В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение коэффициента водопоглощения и расходного коэффициента лекарственного растительного сырья ОФС.1.5.3.0012.15
Вводится впервые
Коэффициент водопоглощения – показатель, определяющий количество воды в миллилитрах, удерживаемое 1 г лекарственного растительного сырья после его отжатия в перфорированном стакане инфундирного аппарата. Коэффициент водопоглощения используется для расчетов при получении водных извлечений из лекарственного растительного сырья. Для определения коэффициента водопоглощения навеску цельного или измельченного лекарственного растительного сырья массой 10,0 г заливают водой очищенной и готовят водное извлечение в соответствии с ОФС “Настои и отвары”. После изготовления полученное водное извлечение процеживают, оставшееся сырье отжимают в перфорированном стакане инфундирки и измеряют объем полученного водного извлечения. Коэффициент водопоглощения (Квп) рассчитывают по следующей формуле:
,
где: V1 – объем водного извлечения, который необходимо получить, мл; V2 – объем водного извлечения, который был получен после отжатия сырья, мл; a – навеска лекарственного растительного сырья, взятая для приготовления водного извлечения, г.
Коэффициент водопоглощения рассчитывают как среднее арифметическое результатов 3 параллельных определений. В таблице 1 приведены значения коэффициентов водопоглощения для отдельных видов лекарственного растительного сырья.
Таблица 1
Коэффициенты водопоглощения некоторых видов лекарственного растительного сырья
Вид сырья
Коэффициент
Вид сырья
Коэффициент
Валерианы корневища с корнями
2,9
Мать-и-мачехи листья
3,0
Мяты перечной листья
2,4
Горицвета трава
2,8
Подорожника большого листья
2,5
Горца змеиного (змеевика) корневища
2,0
Полыни горькой трава
2,1
Дуба кора
2,0
Пустырника трава
2,0
Душицы трава
2,0
Ромашки аптечной цветки
3,4
Зверобоя трава
1,6
Сенны листья
1,8
Калины кора
2,0
Солодки корни
1,7
Крапивы листья
1,8
Сушеницы трава
2,2
Кровохлебки корневища и корни
1,7
Толокнянки листья
1,4
Крушины кора
1,6
Шалфея листья
3,3
Лапчатки корневища
1,4
Шиповника плоды
1,1
Если коэффициент водопоглощения для лекарственного растительного сырья отсутствует, используют его следующие условные значения: – для корней и корневищ – 1,5 мл/г;
– для коры, почек, травы и цветков – 2,0 мл/г; – для семян – 3,0 мл/г.
Объем воды (Vквп), необходимый для изготовления водного извлечения с учетом коэффициента водопоглощения (Квп), рассчитывают по следующей формуле:
Vквп = V + m · Квп,
где: V – объем водного извлечения, который необходимо получить, мл; m – масса лекарственного растительного сырья, необходимая для приготовления водного извлечения, г; Квн – коэффициент водопоглощения данного лекарственного растительного сырья.
Для лекарственного растительного сырья, содержащего слизь, в частности – корней алтея, определяют расходный коэффициент (Кр). Расходный коэффициент показывает, во сколько раз следует увеличить массу сырья и объем воды очищенной, чтобы получить требуемый объем (мл) водного извлечения. Данный показатель характеризует качество лекарственного растительного сырья, содержащего слизь, и позволяет контролировать процессы его заготовки и сушки. Расходные коэффициенты для изготовления водного извлечения корней алтея при различных соотношениях сырья и экстрагента приведены в таблице 2.
Таблица 2
Расходные коэффициенты для изготовления водного извлечения корней алтея при различных соотношениях сырья и экстрагента
Соотношение сырье-экстрагент
Расходный коэффициент корней алтея, Kp
1:100
1,05
1:50
1,10
1:30
1,15
1:25
1,20
1:20
1,30
Для водного извлечения корней алтея с концентрацией более 5% (1:20) расходный коэффициент (Кр) рассчитывают по формуле:
где: m – количество корня алтея (г), необходимое для изготовления 100 мл водного извлечения необходимой концентрации; 4,6 – постоянная величина, показывающая, что 1 г корня алтея удерживает 4,6 мл водного извлечения.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах ОФС.1.5.3.0011.15
Вводится впервые
Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырье и лекарственные растительные препараты, независимо от формы выпуска, на этапах переработки лекарственного растительного сырья, при производстве лекарственных растительных препаратов, хранении, транспортировании, закупке, ввозе в страну, сертификации и реализации (далее обращение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов). Содержание остаточных пестицидов, как правило, определяют в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, получаемых от культивируемых лекарственных растений.
Термины и определения
В настоящей общей фармакопейной статье использованы следующие определения. Пестициды – химические или биологические препараты, используемые для борьбы с вредителями и болезнями растений, сорными растениями, вредителями хранящейся сельскохозяйственной продукции, бытовыми вредителями и внешними паразитами животных, а также для регулирования роста растений, предуборочного удаления листьев (дефолианты), предуборочного подсушивания растений (десиканты). Остаточные пестициды – вещества, включающие в себя остаточное количество пестицидов и любые производные пестицидов (продукты конверсии, реакций, метаболиты, примеси). Проба для определения остаточных пестицидов и тяжелых металлов – определенное количество пробы, выделенной методом квартования из объединенной пробы. Единицы измерения – мг/кг – количество мг пестицида в 1 кг лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата. Средства измерении включают необходимые для определения содержания пестицидов приборы и методики выполнения измерений, имеющие нормированные метрологические характеристики. Контроль на содержание остаточных количеств пестицидов – определение соответствия исследуемых объектов требованиям нормативной документации.
Общие положения
Для обеспечения достоверности полученных результатов анализируемое на содержание остаточных пестицидов лекарственное растительное сырье/препараты, как правило, должно иметь влажность не более 15%. В лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах определяют содержание остаточных пестицидов, в том числе хлорсодержащих: гексахлорциклогексана (ГХЦГ) и его изомеров (-, -, -ГХЦГ), дихлордифенилтрихлорметилметана (ДДТ) и его метаболитов (ДДД – дихлордифенилдихлорметилметана, ДДЕ – дихлордифенилхлорэтилена), гексахлрбензол (ГХБ), алдрина, гептахлора и других. Основные этапы определения содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах: – отбор пробы для определения остаточных пестицидов, тяжелых металлов и мышьяка (ОФС “Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов”); – подготовка пробы к определению;
– определение содержания остаточных пестицидов в испытуемых образцах; – обработка результатов измерений;
– определение соответствия сырья допустимым нормам. Пробы должны анализироваться немедленно, во избежание возможного разрушения остатков пестицидов. Если это невозможно, пробы сохраняют в герметичных контейнерах, пригодных для контакта с пищевыми продуктами, при температуре ниже 0 °С в защищенном от света месте. Все реактивы и растворители не должны содержать примесей, особенно пестицидов, которые могут влиять на результаты анализа. Используемые аналитические методы должны удовлетворять требованиям ОФС “Валидация аналитических методик” и следующим критериям: – выбранный метод является подходящим для комбинации остаточный пестицид/лекарственное растительное сырье; – при интерпретации результатов необходимо учитывать влияние некоторых компонентов (например, влияние дисульфида у растений семейства Крестоцветных); – концентрации испытуемого раствора и раствора сравнения, а также настройки аппаратуры должны быть такими, чтобы аналитический сигнал, используемый для количественного анализа пестицидов, находился в пределах линейного диапазона используемого детектора; – каждый пестицид извлекается в диапазоне 70-110%; – повторяемость и воспроизводимость метода: относительное стандартное отклонение (%) не должно превышать значений, указанных в табл. 1. Для определения содержания пестицидов в пробе используется газовая (ГХ/МС) или жидкостная (ВЭЖХ/МС) хроматография с масс-спектрометрическим детектором. При отсутствии масс-спектрометрического детектора можно использовать электронно-захватный или другие селективные детекторы. Определение проводится в соответствии с требованиями ОФС “Хроматография”, “Газовая хроматография”, “Высокоэффективная жидкостная хроматография” и “Масс-спектрометрия”.
Таблица 1
Аналитические характеристические параметры в различных диапазонах концентрации вещества
Диапазон концентрации вещества, мг/кг
Повторяемость (относительное стандартное отклонение, %) Воспроизводимость (относительное стандартное отклонение, %) 0,001-0,01
30
60
> 0,01-0,1
20
40
> 0,1-1
15
30
> 1
10
20
Лекарственные растительные препараты получают из лекарственного растительного сырья, которое соответствует по содержанию остаточных пестицидов требованиям настоящей общей фармакопейной статьи. Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственных растительных препаратах проводят в случае обоснованных претензий. Поставщик лекарственного растительного сырья должен предоставить протокол анализа на поставляемую партию лекарственного растительного сырья, в котором указываются использованные пестициды и содержание остаточных пестицидов.
Порядок отбора проб
Отбор проб от партии сырья/серии препарата проводят в соответствии с требованиями ОФС “Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов” и настоящей статьей. Отбор проб для проведения испытаний осуществляют в соответствии с действующими санитарно-гигиеническими правилами и условиями, исключающими дополнительное загрязнение сырья.
Определение остаточных пестицидов (хлорсодержащих)
Подготовка проб к анализу
Пробы лекарственного растительного сырья/препарата измельчают и просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Затем около 5 г сырья/препарата (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 100 мкл стандартного раствора внутреннего стандарта с общей концентрацией 1 мкг/мл и 50 мл перегнанного гексана, перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 ч при нагревании с использованием обратного холодильника. Затем полученное извлечение отфильтровывают через стекловату и проводят повторную экстракцию 30 мл гексана. Остаток на фильтре промывают 30 мл гексана и промывную жидкость объединяют с полученными извлечениями. К объединенному извлечению добавляют натрия сульфат безводный в соотношении 1:10 и выдерживают 1-1,5 ч, а затем упаривают на роторном вакуумном испарителе до объема 10-15 мл. В делительную воронку вместимостью 100 мл помещают 10-15 мл полученного объединенного извлечения и прибавляют 20-25 мл серной кислоты концентрированной. Содержимое делительной воронки осторожно встряхивают 5-10 раз и оставляют до расслоения фаз, после чего нижний слой (кислотный) отбрасывают. Очистку повторяют несколько раз до получения бесцветного слоя серной кислоты. Очищенные извлечения нейтрализуют натрия гидрокарбоната раствором 0,5 М и промывают водой очищенной до нейтральной реакции промывных вод, после чего извлечения пропускают через колонку (длиной 10 см и диаметром 1 см), последовательно заполненную алюминия оксидом (высота слоя 3 см) и натрия сульфатом безводным (высота слоя 3 см). Колонку промывают 20 мл метиленхлорида. Полученное очищенное извлечение упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона.
Альтернативный способ пробоподготовки
Для проведения анализа может быть использован альтернативный способ пробоподготовки. Измельчают около 50 г лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата (проба для определения остаточных пестицидов, тяжелых металлов и мышьяка) и просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Затем помещают 10 г (точная навеска) измельченного образца в тефлоновую пробирку для центрифугирования вместимостью 50 мл, добавляют 10 мл ацетонитрила для хроматографии, тщательно встряхивают в течение 1 мин, добавляют 4 г безводного магния сульфата, 1 г натрия хлорида, тщательно встряхивают в течение 1 мин. Затем экстракт центрифугируют в течение 3 мин при 5000 об/мин. После центрифугирования из пробирки из верхнего слоя переносят аликвоту объемом 6 мл в тефлоновую пробирку для центрифугирования вместимостью 15 мл, содержащую 150 мг сорбента, представляющего собой смесь первичных и вторичных аминов, и 950 мг магния сульфата безводного, и снова центрифугируют в течение 3 мин при 5000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм. 1,5 мл полученного фильтрата переносят в хроматографическую виалу, содержащую 15 мкл муравьиной кислоты раствора 5% в ацетонитриле (для стабилизации экстракта). Проводят определение содержания остаточных пестицидов методом ГХ/МС или ВЭЖХ/МС. В качестве внутреннего стандарта может быть использован трифенилфосфат. Его добавляют в начальной стадии пробоподготовки одновременно с ацетонитрилом в концентрации 1 мкг/мл для ВЭЖХ/МС или 10 мкг/мл для ГХ/МС. Могут быть использованы другие методики пробоподготовки при условии их валидации.
Проведение измерений
Хроматомасс-спектрометрический анализ полученных растворов проводят на газовом хроматографе с масс-селективным детектором с использованием стандартных веществ (стандартный образец состава: -гексахлорциклогексан, -гексахлорциклогексан, ДДТ, ДДЕ, ДДД, альдрин, гептахлор), а также внутреннего стандарта-4,4′-дибромдифенила. Для анализа используют 30 м кварцевую капиллярную колонку НР-5MS (сополимер 5% дифенила и 95% диметилсилоксана) с внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки неподвижной фазы 0,3 мкм или любую аналогичную. Анализ осуществляют при условиях, указанных в табл. 2. Масс-спектры регистрируют при ионизации электронным ударом с энергией ионизации 70 эВ. Скорость сканирования должна составлять 1 скан/с при диапазоне сканирования 40-600 а.е.м.
Таблица 2
Условия хроматомасс-спектрометрического анализа остаточных пестицидов (хлорсодержащих) на колонке HP-5MS
Тнач., °C
v, °С/мин
Тконеч., °C
Тисп., °C
Тинт., °C
V, мкл
70
10
300
280
280
1
Примечание: Тнач. – начальная температура термостата колонки (выдержка 4 мин.); v – скорость линейного нагрева колонки; Тконеч. – конечная температура колонки (выдержка 5 мин.); Тисп. – температура испарителя; Тинт. – температура интерфейса; V, мкл – объем вводимой пробы.
Хроматомасс-спектрометрический анализ проводят в режиме селективного детектирования индивидуальных ионов с идентификацией пестицидов по характеристическим ионам и времени удерживания с использованием растворов стандартных образцов (табл. 3).
Таблица 3
Хроматографические и масс-спектрометрические данные анализа растворов стандартных образцов хлорорганических пестицидов (ХОП) и полихлорбифенилов (ПХБ)
Наименование
ХОП или ПХБ
Время удерживания, мин
Характеристические ионы, m/z
Относительное время удерживания
-ГХЦГ
17,26
219, 183, 217, 181
0,848
-ГХЦГ
17,82
0,874
-ГХЦГ
17,96
0,881
ДДТ
23,49
235, 237, 165
1,152
ДДД
22,80
1,118
ДДЕ
22,02
318, 246, 248
1,080
Альдрин
20,14
263, 298, 66
0,988
Гептахлор
19,45
272, 274, 339, 237
0,954
4,4′-Дибром-дифенил
20,39
312, 310, 314, 152
1,000
Примечание: Данные представлены для колонки HP-5MS.
Критериями идентификации являются:
– времена удерживания, которые не должны отличаться более чем на 0,5 мин от времени удерживания стандартного вещества; – относительные интенсивности пиков характеристических ионов на реконструированной хроматограмме не должны отличаться более чем на 20% от относительной интенсивности этих пиков в масс-спектре стандартного вещества, полученного на данной хроматомасс-спектрометрической системе; – синхронность максимумов пиков характеристических ионов; – соотношение сигнал/шум, которое должно быть не менее 3:1. Условия проведения измерений могут быть иными при использовании других детекторов, при этом методика должна быть валидирована.
Обработка результатов измерений
Содержание пестицидов в лекарственном растительном сырье/препарате рассчитывают методом внешнего стандарта, в качестве которого используют растворы стандартных веществ определяемых соединений. Для количественной оценки используют пробы, извлечение из которых внутренних стандартов составляет 70-110%. Рассчитывают среднее значение из трех измерений площадей пиков анализируемых веществ. Количество определяемого компонента (Cисп) в нг/г или нг/мл вычисляют по формуле:
,
где: Сконтр – концентрация определяемого соединения в контрольной пробе, нг/г или нг/мл; S – площадь пика определяемого соединения на хроматограмме испытуемого раствора; Сст – концентрация определяемого соединения в стандартном растворе; Sст – площадь пика определяемого соединения на хроматограмме стандартного раствора; P(V) – навеска в г или объем пробы в мл.
Для перевода концентрации в мг/кг полученное значение следует разделить на 1000.
Определение соответствия остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах допустимым нормам
Пределы допустимого содержания остаточных хлорсодержащих пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах не должны превышать значения, указанные в табл. 4.
Таблица 4
Пределы допустимого содержания остаточных пестицидов (хлорсодержащих) в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах
Вещество
Пределы допустимого содержания, мг/кг
Гексахлорциклогексан и его изомеры (в сумме) 0,1
ДДТ и его метаболиты (в сумме)
0,1
Алдрин
Не допускается
Гептахлор
Не допускается
Если нет других указаний в фармакопейной статье, количество других остаточных пестицидов не должно превышать значений предельно допустимого содержания, указанных в табл. 5.
Таблица 5
Пределы допустимого содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах
N п/п
Вещество
Пределы допустимого содержания, мг/кг
1
Азинфос-метил
1,0
2
Азиифос-этил
0,1
3
Алахлор
0,02
4
Ацефат
0,1
5
Бромид, неорганический (в пересчете на бромид ион) 50
6
Бромофос-метил
0,05
7
Бромофос-этил
0,05
8
Бромпропилат
3,0
9
Винклозолин
0,4
10
Гексахлорбензол
0,1
11
Дельтаметрин
0,5
12
Диазинон
0,5
13
Дихлофлуанид
0,1
14
Дихлорфос
1,0
15
Дикофол
0,5
16
Диметоат и ометоат (в сумме)
0,1
17
Дитиокарбаматы (в пересчете на CS2)
2,0
18
Квиналфос
0,05
19
Квинтоцен (в сумме с пентахлоранилином и метилпентахлорфенилсульфидом) 1,0
20
Малатион (в сумме с малаоксоном)
1,0
21
Мекарбам
0,05
22
Метакрифос
0,05
23
Метамидофос
0,05
24
Метидатион
0,2
25
Метоксихлор
0,05
26
Мирекс
0,01
27
Монокротофос
0,1
28
Паратион-метил и параоксон-метил (в сумме) 0,2
29
Паратион-этил и параоксон-этил (в сумме) 0,5
30
Пендиметалин
0,1
31
Пентахлоранизол
0,01
32
Перметрин и изомеры (в сумме)
1,0
33
Пиперонилбутоксид
3,0
34
Пиретрум (цинерин I, цинерин II, джасмолин I, джасмолин II, пиретрин I и пиретрин II в сумме) 3,0
35
Пиримифос-метил и с N-дезэтил-пиримифос-метил в сумме 4,0
36
Пиримифос-этил
0,05
37
Протиофос
0,05
38
Профенофос
0,1
39
Процимидон
0,1
40
С-421
0,02
41
Текназен
0,05
42
Тетрадифон
0,3
43
Фенвалерат
1,5
44
Фенитротион
0,5
45
Фенпропатрин
0,03
46
Фенсульфотион (в сумме)
0,05
47
Фентион (в сумме)
0,05
48
Фенхлорофос (сумма фемхлорофоса и фенхлорофосоксона) 0,1
49
-Флувалинат
0,05
50
Флуцитринат
0,05
51
Фонофос
0,05
52
Фозалон
0,1
53
Фосмет
0,05
54
Хлордан (сумма цис-, транс- и оксихлордана) 0,05
55
Хлорпирифос-метил
0,1
56
Хлорпирифос-этил
0,2
57
Хлортал-диметил
0,01
58
Хлорфенвинфос
0,5
59
-Цигалотрин
1,0
60
Циперметрин и изомеры (в сумме)
1,0
61
Цифлутрин (в сумме)
0,1
62
Эндосульфан (изомеры и эндосульфана сульфат в сумме) 3,0
63
Эндрин
0,05
64
Этион
2,0
65
Этримфос
0,05
Значение пределов допустимого содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах (ПДСОПЛРС), не включенных в табл. 5, рассчитывают по формуле с учетом значения уровня допустимого суточного потребления вещества, рекомендованного ФАО/ВОЗ, и величины дозы суточного потребления лекарственного растительного сырья/препарата:
где: ДСП – допустимое суточное потребление вещества <> в мг на кг массы тела; М – масса тела, кг (60 кг);
МСД – суточная доза лекарственного растительного сырья, кг; 100 – фактор потребления <*>.
Значение предельно допустимого содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном препарате (ПДСОПЛРП) рассчитывают по формуле:
- Э 10 ,
- Э > 10
где: ДСП – допустимое суточное потребление вещества <> в мг на кг массы тела; М – масса тела в кг (60 кг);
100 – фактор потребления <*>;
Э – фактор экстракции определяется экспериментально, как соотношение между количеством сырья и количеством полученного препарата; МСДП – суточная доза лекарственного растительного препарата в кг.
Примечания:
<> Как опубликовано Организацией по продовольствию и сельскому хозяйству ВОЗ; <*> Относится к требованию ВОЗ о том, что количество остаточных пестицидов, потребляемых из ЛРС, не должно превышать 1% от общего количества потребляемых пестицидов.
Если в ходе анализа установлено превышение допустимых норм остаточных пестицидов, организация, проводившая анализ, должна поставить в известность производителя готовой продукции и оптовое или розничное предприятие, через которое данное лекарственное растительное сырье или лекарственный растительный препарат поступил на реализацию.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение содержания эфирного масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах ОФС.1.5.3.0010.15
Взамен ГФ X,
ст. ГФ XI, вып. 1
Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырье и лекарственные растительные препараты. Определение содержания эфирного масла проводят путем его перегонки с водяным паром из лекарственного растительного сырья или лекарственных растительных препаратов с последующим измерением объема. Содержание масла выражают в массо-объемных процентах в пересчете на абсолютно сухое сырье или препарат. Навеска сырья или препарата, степень его измельчения, метод и время перегонки должны быть указаны в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат. Определение проводят одним из описанных ниже методов. Метод 1 применим для определения эфирного масла в лекарственном растительном сырье/препарате, содержащем значительную массовую долю эфирного масла, или если имеется возможность отобрать для анализа достаточно большую навеску, однако этот метод не пригоден для анализа термолабильных эфирных масел. Метод 2 применим для анализа термолабильных эфирных масел. Содержание эфирного масла, которое при перегонке претерпевает изменения, образует эмульсию, легко загустевает или имеет плотность, равную единице или более единицы, определяют методом 3. Приведенные ниже методы могут использоваться для определения содержания эфирного масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.
Метод 1. Используют прибор, изображенный на рис. 1. Навеску измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, указанную в фармакопейной статье или нормативной документации, помещают в широкогорлую кругло донную колбу (4) вместимостью 1000 мл, приливают 300 мл воды очищенной и закрывают резиновой пробкой (2) с обратным шариковым холодильником (1). В пробке снизу укрепляют металлические крючки, на которые при помощи тонкой проволоки подвешивают предварительно заполненный водой очищенной градуированный приемник (3) так, чтобы конец холодильника находился над воронкообразным расширением приемника, не касаясь его. Приемник должен свободно помещаться в горле колбы, не касаясь стенок, и отстоять от уровня воды не менее чем на 50 мм. Цена деления градуированной части приемника 0,025 мл.
Рисунок 1. Прибор для определения эфирного масла методом 1 1 – обратный шариковый холодильник; 2 – резиновая пробка; 3 – приемник (размеры даны в миллиметрах): а – 55-80; б – 70-95; в – 18-21; г – 6-10;
4 – широкогорлая колба
Колбу с содержимым нагревают на электроплитке с закрытой спиралью и регулятором мощности нагрева или при помощи специального колбонагревателя и кипятят в течение времени, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат. За 5 мин до окончания отгонки прекращают подачу воды в холодильник с целью прогревания его для того, чтобы оставшиеся на его внутренних стенках капли эфирного масла стекли в приемник. Объем эфирного масла в градуированной части приемника измеряют после окончания перегонки и охлаждения прибора до комнатной температуры. После 6-8 определений холодильник и градуированный приемник необходимо промыть последовательно ацетоном и водой. Содержание эфирного масла в абсолютно сухом сырье в массо-объемных процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: V – объем эфирного масла, мл;
a – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %.
Метод 2. Используют прибор, изображенный на рис. 2. Прибор для определения эфирного масла состоит из круглодонной колбы (7) вместимостью 1000 мл, паропроводной изогнутой трубки (2), холодильника (3), градуированной трубки-приемника (4), оканчивающейся внизу спускным краном (5) и сливной трубкой (9). В верхней части приемника имеется расширение (6) с боковой трубкой (7), которая служит для внесения растворителя эфирного масла в дистиллят и сообщения внутренней части прибора с атмосферой. Колба и паропроводная трубка соединяются через шлиф. Градуированная трубка имеет цену деления 0,02 мл. Заполнение прибора водой производится через спускной кран при помощи резинового шланга (8) с внутренним диаметром 4,5-5 мм, длиной 450 мм и с присоединенной к нему воронкой диаметром 30-40 мм. Перед каждым определением через прибор пропускают пар в течение 15-20 мин. После 6-8 определений прибор необходимо промыть последовательно ацетоном и водой. Навеску измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, указанную в фармакопейной статье или нормативной документации, помещают в колбу, приливают 300 мл воды, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через кран при помощи резинового шланга, оканчивающегося воронкой.
Рисунок 2. Прибор для определения эфирного масла методами 2 и 3 1 – колба; 2 – паропроводная изогнутая трубка; 3 – холодильник; 4 – градуированная трубка-приемник; 5 – спускной кран; 6 – расширение приемника; 7 – боковая трубка приемника; 8 – резиновый шланг; 9 – сливная трубка
Колбу с содержимым нагревают и кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания дистиллята составляет 60-65 капель в минуту в течение времени, указанного в фармакопейной статье или нормативной документации. Через 5 мин после окончания перегонки открывают кран, постепенно спуская дистиллят так, чтобы эфирное масло заняло градуированную часть трубки-приемника, и еще через 5 мин измеряют объем эфирного масла. Содержание эфирного масла в абсолютно сухом сырье в массо-объемных процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: V – объем эфирного масла, мл;
a – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %.
Метод 3. Для определения эфирного масла методом 3 используют прибор, изображенный на рис. 2. Навеску измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, указанную в фармакопейной статье или нормативной документации, помещают в колбу, приливают 300 мл воды, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через спускной кран при помощи резинового шланга, оканчивающегося воронкой. Затем через боковую трубку при помощи пипетки добавляют в приемник около 0,5 мл декалина и точно измеряют его объем, опуская для этого уровень жидкости в градуированную часть трубки. Далее поступают, как описано в методе 2. Содержание эфирного масла в абсолютно сухом сырье в массо-объемных процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: V – объем раствора эфирного масла в декалине, мл; V1 – объем декалина, мл;
a – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах ОФС.1.5.3.0009.15
Вводится впервые
Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на методы количественного определения тяжелых металлов: свинца, кадмия, ртути и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах. Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах проводят с использованием одного из следующих методов: – атомно-абсорбционной спектрометрии;
– атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой; – масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. Результаты, полученные при определении содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье, распространяются на лекарственный растительный препарат, произведенный из данной партии лекарственного растительного сырья. Лекарственные растительные препараты подвергаются выборочному контролю на содержание тяжелых металлов и мышьяка не реже одного раза в год (одна серия каждого наименования). Процедура определения содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах состоит из следующих основных этапов: 1. Отбор пробы для определения остаточных пестицидов, тяжелых металлов и мышьяка. Отбор пробы проводится в соответствии с требованиями ОФС “Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов” в условиях, исключающих дополнительное загрязнение сырья. 2. Подготовка пробы.
3. Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в испытуемых пробах. 4. Определение соответствия сырья допустимым нормам.
Оборудование, реактивы, растворы
Для определения содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах используют оборудование, отвечающее требованиям ОФС на соответствующие методы анализа. При выполнении исследований используют реактивы, предназначенные для спектральных методов анализа или марки “ос.ч.”. Приготовление растворов осуществляют в мерной посуде класса А или 1 класса точности, а их хранение – в пластиковой посуде (PMP, PFA, PP). Используемая вода должна быть деионизованной (деионизированной) на ионнообменных смолах и соответствовать требованиям, предъявляемым к воде очищенной.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ И МЫШЬЯКА МЕТОДОМ АТОМНО-АБСОРБЦИОННОЙ СПЕКТРОМЕТРИИ
Аппаратура для метода атомно-абсорбционной спектрометрии
Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах проводят на атомно-абсорбционном спектрометре с различными атомизаторами пробы (пламенный, электротермический), а также методом “холодного пара” и генерации гидридов. Подготовка лабораторной посуды включает следующие последовательные этапы: обычная мойка посуды с раствором моющего средства, тщательное ополаскивание проточной водой питьевой, затем замачивание в натрия гидроксида растворе 1% и водорода пероксиде, ополаскивание проточной водой питьевой с последующим замачиванием в течение 1 ч в хлористоводородной кислоты растворе 10%, либо обработка посуды азотной кислоты раствором 1%, ополаскивание водой для хроматографии 3-4 раза, сушка. Приготовление стандартных растворов тяжелых металлов и мышьяка осуществляют в лабораторных условиях или используют готовые растворы стандартных образцов.
Подготовка проб к анализу
Пробоподготовка включает в себя предварительное измельчение пробы для определения остаточных пестицидов, тяжелых металлов и мышьяка с целью приготовления однородного образца и последующего взятия не менее двух параллельных навесок, деструкцию органической матрицы для переведения ионов металлов и мышьяка в раствор. При отборе проб следует избегать контакта лекарственного растительного сырья и препаратов с предметами, содержащими определяемые металлы. Загрязнение лабораторной посуды железом, хромом и никелем может происходить при контакте с нержавеющей сталью, свинцом – с резиной, кадмием – с некоторыми видами пластмасс. Эти загрязнения контрольным опытом не учитываются и могут давать заметное завышение результатов. Пробу сырья предварительно измельчают с помощью ножа или ножниц, затем в специальных лабораторных дробилках или мельницах-измельчителях и просеивают сквозь сито с размером отверстий 1 мм (ОФС “Оборудование”). Лекарственные растительные препараты, расфасованные в пачки, дополнительно измельчают и просеивают сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Лекарственные растительные препараты, расфасованные в фильтр-пакеты, дополнительно измельчают и просеивают сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Для дальнейшей подготовки к анализу рекомендуется использовать два метода подготовки пробы: – сухая минерализация;
– мокрая минерализация.
Пробоподготовка сырья и препаратов к анализу заключается в деструкции органической основы пробы методами “сухой” (термической) минерализации, “мокрой” (кислотной) минерализации с последующим растворением остатка в водных растворах кислот или кислотной экстракции (неполной минерализации). При недостаточной чувствительности проводят концентрирование токсичных элементов с последующим атомно-абсорбционным определением их в органических растворах. Метод “сухой” минерализации основан на полном разложении органических веществ путем сжигания анализируемой пробы в муфельной печи при контролируемом температурном режиме. Метод “мокрой” минерализации основан на полном разложении органических веществ пробы при нагревании в смеси концентрированных кислот. Проведение “мокрой” минерализации возможно в открытых системах (колбах Кьельдаля, стеклянных стаканах), либо в закрытых системах (например, автоклав, микроволновая система для пробоподготовки). Метод пробоподготовки лекарственного растительного сырья и препаратов к анализу выбирают в соответствии с аппаратурным оснащением аналитической лаборатории. Для арбитражного контроля используют метод “мокрой” минерализации (с использованием микроволновой системы для пробоподготовки). Параллельно проводят холостой опыт.
Метод 1а (“сухая” минерализация, Pb, Cd)
Около 2,5 г (точная навеска) лекарственного растительного сырья/препарата помещают в фарфоровый, стеклоуглеродный, кварцевый или другой тигель и ставят в холодную муфельную печь. Озоление образцов проводят постепенно, поднимая температуру печи на 50 °С каждые 30 мин (во избежание воспламенения) до 480 °С, выдерживают в печи до полного озоления образца. После охлаждения пробу переносят во фторопластовый стакан, прибавляют 5 мл азотной кислоты концентрированной, свободной от свинца и кадмия, и оставляют на ночь. Затем нагревают пробу на электрической плитке и выпаривают до сухого остатка, после чего добавляют 1 мл фтористоводородной кислоты концентрированной и при сильном нагреве выпаривают досуха. Остаток охлаждают и обрабатывают 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной (1:1) и упаривают до “влажных солей”. Остаток доводят хлористоводородной кислоты раствором 2,5% до объема 10 мл.
Метод 1б (“сухая” минерализация, Pb, Cd)
Около 0,5-1,0 г (точная навеска) лекарственного растительного сырья/препарата помещают в тигель (из стеклоуглерода марки С-200, разрешается использование кварцевых и платиновых тиглей, фарфоровых с неповрежденной внутренней поверхностью), смачивают 0,5-1,5 мл серной кислоты концентрированной и осторожно нагревают на пламени газовой горелки, электрической плитке и др. до полного обугливания. Затем тигель охлаждают до комнатной температуры и прибавляют к его содержимому 1 мл азотной кислоты концентрированной и 5 капель серной кислоты концентрированной. После этого осторожно нагревают на электрической плитке до исчезновения бурых паров, избегая разбрызгивания, потом усиливают нагрев до исчезновения плотных белых паров. Затем тигель помещают в муфельную печь и прокаливают при температуре около 500 °С до получения зольного остатка. После чего тигель охлаждают до комнатной температуры и к его содержимому прибавляют 4 мл хлористоводородной кислоты раствора 6 М, закрывают крышкой и нагревают на кипящей водяной бане 15 мин. Затем крышку снимают и осторожно упаривают содержимое тигля до “влажных солей”, после чего прибавляют 1 каплю хлористоводородной кислоты концентрированной и 5 мл горячей воды и нагревают в течение 2 мин. Полученный остаток количественно (трехкратно) переносят небольшими порциями при помощи воды для хроматографии в мерную колбу вместимостью 25 или 50 мл, фильтруя через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, и доводят водой для хроматографии до метки и перемешивают.
Метод 2а (“мокрая” минерализация, Pb, Cd)
Около 1,0 г (точная навеска) лекарственного растительного сырья/препарата помещают в колбу Кьельдаля вместимостью 100 мл, прибавляют 7 мл азотной кислоты концентрированной, перемешивают до полного смачивания пробы. После этого к содержимому прибавляют 4 мл хлорной кислоты концентрированной и перемешивают. Колбу закрепляют под углом 45° на песчаной бане, осторожно нагревают до появления бурых паров азота оксида и нагрев отключают. После полного прекращения выделения бурых паров температуру повышают до появления плотных белых паров и получения кислотного остатка 1-2 мл, колбу снимают с песчаной бани, охлаждают и количественно при помощи воды для хроматографии переносят ее содержимое в мерную колбу вместимостью 50 или 100 мл, фильтруя содержимое через беззольный фильтр (промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Метод 2б (“мокрая” минерализация, Hg)
Около 0,5 г (точная навеска) лекарственного растительного сырья/препарата помещают в стеклянный стакан вместимостью 50 мл, смачивают водой, приливают 6 мл серной кислоты концентрированной и 3 мл азотной кислоты концентрированной. Перемешивают, стакан накрывают крышкой из стеклоуглерода и оставляют в водяной бане на 1 сут при температуре около 10-20 °С, затем переносят на водяную баню и нагревают при температуре 50-60 °С в течение 2 ч. После этого стакан охлаждают до комнатной температуры, снимают крышки из стеклоуглерода и прибавляют 5 мл аммония персульфата раствора 5%. Смесь перемешивают и оставляют в стакане на ночь при комнатной температуре. На следующий день содержимое стакана переносят в мерную колбу вместимостью 200 или 250 мл и проводят дальнейшее определение.
Метод 2в (“мокрая” минерализация, Hg)
Около 1,0 г (точная навеска) лекарственного растительного сырья/препарата помещают во фторопластовый стакан металлического тубуса, смачивают 6 мл смеси серной кислоты концентрированной и азотной кислоты концентрированной в соотношении 1:5. Стакан, закрытый фторопластовой крышкой, помещают в металлический тубус. Металлический тубус закрывают, помещают в сушильный шкаф, нагревают до 100 °С и выдерживают при этой температуре в течение 4 ч, далее его вынимают, охлаждают, вскрывают и количественно переносят содержимое фторопластового стакана в мерную колбу вместимостью 200 или 250 мл, и проводят определение.
Метод 2г (“мокрая” минерализация, Pb, Cd, As)
Около 1,0 г (точная навеска) лекарственного растительного сырья/препарата помещают во фторопластовый стакан автоклава, смачивают 10 мл смеси хлористоводородной кислоты концентрированной и азотной кислоты концентрированной в соотношении 1:1. Стакан, закрытый фторопластовой крышкой, помещают в автоклав. Автоклав закрывают, помещают в сушильный шкаф, нагревают до 200 °С и выдерживают при этой температуре 2 ч. Далее автоклав вынимают, охлаждают, вскрывают и количественно переносят содержимое фторопластового стакана в мерную колбу вместимостью 50 мл, фильтруя содержимое через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Метод 2д (“мокрая” минерализация, Pb, Cd, Hg, As)
Мокрую минерализацию проводят в системе микроволнового разложения. Разложение в микроволновой системе возможно в различном аппаратурном исполнении при использовании различных кислот и реагентов. При использовании таких систем нужно придерживаться рекомендаций фирмы-изготовителя. Необходимо валидировать методику разложения лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов. В качестве примера приводится следующая методика. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата помещают в сосуд для микроволнового разложения, приливают 3 мл воды и 5 мл азотной кислоты концентрированной, осторожно перемешивают до полного смачивания и выдерживают в течение 5-10 мин. Сосуд герметично закрывают, помещают его в защитный кожух и затем в ротор микроволновой системы. Далее проводят обработку по программе, приведенной в табл. 1.
Таблица 1
Программа обработки образцов
лекарственного растительного сырья/препарата в системе микроволнового разложения
Этап
Время, мин
Температура, °С
Мощность излучения, Вт
1
5
80
до 350
2
3,5
160
до 800
3
4,5
190
до 1000
4
12
190
до 800
В конце цикла сосуды охлаждают на воздухе, открывают и полученный прозрачный или с небольшим осадком раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, фильтруя через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, затем доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Допускается проведение пробоподготовки с использованием систем для минерализации проб (микроволновые, автоклавные и т.д.) с валидацией по образцам с известным содержанием элементов.
Проведение измерений
Измерения проводят различными вариантами метода атомно-абсорбционной спектрометрии с разными способами атомизации пробы. Чувствительность измерения в атомно-абсорбционном анализе для пламенного метода составляет 0,01-10 мкг/мл, для непламенных – 0,0001-0,1 мкг/мл. Ртуть определяют методом атомно-абсорбционной спектрометрии с применением техники “холодных паров”. Анализ проб на содержание свинца и кадмия осуществляют пламенным вариантом (табл. 2), свинца, кадмия и мышьяка с использованием электротермического атомизатора (табл. 3); ртути – на ртутном анализаторе или с использованием ртутно-гидридной приставки к атомно-абсорбционному спектрометру, мышьяка – с использованием ртутно-гидридной приставки к атомно-абсорбционному спектрометру в соответствии с условиями анализа элементов (табл. 2).
Таблица 2
Ориентировочные параметры определения тяжелых металлов и мышьяка методом атомно-абсорбционной спектрометрии (пламенный вариант)
Металл
Длина волны, нм
Ширина щели, нм
Тип пламени
Чувствительность, мкг/мл
Кадмий
228,8
0,3
В-А
0,025
Свинец
283,3
0,4
В-А
0,50
Ртуть
253,7
0,7
“холодный пар”
0,002
Мышьяк
193,7
0,5
0,002
Примечание: тип пламени: В – воздух, А – ацетилен в соответствии с требованиями инструкции по эксплуатации фирмы изготовителя.
Обработку полученного аналитического сигнала для ртути и мышьяка осуществляют по высоте пика. Стадия высушивания зависит от кислотного, органического, минерального состава пробы и конструктивных особенностей прибора. Обработку полученного аналитического сигнала для кадмия, свинца и мышьяка осуществляют по площади пика. Параметры определения тяжелых металлов и мышьяка со стадиями высушивания, озоления (пиролиза), атомизации и отжига (очистки) исследуемых проб отрабатываются для конкретных приборов в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора.
Таблица 3
Ориентировочные параметры определения тяжелых металлов и мышьяка методом атомно-абсорбционной спектрометрии (электротермический вариант)
Металл
Длина волны, нм
Ширина щели, нм
Стадия озоления (пиролиза)
Стадия атомизации
Т, °С
tсек, с
Т, °С
tсек, с
tинт, с
Кадмий
228,8
0,20-0,5
300-600
8-25
1300-1700
3-5
3-5
Свинец
283,3
0,20-0,5
500-800
8-25
1600-2000
3-5
3-5
Мышьяк <*>
193,7
0,20-0,5
800-1400
8-15
2200-2600
3-5
3-5
Примечание: Т, °С – температура озоления, атомизации; tсек, с – время озоления, атомизации; tинт, с – время интегрирования; <*> При использовании корректора Зеемана.
Для уменьшения влияния минерального состава лекарственного растительного сырья или препарата на исследуемые элементы используют: 1. Кювету с пластиной (платформой).
2. Модификаторы матрицы.
3. Разбавление анализируемого раствора. Подготовку атомно-абсорбционного спектрометра к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора с учетом особенности измерения низких концентраций элементов. Результатом измерений является величина атомного поглощения элемента, полученная в абсорбционном режиме с доверительной вероятностью P = 0,95. Обработка результатов измерений и определение соответствия тяжелых металлов в сырье допустимым нормам. Обработку результатов проводят с использованием компьютерных программ. При ручной обработке данных строят график зависимости абсорбции от концентрации. Допускается применять линейную, кусочно-линейную или сглаженную нелинейную аппроксимацию градуировочной функции с коэффициентом корреляции не менее 0,990. В расчетах используют среднее арифметическое значение 3 параллельных измерений. Результаты определения содержания тяжелых металлов в испытуемом образце (С) следует считать как среднее арифметическое 3 параллельных определений с точностью до 0,001 мкг. Содержание металла в испытуемом лекарственном растительном сырье/препарате (X) в мкг/г вычисляют по формуле:
,
где: CX – концентрация металла в испытуемом растворе, мкг/мл; V – разведение, мл;
CK – концентрация металла в контрольном опыте, мкг/мл; VK – объем контрольной пробы, мл;
a – навеска сырья/препарата, г.
Методики определения тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах должны быть валидированы. Выбор методики измерения аналитического сигнала (по градуировочной кривой или методом “стандартных добавок”) для конкретных объектов исследования определяется в ходе валидации методики.
АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ СПОСОБЫ ПРОБОПОДГОТОВКИ
И ПРОВЕДЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
При проведении определения содержания тяжелых металлов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах методами атомно-абсорбционной спектрометрии; атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой; масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой; рентгенофлуоресцентной спектрометрии могут быть использованы способы пробоподготовки и проведения результатов измерений, приведенные ниже.
Метод 1 (сухая минерализация)
Метод соответствует методу 1б (“сухая” минерализация, Pb, Cd), приведенному в разделе “Подготовка проб к анализу” для атомно-адсорбционной спектрометрии.
Метод 2 (мокрая минерализация)
Метод соответствует методу 2д (“мокрая” минерализация, Pb, Cd, Hg, As), приведенному в разделе “Подготовка проб к анализу” для атомно-адсорбционной спектрометрии.
Проведение измерений
Определение содержания кадмия, ртути, мышьяка, свинца проводят методом калибровочной кривой. Для этого из стандартных образцов элементов с концентрацией 1000 мг/дм3 готовят серию градуировочных растворов, содержащих заявленные элементы в концентрациях:
Градуировочный раствор
N 1
N 2
N 3
N 4
N 5
N 6
Концентрация, мг/дм3
0,003
0,01
0,03
1,0
4,0
10
Приготовление градуировочных растворов. Для приготовления градуировочных растворов используют готовые растворы стандартных образцов (ГСО) состава ионов металлов отечественного или зарубежного производства (CRM) с концентрацией элементов 1000 мг/дм3 в азотной или хлористоводородной кислоте с массовой долей кислоты не менее 1%. Измерения для каждого градуировочного раствора выполняют не менее 5 раз. С помощью программы обработки данных полученные результаты для каждого градуировочного раствора усредняют и строят линейную градуировочную характеристику (калибровочную кривую) зависимости выходного сигнала от концентрации определяемых элементов в градуировочном растворе (мг/дм3). Градуировочная характеристика должна быть линейной во всем диапазоне измеряемых концентраций с коэффициентом корреляции не менее 0,990, который определяется автоматически, без вмешательства оператора. По значению выходного сигнала испытуемого раствора с использованием градуировочной характеристики и программы обработки данных находят концентрацию определяемых элементов в анализируемом растворе (мг/дм3). За результат измерений принимают среднее арифметическое 3 параллельных определений одной пробы. Предельно допустимое содержание тяжелых металлов не должно превышать значений, приведенных в табл. 4.
Таблица 4
Предельно допустимое содержание тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах
Металл
Предельно допустимое содержание, мг/кг
Свинец
Кадмий
Ртуть
Мышьяк
6,0
1,0
0,1
0,5
Примечание: В соответствии с требованиями безопасности, принятыми в Российской Федерации.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах ОФС.1.5.3.0008.15
Взамен ГФ Х,
ст. ГФ ХI, вып. 1
Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах проводят титриметрическим и/или спектрофотометрическим методами. Титриметрический метод заключается в определении суммы дубильных веществ в пересчете на танин, а спектрофотометрический метод позволяет определять сумму дубильных веществ в пересчете на пирогаллол.
Метод 1. Определение суммы дубильных веществ в пересчете на танин
Около 2 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Полученное извлечение охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 250 мл так, чтобы частицы сырья/препарата не попали в колбу, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 25,0 мл полученного водного извлечения помещают в коническую колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 500 мл воды, 25 мл раствора индигосульфокислоты и титруют при постоянном перемешивании калия перманганата раствором 0,02 М до золотисто-желтого окрашивания. Параллельно проводят контрольный опыт: в коническую колбу вместимостью 1000 мл помещают 525 мл воды, 25 мл раствора индигосульфокислоты и титруют при постоянном перемешивании калия перманганата раствором 0,02 М до золотисто-желтого окрашивания. 1 мл калия перманганата раствора 0,02 М соответствует 0,004157 г дубильных веществ в пересчете на танин. Содержание суммы дубильных веществ в пересчете на танин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: V – объем калия перманганата раствора 0,02 М, израсходованного на титрование водного извлечения, мл; V1 – объем калия перманганата раствора 0,02 М, израсходованного на титрование в контрольном опыте, мл; 0,004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл калия перманганата раствора 0,02 М (в пересчете на танин), г; a – навеска сырья или лекарственного растительного препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата, %; 250 – общий объем водного извлечения, мл; 25 – объем водного извлечения, взятого для титрования, мл. Примечание. Приготовление раствора индигосульфокислоты. 1 г индигокармина растворяют в 25 мл серной кислоты концентрированной, затем прибавляют дополнительно 25 мл серной кислоты концентрированной и разбавляют водой до 1000 мл, осторожно вливая полученный раствор в воду, в мерной колбе вместимостью 1000 мл, перемешивают.
Метод 2. Определение суммы дубильных веществ в пересчете на пирогаллол
Около 0,5-1,0 г (точную навеску или иную, указанную в фармакопейной статье или нормативной документации) измельченного лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл воды и кипятят на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. Полученное водное извлечение в колбе охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 250 мл так, чтобы частицы сырья не попали в колбу, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр диаметром около 125 мм, отбрасывая первые 50 мл фильтрата. Определение проводят в защищенном от света месте. Определение суммы дубильных веществ. 5,0 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл фосфорномолибденововольфрамового реактива, 10 мл воды и доводят объем раствора до метки натрия карбоната раствором 10,6% (испытуемый раствор). Через 30 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора (A1) на спектрофотометре при длине волны 760 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду. Определение суммы дубильных веществ, не адсорбируемых кожным порошком. К 10,0 мл фильтрата прибавляют 0,1 г кожного порошка, перемешивают полученную смесь в течение 60 мин и фильтруют через бумажный фильтр. 5,0 мл полученного фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл фосфорномолибденововольфрамового реактива, 10 мл воды, объем раствора доводят до метки натрия карбоната раствором 10,6% и перемешивают (испытуемый раствор). Через 30 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора (A2) на спектрофотометре при длине волны 760 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду. Параллельно измеряют оптическую плотность стандартного раствора. 2,0 мл раствора CO пирогаллола помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл фосфорномолибденововольфрамового реактива, 10 мл воды, доводят объем раствора до метки натрия карбоната раствором 10,6% и перемешивают (стандартный раствор). Через 30 мин измеряют оптическую плотность стандартного раствора (A3) на спектрофотометре при длине волны 760 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду. Содержание суммы дубильных веществ в пересчете на пирогаллол в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: A1 – оптическая плотность испытуемого раствора при определении суммы дубильных веществ; A2 – оптическая плотность испытуемого раствора при определении суммы дубильных веществ, не адсорбируемых кожным порошком, в пересчете на пирогаллол; A3 – оптическая плотность стандартного раствора; a – навеска лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата, г; a0 – навеска CO пирогаллола, г;
W – влажность лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата, %. Примечание. Приготовление раствора CO пирогаллола. 0,05 г (точная навеска) CO пирогаллола помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов ОФС.1.5.3.0007.15
Взамен ГФ X,
ст. ГФ XI, вып. 1
Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырье (свежее и высушенное) и лекарственные растительные препараты. Под влажностью понимают потерю в массе при высушивании за счет удаления гигроскопической влаги и летучих веществ, которую определяют в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах при высушивании до постоянной массы или другим методом, описанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Аналитическую пробу высушенного лекарственного растительного сырья, предназначенную для определения влажности, предварительно измельчают любым подходящим способом до размера частиц не более 10 мм, в зависимости от морфологической группы лекарственного растительного сырья. Аналитическую пробу лекарственного растительного препарата или измельченного высушенного лекарственного растительного сырья перемешивают и берут две навески по 3-5 г, взвешенные с погрешностью г. Каждую навеску высушенного лекарственного растительного сырья/препарата помещают в предварительно высушенный до постоянной массы и взвешенный бюкс с крышкой и ставят в сушильный шкаф, нагретый до 100-105 °С. При этой же температуре осуществляют высушивание взятых навесок. Высушивание лекарственного растительного сырья/препарата проводят в открытых бюксах вместе со снятыми крышками. При взвешивании бюксы должны быть закрыты. Первое взвешивание охлажденных в эксикаторе анализируемых образцов, представленных листьями, травами, цветками и порошком из лекарственного растительного сырья и препаратов, проводят через 2 ч; анализируемых образцов, представленных корнями, корневищами, корой, плодами, семенами и другими морфологическими группами лекарственного растительного сырья и препаратов, – через 3 ч. При определении влажности в свежем лекарственном растительном сырье аналитическую пробу анализируемого растительного объекта, предназначенную для определения влажности, предварительно измельчают до размера частиц не более 10 мм, используя для этого соответствующее оборудование и приспособления (ножницы, мельницы различных типов, ступку и др.), что определяется морфологической группой лекарственного растительного сырья. Измельченную аналитическую пробу свежего лекарственного растительного сырья тщательно перемешивают и берут две навески по 3-5 г, взвешенные с погрешностью г. Каждую навеску свежего лекарственного растительного сырья помещают в предварительно высушенный и взвешенный бюкс с крышкой и ставят в сушильный шкаф, нагретый до 130-135 °С. При этой же температуре осуществляют высушивание взятых навесок. Высушивание свежего лекарственного растительного сырья проводят в открытых бюксах вместе со снятыми крышками. При взвешивании бюксы должны быть закрыты. Для свежего лекарственного растительного сырья, представленного листьями, травами, цветками и плодами, первое взвешивание охлажденных в эксикаторе анализируемых образцов проводят через 1 ч, анализируемых образцов, представленных другими более плотными по морфологической структуре видами сырья, – через 2 ч. Высушивание лекарственного растительного сырья/лекарственного растительного препарата проводят до постоянной массы. Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последовательными взвешиваниями после 30 мин дополнительного высушивания и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает г. В этом случае имеется в виду влажность воздушно-сухого лекарственного растительного сырья/препарата. При определении абсолютной влажности, значение которой используется в формулах расчета количества действующих веществ в высушенном лекарственном растительном сырье/препарате, определение проводят в навесках 1-2 г (точная навеска), взятых из аналитической пробы, предназначенной для количественного определения действующих веществ и золы, вышеописанным методом, но при разнице между взвешиваниями, не превышающей г. Влажность (W) лекарственного растительного сырья/препарата в процентах вычисляют по формуле:
,
где: m – масса до высушивания, г;
m1 – масса после высушивания, г.
За окончательный результат определения принимают среднее арифметическое трех параллельных определений, вычисленных до десятых долей процента. Допустимое расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 0,5%. Для высушенного лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов устанавливают верхний предел содержания влаги: не более…%. Для свежего лекарственного растительного сырья, как правило, нормируется нижний и верхний предел содержания влаги: не менее…% и не более…%. Для определения влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов возможно использование влагомеров термографических инфракрасных, при этом в фармакопейной статье или нормативной документации должны быть указаны навеска, измельченность лекарственного растительного сырья/препарата, а также режим сушки и норма влажности. Методика должна быть валидирована.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах ОФС.1.5.3.0006.15
Взамен ГФ X,
ст. ГФ XI, вып. 1
Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырье и лекарственные растительные препараты, которые в последующем используются для получения экстракционных лекарственных форм (настои, отвары, экстракты и т.д.), а также в случае отсутствия в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации метода количественного определения действующих биологически активных веществ. Показатель “экстрактивные вещества” характеризует содержание в лекарственном растительном сырье/препарате всей суммы биологически активных и балластных веществ, извлекаемых экстрагентом. Тип экстрагента приводится в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат в зависимости от его последующего назначения. Определение содержания экстрактивных веществ проводят гравиметрически одним из описанных ниже методов. Метод 1 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются процессу однократной экстракции. Метод 2 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются многократной обработке одним и тем же экстрагентом. Метод 3 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются последовательной обработке различными экстрагентами. При отсутствии соответствующих указаний в фармакопейной статье или нормативной документации используют метод 1.
Метод 1. Однократная экстракция
Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200-250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, колбу закрывают пробкой, взвешивают (с погрешностью г) и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой и взвешивают. Потерю в массе содержимого колбы восполняют тем же растворителем. Содержимое колбы тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 мл. 25,0 мл полученного фильтрата пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7-9 см и выпаривают содержимое на водяной бане досуха. Чашку с сухим остатком сушат при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится кальция хлорид безводный, и немедленно взвешивают. Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье/препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: m – масса сухого остатка, г;
a – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; V – объем экстрагента, используемый при однократной обработке лекарственного растительного сырья/препарата, мл; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %.
Примечание. Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье/препарате, содержащем полисахариды, проводят методом холодного настаивания в соответствии с ОФС “Настои и отвары”.
Метод 2. Многократная экстракция
(предполагает последовательную обработку сырья одним и тем же экстрагентом с последующим получением суммарного экстракта)
Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200-250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, колбу закрывают пробкой, взвешивают с погрешностью г и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают на водяной бане, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой, взвешивают и потерю в массе восполняют растворителем. Содержимое колбы тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 мл. Фильтр с навеской снова помещают в исходную колбу и повторяют эту процедуру в соответствии с количеством экстракций сырья, необходимом при получении экстракта (2-, 3- и более кратном), каждый раз прибавляя фильтрат в ту же колбу. 25,0 мл объединенного фильтрата пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы в точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7-9 см и выпаривают на водяной бане досуха. Чашку с сухим остатком сушат при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, затем охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится кальция хлорид безводный, и снова взвешивают. Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье/препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: m – масса сухого остатка, г;
a – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %; n – число экстракций;
V – объем экстрагента, используемый при однократной обработке лекарственного растительного сырья/препарата, мл.
Метод 3. Последовательная экстракция
(предполагает последовательную обработку сырья различными экстрагентами с определением содержания экстрактивных веществ в каждой фракции)
Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помешают в коническую колбу вместимостью 200-250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, взвешивают и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения потерю в массе содержимого колбы восполняют тем же растворителем. Содержимое колбы взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 мл. Фильтр с навеской помещают в чистую колбу и воспроизводят процедуру с растворителем, указанным в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, фильтруя каждый раз в новые колбы. Из каждой полученной фракции 25,0 мл фильтрата пипеткой переносят в отдельные фарфоровые чашки и выпаривают извлечения на водяной бане досуха. Сухие остатки высушивают до постоянной массы и снова взвешивают. Содержание экстрактивных веществ в каждой фракции в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье/препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: m – масса сухого остатка, г;
a – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г; W – влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %; V – объем экстрагента, используемый при однократной обработке лекарственного растительного сырья/препарата, мл.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте ОФС.1.5.3.0005.15
Взамен ГФ X,
ст. ГФ XI, вып. 2
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте, представляет собой остаток после обработки хлористоводородной кислотой золы общей и состоит преимущественно из кремнезема. В тигель, содержащий остаток после определения общей золы, прибавляют 25 мл хлористоводородной кислоты разведенной 10%, тигель накрывают часовым стеклом и нагревают на кипящей водяной бане или электроплитке до закипания смеси и выдерживают в течение 10 мин. После охлаждения фильтруют содержимое тигля через беззольный фильтр, перенося на него осадок и обмывая часовое стекло горячей водой. Фильтр с осадком промывают горячей водой до нейтральной реакции промывных вод по универсальной индикаторной бумаге, переносят его в тот же тигель, сушат и прокаливают при красном калении (550-650 °С), охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Прокаливание проводят до постоянной массы остатка. Содержание золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте 10%, в сырье/препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
,
где: m1 – масса золы, г;
m – масса золы фильтра, г (если золы последнего более 0,002 г); m2 – масса сырья/препарата, г.
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 1 января 2016 года.
Примечание.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Текст документа
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах ОФС.1.5.3.0004.15
Взамен ГФ X,
ст. ГФ XI, вып. 1
Настоящая общая фармакопейная статья устанавливает единые требования к определению подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.
Термины и определения
Подлинность лекарственного растительного сырья/препарата – это соответствие сырья/препарата тому наименованию, под которым оно поступило на анализ. Измельченность лекарственного растительного сырья/препарата – показатель качества лекарственного растительного сырья/препарата (цельного, измельченного, порошка), который характеризует количество лекарственного растительного сырья/препарата, имеющего больший или меньший размер частиц в сравнении с установленным фармакопейной статьей для соответствующего вида лекарственного растительного сырья или препарата, и выражается в процентах. Содержание примесей – показатель качества лекарственного растительного сырья/препарата (цельного, измельченного, порошка), характеризующий содержание в сырье/препарате допустимых примесей, попавших в сырье в процессе его заготовки, и выражающийся в процентах.
Общие положения
Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах проводят в одной из 3 аналитических проб, полученной из средней пробы методом квартования в соответствии с требованиями ОФС “Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов”.
Определение подлинности
Подлинность сырья устанавливают по внешним признакам, анатомо-диагностическим признакам при микроскопическом исследовании и качественным реакциям, хроматографическим и спектральным характеристикам и иными методами в соответствии с требованиями фармакопейной статьи или нормативной документации на лекарственное растительное сырье или препарат. Методы определения подлинности лекарственного растительного сырья различных морфологических групп приведены в соответствующих ОФС (“Листья”, “Травы”, “Кора”, “Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы”, “Цветки”, “Плоды”, “Семена”, “Почки”).
Определение измельченности
Измельченность лекарственного растительного сырья/препарата определяют методом ситового анализа. Для цельного лекарственного растительного сырья/препарата, как правило, приводят нормируемое значение частиц меньшего размера, определяемое с помощью сита. Размер отверстий сита и допустимая норма содержания частиц меньшего размера указаны в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат. В зависимости от морфологических особенностей, структуры и размеров цельного лекарственного растительного сырья для его просеивания используют сита с размером отверстий 3,2, 1 и 0,5 мм. Для измельченного лекарственного растительного сырья и порошка в фармакопейной статье или нормативной документации приводятся допустимые значения содержания частиц большего и меньшего размера, определяемые с помощью 2 сит, размер отверстий которых указан в фармакопейной статье или нормативной документации на анализируемый вид лекарственного растительного сырья. В зависимости от морфологической группы измельченное лекарственное растительное сырье, как правило, имеет размер частиц не более 7, 5 или 3 мм. Для просеивания измельченного сырья, как правило, используют верхние сита с размером отверстий 7, 5 или 3 мм и нижнее сито с размером отверстий 0,5 мм. В ряде случаев, когда высушенное лекарственное растительное сырье/препарат имеет хрупкую структуру, размер отверстий нижнего сита составляет 0,18 мм (ромашки цветки, мяты перечной листья, донника трава и др.). Порошок – это, как правило, лекарственное растительное сырье, измельченное до частиц размером не более 2 мм. Для просеивания порошка, как правило, используют верхнее сито с размером отверстий 2 мм и нижнее сито с размером отверстий 0,18 мм. Для цельного сырья количество частиц, проходящих сквозь сито с указанным размером отверстий, не должно превышать 5%, если иное не указано в фармакопейной статье или нормативной документации. Для измельченного сырья и порошка количество частиц, не проходящих сквозь верхнее сито с указанным размером отверстий, не должно превышать 5%; количество частиц, проходящих сквозь нижнее сито с указанным размером отверстий, не должно превышать 5%, если иное не указано в фармакопейной статье или нормативной документации.
Методика определения измельченности
Часть аналитической пробы лекарственного растительного сырья или лекарственного растительного препарата помещают на сито, указанное в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, и осторожно, плавными вращательными движениями просеивают, не допуская дополнительного измельчения. Просеивание измельченных частей считается законченным, если количество сырья/препарата, прошедшего сквозь сито при дополнительном просеве в течение 1 мин, составляет менее 1% сырья/препарата, оставшегося на сите. Для цельного сырья частицы, прошедшие сквозь сито, взвешивают и вычисляют их процентное содержание к массе аналитической навески. Для просеивания измельченного лекарственного растительного сырья/препарата и порошка берут 2 сита. Часть аналитической пробы сырья/препарата помещают на верхнее сито и просеивают. Затем отдельно взвешивают сырье/препарат, оставшееся на верхнем сите и прошедшее сквозь нижнее сито, и вычисляют процентное содержание частиц, не прошедших сквозь верхнее сито, и содержание частиц, прошедших сквозь нижнее сито, к массе аналитической навески. Взвешивание проводят с погрешностью г при массе аналитической навески свыше 100 г и г при массе аналитической навески 100 г и менее. Допустимая норма содержания измельченных частиц для каждого вида лекарственного растительного сырья/препарата должна быть указана в фармакопейной статье или нормативной документации.
Определение содержания примесей
Обычно к допустимым примесям лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов относят: – части сырья, изменившие окраску, присущую данному виду лекарственного растительного сырья/препарата (побуревшие, почерневшие, выцветшие и т.д.); – другие части растения, не соответствующие установленному описанию сырья; – органическую примесь (части других неядовитых растений); – минеральную примесь (земля, песок, камешки). К недопустимым примесям относят стекло, помет грызунов и птиц, части ядовитых растений, части растений, утратившие свою окраску (с указанием в фармакопейной статье или нормативной документации их недопустимой окраски). Часть аналитической пробы цельного и измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, оставшуюся после определения подлинности и измельченности, взвешивают с погрешностью г, затем помещают на чистую гладкую поверхность и лопаточкой или пинцетом выделяют примеси, указанные в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье или лекарственный растительный препарат. Для порошка, как правило, определяют только минеральную примесь, так как определение других допустимых примесей затруднено. Одновременно обращают внимание на наличие вредителей запасов в соответствии с требованиями ОФС “Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов”. Каждый вид примеси взвешивают отдельно с погрешностью г при массе аналитической навески более 100 г и погрешностью г при массе аналитической навески 100 г и менее. Содержание каждого вида примеси в процентах (X) вычисляют по формуле:
(1)
где: m1 – масса примеси, г;
m2 – навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г. Для допустимых примесей устанавливаются следующие нормы: органическая примесь должна составлять не более 1%; минеральная примесь – не более 1%; части сырья, утратившие окраску, присущую данному виду сырья, – не более 3%; другие части растения, не соответствующие установленному описанию сырья, – не более 2%, если иное не указано в фармакопейной статье или нормативной документации. Для определения содержания минеральной примеси, имеющей размеры менее 2 мм, анализируемую пробу цельного и измельченного лекарственного растительного сырья/препарата просеивают сквозь сито с размером отверстий 2 мм. Частицы, прошедшие сквозь сито, помещают в стеклянный стакан вместимостью 1000 мл и далее используют метод определения содержания минеральной примеси в порошке. Массу минеральной примеси, полученную в отсеве, присоединяют к массе минеральной примеси, отобранной механическим способом с помощью пинцета, и рассчитывают ее суммарное содержание по формуле (1). Для определения содержания минеральной примеси в порошке лекарственного растительного сырья/препарата часть аналитической пробы взвешивают с погрешностью г, затем помещают в стеклянный стакан вместимостью 1000 мл, прибавляют 200 мл воды. Чтобы устранить комочки из слипшихся частиц, содержимое размешивают до полного смачивания сырья/препарата, равномерно распределяя в объеме раствора. Выдерживают 3-5 мин. После оседания минеральной примеси воду со взвешенными частицами быстро (не давая разбухнуть частицам сырья) сливают с осадка. Осадок в стакане несколько раз промывают водой до полного удаления взвешенных частиц сырья. По окончании промывания в стакане должен остаться осадок минеральной примеси с минимальным количеством воды. Стакан с осадком помещают в сушильный шкаф и сушат при температуре около 100-105 °С до приобретения осадком сыпучести. Высушенный осадок (минеральную примесь) охлаждают и взвешивают с погрешностью г. Содержание минеральной примеси рассчитывают по формуле (1).
ФЕДЕРАЛЬНАЯ АНТИМОНОПОЛЬНАЯ СЛУЖБА
РАЗЪЯСНЕНИЕ
ОБ УТОЧНЕНИИ
МЕТОДИКИ РАСЧЕТА ПОРЯДКА ФОРМИРОВАНИЯ ОТПУСКНОЙ ЦЕНЫ ЖНВЛП
В настоящее время действующим законодательством не предусмотрена дифференциация порядка формирования отпускных цен на лекарственные препараты, включенные в перечень ЖНВЛП, в зависимости от налоговых режимов, используемых организациями оптовой и розничной торговли лекарственными препаратами. Действующими Правилами установления предельных размеров оптовых и предельных размеров розничных надбавок к фактическим отпускным ценам производителей на лекарственные препараты, включенные в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, в субъектах Российской Федерации, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации от 29.10.2010 N 865 (далее – Правила) предусмотрен расчет оптовой и (или) розничной надбавки к фактической отпускной цене производителя на ЖНВЛП без налога на добавленную стоимость (далее – НДС). В связи с этим, ФАС России считает, что организациям оптовой торговли и организациям розничной торговли, находящимся на общей системе налогообложения (то есть являющимся плательщиками НДС), необходимо формировать отпускную цену на ЖНВЛП, суммируя цену приобретения ЖНВЛП без НДС (если поставщик ЖНВЛП является плательщиком ЕНВД или находится на УСН, то есть не является плательщиком НДС, фактическую цену приобретения ЖНВЛП у такого поставщика), надбавку (размер которой не превышает предельный размер оптовой или розничной надбавки, установленный в субъекте Российской Федерации для данной ценовой группы), исчисленную от фактической отпускной цены производителя без НДС, и налог на добавленную стоимость, исчисленный от суммы, полученной в результате сложения вышеуказанных цены приобретения и надбавки. Организациям оптовой торговли и организации розничной торговли, находящимся на УСН или являющимся плательщиками ЕНВД, необходимо формировать отпускную цену на ЖНВЛП, суммируя цену приобретения ЖНВЛП у поставщика (реальные расходы организации на приобретение ЖНВЛП, независимо от режима налогообложения, применяемого поставщиком) и надбавку (размер которой не превышает предельный размер оптовой или розничной надбавки, установленный в субъекте Российской Федерации для данной ценовой группы), исчисленную от фактической отпускной цены производителя без НДС. Примеры формирования организациями оптовой и розничной торговли отпускных цен на ЖНВЛП в зависимости от применяемой системы налогообложения приведены в приложении к настоящему письму.
Приложение
ПОРЯДОК
ФОРМИРОВАНИЯ ОРГАНИЗАЦИЯМИ ОПТОВОЙ И РОЗНИЧНОЙ ТОРГОВЛИ ОТПУСКНОЙ ЦЕНЫ НА ЖНВЛП В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПРИМЕНЯЕМОЙ СИСТЕМЫ НАЛОГООБЛОЖЕНИЯ
Пример 1. Организация оптовой торговли приобретает ЖНВЛП у производителя ЖНВЛП.
N п/п
Фактическая отпускная цена производителя Режим налогообложения организации оптовой торговли Размер применяемой оптовой надбавки, %
Размер применяемой оптовой надбавки, руб. Входящий НДС, руб. (будет принят к вычету) Отпускная цена организации оптовой торговли на общей системе налогообложения без НДС, руб. НДС, начисленный организацией оптовой торговли, руб. Отпускная цена организации оптовой торговли на общей системе налогообложения с НДС, руб. Отпускная цена организации оптовой торговли на УСН или ЕНВД, руб. Надбавка, полученная после уплаты и принятия к вычету НДС, руб. без НДС
с НДС (10%)
1
150
165
общая система налогообложения
13
150 * 13 / 100 = 19,50
165 – 150 = 15
150 + 19,50 = 169,50
169,50 * 10 / 100 = 16,95
150 + 19,5 + 16,95 = 186,45
–
186,45 – 165 – 16,95 + 15 = 19,50
2
150
165
ЕНВД или УСН
13
150 * 13 / 100 = 19,50
–
–
–
–
165 + 19,50 = 184,50
184,50 – 165 = 19,50
Пример 2. Организация розничной торговли, находящаяся на общей системе налогообложения, приобретает ЖНВЛП у оптовой организации, находящейся на общей системе налогообложения и применившей предельный размер оптовой надбавки в размере 13%.
Фактическая отпускная цена производителя, руб. без НДС Размер применяемой розничной надбавки, % Размер применяемой розничной надбавки, руб. Цена приобретения ЖНВЛП у поставщика, находящегося на общей системе налогообложения, руб. без НДС Цена приобретения ЖНВЛП у поставщика, находящегося на общей системе налогообложения, руб. с НДС Цена приобретения у поставщика – плательщика ЕНВД или находящегося на УСН, руб. Входящий НДС, руб. (будет принят к вычету) Отпускная цена организации розничной торговли, руб. без НДС НДС, начисленный организацией розничной торговли, руб. Отпускная цена организации розничной торговли с НДС, руб. Надбавка, полученная после уплаты и принятия к вычету НДС, руб. без НДС
с НДС (10%)
150
165
25%
150 * 25 / 100 = 37,50
169,50
186,45
–
186,45 – 169,50 = 16,95
169,50 + 37,50 = 207,00
207,00 * 10 / 100 = 20,70
207,00 + 20,70 = 227,70
227,70 – 186,45 – 20,70 + 16,95 = 37,50
Пример 3. Организация розничной торговли, находящаяся на общей системе налогообложения, приобретает ЖНВЛП у оптовой организации, находящейся на УСН или являющейся плательщиком ЕНВД и применившей предельный размер оптовой надбавки в размере 13%.
Фактическая отпускная цена производителя, руб. без НДС Размер применяемой розничной надбавки, % Размер применяемой розничной надбавки, руб. Цена приобретения ЖНВЛП у поставщика, находящегося на общей системе налогообложения, руб. без НДС Цена приобретения ЖНВЛП у поставщика, находящегося на общей системе налогообложения, руб. с НДС Цена приобретения у поставщика – плательщика ЕНВД или находящегося на УСН, руб. Входящий НДС, руб. (будет принят к вычету) Отпускная цена организации розничной торговли, руб. без НДС НДС, начисленный организацией розничной торговли, руб. Отпускная цена организации розничной торговли с НДС, руб. Надбавка, полученная после уплаты и принятия к вычету НДС, руб. без НДС
с НДС (10%)
150
165
25%
150 * 25 / 100 = 37,50
–
–
184,50
–
184,50 + 37,50 = 222,00
222,00 * 10 / 100 = 22,20
222,00 + 22,20 = 244,20
244,20 – 184,50 – 22,20 = 37,50
Пример 4. Организация розничной торговли, находящаяся на УСН или являющаяся плательщиком ЕНВД, приобретает ЖНВЛП у оптовой организации, находящейся на общей системе налогообложения и применившей предельный размер оптовой надбавки в размере 13%.
Фактическая отпускная цена производителя, руб. Размер применяемой розничной надбавки, % Размер применяемой розничной надбавки, руб. Цена приобретения ЖНВЛП у поставщика, находящегося на общей системе налогообложения, руб. с НДС Цена приобретения у поставщика – плательщика ЕНВД или находящегося на УСН, руб. Отпускная цена организации розничной торговли, руб. Надбавка организации розничной торговли, руб. без НДС
с НДС (10%)
150
165
25%
150 * 25 / 100 = 37,50
186,45
–
186,45 + 37,50 = 223,95
223,95 – 186,45 = 37,50
Пример 5. Организация розничной торговли, находящаяся на УСН или являющаяся плательщиком ЕНВД, приобретает ЖНВЛП у оптовой организации, находящейся на УСН или являющейся плательщиком ЕНВД и применившей предельный размер оптовой надбавки в размере 13%.
Фактическая отпускная цена производителя, руб. Размер применяемой розничной надбавки, % Размер применяемой розничной надбавки, руб. Цена приобретения ЖНВЛП у поставщика находящегося на общей системе налогообложения, руб. с НДС Цена приобретения у поставщика – плательщика ЕНВД или находящегося на УСН, руб. Отпускная цена организации розничной торговли, руб. Надбавка организации розничной торговли, руб. без НДС
с НДС (10%)
150
165
25%
150 * 25 / 100 = 37,50
–
184,5
184,50 + 37,50 = 222,00
222,00 – 184,50 = 37,50
