калибруют, используя стандартные источники, так как эффективность детектирования зависит от энергии гамма-квантов и рентгеновских лучей, а также от формы источника и расстояния между детектором и источником. Эффективность детектора может быть измерена с использованием калиброванного источника измеряемого радионуклида или, (для обычной работы) по графику эффективность – энергия гамма-квантов и рентгеновских лучей, построенному с использованием нескольких калибровочных источников различных радионуклидов. Гамма и рентгеновский спектр радионуклида, который испускает гамма-кванты и/или рентгеновское излучение, уникален для этого нуклида и характеризуется энергиями и количеством фотонов с определенной энергией, испускаемой при переходе с одного энергетического уровня на другой. Это свойство используют при идентификации радионуклидов, присутствующих в источнике, и в определении их количества, что обеспечивает оценку наличия радионуклидной примеси путем детектирования других пиков, отличающихся от ожидаемых.

Слой половинного ослабления

Для идентификации чистых бета-излучателей рекомендуется определять граничные энергии бета-спектров или зависящие от них параметры. Например, идентификацию проводят с помощью кривых поглощения бета-излучения в алюминии по величине слоя половинного ослабления следующим образом: используя установку с торцевым счетчиком в строго определенных экспериментальных условиях, находят зависимость скорости счета от толщины слоя d алюминиевого поглотителя, помещаемого между источником и окном счетчика, в непосредственной близости к счетчику. Толщину слоя поглотителя принято выражать массой, приходящейся на единицу поверхности поглощающего слоя, в мг/см2. Кривая поглощения, представляющая собой зависимость логарифма скорости счета logan от толщины d поглотителя, имеет прямолинейный участок. По нему с помощью формулы определяют величину слоя половинного ослабления d1/2 в мг/см2:

где: B – коэффициент при d в формуле logan = C – Bd, определяющей прямолинейный участок. Для определения подлинного значения d1/2 для данного радионуклида аналогичные измерения проводят с источником тех же размеров, формы и толщины и примерно той же активности, приготовленным из образцового раствора с этим радионуклидом.

Период полураспада

Для определения периода полураспада измеряют величину активности (или любой пропорциональной ей величины, например, скорости счета, площади участка спектра и т.д.) в зависимости от времени. Детектор выбирают в зависимости от вида излучения, испускаемого анализируемым нуклидом. Измерения проводят при строго фиксированном расположении источника относительно детектора излучения, при условии регулярного контроля стабильности показаний применяемой аппаратуры с помощью источника с долгоживущим радионуклидом. Длительность и число измерений определяют для каждого конкретного случая. Кривая экспоненциального распада (кривая распада) описывается уравнением:

где: At – радиоактивность в момент t;
A0 – радиоактивность в момент t = 0;

константа распада, характерная для каждого радионуклида, e – основание натурального логарифма. Период полураспада (T1/2) связан с константой распада () уравнением:

где: ln2 ~ 0,693;

константа распада, характерная для каждого радионуклида.

Измерение активности

Активность радионуклида в препарате (также как и удельную, молярную и объемную активность) указывают на определенную дату, а для препаратов, содержащих радионуклид с периодом полураспада менее 10 сут., также и на определенное время. Для препаратов, содержащих радионуклид с периодом полураспада менее 1 сут., активность указывают с учетом минут. Абсолютное измерение активности определенного образца может быть выполнено, если известна схема распада радионуклида, но на практике требуется вносить много корректировок для получения точных результатов. Поэтому обычно проводят измерения с помощью первичного стандартного источника. Первичные стандартные источники не могут быть использованы для короткоживущих радионуклидов, например позитрон-излучателей. Измерительная аппаратура калибруется по доступным стандартам для каждого конкретного радионуклида. Стандарты, которые используют в лабораториях, тестируются компетентными органами. Для измерения активности бета- и бета/гамма-излучателей используют ионизационные камеры и счетчики Гейгера-Мюллера; сцинтилляционные и полупроводниковые счетчики или ионизационные камеры используют для измерения активности гамма-излучателей. Для детектирования и измерения активности альфа-излучателей требуются специальное оборудование и методы. Для корректного сравнения радиоактивных источников важно, чтобы исследуемые препараты и стандарты были измерены в одних и тех же условиях. Активность бета-излучателей с низкой энергией может быть измерена с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Образец растворяют в растворе, содержащем одно или несколько (обычно два) органических флюоресцентных вещества (первичный и вторичный сцинтилляторы), превращающих часть энергии распада в фотоны света, которые детектируются фотоумножителем и конвертируются в электрические импульсы. При использовании жидкостных сцинтилляционных счетчиков сравнительные измерения корректируют с учетом эффектов светопоглощения. Прямые измерения выполняют, если это возможно, в одинаковых условиях (например, объем и вид растворов) для определяемого и стандартного источника. Все измерения активности должны быть скорректированы путем вычитания фоновой активности окружающей среды и ложных сигналов, испускаемых самим оборудованием. При измерении большой активности на некотором оборудовании необходимо провести коррекцию на потери от совпадений, возникающие из-за ограниченного времени разрешения детектора и связанного с ним электронного оборудования. Для регистрирующей системы с фиксированным мертвым временем , которое наступает после каждого счета, уравнение коррекции:

где Aабс: – истинная скорость счета в секунду; A – полученная скорость счета в секунду;

мертвое время, в секундах. На некоторых приборах эта корректировка выполняется автоматически. Корректировка из-за потерь от совпадений должна быть выполнена перед корректировкой на фоновое излучение. Если время индивидуального измерения ™ не пренебрежимо мало по сравнению с периодом полураспада (T1/2), то должен быть принят во внимание распад в течение времени измерения. После проведения корректировки показаний прибора (скорость счета, ионизационный ток и т.д.) на фон и, если необходимо, на потери из-за электронных эффектов, проводят коррекцию на распад за время измерения по уравнению:

где: Rкорр – показания прибора, скорректированные на начало индивидуального измерения; R – показание прибора перед корректировкой на распад, но уже после коррекции на фон и т.д. Результаты определения активности показывают различия, которые, главным образом, связаны с редким видом ядерного превращения. Для того чтобы компенсировать различия в количестве переходов в единицу времени, должно быть зарегистрировано достаточное количество импульсов. Так, например, необходимо, по крайней мере, 10000 импульсов для получения относительного стандартного отклонения не более 1% (доверительный интервал: 1 сигма, стандартное отклонение – корень квадратный из числа импульсов). Все результаты измерения активности приводят с указанием даты и, если необходимо, времени измерения. Это указание должно быть сделано с учетом часового пояса (GMT, CET) (Среднее время по меридиану Гринвича, Центральное Европейское время). Активность на другое время рассчитывают по экспоненциальному уравнению или определяют по таблицам.

Определение радионуклидной чистоты
и радиоиуклидных примесей

В большинстве случаев для определения радионуклидной чистоты и/или радиоиуклидных примесей РФЛП предварительно устанавливают подлинность каждого присутствующего радионуклида и измеряют их активность. Для определения радионуклидной чистоты часто используют гамма-спектрометрию. Однако, это не совсем надежный метод, так как обычно нелегко детектировать альфа- и бета-излучатели, и при использовании детекторов NaI-Tl на пики, характерные для примесей, испускающих гамма-кванты, часто накладывается спектр основного радионуклида. Требуемая радионуклидная чистота (например, спектр гамма-квантов незначительно отличается от спектра стандартизованного препарата) регламентируется в фармакопейной статье или нормативной документации производителя РФЛП, также могут быть установлены пределы для специфических примесей радионуклидов (например, кобальт-60 в кобальте-57). Хотя эти требования необходимы, они сами по себе недостаточны для подтверждения того, что радионуклидная чистота достаточна для использования этого РФЛП для пациентов. Производитель должен исследовать продукт детально на присутствие долгоживущих примесей через определенное количество периодов полураспада. Особенно это касается анализа РФЛП, содержащих короткоживущий радионуклид. Если необходимо идентифицировать и/или дифференцировать два или более позитрон-излучающих радионуклида, таких как, например, примеси фтора-18 в препаратах азота-13, дополнительно к гамма-спектрометрии проводят определение периода полураспада. Из-за различия периодов полураспада радионуклидов, присутствующих в РФЛП, радионуклидная чистота меняется во времени. Радионуклидный анализ включает в себя следующие этапы: обнаружение радионуклидных примесей, их идентификацию (см. раздел “Установление подлинности по радионуклиду”) и определение активности. Измерение активности идентифицированных примесей проводят аналогично тому, как описано в разделе “Измерение активности”, с помощью подходящих радиометрических установок с бета- и гамма-счетчиками, спектрометров, установок для измерения активности методом совпадений и другой аппаратуры. Конкретные методики анализа на отдельные радионуклидные примеси приводят в соответствующих фармакопейных статьях или нормативной документации производителя РФЛП для тех случаев, когда анализ может быть выполнен в течение срока годности препарата. Активность обнаруженной примеси приводят в процентах по отношению к активности основного радионуклида в препарате на определенную дату. Радионуклидные примеси, активность которых составляет не более 0,01% от активности основного радионуклида в течение всего срока годности, в фармакопейной статье или нормативной документации производителя РФЛП не приводят, кроме особых случаев. Указание о пределе суммарной примеси в фармакопейной статье или нормативной документации производителя РФЛП обязательно. В тех случаях, когда примесь не обнаружена, должен быть указан нижний предел обнаружения примененным методом анализа. Контроль препарата на содержание радионуклидных примесей не выполняют, если: – в документе на радиоактивное исходное сырье, применяемое для получения препарата, указано содержание радионуклидных примесей; – радионуклид является ультра-короткоживущим или короткоживущим, то определение его радионуклидной чистоты затруднено, и его испытание проводится на стадии производства.

Определение радиохимической чистоты
и радиохимических примесей

Определение радиохимической чистоты требует разделения различных химических соединений, содержащих радионуклид, и расчета процента активности, связанной с основной химической формой. Радиохимические примеси могут образовываться в результате: – производства радионуклида;
– последующих химических операций;
– неполного препаративного разделения;
– химических изменений в результате хранения. Требование к радиохимической чистоте должно выполняться в течение всего периода хранения. Для определения радиохимической чистоты, в принципе, могут быть использованы различные методы физико-химического анализа: бумажная, тонкослойная, газовая, высокоэффективная жидкостная хроматография, электрофорез и др. Следует указывать меры предосторожности, связанные с использованием радиоактивности, и обеспечивающие радиационную безопасность выполнения определения. Наиболее часто используются тонкослойная и бумажная хроматография. В бумажной и тонкослойной хроматографии пробу, объем которой указан в фармакопейной статье или нормативной документации производителя РФЛП, наносят на стартовую линию, как описывается в общих методах хроматографии. Важно предотвратить нанесение такого количества активности, которое обусловит потери при измерении за счет совпадений, возникающих при измерении активности. Используют такое количество препарата, чтобы можно было получить статистически достоверные результаты измерения для тех примесей, активность которых составит не менее 0,5% от нанесенного количества. Одновременно активность анализируемой пробы должна быть такой, чтобы поправка на просчеты, обусловленная мертвым временем регистрирующей установки, не превышала 1-2%. При измерении, в случае необходимости, в пробу может быть добавлен носитель. При этом массы разделяемых веществ не должны превышать допустимые для указанных методов. После разделения хроматограмму высушивают, и положение зон радиоактивности определяют авторадиографией или путем измерения активности по длине хроматограммы с помощью соответствующих коллимированных счетчиков, или путем разрезания полоски и измерения активности каждого участка полоски (соотношения измеренной активности определяют соотношения концентраций радиоактивных химических форм). Положение пятен и участков можно химически идентифицировать путем сравнения с соответствующими растворами такого же химического вещества (нерадиоактивного), используя соответствующий метод детектирования. Активность может быть измерена путем интегрирования с использованием сканеров или цифровых счетчиков. В показателе радиохимической чистоты приводятся нормативы содержания специфических примесей, включая изомеры. Для оценки эффективности радиофармацевтических лекарственных препаратов промышленного производства при необходимости используется такой показатель качества как физиологическое распределение в тканях организма, определяемый в тестах in vivo (на животных).

Удельная активность

Удельную активность обычно рассчитывают, исходя из объемной активности и концентрации изучаемого химического соединения после подтверждения, что активность относится только к радионуклиду (радионуклидная чистота) и интересующим химическим формам (радиохимическая чистота). Удельная активность изменяется во времени. Поэтому величину удельной активности приводят с указанием даты и, если необходимо, времени. Удельную активность необходимо измерять в препаратах с добавленным носителем. Для некоторых радиофармацевтических лекарственных препаратов без добавления носителя (например, лиганды рецепторов), важно указывать удельную радиоактивность. Фармакопейная статья или нормативная документация производителя РФЛП должны включать пределы удельной радиоактивности.

Действующие и вспомогательные вещества

Для установления подлинности и количественного определения действующих и вспомогательных веществ, входящих в состав радиофармацевтического лекарственного препарата, можно использовать любые пригодные методы физико-химического анализа. Однако, принимая во внимание требования радиационной безопасности, а также небольшое количество фасовок РФЛП в серии, следует учитывать необходимость минимизации проб испытуемого препарата, как по объему, так и по массе. Кроме того, предпочтительно должны быть выбраны методы экспресс-анализа с использованием дистанционно управляемого оборудования. Для выполнения анализов препарата при отсутствии отечественных реактивов и материалов допускается использование импортных реактивов и материалов соответствующей квалификации. В исключительных случаях из-за невозможности количественного определения какого-либо вещества в составе РФЛП современными методами с учетом выше изложенных требований определение не проводят.

Химические примеси

Определение примесей и установление их допустимых пределов проводят в соответствии с требованиями ОФС, предназначенных для проведения испытаний на чистоту и допустимые пределы примесей. Допустимое содержание примесей в растворах РФЛП строго нормировано, так как уровень концентрации радионуклида в препарате без добавления носителя составляет около 10-7 – 10-8 моль/л, и примеси могут конкурентно связываться с химическими веществами, входящими в состав препарата, что приводит к изменению его радиохимической чистоты и, соответственно, фармакокинетики. Поэтому для определения примесей следует использовать высокочувствительные методы физико-химического анализа, такие как атомно-эмиссионная и атомно-абсорбционная пламенная спектрометрия или спектрометрия индуктивно-связанной плазмы в сочетании с масс-спектроскопией. Обязательно следует проводить определение примесей свинца, железа, мышьяка и металлов, присутствующих в конструкционных материалах мишеней и/или радионуклидных генераторах, а также в исходных реагентах (нерадиоактивном сырье) в процессе разработки и валидации производственного процесса и осуществлять дополнительный контроль в случае изменения конструкционных материалов мишени, генераторного устройства и замены реагентов. Особое внимание необходимо уделять фармакологически активным примесям или примесям, даже в очень малых количествах влияющим на фармакодинамику (например, лиганды рецепторов). В случае необходимости следует определять стереоизомерную чистоту. По возможности, следует указывать подробную характеристику примесей. Общие пределы содержания могут быть установлены для неидентифицированных примесей. Пределы должны быть тщательно подобраны с учетом количества и токсичности, на основании токсичности исходных материалов, предшественников, возможных продуктов распада и конечного продукта.

Стереоизомерная чистота

При необходимости должна быть указана стереоизомерная чистота.

Определение pH

Определение pH раствора препарата или лиофилизата следует проводить в соответствии с ОФС “Ионометрия”.

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ (БИОЛОГИЧЕСКОЕ) РАСПРЕДЕЛЕНИЕ

При необходимости для некоторых РФЛП могут быть предписаны биологические испытания. Распределение активности, наблюдаемое в указанных органах, тканях и других частях тела у соответствующих видов животных (обычно крысы или мыши), должно реально отражать ожидаемое распределение у человека и таким образом подтвердить функциональную пригодность препарата. Виды испытаний и требования к биологическому распределению РФЛП приводят в соответствующих фармакопейных статьях или нормативной документации производителя РФЛП. Биологическое распределение, соответствующее требованиям, обеспечит накопление радиоактивных соединений в интересующем биологическом органе человека и пределы его накопления по отношению к окружающим органам и системам.

Стерильность

РФЛП для парентерального введения должны быть приготовлены с соблюдением мер предосторожности, чтобы исключить микробное загрязнение и обеспечить стерильность. Испытание на стерильность выполняют в соответствии с ОФС “Стерильность”. Однако, из-за короткого периода полураспада радионуклидов, входящих в состав большинства РФЛП, результат анализа на стерильность получают, как правило, после использования конкретной партии. В таких случаях в фармакопейных статьях или нормативной документации приводят указание о том, что результат контроля стерильности может быть получен после использования препарата. Часто по нормативам радиационной безопасности (высокий уровень радиоактивности) для испытания на стерильность невозможно использовать РФЛП в количествах, указанных в ОФС “Стерильность”. Кроме того, когда объем партии РФЛП ограничен одним или несколькими образцами (например, терапевтические или ультра-короткоживущие препараты), то тест на стерильность оказывается невыполнимым. Если период полураспада очень короткий (например, мин.), введение препарата пациенту проводят в потоке с применением метода мембранной фильтрации и валидацией системы производства. Как правило, для РФЛП контроль соблюдения условий стерилизации должен гарантировать стерильность препарата, а испытание на стерильность предусматривает проверку каждой десятой партии препаратов, стерилизуемых автоклавированием, или в сухожаровом шкафу (при условии валидации процесса стерилизации). Для препаратов, стерилизованных фильтрованием и/или изготовленных в асептических условиях, следует проводить испытания стерильности каждой десятой партии при условии валидации асептических зон и контроля целостности стерилизующего фильтра при производстве каждой партии. При проведении испытаний на “стерильность”, образцы должны храниться в надлежащих условиях, обеспечивающих достоверность полученных результатов.

Бактериальные эндотоксины или пирогенность

Испытание на “Бактериальные эндотоксины” является более предпочтительным для РФЛП из-за большей чувствительности и скорости проведения. Испытание проводят в соответствии с ОФС “Бактериальные эндотоксины” с соблюдением необходимых предосторожностей в целях ограничения облучения персонала, проводящего тест. В разделе “Бактериальные эндотоксины” указывают предельное содержание бактериальных эндотоксинов в расчете на максимальную дозу препарата в миллилитрах с учетом способа его введения. Для препаратов, приготовляемых из лиофилизатов и растворов (элюатов), расчет значений предельного содержания бактериальных эндотоксинов каждого из компонентов (лиофилизатов или растворов) проводят с учетом величины предельного содержания бактериальных эндотоксинов в готовой лекарственной форме: для препаратов, вводимых внутривенно, предельное содержание бактериальных эндотоксинов рассчитывают по формуле 175 ЕЭ/V, где V – максимальная доза препарата в мл в конце срока годности (наибольшая по объему доза препарата с наименьшей объемной активностью). Расчеты необходимо проводить с использованием данных об изменении величины объемной активности препарата в процессе хранения РФЛП, указанных в соответствующих фармакопейных статьях или нормативной документации производителя РФЛП, и данных инструкции по медицинскому применению о максимальной дозе, вводимой пациенту. Если точное определение максимально вводимого объема не представляется возможным (так как для РФЛП показателем дозы является вводимая активность), целесообразно за V принимать максимальный объем, используемый для введения пациенту РФЛП, равный 10 мл. Полученное значение выражают в ЕЭ на мг сухого вещества, мл раствора или на флакон. Кроме расчетов должна быть проведена экспериментальная апробация выбранных величин в соответствии с требованиями ОФС “Бактериальные эндотоксины”, раздел “Мешающие факторы”. Приводят подробное обоснование, а также результаты экспериментального подтверждения правильности выбранного значения предельного содержания бактериальных эндотоксинов в РФЛП в виде конкретной инъекционной лекарственной формы или ее компонентах. Для РФЛП, пирогенность которых может быть обусловлена не только бактериальными эндотоксинами, но и природой испытуемого материала, проводят испытание на пирогенность. В разделе “Пирогенность” указывают, что препарат должен быть апирогенным. Количество вводимого препарата приводят в миллилитрах на 1 кг массы животного. Если природа РФЛП обуславливает ингибирование или активирование процесса гелеобразования (при определении бактериальных эндотоксинов) и невозможно ликвидировать мешающий фактор (факторы), проводят испытание на пирогенность в соответствии с ОФС “Пирогенность”. Испытание РФЛП, поставляемых в клинические учреждения в готовой для использования форме, на бактериальные эндотоксины или пирогенность предусматривает проверку каждой десятой партии препаратов.

Срок годности

Срок годности радиофармацевтических лекарственных препаратов определяется совокупностью следующих факторов: – стабильностью химического и радиохимического состава РФЛП; – уменьшением активности радионуклида с течением времени по закону радиоактивного распада; – возрастанием относительного содержания долгоживущих радионуклидных примесей, имеющих периоды полураспада большие, чем основной радионуклид. Срок годности каждого РФЛП приводят в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации и устанавливают в соответствии с ОФС “Сроки годности лекарственных средств”. Периодичность контроля РФЛП в зависимости от их срока годности представлена в табл. 1.

Таблица 1

Периодичность контроля РФЛП
при установлении их срока годности

N п/п
Срок годности
Периодичность проверки качества
1
До 40 мин. включительно
На время изготовления
2
Свыше 40 мин. до 5 сут. включительно
На время изготовления и конец срока годности 3
Свыше 5 сут. до 10 сут. включительно
На дату изготовления и конец срока годности 4
Свыше 10 сут.
На дату изготовления, в середине и в конце срока годности

Для препаратов со сроками годности, указанными в п.п. 3 и 4, приводят еще один раз данные анализа за их пределами. Временной интервал со времени окончания срока годности до даты данного анализа составляет 10-50% срока годности.

Хранение

Условия хранения должны обеспечивать снижение мощности дозы излучения до допустимого уровня. В фармакопейной статье или нормативной документации указывают конкретные условия хранения препарата, обусловленные его специфическими свойствами и обеспечивающие сохранность его качества (температурный режим и т.д.). Радиофармацевтические лекарственные препараты должны быть тщательно закрыты и храниться в зоне, предназначенной для данных целей. Во время хранения материал первичной упаковки может менять окраску в результате облучения. Изменение окраски не означает ухудшение качества препарата.

Транспортирование

Транспортирование РФЛП выполняется в соответствии с действующими правилами безопасности при транспортировании радиоактивных веществ.

Упаковка и маркировка

Упаковка и маркировка РФЛП должны производиться в соответствии с действующим законодательством РФ в этой области в отношении радиоактивных препаратов медицинского назначения. При этом необходимо учитывать, что исчерпывающая информация о препарате должна содержаться в паспорте и инструкции по медицинскому применению РФЛП. Маркировка первичной упаковки РФЛП (как правило, флакон для лекарственных средств) должна содержать минимум информации в целях обеспечения минимальной лучевой нагрузки на глаза медперсонала. На этикетке первичной упаковки (флакона) со знаком радиационной опасности указывают: название препарата, лекарственную форму, активность (для капсул или драже активность каждой единицы) на установленную дату (и время), номер серии, срок годности. На этикетке вторичной упаковки (комплект упаковочный транспортный) со знаком радиационной опасности указывают: наименование производителя; его товарный знак (при его наличии); название препарата; МНН на русском языке (если оно имеется); лекарственную форму, состав; “стерильно” (только для инъекционных лекарственных форм); информацию о том, что препарат предназначен для диагностики или для терапевтического применения; пути введения; общая радиоактивность на указанную дату и, при необходимости, время; для растворов предоставляются данные о радиоактивности в надлежащем объеме (например, в МБк на мл раствора); для растворов указывается общий объем; любые специальные требования к хранению в отношении температуры и освещенности; при необходимости указывается наименование и концентрация антимикробных консервантов; для капсул (драже) дополнительно указывают активность каждой единицы и количество капсул (драже) в упаковке.

Меры предосторожности

Все процедуры с РФЛП выполняются в соответствии с действующими нормативными документами, регламентирующими правила работы с радиоактивными веществами, включая их хранение и транспортировку.

Приложение 1

ТАБЛИЦА ОСНОВНЫХ ФИЗИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК РАДИОНУКЛИДОВ

Обозначения:

X

=
=
=
=
=
электроны Оже
электроны конверсии
электроны
позитроны
гамма-излучение
рентгеновское излучение

Электронная эмиссия
Фотонная эмиссия
Радионуклид
Период полураспада
Тип
Энергия (МэВ)
Вероятность (на 100 распадов)
Тип
Энергия (МэВ)
Вероятность (на 100 распадов)
(I) Средняя энергия -спектра
(II) Максимальная вероятность, соответствующая полной аннигиляции в источнике на 100 распадов. Тритий (3H)
12.33 (6) лет

0.006 (I) (макс: 0.019)
100

Углерод-11 (11C)
20.385 (20) мин.

0.386 (I) (макс: 0.960)
99.8

0.511
199.5 (II)
Азот-13 (13N)
9.965 (4) мин.

0.492 (I) (макс: 1.198)
99.8

0.511
199.6 (II)
Кислород-15 (15O)
122.24 (16) с

0.735 (I) (макс: 1.732)
99.9

0.511
199.8 (II)
Фтор-18 (18F)
109.77 (5) мин.

0.250 (I) (макс: 0.633)
96.7

0.511
193.5 (II)
Фосфор-32 (32P)
14.26 (4) сут.

0.695 (I) (макс: 1.71)
100

Фосфор-33 (33P)
25.34 (12) сут.

0.076 (I) (макс: 0.249)
100

Сера-35 (35S)
87.51 (12) сут.

0.049 (I) (макс: 0.167)
100

Хром-51 (51Cr)
27.7025 (24) сут.

0.004
67
X
0.005
22.3

0.320
9.9
Кобальт-56 (56Co)
77.27 (3) сут.

0.006
47
X
0.006-0.007
25

0.179 (I)
0.9

0.511
38.0 (II)

0.631 (I)
18.1

0.847
100.0

1.038
14.1

1.175
2.2

1.238
66.1

1.360
4.3

1.771
15.5

2.015
3.0

2.035
7.8

2.598
17.0

3.202
3.1

3.253
7.6
Кобальт-57 (57Co)
271.79 (9) сут.
+ ce
0.006-0.007
177.4
X
0.006-0.007
57

ce
0.014
7.4

0.014
9.2

0.115
1.8

0.122
85.6

0.129
1.3

0.136
10.7

0.692
0.15
Кобальт-58 (58Co)
70.86 (7) сут.

0.006
49.4
X
0.006-0.007
26.3

0.201 (I)
14.9

0.511
29.9 (II)

0.811
99.4

0.864
0.7

1.675
0.5
Кобальт-60 (60Co)
5.2714 (5) лет

0.096 (I) (макс: 0.318)
99.9

1.173
100.0

1.333
100.0
Медь-62 (62Cu)
9.67 мин.

1.316 (макс: 2.926)
97.2
X
0.007
0.709

0.007
1.138

0.511
194.86

0.875
0.15

1.173
0.342
Медь-64 (64Cu)
12.7 час

0.278 (макс: 0.653)
17.4
X
0.007
14.12

0.190 (макс: 0.579)
39.0

0.008
1.91

0.007
22.66

0.511
34.79

1.345
0.473
Галлий-66 (66Ga)
9.49 (7) час

0.008
21
X
0.009-0.010
19.1

0.157 (I)
1

0.511
112 (II)

0.331 (I)
0.7

0.834
5.9

0.397 (I)
3.8

1.039
37

0.782 (I)
0.3

1.333
1.2

1.90 (I)
50

1.919
2.1

2.190
5.6

2.423
1.9

2.752
23.4

3.229
1.5

3.381
1.5

3.792
1.1

4.086
1.3

4.295
4.1

4.807
1.8
Галлий-67 (67Ga)
3.2612 (6) сут.

0.008
62
X
0.008-0.010
57

ce
0.082-0.084
30.4

0.091-0.093
42.4

0.090-0.092
3.6

0.185
21.2

0.175
0.3

0.209
2.4

0.300
16.8

0.394
4.7

0.888
0.15
Германий-68 (68Ge) в равновесии с Галлием-68 (68Ga) 270.82 (27) сут.

0.008
42.4
X
0.009-0.010
44.1

(68Ga: 67.629 (24) мин.)

0.353 (I)
1.2

0.511
178.3

0.836 (I)
88.0

1.077
3.0
Галлий-68 (68Ga)
67.629 (24) мин.

0.008
5.1
X
0.009-0.010
4.7

0.353 (I)
1.2

0.511
178.3

0.836 (I)
88.0

1.077
3.0
Криптон-81m (81mKr)
13.10 (3) с
ce
0.176
26.4
X
0.012-0.014
17.0

0.189
4.6

0.190
67.6
Рубидий-81 (81Rb) в равновесии с Криптоном-81m (81mKr) 4.576 (5) час

0.011
31.3
X
0.0.13-0.014
57.2

ce
0.176
25.0

0.190
64

0.188
4.3

0.446
23.2

0.457
3.0
(81mKr: 13.10 (3) с)

0.253 (I)
1.8

0.510
5.3

0.447 (I)
25.0

0.511
54.2

0.538
2.2
Рубидий-82 (82Rb)
1.3 мин.

1.523
83.3

0.511
191
Стронций-82 (82Sr)
25 сут.
e
0.00017
202
X
0.002-0.013
60
Стронций-85 (85Sr)
64.84 сут.
e
0.017
204
X
0.013
50

ce
0.51
0.066
X
0.013-0.015
55

0.514
99,3
Стровций-89 (89Sr) в равновесии с Иттрием-89m (89mY) 50.53 (7) сут.

0.583 (I) (макс: 1.492)
99.99

0.909
0.01

(89mY: 16.06 (4) с)

Стронций-90 (90Sr) в равновесии с Иттрием-90 (90Y) 28.74 (4) лет

0.196 (I) (макс: 0.546)
100

(90Y: 64.10 (8) час)

Иттрий-90 (90Y)
64.10 (8) час

0.934 (I) (макс: 2.280)
100

Молибден-99 (99Mo) в равновесии с Технецием-99m (99mTc) 65.94 (1) час

0.133 (I)
16.4
X
0.018-0.021
3.6

0.290 (I)
1.1

0.443 (I)
82.4

0.041
1.1

0.141
4.5

0.181
6

0.366
1.2
(99mTc: 6.01 (1) час)

0.740
12.1

0.778
4.3
Технеций-99m (99mTc)
6.01 (1) час
ce
0.002
74
X
0.018-0.021
7.3

0.015
2.1

0.141
89.1

ce
0.120
9.4

0.137-0.140
1.3

Технеций-99 (99Tc)
2.11 x 105 лет

0.085 (I) (макс: 0.294)
100

Рутений-103 (103Ru) в равновесии с Родием-103m (103mRh) 39.26 (2) сут.
+ ce
0.017
12
X
0.020-0.023
9.0

ce
0.030-0.039
88.3

0.497
91
(103mRh: 56.114 (20) мин.)

0.610
5.8

0.031 (I)
6.6

0.064 (I)
92.2

Индий-110 (110In)
4.9(1) час

0.019
13.4
X
0.023-0.026
70.5

0.642
25.9

0.658
98.3

0.885
92.9

0.938
68.4

0.997
10.5
Индий-110m (110mIn)
69.1 (5) мин.

0.019
5.3
X
0.023-0.026
27.8

1.015 (I)
61

0.511
123.4 (II)

0.658
97.8

2.129
2.1
Индий-111 (111In)
2.8047 (5) сут.

0.019
15.6
X
0.003
6.9

0.023-0.026
82.3

ce
0.145
7.8

0.167-0.171
1.3

0.171
90.2

0.219
4.9

0.245
94.0

0.241-0.245
1.0

Индий-114m (114mIn) в равновесии с Индием-114 (114In) 49.51 (1) сут.
ce
0.162
40
X
0.023-0.027
36.3

0.186-0.190
40

0.190
15.6

0.777 (I) (макс: 1.985)
95

0.558
3.2
(114In: 71.9 (1) с)

0.725
3.2
Теллур-121m (121mTe) в равновесии с Теллуром-121 (121Te) 154.0 (7) сут.

0.003
88.0
X
0.026-0.031
50.5

0.022-0.023
7.4

0.212
81.4

ce
0.050
33.2

1.102
2.5
(121Te: 19.16 (5) сут.)

0.077
40.0

0.180
6.1

Теллур-121 (121Te)
19.16 (5) сут.

0.022
11.6
X
0.026-0.030
75.6

0.470
1.4

0.508
17.7

0.573
80.3
Йод-123 (123I)
13.27 (8) час

0.023
12.3
X
0.004
9.3

0.027-0.031
86.6

ce
0.127
13.6

0.154
1.8

0.159
83.3

0.158
0.4

0.346
0.1

0.440
0.4

0.505
0.3

0.529
1.4

0.538
0.4
Йод-124 (124I)
4.176 дня

0.687 (макс: 1.534)
11.79
X
0.004
6.3

0.975 (макс: 2.138)
10.89

0.027
47.5

0.003
63.0

0.031
10.73

0.023
8.30

0.511
45.96

0.603
62.9

0.723
10.35

1.509
3.13

1.691
10.88
Йод-125 (125I)
59.402 (14) сут.
+ ce
0.004
80
X
0.004
15.5

0.023-0.035
33

0.027
114

0.031
26

0.035
6.7
Йод-126 (126I)
13.11 (5) сут.

0.023
6
X
0.027-0.031
42.2

ce
0.354
0.5

0.388
34

0.634
0.1

0.491
2.9

0.511
2.3 (II)

0.109 (I)
3.6

0.666
33

0.290 (I)
32.1

0.754
4.2

0.459 (I)
8.0

0.880
0.8

1.420
0.3

0.530 (I)
1

Йод-131 (131I)
8.02070 (11) сут.
ce
0.46
3.5
X
0.029-0.030
3.9

0.330
1.6

0.080
2.6

0.069 (I)
2.1

0.284
6.1

0.097 (I)
7.3

0.365
81.7

0.192 (I)
89.9

0.637
7.2

0.723
1.8
Ксенон-131m (131mXe)
11.84 (7) сут.

0.025
6.8
X
0.004
8.3

0.030
44.0

ce
0.129
61

0.034
10.2

0.159
28.5

0.163
8.3

0.164
2.0
Йод-133 (133I) (распадается до Ксенона-133) 20.8 (1) час

0.140 (I)
3.8

0.530
87

0.162 (I)
3.2

0.875
4.5

0.299 (I)
4.2

1.298
2.4

0.441 (I)
83

Ксенон-133 (133Xe)
5.243 (1) сут.

0.026
5.8
X
0.004
6.3

0.031
40.3

ce
0.045
55.1

0.035
9.4

0.075-0.080
9.9

0.080
38.3

0.101 (I)
99.0

Ксенон-133m (133mXe) (распадается до Ксенона-133) 2.19 (1) сут.

0.025
7
X
0,004
7.8

0.030
45.9

ce
0.199
64.0

0.034
10.6

0.228
20.7

0.232
4.6

0.233
10.0
Йод-135 (135I) (распадается до Ксенона-135) 6.57 (2) час

0.140 (I)
7.4

0.527
13.8

0.237 (I)
8

0.547
7.2

0.307 (I)
8.8

0.837
6.7

0.352 (I)
21.9

1.039
8.0

0.399 (I)
8

1.132
22.7

0.444 (I)
7.5

1.260
28.9

0.529 (I)
23.8

1.458
8.7

1.678
9.6

1.791
7.8
Ксенон-135 (135Xe)
9.14 (2) час
ce
0.214
5.5
X
0.031-0.035
5.0

0.171
3.1

0.250
90.2

0.308
96.0

0.608
2.9
Цезий-137 (137Cs) в равновесии с Барием-l37m (137mBa) 30.04 (3) лет

0.026
0.8
X
0.005
1

0.032-0.036
7
ce
0.624
8.0

(137mBa: 2.552 (1) мин.)

0.656
1.4

0.662
85.1

0.174 (I)
94.4

0.416 (I)
5.6

Самарий-153 (153Sm)
46.3 часа

0.200 (макс: 0.635)
32.2
X
0.006
12.0

0.226 (макс: 0.705)
49.6

0.041
17.5

0.265 (макс: 0.808)
17.5

0.042
31.7

ce
0.021
21.7

0.047
12.4

0.055
43.2

0.095
6.44

0.070
4.85

0.103
29.8
Гольмий-166 (166Ho)
26.8 час

0.651 (макс: 1.773)
48.7
X
0.007
8.3

0.694 (макс: 1.854)
50.0

0.048
3.1

0.006
27.8

0.049
5.5

ce
0.023
11.5

0.071
26.5

0.081
6.71

0.078
6.44

Лютеций-177 (177Lu)
6.65 дня

0.048 (макс: 0.177)
11.61

0.208
10.36

0.110 (макс: 0.385)
9.1

0.149 (макс: 0.498)
79.4

0.044
0.27

ce
0.112
0.48

0.143
0.57

Рений-188 (188Re)
17.0 час

0.528 (макс: 1.487)
1.748
X
0.009
3.2

0.729 (макс: 1.965)
26.3

0.063
2.44

0.795 (макс: 2.120)
70.0

0.007
6.8

0.155
15.61

ce
0.081
5.04

0.142
5.85

Золото-198 (198Au)
2.696 сут.

0.315 (I)
98.7

0.412
95.5
Таллий-199 (199Tl)
7.42 час
ce
0.144
1.23
X
0.069-0.080
94.5

0.193
1.19

0.227
0.1

0.158
4.9

0.208
12.8

0.247
9.2

0.334
1.6

0.455
12.3
Таллий-200 (200Tl)
26.1 (1) час
ce
0.285
3.4
X
0.010
32.0

0.353
1.4

0.069-0.071
63.3

0.08
17.5

0.495 (I)
0.3

0.368
87.2

0.579
13.8

0.828
10.8

1.206
29.9

1.226
3.4

1.274
3.3

1.363
3.4

1.515
4.0
Свинец-201 (201Pb) (распадается до Таллия-201) 9.33 (3) час

0.055
3
X
0.070-0.073
69

0.083
19

ce
0.246
8.5

0.276
2

0.331
79

0.316
2.3

0.361
9.9

0.406
2.0

0.585
3.6

0.692
4.3

0.767
3.2

0.826
2.4

0.908
5.7

0.946
7.9

1.099
1.8

1.277
1.6
Таллий-201 (201Tl)
72.912 (17) час
ce
0.016-0.017
17.7
X
0.010
46.0

0.027-0.029
4.1

0.069-0.071
73.7

0.052
7.2

0.080
20.4

0.084
15.4

0.153
2.6

0.135
2.6

0,167
10.0
Таллий-202 (202Tl)
12.23 (2) сут.

0.054
2.8
X
0.010
31.0

0.069-0.071
61.6

ce
0.357
2.4

0.080
17.1

0.440
91.4
Свинец-203 (203Pb)
51.873 (9) час

0.055
3.0
X
0.010
37.0

0.071-0.073
69.6

ce
0.194
13.3

0.083
19.4

0.279
80.8

0.401
3.4
Астат-211 (211At)
7.21 час

5.870
41.8
X
0.011
19.7

0.077
12.68

0.008
26.1

0.079
21.24

0.06
1.34

0.090
9.53

0.687
0.261
Висмут-213 (213Bi)
45.6 мин.

5.869
1.94
X
0.011
1.75

0.320 (макс: 0.982)
31.0

0.077
1.18

0.492 (макс: 1.422)
65.9

0.079
1.98

0.008
2.31

ce
0.347
3.97

0.440
26.1
Радий-226 (226Ra)
11.43 дня

5.434
2.22
X
0.012
25

5.540
9.0

0.081
15.3

5.607
25.2

0.084
25.4

5.716
51.6

0.095
11.5

5.747
9.0

0.009
28

0.154
5.7

ce
0.024
7.5

0.269
13.9

0.046
12.7

0.056
18.5

0.171
9.3

В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы ОФС.1.8.2.0009.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы, который предназначен для определения однородности (идентичности) иммунобиологических лекарственных препаратов (иммуноглобулинов). Метод основан на различной скорости перемещения белков в электрическом поле в зависимости от соотношения основных и кислотных групп белка, pH, ионной силы буферного раствора, величины заряда и молекулярной массы частиц. Белки движутся в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, движутся к аноду (+), а положительно заряженные – к катоду (-). По скорости движения в электрическом поле белки делятся на 5 основных фракций: альбумины, -глобулины, -глобулины, -глобулины и -глобулины. Наименьшей скоростью продвижения обладают -глобулины (молекулярная масса 150-160 тыс. кДа); они практически остаются на линии старта, т.к. их заряд близок к нейтральному. Альбумины обладают выраженным отрицательным зарядом и меньшей молекулярной массой (67-70 тыс. кДа), поэтому в электрическом поле они движутся с наибольшей скоростью и в результате обнаруживаются дальше других белковых фракций от линии старта. С меньшей скоростью, чем альбумины, в электрическом поле перемещаются -, – и -глобулины.

Электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы

На увлажненную пленку из ацетата целлюлозы размером 90×90 мм, заправленную в специальную рамку, наносят 2-4 мкл исследуемых образцов (5 образцов в 2-х параллельных определениях) и для идентификации контрольный образец – сыворотка для контроля качества электрофоретического разделения белковых фракций. Определение проводят в 2-х параллельных определениях. Предварительно в электродные секции камеры (аппарат для электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы) наливают барбиталовый буферный раствор (pH 8,4). Вместо барбиталового буферного раствора можно использовать любой подходящий коммерческий буферный раствор с указанным значением pH. Рамку с пленкой из ацетата целлюлозы помещают в разделительную камеру, закрывают крышкой, включают источник питания (сила тока 8-10 мА, напряжение 100-129 В). Разделение проводят в течение 30-40 мин. После проведения электрофореза снимают крышку разделительной камеры, не допуская попадания конденсационной воды на пленку. Рамку с пленкой извлекают из камеры, избегая контакта с участками, где происходил электрофорез испытуемых образцов. Пленку достают из рамки пинцетом и дают подсохнуть на воздухе. Затем пленку обрезают с обоих концов (около 2,5 мм), помещают в кювету с 50 мл раствора красителя и выдерживают в течение не более 5 мин. (контакт с красителем в течение более длительного времени может деформировать пленку). Пленку вынимают из кюветы и после стекания избыточной жидкости помещают на 5 мин. поочередно в 3 кюветы, со 100 мл отмывочной жидкости (для ускорения процесса отмывки кювету покачивают). После отмывки фон пленки должен приобрести бледно-голубое окрашивание или стать почти прозрачным. Далее пленку тщательно промывают водой, помещают между листами фильтровальной бумаги и слегка промокают. Идентификацию белковых фракций проводят путем сравнения электрофореграммы испытуемых образцов с электрофореграммой контрольной сыворотки для контроля качества электрофоретического разделения белковых фракций. Сыворотка должна разделиться не менее, чем на 5 фракций: альбумин, – и -глобулины, -глобулин и -глобулин. После проведения электрофореза проводят количественное определение фракций иммуноглобулина путем извлечения краски из пленки элюирующим раствором с последующим колориметрированием или путем денситометрии электрофореграмм.

Количественное определение фракций иммуноглобулина

Колориметрическое определение. Извлечение краски каждой фракции проводят в 3 мл элюирующего раствора с 2-х параллельных электрофореграмм. Элюцию проводят в течение 40 мин. при многократном встряхивании. Оптическую плотность полученного элюата измеряют на спектрофотометре при длине волны 620 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по отношению к элюату неокрашенного участка электрофореграммы. Сумму оптических плотностей всех белковых фракций принимают за 100% и рассчитывают процентное содержание каждой фракции препарата иммуноглобулина. Денситометрическое определение. Электрофореграммы исследуемых образцов высушивают между листами фильтровальной бумаги в полиэтиленовом пакете (такие условия высушивания исключают деформацию пленки). Высушенные пленки просветляют вазелиновым маслом, пропитывая их таким образом, чтобы в пленке не остались пузырьки воздуха. Для этого пленку следует держать горизонтально и нижней поверхностью осторожно касаться масла. Избыток вазелинового масла удаляют, промокая пленку между листами фильтровальной бумаги. Фракции иммуноглобулина записываются денситометром в виде пиков. Величина площади каждого пика пропорциональна количеству краски, соединившейся с белком. С помощью автоматического интегратора площадь каждого пика вычисляют по формуле площади прямоугольника (h x d, где h – максимальная высота пика, d – ширина пика). Сумма площадей всех пиков фракций иммуноглобулина принимается за 100% и вычисляется процентное содержание каждой фракции в испытуемом препарате иммуноглобулина. Примечания
1. Подготовка пленки из ацетата целлюлозы. Пленку смачивают в барбиталовом буферном растворе и гладкой стороной помещают в кювету на поверхность буферного раствора на 2 мин., а затем пинцетом погружают на дно кюветы и выдерживают 5 мин. После этого пленку вынимают пинцетом, избыток влаги удаляют между листами фильтровальной бумаги и заправляют в рамку, избегая неравномерного натяжения и провисания. 2. Подготовка испытуемых образцов. Испытуемые образцы предварительно обрабатывают 0,05% раствором красителя – бромфенолового синего, используемого для отслеживания продвижения и распределения белковых фракций препарата иммуноглобулина в процессе электрофореза. В пробирку типа Эппендорф помещают 100 мкл испытуемого образца и 10 мкл 0,05% раствора бромфенолового синего и перемешивают. Окрашенные испытуемые образцы в объеме 2-4 мкл помещают в каждую лунку лотка. 3. Приготовление барбиталового буферного раствора (pH 8,4) <>. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия барбитала, растворяют в 600-700 мл воды очищенной, прибавляют 11 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

<> Вместо барбиталового буферного раствора можно использовать любой другой коммерческий буферный раствор с известным значением pH.

4. Приготовление 1 М раствора хлористоводородной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 85 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводят объем раствора до метки и перемешивают. 5. Приготовление красителя. К 0,5 г амидочерного 10 Б прибавляют 10 мл уксусной кислоты ледяной, 3 г трихлоруксусной кислоты и 90 мл этилового спирта и перемешивают. Для полного растворения краситель оставляют на 24 ч. Перед использованием раствор красителя перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. 6. Приготовление раствора для отмывки электрофореграмм. В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл помещают 40 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 700 мл воды очищенной и перемешивают. Затем объем раствора доводят водой очищенной до метки и вновь перемешивают. 7. Приготовление элюирующего раствора. Смешивают 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида с 1 мл 1 М раствора натрия эдетата (трилон Б). Если условия проведения анализа и реагенты отличаются от приведенных в этой статье, они должны быть указаны в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации с изложением иной валидированной методики анализа.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в лекарственных препаратах из сыворотки крови человека и животных ОФС.1.8.2.0008.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод определения содержания антиальфастафилолизина (специфических антител), предназначенный для оценки специфической активности препаратов крови (донорская плазма, плазма для фракционирования, иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного и внутримышечного введения, иммуноглобулин человека антистафилококковый для внутримышечного введения), иммуногенности анатоксинов стафилококковых (раствора и суспензии) для подкожного введения, а также для определения активности токсина стафилококкового диагностического. С помощью описываемого метода определяют содержание антиальфастафилолизина – специфических антител к экзотоксину стафилококковому (син.: альфа-токсин, токсин стафилококковый, альфастафилолизин). Метод основан на способности специфических антител нейтрализовать гемолитические свойства стафилококкового альфатоксина. Используемые ингредиенты:
– 0,9% раствор натрия хлорида (pH );
– вода очищенная;
– стандартный образец (CO) антиальфастафилолизина; – эритроциты кролика;
– набор реагентов для определения уровня антиальфастафилолизина в сывороточных препаратах крови человека и животных (токсин стафилококковый диагностический). Стандартный образец (CO) антиальфастафилолизина представляет собой раствор очищенной концентрированной сыворотки крови лошади в глицерине, полученный путем иммунизации лошадей стафилококковым анатоксином, который содержит антитела к альфастафилолизину. Активность стандартного образца (CO) выражается в Международных единицах (ME). Для того, чтобы исключить искажение результатов испытания специфической активности препаратов, обязательно определяют уровень содержания антиальфастафилолизина в сыворотке крови кроликов-доноров. Пригодными считаются те кролики, в сыворотке крови которых антиальфастафилолизин отсутствует или содержится в количестве не более 0,125 МЕ/мл. Кролик в качестве донора может быть использован в течение 3-6 мес. Кровь берут из сердца или краевой вены уха кролика-донора в стерильный сосуд со стеклянными бусами и дефибринируют ее, встряхивая флакон круговыми движениями в течение 10-15 мин. Кровь освобождают от сгустка фибрина и бус, в асептических условиях фильтруя ее в стерильный флакон через стерильную марлю, сложенную в три слоя. Дефибринированная кровь пригодна для приготовления взвеси эритроцитов в течение 2 дней при условии хранения ее при температуре от 2 до 8 °С. Кровь кролика можно консервировать в равных объемах модифицированного раствора Олсвера.

Примечание
Приготовление модифицированного раствора Олсвера. В 1200 мл воды очищенной растворяют 24,6 г глюкозы, 9,6 г натрия цитрата, 5,04 г натрия хлорида, доводят pH до 6,1 с помощью 1 М раствора лимонной кислоты и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Консервированная кровь пригодна для приготовления взвеси эритроцитов в течение 30 дней при условии хранения при температуре от 2 до 8 °С.

Методика испытания

В день проведения испытания эритроциты кролика из дефибринированной или консервированной крови отмывают трижды пятикратным объемом 0,9% раствора натрия хлорида и последующего центрифугирования в течение 15 мин. при 1500 об/мин. Из осадка отмытых эритроцитов готовят 15% суспензию, используя 0,9% раствор натрия хлорида. Для стандартизации методики устанавливают концентрацию эритроцитов в приготовленной взвеси, определяя оптическую плотность гемолизированного раствора эритроцитов. Для этого к 0,5 мл 15% взвеси эритроцитов кролика добавляют 2,0 мл воды очищенной, перемешивают круговыми движениями, после чего разводят полученный раствор 1:6. После приготовления раствора гемолизированных эритроцитов измеряют оптическую плотность раствора гемоглобина, полученного в результате гемолиза, при длине волны 400 нм в кювете с толщиной слоя 1 мм. Контролем служит вода очищенная. Величина оптической плотности приготовленного раствора должна быть равна . В случае, если этот показатель выше 0,54, к приготовленной 15% взвеси эритроцитов добавляют 0,9% раствор натрия хлорида в объеме (Vдоб), рассчитанном по формуле:

Vдоб = Vнач x A400 / 0,53 – Vнач,

где: Vнач – начальный объем 15% взвеси эритроцитов; A400 – значение оптической плотности гемолизированного раствора. В случае, если значение оптической плотности ниже 0,52, то добавляют отмытые эритроциты в объеме (Vэр.доб), рассчитанном по формуле:

Vэр.доб = Vэр.исх x 0,53 / A400 – Vэр.исх,

где: Vэр.исх – объем отмытых эритроцитов, использованных для приготовления 15% взвеси, мл; A400 – значение оптической плотности гемолизированного раствора. После добавления 0,9% раствора натрия хлорида или отмытых эритроцитов следует вновь определить оптическую плотность приготовленного раствора. Приготовленная 15% взвесь эритроцитов с установленным значением оптической плотности пригодна для проведения анализа в течение дня. Токсин стафилококковый диагностический представляет собой фильтрат бульонной культуры токсигенного штамма стафилококка 0-15 и выпускается с установленным значением Lh (лимит гемолитического действия токсина). Лимит гемолитического действия токсина (Lh) – это минимальное количество стафилококкового токсина, соответствующее 1 ME (Международной единице) CO антиальфастафилолизина, которое вызывает почти полный гемолиз (+++) взятых в опыт эритроцитов кролика. В день проведения испытания специфической активности препаратов необходимо установить Lh токсина в условиях опыта, т.к. вследствие влияния различных факторов (нестабильность стафилококкового токсина в процессе хранения, возможные колебания чувствительности отдельных партий эритроцитов кролика и др.) результаты могут отклоняться в ту или иную сторону.

Методика определения лимита гемолитического действия стафилотоксина

Разведения токсина готовят, исходя из величины Lh, указанной в паспорте препарата. Осторожно, не касаясь стенок, в 7 пробирок вносят испытуемый токсин: в среднюю – в объеме, равном величине Lh по паспорту, в остальные – в соответствующих объемах с интервалом в 0,01 мл в стороны убывания и возрастания от средней пробирки. Затем в каждую пробирку добавляют 0,9% раствор натрия хлорида до объема 1,0 мл. CO антиальфастафилолизина разводят до содержания 1 ME антиальфастафилолизина в 1,0 мл и добавляют по 1,0 мл приготовленных разведений токсина в каждую пробирку с CO. В контрольную пробирку (контроль отсутствия спонтанного лизиса эритроцитов кролика) вносят 2,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Пробирки со смесью антигена (стафилотоксина) с антителом (CO антиальфастафилолизина) осторожно встряхивают и инкубируют при температуре от 18 до 22 °С в течение 15 мин. Затем в каждую пробирку ряда (опытные и контрольную) добавляют по 0,1 мл свежеприготовленной 15% взвеси эритроцитов с установленной величиной оптической плотности. Пробирки снова осторожно встряхивают и инкубируют в термостате при температуре () °С в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально по степени гемолиза: (++++) – полный гемолиз эритроцитов;
(+++) – почти полный гемолиз эритроцитов; (++) – частичный гемолиз (50%-ный гемолиз эритроцитов); (+) – следы гемолиза эритроцитов;
(-) – отсутствие гемолиза эритроцитов.
В контрольной пробирке гемолиз эритроцитов должен отсутствовать. Количество токсина, содержащееся в первой пробирке, в которой произошел почти полный гемолиз (+++) эритроцитов, принимается за лимит его гемолитического действия в условиях опыта.

Методика определения содержания антиальфастафилолизина в испытуемых образцах в концентрации 0,2 МЕ/мл и выше

Стафилококковый токсин с установленной величиной Lh непосредственно перед проведением анализа разводят 0,9% раствором натрия хлорида до содержания Lh/5 в 1,0 мл (рабочий раствор токсина). Количество исходного токсина и объем рабочего раствора стафилококкового токсина, необходимый для проведения анализа, рассчитывают, исходя из установленной величины Lh токсина и количества пробирок, необходимых для проведения анализа. Для определения концентрации антиальфастафилолизина в 1 мл испытуемого сывороточного препарата готовят его разведения с учетом предполагаемого содержания антиальфастафилолизина (в МЕ/мл) по схеме (табл. 1). Таблица 1

Схема разведения исследуемых препаратов

N пробирки
Предполагаемое содержание антиальфастафилолизина, (МЕ/мл) Разведение препарата
Количество вносимого в пробирку
исследуемого препарата, мл
0,9% раствора натрия хлорида, мл
1
0,2
–
0,5
–
2
0,5
1:2,5
1,0
1,5
3
1
1:5
1,0
4,0
4
2
1:10
1,0
9,0
5
3
1:15
0,5 (из пробирки N 3)
1,0
6
4
1:20
0,5 (из пробирки N 3)
1,5
7
5
1:25
0,5 (из пробирки N 3)
2,0
8
6
1:30
0,5 {из пробирки N 3)
2,5
9
7
1:35
0,5 (из пробирки N 3)
3,0
10
8
1:40
0,5 (из пробирки N 3)
3,5
11
9
1:45
0,5 (из пробирки N 3)
4,0
12
10
1:50
0,5 (из пробирки N 3)
4,5
13
14
1:70
0,5 (из пробирки N 4)
3,0
14
16
1:80
0,5 (из пробирки N 4)
3,5
15
18
1:90
0,5 (из пробирки N 4)
4,0
16
20
1:100
0,5 (из пробирки N 4)
4,5
17
22
1:110
0,5 (из пробирки N 4)
5,0
18
24
1:120
0,5 (из пробирки N 4)
5,5
19
26
1:130
0,5 (из пробирки N 4)
6,0
20
28
1:140
0,5 (из пробирки N 4)
6,5 и т.д

Каждый опыт сопровождается контролем, необходимым для подтверждения соблюдения условий проведения испытания. Контроль предусматривает оценку точности взятой в опыт дозы стафилококкового токсина и, при необходимости, коррекцию результатов опыта с помощью CO антиальфастафилолизина. CO антиальфастафилолизина разводят 0,9% раствором натрия хлорида до содержания 1 ME антиальфастафилолизина в 1 мл. Далее из этого разведения, содержащего 1 МЕ/мл, готовят следующие разведения по схеме (табл. 2).

Таблица 2

Схема разведения CO антиальфастафилолизина

N пробирки
Концентрация CO антиальфастафилолизина, МЕ/0,5 мл Количество вносимого в пробирку
CO антиальфастафилолизина в разведении 1 МЕ/мл, мл 0,9% раствора натрия хлорида, мл
1
0,12
1,0
3,17
2
0,11
1,0
3,55
3
0,10
1,0
4,00
4
0,09
1,0
4,56
5
0,08
1,0
5,25

В чистые пробирки вносят по 0,5 мл необходимых для анализа разведений испытуемого препарата (опытный ряд) и по 0,5 мл приготовленных разведений CO антиальфастафилолизина (контрольный ряд), затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл приготовленного разведения стафилококкового токсина (рабочего раствора токсина). Пробирки осторожно встряхивают круговыми движениями и инкубируют при температуре от 18 до 22 °С в течение 15 мин. Затем в каждую пробирку опытного и контрольного рядов добавляют по 0,05 мл свежеприготовленной 15% взвеси эритроцитов кролика с установленной величиной оптической плотности. Пробирки вновь осторожно встряхивают круговыми движениями и инкубируют при температуре () °С в течение 1 ч. После инкубации проводят учет результатов реакции по степени выраженности гемолиза. Учет результатов начинают с визуальной оценки степени гемолиза. Для этого в контрольном и опытном рядах отбирают последнюю пробирку, в которой отмечается начало гемолиза (+), все пробирки с 50% (частичным) гемолизом (++) и первую пробирку с почти полным гемолизом (+++). Для остановки гемолиза отобранные пробирки помещают в холодильник на 10 минут при температуре 2-8 °С. После охлаждения пробирки центрифугируют в течение 5 мин. при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость из каждой пробирки быстро и осторожно отбирают в чистые сухие пробирки и определяют оптическую плотность при длине волны 400 нм, используя кюветы с толщиной слоя 1 мм. Раствором сравнения служит 0,9% раствор натрия хлорида. Оптическая плотность, соответствующая 50% гемолизу эритроцитов, должна быть равна . Аналогичным образом определяют оптическую плотность надосадочной жидкости в пробирках контрольного ряда, содержащих разведения CO антиальфастафилолизина. При оптимальных условиях опыта 50% гемолиз эритроцитов и величина оптической плотности, равная , регистрируются в пробирке, содержащей 0,1 ME CO антиальфастафилолизина, т.е. расчетная доза Lh/10 точно соответствует ее истинному значению. В этом случае пробирка опытного ряда, в которой зарегистрирован гемолиз 50% эритроцитов, содержит 0,1 ME антиальфастафилолизина в объеме 0,5 мл, что соответствует содержанию 0,2 ME в мл. Для расчета содержания антиальфастафилолизина в 1,0 мл неразведенного исследуемого образца, необходимо 0,2 ME умножить на величину разведения в данной пробирке. Например, первая пробирка, в которой надосадочная жидкость имеет величину оптической плотности , содержит препарат в разведении 1:100; следовательно, 1 мл неразведенного препарата содержит 0,2 ME x 100 = 20 ME. В результате влияния различных факторов возможно несоответствие дозы токсина, используемой в опыте, получаемому расчетному значению. В таких случаях при расчете специфической активности испытуемых препаратов применяется коэффициент пересчета (К), определяемый для каждого конкретного анализа по формуле:

К = а/0,1,

где: а – концентрация (количество ME) CO антиальфастафилолизина в первой пробирке контрольного ряда, в которой зарегистрирован гемолиз 50% эритроцитов, дающий оптическую плотность надосадочной жидкости .

Методика определения содержания антиальфастафилолизина в испытуемых сывороточных образцах в концентрации не более 0,125 МЕ/мл

Для исключения искажения результатов при определении специфической активности иммуноглобулинов и препаратов крови, необходимо определять содержание антиальфастафилолизина в сыворотке крови кроликов, используемых в качестве доноров для получения эритроцитов, а также при подборе кроликов для проведения испытания иммуногенности (специфической активности), специфической безвредности и антигенной активности стафилококковых анатоксинов. Для таких целей пригодны кролики, в сыворотке крови которых антиальфастафилолизин отсутствует или содержится в количестве не более 0,125 МЕ/мл. Для определения малых концентраций антиальфастафилолизина можно использовать метод титрования препарата с использованием более высоких разведений токсина (Lh/20, Lh/40, Lh/80, и т.д.). Определение содержания антиальфастафилолизина в сыворотках крови кроликов проводят следующим образом: испытуемые сыворотки разводят в 5 раз 0,9% раствором натрия хлорида. Для этого в пробирку с 4,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида добавляют 1,0 мл сыворотки. Затем в необходимых количествах готовят разведения стафилококкового токсина с содержанием в 0,5 мл Lh/40 и Lh/80. Для приготовления разведений токсина используют токсин с точно установленной в день испытания величиной Lh. Разведенную в 5 раз сыворотку разливают по 0,5 мл в 3 пробирки, затем в первую и вторую добавляют по 0,5 мл токсина в разведениях Lh/40 и Lh/80 соответственно, а в третью, являющуюся контрольной, вносят 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Для контроля наличия литического действия токсина берут еще 2 пустые пробирки и наливают в них по 0,5 мл каждого приготовленною разведения токсина и по 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Пробирки осторожно встряхивают, оставляют при температуре 18-22 °С в течение 15 мин., а затем во все пробирки добавляют 0,05 мл свежеприготовленной в день испытания 15% взвеси эритроцитов кролика-донора. Пробирки вновь осторожно встряхивают и инкубируют при температуре () °С в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально по степени гемолиза эритроцитов (табл. 3). В контрольной пробирке N 3 (без добавления токсина) гемолиз эритроцитов должен отсутствовать; в контрольных пробирках с соответствующими разведениями токсина должен произойти полный гемолиз эритроцитов.

Таблица 3

Примеры оценки результатов опыта

N кролика (сыворотки)
Степень гемолиза в пробирках
Оценка результатов (количество МЕ/мл сыворотки) Вывод
Lh/40
Lh/80
Контроль сывороток
1
++++
+++
–
< 0,125 ME
Годен
2
++++
++
–
0,125 ME
Возможно годен
3
+++
+ (-)
–
> 0,125 < 0,25 ME
Не годен
4
++

–
0,25 ME
Не годен
5
+ (-)
–
–
> 0,25 ME
Не годен
Контроль токсина
++++
++++

Результаты следует считать относительно точными, поскольку опыт не сопровождается контролем с CO антиальфастафилолизина. Необходимость включения в опыт контрольного ряда CO в данном случае не оправдана, принимая во внимание цели испытания и концентрацию антиальфастафилолизина. При необходимости точного определения малых концентраций антиальфастафилолизина следует использовать методику, описанную выше, но использовать более высокие разведения токсина.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение антикомплементарной активности лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения ОФС.1.8.2.0007.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод определения антикомплементарной активности лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения. Метод определения антикомплементарной активности (АКА) в препаратах иммуноглобулинов человека основан на способности высокомолекулярных и денатурированных белков (агрегатов) связывать комплемент в отсутствие комплексов антиген-антитело и, таким образом, препятствовать лизису сенсибилизированных эритроцитов. Количество высокомолекулярных и денатурированных белков (агрегатов), обладающих антикомплементарной активностью, в препаратах иммуноглобулинов человека для внутривенного введения должно быть минимальным. Антикомплементарную активность испытуемого препарата иммуноглобулинов (в процентах) выражают как расход комплемента в испытуемом образце по отношению к контрольному комплементу, принятому за 100%. Допустимый предел связывания комплемента – не более 50% (т.е. не более 1 CH50/мг белка).

Методика определения

Для определения антикомплементарной активности иммуноглобулина человека для внутривенного введения берут фиксированное количество испытуемого образца (10 мг иммуноглобулина в объеме 0,2 мл 5% раствора) и инкубируют с определенным количеством комплемента морских свинок (20 CH50); затем добавляют сенсибилизированные эритроциты барана и определяют количество несвязавшегося комплемента. Подготовка 5% суспензии эритроцитов барана. Эритроциты барана отделяют центрифугированием соответствующего объема стабилизированной крови барана в течение 5 мин. при 3000 об/мин. (1000 g). Осадок эритроцитов промывают не менее трех раз 10-кратным (к объему эритроцитов) объемом буферного раствора до получения бесцветной промывной жидкости. Отбирают определенный объем отмытых эритроцитов и смешивают с рассчитанным количеством буферного раствора для получения 5% суспензии (об/об). Плотность клеточной суспензии определяют следующим образом: 0,2 мл полученной суспензии эритроцитов прибавляют к 2,8 мл воды очищенной, перемешивают, центрифугируют полученный раствор в течение 5 мин. при 3000 об/мин., измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 541 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм (раствор сравнения – вода очищенная). Суспензия пригодна для испытания, если измеренная оптическая плотность супернатанта составляет . Корректируют плотность суспензии до указанного показателя добавлением необходимого количества отмытых эритроцитов, если оптическая плотность ниже 0,61, либо рассчитанным по формуле (1) количеством буферного раствора, если оптическая плотность выше 0,63:

VБР = (VH x A/0,62) – VH,

где: VБР – добавочный объем буферного раствора, мл; VH – начальный объем суспензии, мл;
A – значение оптической плотности исходной суспензии; 0,62 – целевое значение оптической плотности.

Титрование гемолитической сыворотки

Готовят серию разведений гемолитической сыворотки, в соответствии с Таблицей 1 (значения разведений гемолитической сыворотки могут быть изменены).

Таблица 1

Порядок приготовления разведений гемолитической сыворотки

Разведение гемолитической сыворотки
Используемые растворы
Объем буферного раствора, мл
Гемолитическая сыворотка
Разведение
Объем, мл
1:50
4,9
Без разведения
0,1
1:100
1,0
1:50
1,0
1:250
4,0
1:50
1,0
1:500
2,0
1:250
2,0
1:1000
2,0
1:500
2,0
1:2000
1,5
1:1000
1,5
1:3000
2,0
1:1000
1,0
1:4000
1,0
1:2000
1,0

Далее из каждой пробирки с полученными разведениями гемолитической сыворотки переносят по 1,0 мл в новые пробирки, добавляют по 1,0 мл 5% суспензии эритроцитов и осторожно перемешивают. Пробы инкубируют при температуре °С в течение 30 мин. По окончании инкубации по 0,2 мл каждой из этих инкубированных проб переносят в новые пробирки и прибавляют по 1,1 мл буферного раствора и по 0,2 мл предварительно приготовленного раствора комплемента (например, разведение 1:150). Испытание выполняют в двух повторностях. Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,4 мл буферного раствора и по 0,1 мл 5% суспензии эритроцитов. Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,4 мл воды очищенной и по 0,1 мл 5% суспензии эритроцитов. Пробы инкубируют в термостате при температуре °С в течение 60 мин., затем охлаждают 10 мин. при температуре °С и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 5 мин. Определяют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Рассчитывают степень гемолиза в процентах (Y%) в каждой пробирке по формуле (2):

где: Aп – среднее значение оптической плотности разведений гемолитической сыворотки; Aо – среднее значение оптической плотности контрольных проб без гемолиза; Aк – среднее значение оптической плотности контрольных проб с полным гемолизом. Строят график, откладывая по оси ординат степень гемолиза в процентах, а по оси абсцисс – обратные значения соответствующего разведения гемолитической сыворотки. Результаты титрования гемолитической сыворотки считают достоверными, если максимальная степень гемолиза находится в пределах 50-70%. Если максимальная степень гемолиза не находится в этих пределах, титрование повторяют с использованием менее или более разбавленного раствора комплемента, соответственно. Определяют минимальное разведение, при котором дальнейшее повышение количества гемолитической сыворотки не вызывает существенного повышения степени гемолиза. Это разведение определяется как одна минимальная гемолитическая единица (1 МГЕ) в 1 мл. В дальнейшем для приготовления суспензии сенсибилизированных эритроцитов барана используют разведение гемолитической сыворотки, содержащее 2 МГЕ/мл (например, если за 1 МГЕ/мл принимают разведение 1:500, то 2 МГЕ/мл – 1:250). При проведении последующих испытаний с использованием образцов гемолитической сыворотки той же серии можно использовать данные, полученные ранее. Рекомендуется определять гемолитическую активность используемой серии гемолитической сыворотки не реже одного раза в 6 месяцев.

Титрование комплемента

Готовят исходное разведение комплемента (например, 1:250) с помощью буферного раствора, затем из него готовят ряд разведений в двух повторностях в соответствии с Таблицей 2:

Таблица 2

Порядок приготовления разведений комплемента

Номера пробирок
Объем разведения комплемента (например, 1:250), мл Объем буферного раствора, мл
1
0,1
1,2
2
0,2
1,1
3
0,3
1,0
4
0,4
0,9
5
0,5
0,8
6
0,6
0,7
7
0,7
0,6
8
0,8
0,5
9
0,9
0,4
10
1,0
0,3
11
1,1
0,2
12
1,2
0,1

Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,3 мл буферного раствора. Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,3 мл воды очищенной. Затем в каждую пробирку (с разведениями комплемента пробирки 1-12 и контрольными пробами) добавляют по 0,2 мл гемолитической системы (состоит из суспензии эритроцитов барана и гемолитической сыворотки), тщательно перемешивают и инкубируют в термостате при температуре °С в течение 60 мин.; затем охлаждают 10 мин. при температуре °С и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 5 мин. Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения – буферный раствор. Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3):

где: Aп – среднее значение оптической плотности испытуемой пробы; Aо – среднее значение оптической плотности контрольной пробы без гемолиза; Aк – среднее значение оптической плотности контрольной пробы с полным гемолизом. С помощью программного обеспечения или на миллиметровой бумаге с логарифмическим масштабом строят график со значениями Y/(1-Y) по оси абсцисс и количеством разведенного комплемента (в мл) по оси ординат. Получают оптимизированную кривую (при построении графика учитываются значения степени гемолиза, находящиеся в диапазоне от 0,15 до 0,85; значения, находящиеся за пределами указанного диапазона не учитываются), соответствующую нанесенным точкам, и определяют ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y)=1. Вычисляют активность комплемента в исходном растворе, выраженную в гемолитических единицах (CH50/мл), по формуле (4):

где: B – величина, обратная степени разведения комплемента; C – объем разведенного комплемента (мл), вызывающий 50% гемолиз (Y/(1-Y)=1); 5 – множитель для учета количества эритроцитов. Результат титрования комплемента считают достоверным при условии, что наклон прямой составляет от 0,15 до 0,40, предпочтительно в интервале 0,18-0,30.

Определение антикомплементарной активности испытуемого образца иммуноглобулина

Проверяют pH испытуемого образца иммуноглобулина потенциометрическим методом в соответствии с ОФС “Ионометрия”. При pH менее 7,0 его доводят до значений 7,0-7,3 с помощью 0,1 М раствора натрия гидроксида (если нет иных указаний в фармакопейной статье). Определяют содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина колориметрическим методом с биуретовым реактивом в соответствии с ОФС “Определение белка”. – Готовят пробу испытуемого образца иммуноглобулина, в зависимости от содержания белка. Например, при содержании белка в испытуемом образце иммуноглобулина 50 мг/мл, к 0,2 мл раствора иммуноглобулина добавляют 0,6 мл буферного раствора. Если содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина отличается от 50 мг/мл, используют большие или меньшие объемы испытуемого образца иммуноглобулина. Точный объем испытуемого образца иммуноглобулина (V) в мл рассчитывают по формуле (5):

где: 50 – необходимое содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина, мг/мл; 0,2 – объем испытуемого образца иммуноглобулина, взятый для испытания, мл; C – фактическое содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина, мг/мл. Объем пробы доводят буферным раствором до 0,8 мл. Подготовку положительного и отрицательного контролей с использованием стандартного образца иммуноглобулина человека (BRP или аналогичного) проводят в соответствии с инструкцией по его применению. Для приготовления пробы с контролем комплемента в пробирку вносят 0,8 мл буферного раствора. Во все приготовленные пробы добавляют по 0,2 мл раствора комплемента, содержащего 100 CH50/мл. Конечный объем проб – 1 мл. Пробирки инкубируют в термостате при температуре °С в течение 60 мин. По истечении срока инкубации готовят разведения 1:50 для проб с контролем комплемента и испытуемым образцом иммуноглобулина. Разведения контрольных образцов (положительный и отрицательный контроль) проводят в соответствии с инструкцией по применению к стандартному образцу. Проводят определение остаточной активности комплемента (в двух повторностях) в соответствии с Таблицей 3.

Таблица 3

Порядок подготовки проб для определения остаточной активности комплемента

Номера пробирок
Объем пробы, мл
Объем буферного раствора, мл
1
0,1
1,2
2
0,2
1,1
3
0,3
1,0
4
0,4
0,9
5
0,5
0,8
6
0,6
0,7
7
0,7
0,6
8
0,8
0,5
9
0,9
0,4
10
1,0
0,3
11
1,1
0,2
12
1,2
0,1

Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,3 мл буферного раствора. Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,3 мл воды очищенной. Затем в каждую пробирку (пробирки 1-12 и пробирки с контрольными пробами) добавляют по 0,2 мл гемолитической системы, тщательно перемешивают и инкубируют в термостате при температуре °С в течение 60 мин., затем охлаждают 10 мин. при температуре °С и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 5 мин. Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения – буферный раствор. Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3) и строят график, как и при титровании комплемента. Если центрифугирование и/или считывание результатов не может быть проведено немедленно, пробы хранят при температуре °С не более 1 ч.

Учет и интерпретация результатов

Вычисляют по формуле (4) активность комплемента в гемолитических единицах (CH50/мл) для испытуемого образца иммуноглобулина, контрольных образцов (положительный и отрицательный контроли) и контроля комплемента. Антикомплементарную активность испытуемого образца иммуноглобулина (в %) и контрольных образцов (положительный и отрицательный контроли) вычисляют относительно АКА в контроле комплемента, принятой за 100%, по формуле (6):

где: b – активность комплемента (CH50/мл) в контроле комплемента, рассчитанная по формуле (4); a – активность комплемента (CH50/мл) в испытуемом образце иммуноглобулина и в контрольных образцах (положительный и отрицательный контроли), рассчитанная по формуле (4). Антикомплементарную активность испытуемого образца иммуноглобулина в CH50/мг белка рассчитывают по формуле (7):

где: 20 CH50 – количество комплемента, взятого для испытания; b – активность комплемента (CH50/мл) в контроле комплемента, рассчитанная по формуле (4); a – активность комплемента (CH50/мл) в испытуемом образце иммуноглобулина и в контрольных образцах (положительный и отрицательный контроли), рассчитанная по формуле (4); 10 – количество белка иммуноглобулина (мг), взятого для испытания. Результаты испытания препарата иммуноглобулина считают достоверными, если: 1. Антикомплементарная активность отрицательного и положительного контролей находится в пределах, лимитируемых в инструкции по применению к стандартному образцу; 2. Активность комплемента в контроле комплемента находится в пределах от 80 до 120 CH50/мл. В противном случае проводят повторный анализ.

Примечания
1. Приготовление буферных растворов (желатин-солевого или желатин-барбиталового). 1.1. Приготовление желатин-солевого раствора. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 1 г желатина, прибавляют примерно 200 мл воды очищенной и оставляют набухать. Смесь нагревают при температуре °С до полного растворения. Полученный прозрачный раствор охлаждают до комнатной температуры. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия хлорида, 0,1 г кальция хлорида безводного, 0,04 г магния хлорида 6-водного, растворяют в небольшом количестве воды очищенной и прибавляют приготовленный раствор желатина. Общий объем раствора доводят водой очищенной до метки и перемешивают. Доводят pH раствора до 7,2-7,3 с помощью 0,1 М раствора натрия гидроксида. Раствор используют свежеприготовленным. 1.2. Приготовление желатин-барбиталового буферного раствора. 1.2.1. Приготовление исходного раствора кальция и магния хлорида. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют в небольшом количестве воды очищенной 4,412 г кальция хлорида дигидрата и 20,332 г магния хлорида 6-ти водного, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре °С в течение 1 мес. 1.2.2. Приготовление исходного барбиталового буферного раствора (pH 7,3). В мерной колбе вместимостью 2000 мл растворяют, постоянно перемешивая, 83,0 г натрия хлорида и 10,192 г барбитала натрия в 1700 мл воды очищенной. Показатель pH доводят до 7,31 М с помощью раствора хлористоводородной кислоты. Добавляют 5 мл исходного раствора кальция и магния хлорида, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре °С в течение 1 мес. 1.2.3. Приготовление раствора желатина. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,25 г желатина, прибавляют 500 мл воды очищенной и тщательно перемешивают. Полученную смесь нагревают при температуре °С до полного растворения желатина. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Используют только свежеприготовленный раствор. 1.2.4. Приготовление желатин-барбиталового буферного раствора. Прибавляют 4 части раствора желатина к 1 части исходного барбиталового буферного раствора, тщательно перемешивают и доводят pH до 7,2-7,3 с помощью 1 М раствора натрия гидроксида или 1 М раствором хлористоводородной кислоты. Раствор используют свежеприготовленным. 2. Подготовка контрольных образцов. Подготовку отрицательного и положительного контролей осуществляют в соответствии с прилагаемой инструкцией по применению к стандартному образцу (CO) иммуноглобулина человека. 3. Приготовление стабилизированной крови барана. Берут один объем крови барана и один объем цитратного раствора, перемешивают. Хранят при температуре °С. Стабилизированную кровь барана можно использовать в течение 28 дней, но не ранее чем через 7 дней после взятия. 4. Приготовление цитратного раствора. Растворяют в 750 мл воды очищенной 20,5 г глюкозы, 8,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного и 4,2 г натрия хлорида, устанавливают pH раствора 6,1 раствором лимонной кислоты (100 г/л), доводят объем раствора до 1000 мл водой очищенной. Стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. при температуре 100 °С. Хранят при температуре °С в течение 1 мес. 5. Приготовление гемолитической системы (суспензии сенсибилизированных эритроцитов барана). Гемолитическая сыворотка – иммунная сыворотка против эритроцитов барана, которую получают путем иммунизации кроликов. (Такие гемолитические сыворотки предлагаются рядом коммерческих источников). Для получения гемолитической системы гемолитическую сыворотку, разведенную до 2 МГЕ/мл, добавляют к 5% суспензии эритроцитов барана в соотношении 1:1. Инкубируют в термостате при температуре °С в течение 15 минут, после чего хранят при температуре °С и используют в течение 6 часов. 6. Комплемент морских свинок. Готовят пул сыворотки из крови не менее 10 морских свинок. Сыворотку отделяют от сгустка крови центрифугированием при температуре 4 °С. Хранят в небольших количествах при температуре ниже минус 70 °С. 7. Приготовление раствора комплемента, содержащего 100 CH50/мл. В зависимости от исходной активности комплемента 1 мл раствора комплемента разбавляют буферным раствором до содержания 100 CH50/мл.

В соответствии с Приказом Минздрава России от 21.11.2014 N 768 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение молекулярных параметров иммуноглобулинов методом ВЭЖХ ОФС.1.8.2.0006.15
Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), предназначенный для определения молекулярных параметров иммуноглобулинов. Механизм процесса эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии заключается в хроматографическом распределении молекул иммуноглобулинов в соответствии с их размером и молекулярными массами. Основные положения эксклюзионной ВЭЖХ указаны в ОФС “ВЭЖХ”. Метод эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии вводится взамен метода гель-фильтрации.

Метод эксклюзионной высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Процесс эксклюзионной ВЭЖХ происходит в водной среде и называется гель-фильтрационным, в результате чего происходит распределение молекул иммуноглобулинов по их размеру в широком диапазоне молекулярных масс от 10 до 600 кДа. Особенностью метода эксклюзионной жидкостной ВЭЖХ является использование высокого давления (до 400 бар) и мелкозернистых сорбентов (размером 3-5 мкм). Это позволяет быстро и полно разделять сложные смеси веществ. Принципиальные основы метода заключаются в объеме эксклюзионной колонки, который можно выразить суммой трех слагаемых:

Vc = Vo + Vi + Vd,

где: Vo – свободный объем подвижной фазы; Vi – объем пор, заполненный подвижной фазой (объем неподвижной фазы); Vd – объем матрицы сорбента без учета пор. Полный объем подвижной фазы колонки (Vt) представляет собой сумму свободного объема подвижной фазы (Vo) и объема неподвижной фазы Vi. Удерживание молекул в эксклюзионной колонке определяется вероятностью их диффузии в поры и зависит в основном от соотношения размеров молекул и пор. Коэффициент распределения Kd представляет собой отношение концентраций вещества в неподвижной (C1) и подвижной фазах (Со) : Kd = C1/Co. Время удерживания молекул иммуноглобулинов зависит от силы взаимодействия вещества с подвижной и неподвижной фазами. Анализ иммуноглобулинов проводят в соответствии с методиками, изложенными в фармакопейных статьях или нормативной документации, с указанием следующих необходимых параметров: пробоподготовки исследуемого образца; приготовления стандартных образцов; приготовления подвижной фазы. При описании требуемых хроматографических условий необходимо указать: – характеристику хроматографической колонки (ее марку (тип), размеры); – диапазон разделения молекулярных масс; – состав и название подвижной фазы;
– наименование носителя (сорбента);
– характеристику детектора;
– длину волны;
– объем вводимой пробы;
– температуру колонки;
– скорость потока подвижной фазы;
– последовательность (порядок) ввода проб; – время хроматографирования.
В процессе разделения фракций иммуноглобулинов на хроматографической колонке белковые молекулы иммуноглобулина с молекулярной массой более 40 кДа свободно проходят между гранулами носителя (сорбента), не попадая и не задерживаясь в пористых гранулах. Более мелкие молекулы частично попадают и задерживаются в гранулах и медленнее вымываются из них подвижной фазой. Очень мелкие молекулы с молекулярной массой менее 50 кДа попадают в гранулы носителя и медленно вымываются подвижной фазой. Распределение по времени удерживания/выхода компонентов (фракций) иммуноглобулинов, о чем указывается в фармакопейных статьях или нормативной документации, происходит в порядке уменьшения их молекулярных масс: полимеры (агрегаты), димеры, мономеры Ig G (основная фракция сывороточного иммуноглобулина) и фрагменты Ig G. Количественный анализ иммуноглобулинов состоит из следующих стадий: 1) хроматографическое разделение; 2) измерение площади и/или высоты пиков; 3) расчет количественного состава фракций иммуноглобулинов на основании хроматографических данных; 4) интерпретация полученных результатов (статистическая обработка данных). Содержание компонентов (фракций) иммуноглобулинов вычисляется автоматически с помощью программного обеспечения счетно-аналитического прибора по площадям пиков и указывается в процентах. Процентное содержание определяемых компонентов иммуноглобулинов должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Пригодность хроматографической системы оценивается по стандартным образцам. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются условия, описанные в фармакопейной статье или нормативной документации: фактор разрешения (R) между пиками, эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику с указанием числа теоретических тарелок, относительное стандартное отклонение площадей пиков. Примечания
1. Испытуемый раствор. Образцы иммуноглобулина перед анализом разводят, как указано в фармакопейной статье или нормативной документации. 2. Подвижная фаза. Подвижную фазу готовят в соответствии с методикой, изложенной в фармакопейной статье или нормативной документации. 3. Стандартные образцы:
– раствор для проверки пригодности хроматографической системы; – маркеры для эксклюзионной ВЭЖХ с молекулярной массой в диапазоне от 10000 до 600000 Да. Приготовление маркеров осуществляют в соответствии с инструкцией по применению или как описано в методике, изложенной в фармакопейной статье или нормативной документации.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

ПРИКАЗ
от 9 декабря 2014 г. N 1780

Список изменяющих документов
(в ред. Приказа Минздрава МО от 17.06.2015 N 854)

Во исполнение требований статьи 79.1 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ “Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации” (с последующими изменениями), статьи 11.1 Закона Московской области от 14.11.2013 N 132/2013-ОЗ “О здравоохранении в Московской области” (с последующими изменениями) и в целях предоставления гражданам информации о качестве оказания услуг медицинскими организациями, а также повышения качества их деятельности, приказываю: 1. Сформировать при Министерстве здравоохранения Московской области общественный совет по проведению независимой оценки качества оказания услуг медицинскими организациями, расположенными на территории Московской области (далее – Общественный совет), в составе в соответствии с приложением 1. 2. Утвердить Положение об Общественном совете (приложение 2). 3. Контроль за исполнением настоящего приказа оставляю за собой.

Министр здравоохранения
Московской области
Н.В.СУСЛОНОВА

Приложение 1
к приказу Министерства
здравоохранения Московской области
от 9 декабря 2014 г. N 1780

СОСТАВ
ОБЩЕСТВЕННОГО СОВЕТА ПО ПРОВЕДЕНИЮ НЕЗАВИСИМОЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ОКАЗАНИЯ УСЛУГ МЕДИЦИНСКИМИ ОРГАНИЗАЦИЯМИ, РАСПОЛОЖЕННЫМИ НА ТЕРРИТОРИИ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

Список изменяющих документов
(в ред. Приказа Минздрава МО от 17.06.2015 N 854)

Алекина Ольга Владимировна

председатель Правления Региональной общественной организации “Помощь больным муковисцидозом” по согласованию; Васорина Татьяна Васильевна
–
президент Московской областной региональной организации Общероссийской благотворительной общественной организации “Всероссийское общество гемофилии” (по согласованию); Геппе Наталья Анатольевна
–
заведующий кафедрой детских болезней Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М.Сеченова, член исполкома Союза педиатров России, член Общества православных врачей (по согласованию); Герасимова Наталия Львовна
–
президент Межрегиональной общественной организации “Ассоциация фондов помощи больным с нервно-мышечными заболеваниями “Надежда” (по согласованию); Густова Эльвира Васильевна
–
президент Межрегиональной общественной организации инвалидов “Московская диабетическая ассоциация больных сахарным диабетом “МДА” (по согласованию); Домников Анатолий Иванович
–
председатель Московской областной организации профсоюза работников здравоохранения РФ (по согласованию); Краснопольский Владислав Иванович
–
директор государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области “Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии”, академик РАМН; Антонюк Анатолий Федорович
–
президент Московского областного общества больных бронхиальной астмой “Дыхание” (по согласованию); Круглов Евгений Ефимович
–
главный врач государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области “Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского”; Лакунин Константин Юрьевич
–
председатель Региональной организации содействия развития муниципального здравоохранения Московской области (по согласованию); Лившиц Сергей Анатольевич
–
председатель некоммерческого партнерства “Московская областная врачебная палата” (по согласованию); Мясникова Ирина Владимировна
–
исполнительный директор Общероссийской общественной организации “Всероссийское общество редких (орфанных) заболеваний” (по согласованию); Серова Ольга Федоровна
–
главный врач государственного бюджетного учреждения здравоохранения Московской области “Московский областной перинатальный центр”; Басенко Оксана Александровна
–
главный специалист отдела развития здравоохранения и взаимодействия с муниципальными образованиями в Управлении информационно-аналитической работы Министерства здравоохранения Московской области. Санина Наталья Петровна
–
профессор кафедры терапии факультета усовершенствования врачей ГБУЗ МО “Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского” Омельяновский Виталий Владимирович
–
профессор кафедры клинической фармакологии Российского государственного медицинского университета Урсова Наталья Игоревна
–
заведующий педиатрическим отделением по разделу “Наука” ГБУЗ МО “Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского” Шевцова Наталья Николаевна
–
доцент кафедры общей врачебной практики факультета усовершенствования врачей ГБУЗ МО “Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского” Кашежева Анисат Заурбековна
–
заместитель директора ГБУЗ МО “Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского” Гуров Андрей Николаевич
–
заместитель директора ГБУЗ МО “Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского”

Приложение 2
к приказу Министерства
здравоохранения Московской области
от 9 декабря 2014 г. N 1780

ПОЛОЖЕНИЕ
ОБ ОБЩЕСТВЕННОМ СОВЕТЕ ПО ПРОВЕДЕНИЮ НЕЗАВИСИМОЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ОКАЗАНИЯ УСЛУГ МЕДИЦИНСКИМИ ОРГАНИЗАЦИЯМИ, РАСПОЛОЖЕННЫМИ НА ТЕРРИТОРИИ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

Список изменяющих документов
(в ред. Приказа Минздрава МО от 17.06.2015 N 854)

Общие положения

1.1. Настоящее Положение определяет компетенцию, порядок формирования и деятельности Общественного совета по проведению независимой оценки качества оказания услуг медицинскими организациями, расположенными на территории Московской области (далее – Общественный совет). 1.2. Общественный совет является совещательно-консультативным органом общественного контроля. 1.3. Решения Общественного совета носят рекомендательный характер. 1.4. Положение об Общественном совете, персональный состав Общественного совета и изменения, вносимые в них, утверждаются приказом Министерства здравоохранения Московской области (далее – Министерство). 1.5. Общественный совет в своей деятельности руководствуется Конституцией Российской Федерации, законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации, законами и иными нормативными правовыми актами Московской области, а также настоящим Положением. 1.6. Общественный совет осуществляет свою деятельность на основе Методических рекомендаций по проведению независимой оценки качества оказания услуг медицинскими организациями, утвержденных приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 14.05.2015 N 240. (п. 1.6 в ред. Приказа Минздрава МО от 17.06.2015 N 854)

2. Компетенция Общественного совета

2.1. Общественный совет:
– определяет перечни медицинских организаций, которые участвуют в реализации программы государственных гарантий бесплатного оказания гражданам медицинской помощи, и в отношении которых проводится независимая оценка качества оказания услуг; – формирует предложения для разработки технического задания для организации, которая осуществляет сбор, обобщение и анализ информации о качестве оказания услуг медицинскими организациями, расположенными на территории Московской области (далее – медицинские организации); – принимает участие в рассмотрении проектов документации о закупке работ, услуг, а также проектов государственных контрактов; – осуществляет независимую оценку качества оказания услуг медицинскими организациями с использованием общедоступной информации по следующим критериям: открытость и доступность информации о медицинской организации; комфортность условий предоставления медицинских услуг; доступность получения медицинских услуг; время ожидания предоставления медицинской услуги; доброжелательность, вежливость, компетентность работников медицинской организации; удовлетворенность оказанными услугами;
– устанавливает при необходимости критерии оценки качества оказания услуг медицинскими организациями (дополнительно к общим критериям, установленным в абзаце 5 настоящего пункта); – представляет в Министерство результаты независимой оценки качества оказания услуг медицинскими организациями, а также предложения об улучшении их деятельности.

3. Порядок формирования состава Общественного совета

3.1. Состав Общественного совета утверждается Министерством. 3.2. Члены Общественного совета исполняют свои обязанности на общественных началах. 3.3. Общественный совет формируется на основе добровольного участия граждан в его деятельности. В состав Общественного совета включаются представители общественных объединений по защите прав граждан в сфере охраны здоровья, медицинских профессиональных некоммерческих организаций, независимые эксперты, представители профессиональных сообществ, заинтересованных общественных организаций и иные лица. 3.4. Председатель Общественного совета, заместитель Председателя Общественного совета и секретарь Общественного совета избираются на его первом заседании из числа выдвинутых членами Общественного совета кандидатур открытым голосованием. 3.5. Полномочия члена Общественного совета прекращаются в случае: подачи им заявления о выходе из состава Общественного совета; вступления в законную силу вынесенного в отношении его обвинительного приговора суда; признания его недееспособным, безвестно отсутствующим или умершим на основании решения суда, вступившего в законную силу.

4. Порядок деятельности Общественного совета

4.1. Первое заседание Общественного совета проводится не позднее чем через месяц после утверждения состава Общественного совета. 4.2. Общественный совет осуществляет свою деятельность в соответствии с планом работы, согласованным с Министерством. 4.3. Основной формой деятельности Общественного совета являются заседания, которые проводятся не реже одного раза в полугодие, и считаются правомочными при присутствии на них не менее половины его членов. По решению Общественного совета может быть проведено внеочередное заседание, а также заочное. 4.4. Решения Общественного совета по рассмотренным вопросам принимаются открытым голосованием простым большинством голосов (от числа присутствующих). 4.5. При равенстве голосов Председатель Общественного совета имеет право решающего голоса. 4.6. Решения Общественного совета отражаются в протоколах его заседаний, копии которых представляются секретарем Общественного совета членам Общественного совета. Отчет об итогах деятельности Общественного совета подлежит публикации в сети Интернет. 4.7. Члены Общественного совета, несогласные с решением Общественного совета, вправе изложить свое особое мнение, которое в обязательном порядке вносится в протокол заседания. 4.8. За 10 дней до начала заседания Общественного совета ответственные за рассмотрение вопросов члены Общественного совета предоставляют секретарю Общественного совета информационные и иные материалы. Секретарь Общественного совета за 5 календарных дней до начала заседания Общественного совета предоставляет указанные материалы в Министерство и членам Общественного совета. 4.9. Председатель Общественного совета: вносит предложения в Министерство по уточнению и дополнению состава Общественного совета; организует работу Общественного совета и председательствует на его заседаниях; подписывает протоколы заседаний и другие документы Общественного совета; формирует при участии членов Общественного совета и утверждает план работы, повестку заседания и состав экспертов и иных лиц, приглашаемых на заседание Общественного совета; взаимодействует с Министерством по вопросам реализации решений Общественного совета; принимает решение в случае необходимости о проведении заочного заседания Общественного совета, решения на котором принимаются путем опроса его членов. 4.10. Заместитель Председателя Общественного совета: по поручению Председателя Общественного совета председательствует на заседаниях в его отсутствие (отпуск, болезнь и т.п.); участвует в подготовке планов работы Общественного совета, формировании состава экспертов и иных лиц, приглашаемых на заседание Общественного совета; обеспечивает коллективное обсуждение вопросов, внесенных на рассмотрение Общественного совета. 4.11. Члены Общественного совета:
– имеют право:
вносить предложения по формированию повестки дня заседаний Общественного совета; возглавлять комиссии и рабочие группы, формируемые Общественным советом; предлагать кандидатуры экспертов для участия в заседаниях Общественного совета; участвовать в подготовке материалов по рассматриваемым вопросам; представлять свою позицию по результатам рассмотренных материалов при проведении заседания Общественного совета путем опроса в срок не более 10 дней с даты направления им материалов; в установленном порядке знакомиться с обращениями граждан, в том числе направленными с использованием сети Интернет, о нарушении их прав, свобод и законных интересов в сфере компетенции Министерства, а также с результатами рассмотрения таких обращений; принимать участие в порядке, определяемом Министерством, в приеме граждан, осуществляемом должностными лицами Министерства; – обладают равными правами при обсуждении вопросов и голосовании; – обязаны лично участвовать в заседаниях Общественного совета и не вправе делегировать свои полномочия другим лицам. 4.12. Секретарь Общественного совета:
уведомляет членов Общественного совета о дате, месте и повестке предстоящего заседания, а также об утвержденном плане работы Общественного совета; готовит и согласовывает с Председателем Общественного совета проекты документов и иных материалов для обсуждения на заседаниях Общественного совета; ведет, оформляет и рассылает членам Общественного совета протоколы заседаний и иные документы и материалы; хранит документацию Общественного совета и готовит в установленном порядке документы для архивного хранения и уничтожения; в случае проведения заседания Общественного совета путем опроса его членов обеспечивает направление всем членам Общественного совета необходимых материалов и сбор их мнений по результатам рассмотрения материалов; готовит и согласовывает с Председателем Общественного совета состав информации о деятельности Общественного совета, обязательной для размещения на официальном сайте Министерства в сети Интернет.